一种香菇多糖冻干粉针剂及其制备方法 【技术领域】
本发明涉及一种香菇多糖冻干粉针剂及其制备方法，属于生物反应调节剂抗肿瘤药物技术领域。
背景技术
香菇多糖(lentinan)是从香菇中提取具有生物活性的葡聚多糖，其由主链β-(1→3)糖苷键，并由β-(1→6)连接的葡萄糖基沿主链随机分布呈梳妆分支结构。香菇多糖首先是由日本学者千原吴郎于1969年，通过香菇子实体提取纯化获得。1974年日本味之素株式会社正进入香菇多糖的研发，在十年间完成了临床等一些列研究，于1985年香菇多糖冻干分针静脉注射剂正式获批新药上市。香菇多糖是一种生物免疫调节剂，对多种肿瘤有抑制作用，特别是对消化道类的肿瘤有显著的抑制作用，其具有剂量低，疗效好，毒副作用小等优点。
目前，我国香菇多糖原料药的国家标准中对香菇多糖(lentinan)分子量的规定为：重均分子量40～80万道尔顿，大于2万道尔顿以上的组分不得少于90％；由此可见香菇多糖的有效部分应是大于2万道尔顿，分子量集中在40～80万道尔顿之间的组分。由于，香菇多糖(lentinan)仅强调重均分子量故而其分子量分布宽泛，分子量大小差距很大。小于2万道尔顿的一般被认为无效组分，而大于200万道尔顿的组分在被注射进入人体血管后容易造成血栓的产生，这也是日本味之素所生产的制剂中添加了右旋糖酐的原因。香菇多糖的溶解度是随着其分子量增大而减小的，分子量越大越难溶解。200万道尔顿以上的组分存在在水溶液中难以溶解的问题，但分子量大的香菇多糖(lentinan)在碱性水溶液中的溶解度却可以得到很大提高，这就是目前注射用香菇多糖冻干制剂采用碱性水溶液来溶解香菇多糖的缘故。
注射用香菇多糖冻干制剂在配液时由于用碱性溶液进行助溶，然后再对酸性溶液进行中和，在此过程中产生的盐，对于疗效无作用，相反会造成一定的不良反应，尤其是对心血管疾病患者及肾功能不全患者。另外，粉针剂中的赋形剂仅仅是起到药品成形的骨架作用，对于治疗没有帮助，反而会产生不良的副作用，所以在药品能够成形的条件下要尽量少用赋形剂，甚至不用赋形剂。
【发明内容】
本发明的目的是提供一种香菇多糖冻干粉针剂及其制备方法，所述香菇多糖冻干粉针剂中不含有盐成份且赋形剂用量小。
为了达到上述目的，本发明的技术方案是提供一种香菇多糖冻干粉针剂，其特征在于，由香菇多糖0.95～1.10重量份和赋形剂10～33.5重量份组成，其中，香菇多糖的重均分子量为40～80万道尔顿，大于2万道尔顿以上的组分不少于98wt％，大于200万道尔顿以上的组分少于2wt％。
所述的赋形剂为甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖。
在20℃条件下，将香菇多糖冻干粉针剂用注射用水溶解，得到的0.5mg/ml香菇多糖溶液的电导率小于等于100μS/cm。
本发明还提供了的香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，具体步骤为：
第一步：将已符合国家标准的香菇多糖用水溶解成0.2～0.3g/L香菇多糖溶液，在5～20℃的条件下，溶液装入截留分子量为1万道尔顿的透析袋内对水透析，每4～6小时换一次水，透析36～48小时；将透析得到的溶液在常温下用孔径为0.14～0.2μm的微滤膜过滤二次，所得滤液再用截留分子量为50～100万道尔顿的超滤膜超滤，超滤进料压力差为0.15～0.18MPa，超滤所得滤液减压浓缩至原体积的1/6～1/8，冷冻干燥，即得到重均分子量为40～80万道尔顿、大于2万道尔顿以上的组分不少于98wt％、大于200万道尔顿以上的组分少于2wt％的香菇多糖；
第二步：首先，取‘第一步’制得的香菇多糖0.95～1.10重量份，加入到500～750重量份注射用水中，搅拌溶解；其次，取赋形剂10～33.5重量份，投入到60～200重量份注射用水中，搅拌使其溶解；再加入活性炭，用量为赋形剂溶液体积的0.08～0.2％w/v(g/ml)，搅拌10～15分钟，用微滤膜过滤脱碳；然后，把香菇多糖溶液与赋形剂过滤液混合，补加注射用水将混合溶液定溶，得到浓度为0.475～1.10mg/ml的香菇多糖制剂溶液；最后，香菇多糖制剂溶液过0.22μm微孔滤膜除菌，分瓶灌装，冷冻干燥，轧盖。
本发明所用香菇多糖分子式为(C6H10O5)n，分子量：平均40～80万(其中大于2万道尔顿以上的组分不少于98wt％，而大于200万道尔顿以上的组分少于2wt％)，其化学式如下：
本发明的原理是通过控制香菇多糖的分子量的分布来提高香菇多糖在中性水溶液中的溶解度来实现制剂的无盐制备。我们所用的香菇多糖是通过透析、超滤等方法，去除了部分过小和过大分子结构的特制的香菇多糖，因此香菇多糖地特点是分子量分布范围相对较窄，分子分布均一，所以本冻干粉针制剂原料相对于普通香菇多糖原料更容易在水中溶解。
图1为普通香菇多糖与本发明精制后的香菇多糖的分子量分布对比图。图中曲线1为普通香菇多糖GPC线，曲线2为精制后的香菇多糖的GPC线。
本发明的优点是冻干制剂采用无盐工艺，针剂制备过程中，用注射用水直接溶解。无盐制剂可以减少病人(尤其是心脏病人和肾脏病人)的不良反应，提高了用药的安全性。本发明确保了香菇多糖的疗效、降低了毒副作用，提高了安全性且方法简便、适用于规模化工业生产。
【附图说明】
图1为普通香菇多糖与本发明精制后的香菇多糖的分子量分布对比图。
【具体实施方式】
下面结合实施例来具体说明本发明。
实施例1
制剂处方：
香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，具体步骤为：
第一步：将已符合国家标准的香菇多糖用水溶解成0.2g/L香菇多糖溶液，在5℃的条件下，溶液装入截留分子量为1万道尔顿的透析袋内对水透析，每4小时换一次水，透析36小时；将透析得到的溶液在常温下用孔径为0.14μm的微滤膜过滤二次，所得滤液再用截留分子量为50万道尔顿的超滤膜超滤，超滤进料压力差设置为0.18MPa，超滤所得滤液减压浓缩至原体积的1/8，冷冻干燥，即得到重均分子量为42万道尔顿、大于2万道尔顿以上的组分不少于98wt％、大于200万道尔顿以上的组分少于2wt％的香菇多糖；
第二步：首先，取‘第一步’制得的香菇多糖2.375g，加入到1188ml(500重量份)注射用水中，搅拌溶解；其次，取赋形剂甘露醇25g，投入到143ml(60重量份)注射用水中，搅拌使其溶解；再加入0.2％w/v(g/ml)活性炭0.28g除热源，搅拌10分钟，用0.22μm微孔滤膜过滤脱碳；然后，把香菇多糖溶液与赋形剂过滤液混合，补加注射用水将混合溶液定溶至5000ml，得到浓度为0.475mg/ml的香菇多糖制剂溶液；最后，香菇多糖制剂溶液过0.22μm微孔滤膜除菌，分瓶灌装、每2ml/瓶，冷冻干燥，轧盖。
在20℃条件下，取本冻干粉针制剂15瓶，每瓶用2ml注射用水溶解，共计30ml，测得电导率为20.2μS/cm。
用法与用量：每周二次，每次1支，用5％w/v(g/ml)葡萄糖注射液5～10ml完全溶解后静注。
实施例2
制剂处方：
香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，具体步骤为：
第一步：将已符合国家标准的香菇多糖用水溶解成0.3g/L香菇多糖溶液，在20℃的条件下，溶液装入截留分子量为1万道尔顿的透析袋内对水透析，每6小时换一次水，透析48小时；将透析得到的溶液在常温下用孔径为0.2μm的微滤膜过滤二次，所得滤液再用截留分子量为100万道尔顿的超滤膜超滤，超滤进料压力差设定为0.15MPa，超滤所得滤液减压浓缩至原体积的1/6，冷冻干燥，即得到重均分子量为76.5万道尔顿、大于2万道尔顿以上的组分不少于98wt％、大于200万道尔顿以上的组分少于2wt％的香菇多糖；
第二步：首先，取‘第一步’制得的香菇多糖5.5g，加入到4125ml(750重量份)注射用水中，搅拌溶解；其次，取赋形剂甘露醇167.50g，投入到1100ml(200重量份)注射用水中，搅拌使其溶解；再加入0.08％w/v(g/ml)活性炭0.88g除热源，搅拌15分钟，以1μm微孔钛合金棒过滤脱碳；然后，把香菇多糖溶液与赋形剂过滤液混合，补加注射用水将混合溶液定溶至5000ml，得到浓度为1.1mg/ml的香菇多糖制剂溶液；最后，香菇多糖制剂溶液过0.22μm微孔滤膜除菌，分瓶灌装、每1ml/瓶，冷冻干燥，轧盖。
在20℃条件下，取本冻干粉针制剂15瓶，每瓶用2ml注射用水溶解，共计30ml，测得电导率为9.3μS/cm。
用法与用量：每周二次，每次1支，用5％w/v(g/ml)葡萄糖注射液5～10ml完全溶解后静注。
实施例3
制剂处方：
香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，具体步骤为：
第一步：将已符合国家标准的香菇多糖用水溶解成0.3g/L香菇多糖溶液，在20℃的条件下，溶液装入截留分子量为1万道尔顿的透析袋内对水透析，每6小时换一次水，透析48小时；将透析得到的溶液在常温下用孔径为0.2μm的微滤膜过滤二次，所得滤液再用截留分子量为100万道尔顿的超滤膜超滤，超滤进料压力差设定为0.16MPa，超滤所得滤液减压浓缩至原体积的1/6，冷冻干燥，即得到重均分子量为61万道尔顿、大于2万道尔顿以上的组分不少于98wt％、大于200万道尔顿以上的组分少于2wt％的香菇多糖；
第二步：首先，取‘第一步’制得的香菇多糖2.50g，加入到1750ml(700重量份)注射用水中，搅拌溶解；其次，取赋形剂甘露醇75g，投入到450ml(180重量份)注射用水中，搅拌使其溶解；再加入0.1％w/v(g/ml)活性炭0.45g除热源，搅拌12分钟，用0.45μm微孔滤膜过滤脱碳；然后，把香菇多糖溶液与赋形剂过滤液混合，补加注射用水将混合溶液定溶至5000ml，得到浓度为0.5mg/ml的香菇多糖制剂溶液；最后，香菇多糖制剂溶液过0.22μm微孔滤膜除菌，分瓶灌装、每2ml/瓶，冷冻干燥，轧盖。
在20℃条件下，取本冻干粉针制剂15瓶，每瓶用2ml注射用水溶解，共计30ml，电导率测得为86.7μS/cm。
用法与用量：每周二次，每次1支，用5％w/v(g/ml)葡萄糖注射液5～10ml完全溶解后静注。
实施例4
制剂处方：
香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，具体步骤为：
第一步：将已符合国家标准的香菇多糖用水溶解成0.25g/L香菇多糖溶液，在15℃的条件下，溶液装入截留分子量为1万道尔顿的透析袋内对水透析，每5小时换一次水，透析42小时；将透析得到的溶液在常温下用孔径为0.17μm的微滤膜过滤二次，所得滤液再用截留分子量为75万道尔顿的超滤膜超滤，超滤进料压力差设定为0.18MPa，超滤所得滤液减压浓缩至原体积的1/7，冷冻干燥，即得到重均分子量为53.4万道尔顿、大于2万道尔顿以上的组分不少于98wt％、大于200万道尔顿以上的组分少于2wt％的香菇多糖；
第二步：首先，取‘第一步’制得的香菇多糖2.00g，加入到1500ml(750重量份)注射用水中，搅拌溶解；其次，取赋形剂蔗糖40g，投入到300ml(150重量份)注射用水中，搅拌使其溶解；再加入0.1％w/v(g/ml)活性炭0.3g除热源，搅拌11分钟，用0.22μm微孔滤膜过滤脱碳；然后，把香菇多糖溶液与赋形剂过滤液混合，补加注射用水将混合溶液定溶至2000ml，得到浓度为1mg/ml的香菇多糖制剂溶液；最后，香菇多糖制剂溶液过0.22μm微孔滤膜除菌，分瓶灌装、每1ml/瓶，冷冻干燥，轧盖。
在20℃条件下，取本冻干粉针制剂15瓶，每瓶用2ml注射用水溶解，共计30ml，电导率测得为20.3μS/cm。
用法与用量：每周二次，每次1支，用5％w/v(g/ml)葡萄糖注射液5～10ml完全溶解后静注。
实施例5
制剂处方：
香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，具体步骤为：
第一步：将已符合国家标准的香菇多糖用水溶解成0.25g/L香菇多糖溶液，在15℃的条件下，溶液装入截留分子量为1万道尔顿的透析袋内对水透析，每5小时换一次水，透析42小时；将透析得到的溶液在常温下用孔径为0.17μm的微滤膜过滤二次，所得滤液再用截留分子量为75万道尔顿的超滤膜超滤，超滤进料压力差为0.16MPa，超滤所得滤液减压浓缩至原体积的1/7，冷冻干燥，即得到重均分子量为50.4万道尔顿、大于2万道尔顿以上的组分不少于98wt％、大于200万道尔顿以上的组分少于2wt％的香菇多糖；
第二步：首先，取‘第一步’制得的香菇多糖2.75g，加入到2000ml(727重量份)注射用水中，搅拌溶解；其次，取赋形剂乳糖82.5g，投入到500ml(182重量份)注射用水中，搅拌使其溶解；再加入0.1％w/v(g/ml)活性炭0.50g除热源，搅拌15分钟，0.22μm微孔滤膜过滤脱碳；然后，把香菇多糖溶液与赋形剂过滤液混合，补加注射用水将混合溶液定溶至5500ml，得到浓度为0.5mg/ml的香菇多糖制剂溶液；最后，香菇多糖制剂溶液过0.22μm微孔滤膜除菌，分瓶灌装、每2ml/瓶，冷冻干燥，轧盖。
在20℃条件下，取本冻干粉针制剂15瓶，每瓶用2ml注射用水溶解，共计30ml，电导率测得为100μS/cm。
用法与用量：每周二次，每次1支，用5％w/v(g/ml)葡萄糖注射液5～10ml完全溶解后静注。
实施例6
制剂处方：
香菇多糖冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，具体步骤为：
第一步：将已符合国家标准的香菇多糖用水溶解成0.25g/L香菇多糖溶液，在15℃的条件下，溶液装入截留分子量为1万道尔顿的透析袋内对水透析，每5小时换一次水，透析42小时；将透析得到的溶液在常温下用孔径为0.17μm的微滤膜过滤二次，所得滤液再用截留分子量为75万道尔顿的超滤膜超滤，超滤进料压力差为0.16MPa，超滤所得滤液减压浓缩至原体积的1/7，冷冻干燥，即得到重均分子量为60万道尔顿、大于2万道尔顿以上的组分不少于98wt％、大于200万道尔顿以上的组分少于2wt％的香菇多糖；
第二步：首先，取‘第一步’制得的香菇多糖10.5g，加入到7350ml(700重量份)注射用水中，搅拌溶解；其次，取赋形剂葡萄糖210g，投入到1600ml(152重量份)注射用水中，搅拌使其溶解；再加入0.1％w/v(g/ml)活性炭1.60g除热源，搅拌14分钟，以0.45μm钛合金棒过滤脱碳；然后，把香菇多糖溶液与赋形剂过滤液混合，补加注射用水将混合溶液定溶至10500ml，得到浓度为1mg/ml的香菇多糖制剂溶液；最后，香菇多糖制剂溶液过0.22μm微孔滤膜除菌，分瓶灌装、每1ml/瓶，冷冻干燥，轧盖。
在20℃条件下，取本冻干粉针制剂20瓶，每瓶用2ml注射用水溶解，共计40ml，电导率测得为8.5μS/cm。
用法与用量：每周二次，每次1支，用5％w/v(g/ml)葡萄糖注射液5～10ml完全溶解后静注。
目前，国内外在香菇多糖冻干制剂配液、冻干过程中，通常采用先用碱性水来助溶，然后再用盐酸来调节配液的pH值至中性。用这种工艺制备的注射用香菇多糖制剂，在给药过程中如采用5％(g/ml)葡萄糖注射液5～10ml进行溶解然后静注，则此时制剂中生成的氯化钠与静脉注射溶液浓度比形成了高渗溶液，在注射时对血管有刺激，且浓度越高刺激越强。以盐酸调节注射用香菇多糖制剂pH生成氯化钠为例：
注：血管刺激程度‘+’‘++’‘+++’表示依次递增。
由上表可见，本发明中不含盐的香菇多糖粉针剂对血管无刺激，可以减少病人的不良反应，尤其是对一些对钠盐敏感的病人如心脏病、肾病病人，提高了用药的安全性。
我们通过采用柠檬酸来调pH值和通过采用盐酸来调pH值的方法来制作通常工艺下的香菇多糖粉针剂，以及采用无盐方法来制作无盐工艺下的香菇多糖粉针剂，并通过测定分别得到它们各自的含盐量和电导率。下表是不同工艺下的香菇多糖(lentinan)粉针剂的含盐量测定的电导率比较。
注：经试验证明采用本无盐工艺的香菇多糖粉针剂，在盐含量测定时电导率不大于100μS/cm。