一种夏蜡梅组培快繁方法.pdf

本发明公开了一种夏蜡梅杂种组培快繁方法，通过对夏蜡梅杂种离体培养，建立起夏蜡梅杂种组培快繁体系，包括材料选择、材料清洗、初代接种、增殖培养、生根培养和炼苗移栽，成活率达95％。夏蜡梅杂种组培快繁方法的建立，解决了夏蜡梅杂种不育问题，适用于夏蜡梅杂种产业化育苗。

1.  一种夏蜡梅杂种组培快繁方法，其特征在于所述的夏蜡梅杂种以以下方法组培快繁：
4-5月采集夏蜡梅杂种半木质化新枝为外植体，去除叶片，剪成3-5cm长度，清洗消毒后切成1cm大小带节间的茎段，吸干表面水分放入诱导培养基培养，待长出不定芽后切下，放入增殖培养基培养，在培养基pH，温度、光照的条件下，苗高2cm时转入生根培养基培养，最后炼苗移栽。

2.  根据权利1要求所述的夏蜡梅杂种组培快繁方法，其特征在于最佳启动培养基为WPM+2.0mg/LZT+0.05mg/L IBA+2％蔗糖+0.8％琼脂。

3.  根据权利1要求所述的夏蜡梅杂种组培快繁方法，其特征在于最佳增殖培养基为WPM+2.0mg/LZT+0.05mg/L IBA+2％蔗糖+0.8％琼脂和MS大量元素+WPM其它成分+2.0mg/LZT+0.05mg/L IBA+2％蔗糖+0.8％琼脂。

4.  根据权利1要求所述的夏蜡梅杂种组培快繁方法，其特征在于最佳生根培养基为3/5MS大量元素+WPM其它成分+0.2mg/L IBA+1％蔗糖+0.8％琼脂+0.05％活性炭。

5.  根据权利1要求所述的夏蜡梅杂种组培快繁方法，其特征在于培养条件为培养基pH5.8，温度26±2℃、光照16h/天、光强1600～2000lx。

6.  根据权利1要求所述的夏蜡梅杂种组培快繁方法，其特征在于增殖培养过程中交替使用培养基WPM+2.0mg/LZT+0.05mg/L IBA+2％蔗糖+0.8％琼脂和MS大量元素+WPM其它成分+2.0mg/LZT+0.05mg/L IBA+2％蔗糖+0.8％琼脂，增殖效果佳。

7.  根据权利1要求所述的夏蜡梅杂种组培快繁方法，其特征在于初代接种的消毒方法用75％酒精浸泡1-2分钟，再用0.1％HgCl2灭菌6-10min，无菌水清洗2-4次。

8.  根据权利1要求所述的夏蜡梅杂种组培快繁方法，其特征在于将在增殖培养基上长至2cm高的无菌苗转接于生根培养基上培养，生根率高。

一种夏蜡梅组培快繁方法
方法领域
本发明涉及夏蜡梅杂种Sinocalycanthus chinensis XCalycanthus floridus组培快繁方法，属于生物技术领域。
背景技术
夏蜡梅杂种Sinocalycanthus chinensis X Calycanthusfloridus为江苏省中国科学所自主培育的园艺花卉新品种，亲本夏蜡梅和美国蜡梅，杂种保持母本花型，继承父本花色，观赏价值高于亲本，且耐强光暴晒，适应性好于亲本，表现杂种优势，但同时它又表现为杂种不育，组培快繁技术正好解决了这一难题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种夏蜡梅杂种组培快繁方法，为夏蜡梅杂种的规模化育苗提供一条有效途径。
本发明的夏蜡梅杂种组培快繁方法，是通过对夏蜡梅杂种的离体培养，建立起夏蜡梅杂种的快繁体系，步骤包括材料选择、清洗、初代接种、增殖培养、生根培养和炼苗移栽，具体做法：采集夏蜡梅杂种半木质化新枝为外植体，去除叶片，剪成3-5cm长度，消毒后切成1cm大小带节间的茎段，吸干表面水分放入启动培养基培养，待长出不定芽后切下，放入增殖培养基培养，苗高2cm时转入生根培养基培养，生根后炼苗移栽。其特征在于最佳启动培养基为WPM+2.0mg/LZT+0.05mg/L IBA+2％蔗糖+0.8％琼脂；最佳增殖培养基为WPM+2.0mg/LZT+0.05mg/L IBA+2％蔗糖+0.8％琼脂和MS大量元素+WPM其它成分+2.0mg/LZT+0.05mg/L IBA+2％蔗糖+0.8％琼脂；最佳生根培养基为3/5MS大量元素+WPM其它成分+0.2mg/L IBA+1％蔗糖+0.8％琼脂+0.05％活性炭；培养条件为培养基pH5.8，温度26±2℃、光照16h/天、光强1600～2000lx。增殖培养过程中交替使用培养基WPM+2.0mg/LZT+0.05mg/L IBA+2％蔗糖+0.8％琼脂和MS大量元素+WPM其它成分+2.0mg/LZT+0.05mg/L IBA+2％蔗糖+0.8％琼脂，增殖效果佳；初代接种的消毒方法用75％酒精浸泡1分钟，再用0.1％HgCl2灭菌8min，无菌水清洗3次；
本发明的优越性在于成活率达95％以上，为夏蜡梅杂种的规模化育苗提供了一条有效途径。
具体实施方式
1.4-5月上午采集夏蜡梅杂种新枝，去除叶片，自来水清洗备用。
2.将清洗干净的外植体材料置于超净工作台上，剪成3-5cm，放在三角瓶内，用用75％酒精浸泡1-2分钟，再用0.1％HgCl2灭菌8-10min，无菌水清洗2-4次，切成1cm大小带节间的茎段，无菌滤纸吸干表面水分，放入启动培养基WPM+2.0mg/LZT+0.05mg/L IBA+2％蔗糖+0.8％琼脂pH5.8上培养，温度26±2℃、光照16h/天以及光强1600～2000lx。
3.待长出不定芽后，切下，放入增殖培养基MS大量元素+WPM其它成分+2.0mg/LZT+0.05mg/L IBA+2％蔗糖+0.8％琼脂pH5.8增殖，温度26±2℃、光照16h/天以及光强1600～2000lx。
4.将增殖培养基中2cm以上的有效苗转入生根培养基培养3/5MS大量元素+WPM其它成分+0.2mg/L IBA+1％蔗糖+0.8％琼脂pH5.8培养，温度26±2℃、光照16h/天以及光强1600～2000lx。
5.根长1-2cm并有2条以上侧根时炼苗2-3天移栽。
实施例1
1.2007年4月25日上午采集夏蜡梅杂种新枝，去除叶片，自来水清洗备用。
2.将清洗干净的外植体材料置于超净工作台上，剪成3-5cm，放在三角瓶内，用用75％酒精浸泡1分钟，再用0.1％HgCl2灭菌8min，无菌水清洗3次，切成1cm大小带节间的茎段，无菌滤纸吸干表面水分，放入启动培养基WPM+2.0mg/LZT+0.05mg/L IBA+2％蔗糖+0.8％琼脂pH5.8上培养，温度26±2℃、光照16h/天、光强1600～2000lx。
3.15d后长出不定芽，切下，放入增殖培养基MS大量元素+WPM其它成分+2.0mg/LZT+0.05mg/L IBA+2％蔗糖+0.8％琼脂pH5.8增殖，温度26±2℃、光照16h/天、光强1600～2000lx。
4.25d后将增殖培养基中2cm以上的有效苗切下，放入生根培养基培养3/5MS大量元素+WPM其它成分+0.2mg/L IBA+1％蔗糖+0.8％琼脂pH5.8培养，温度26±2℃、光照16h/天、光强1600～2000lx。
5.当无菌苗根长1-2cm并有2条以上侧根时，打开瓶盖炼苗炼苗2天移栽，30d后检查成活率，成活率90％。
实施例2
1.2008年5月8日上午采集夏蜡梅杂种新枝，去除叶片，自来水清洗备用。
2.将清洗干净的外植体材料置于超净工作台上，剪成3-5cm，放在三角瓶内，用75％酒精浸泡2分钟，再用0.1％HgCl2灭菌10min，无菌水清洗3次，切成1cm大小带节间的茎段，无菌滤纸吸干表面水分，放入启动培养基WPM+2.0mg/LZT+0.05mg/L IBA+2％蔗糖+0.8％琼脂pH5.8上培养，温度26±2℃、光照16h/天、光强1600～2000lx。3.5月22日切下不定芽，转入增殖培养基MS大量元素+WPM其它成分+2.0mg/LZT+0.05mg/L IBA+2％蔗糖+0.8％琼脂pH5.8增殖，温度26±2℃、光照16h/天、光强1600～2000lx。
4.6月25d将增殖培养基中2cm以上的有效苗转入生根培养基培养3/5MS大量元素+WPM其它成分+0.2mg/L IBA+1％蔗糖+0.8％琼脂pH5.8培养，温度26±2℃、光照16h/天、光强1600～2000lx。
5.7月10日选根长1-2cm并有2条以上侧根的无菌苗，打开瓶盖炼苗炼苗3天移栽，8月10日检查成活率，成活率100％。