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1、10申请公布号CN104041901A43申请公布日20140917CN104041901A21申请号201410292815122申请日20140626A23L2/38200601A23L1/30520060171申请人河南科技大学地址471000河南省洛阳市涧西区西苑路48号72发明人刘普邓瑞雪易军鹏尹卫平李小方高嘉屿田轶段文录梁菊曹辉74专利代理机构洛阳公信知识产权事务所普通合伙41120代理人罗民健54发明名称一种牡丹肽饮料及其制备方法57摘要本发明公开了一种牡丹肽饮料及其制备方法，该饮料按照重量份数由以下原料制成牡丹肽溶液3040份、牡丹籽壳提取液13份、牡丹花露15份、牡丹花提取液。
2、13份、甜味剂13份、乳化剂0103份和水4764份；所述的牡丹肽溶液由经过炒制的牡丹籽仁加入其重量1020倍的水磨浆后水解发酵制得。本发明提供的牡丹肽饮料蛋白含量高、营养价值高、口味佳，含有多种具有较好保健功能的活性成分，且牡丹肽分子量较小，分布均匀，最大限度的保留了牡丹籽的功能，天然、高营养、易吸收，克服了植物蛋白难以消化吸收的问题，具有显著的抗氧化、抗菌和抗肿瘤等多种生物活性。51INTCL权利要求书2页说明书11页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书11页10申请公布号CN104041901ACN104041901A1/2页21一种牡丹肽饮料，其特征在于。
3、按照重量份数由以下原料制成牡丹肽溶液3040份、牡丹籽壳提取液13份、牡丹花露15份、牡丹花提取液13份、甜味剂13份、乳化剂0103份和水4764份；所述的牡丹肽溶液由经过炒制的牡丹籽仁加入其重量1020倍的水磨浆后水解发酵制得；所述的牡丹籽壳提取液由牡丹籽壳提取出的经过干燥的提取物加入其重量68倍的水溶解制得；所述的牡丹花露为干燥牡丹花瓣经水蒸气蒸馏收集得到的馏出液；所述的牡丹花提取液为经过水蒸气蒸馏的牡丹花瓣提取得到的干燥提取物加入其重量68倍的水溶解而得。2如权利要求1所述的一种牡丹肽饮料的制备方法，其特征在于包括以下步骤步骤一、牡丹肽溶液的制备1）取油用牡丹籽原材料，脱壳后收集牡丹籽。
4、壳，并将得到的牡丹籽仁用PH值为8595的稀碱水浸泡除杂，再用清水洗涤34次，晾干水分后在150180的炒锅中炒制58MIN，得到炒牡丹籽仁，备用；2）将步骤1）得到的炒牡丹籽仁加入其重量1020倍的水，用160220目的研磨机中研磨24遍，得到牡丹籽浆液，备用；3）用质量浓度为20的氢氧化钠溶液调节步骤2）得到的牡丹籽浆液的PH值为7596，然后加入培养成熟的混合蛋白酶，并使牡丹籽浆液中蛋白酶的质量百分数为0612，保持温度为4050，控制搅拌桨搅拌转数为100200R/MIN，在无菌空气下水解2448H，水解结束后升温至110120进行高温灭活，过滤除渣，即制得牡丹肽溶液，备用；步骤二、其。
5、他原料的制备取步骤一得到的牡丹籽壳加入提取液进行浸提，提取物浓缩干燥后加入其重量68倍的水，溶解完全，即得到牡丹籽壳提取液，备用；将牡丹花瓣进行水蒸气蒸馏，按照每千克干燥牡丹花瓣收集2000ML馏出液的量进行收集，得到的馏出液即为牡丹花露，备用；将经过水蒸气蒸馏的牡丹花瓣加水进行提取，提取液浓缩干燥后加入其重量68倍的水，溶解完全，即得到牡丹花提取液，备用；步骤三、牡丹肽饮料的制备按照重量份数分别取步骤一得到的牡丹肽溶液3040份、步骤二得到的牡丹籽壳提取液13份、牡丹花露15份和牡丹花提取液13份，再取甜味剂13份、乳化剂0103份和水4764份，备用；先向混合釜内加入水，然后加入牡丹肽溶液。
6、，再加入乳化剂，搅拌均匀，然后依次加入牡丹籽壳提取液、牡丹花露、牡丹花提取液和甜味剂，在温度为5060条件下搅拌2030MIN，过180200目筛，在压力为2030MPA下均质12次，最后在140160温度下采用超高温瞬间杀菌1520S，灌装，即完成牡丹肽饮料的制备。3如权利要求2所述的一种牡丹肽饮料的制备方法，其特征在于步骤一所述的混合蛋白酶是指重量比为108120812012012的胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、碱性2709蛋白酶和中性NEUTRASE蛋白酶的混合物。权利要求书CN104041901A2/2页34如权利要求2所述的一种牡丹肽饮料的制备方法，其特征在于步骤二所述的牡丹。
7、籽壳提取液的具体制备方法为取步骤一收集的牡丹籽壳，加入其重量1525倍的水，超声提取3050MIN，收集提取液并浓缩至原体积的1/41/5，得到浓缩液，备用；向浓缩液中加入其体积46倍的无水乙醇，混合后静置36H，过滤，将得到的滤液浓缩至原体积的1/31/4，喷雾干燥，得到牡丹籽壳提取物，备用；向牡丹籽壳提取物中加入其重量68倍的水，充分溶解后过180200目筛，得到的滤液即为牡丹籽壳提取液。5如权利要求2所述的一种牡丹肽饮料的制备方法，其特征在于步骤二所述的牡丹花露的具体制备方法为取牡丹花瓣原材料，在室温下干燥至水分含量为2030，得到干燥牡丹花瓣，备用；然后加入干燥丹花瓣重量35的食盐，揉。
8、捻后采用水蒸气蒸馏，按照每千克干燥牡丹花瓣收集2000ML馏出液的量进行收集，得到的馏出液即为牡丹花露。6如权利要求2所述的一种牡丹肽饮料的制备方法，其特征在于步骤二所述的牡丹花提取液的具体制备方法为向经过蒸馏的牡丹花中加入其重量的1015倍的水，超声提取2030MIN，然后将提取液浓缩至原体积的1/41/5，再向浓缩液中加入体积46倍的无水乙醇，混合静置36H，过滤，将得到的滤液浓缩至原体积的1/31/4，喷雾干燥，得到牡丹花提取物，备用；向牡丹花提取物中加入其重量68倍的水，充分溶解，过180200目筛，滤液即为牡丹花提取液。权利要求书CN104041901A1/11页4一种牡丹肽饮料及其。
9、制备方法技术领域0001本发明属于食品领域，主要涉及一种牡丹肽饮料及其制备方法。背景技术0002牡丹是我国特有的木本名贵花卉，有数千年的自然生长和两千多年的人工栽培历史，素有“国色天香”、“花中之王”的美称。牡丹全身是宝，牡丹花可供观赏，还可以制成牡丹花茶、牡丹花精油；牡丹根皮是传统中药“丹皮”；牡丹籽油含有多种不饱和脂肪酸，尤其是罕见的奇数脂肪酸，是一种具有重要开发价值的食用油脂来源通过脱皮后牡丹籽仁不仅含有脂肪、蛋白质等营养成分，还含有芍药苷，白芍苷，羟基芍药苷，羟基白芍苷等芍药苷类化合物。如何全发面开发利用牡丹将会是一个非常重要且任务艰巨的研究课题。发明内容0003本发明的目的是提供一种。
10、牡丹肽饮料及其制备方法，该饮料蛋白含量高、营养价值高、口味佳，含有多种具有较好保健功能的活性成分，且牡丹肽分子量较小，分布均匀，最大限度的保留了牡丹籽的功能，天然、高营养、易吸收，克服了植物蛋白难以消化吸收的问题，具有显著的抗氧化、抗菌和抗肿瘤等多种生物活性。0004本发明实现上述目的采用的技术方案是一种牡丹肽饮料，按照重量份数由以下原料制成牡丹肽溶液3040份、牡丹籽壳提取液13份、牡丹花露15份、牡丹花提取液13份、甜味剂13份、乳化剂0103份和水4764份；所述的牡丹肽溶液由经过炒制的牡丹籽仁加入其重量1020倍的水磨浆后水解发酵制得；所述的牡丹籽壳提取液由牡丹籽壳提取出的经过干燥的提。
11、取物加入其重量68倍的水溶解制得；所述的牡丹花露为干燥牡丹花瓣经水蒸气蒸馏收集得到的馏出液；所述的牡丹花提取液为经过水蒸气蒸馏的牡丹花瓣提取得到的干燥提取物加入其重量68倍的水溶解而得。0005所述的牡丹肽饮料的制备方法，包括以下步骤步骤一、牡丹肽溶液的制备1）取油用牡丹籽原材料，脱壳后收集牡丹籽壳，并将得到的牡丹籽仁用PH值为8595的稀碱水浸泡除杂，再用清水洗涤34次，晾干水分后在150180的炒锅中炒制58MIN，得到炒牡丹籽仁，备用；2）将步骤1）得到的炒牡丹籽仁加入其重量1020倍的水，用160220目的研磨机中研磨24遍，得到牡丹籽浆液，备用；3）用质量浓度为20的氢氧化钠溶液调节。
12、步骤2）得到的牡丹籽浆液的PH值为7596，然后加入培养成熟的混合蛋白酶，并使牡丹籽浆液中蛋白酶的质量百分数为0612，保持温度为4050，控制搅拌桨搅拌转数为100200R/MIN，在无菌空气下水说明书CN104041901A2/11页5解2448H，水解结束后升温至110120进行高温灭活，过滤除渣，即制得牡丹肽溶液，备用；步骤二、其他原料的制备取步骤一得到的牡丹籽壳加入提取液进行浸提，提取液浓缩干燥后加入其重量68倍的水，溶解完全，即得到牡丹籽壳提取液，备用；将牡丹花瓣进行水蒸气蒸馏，按照每千克干燥牡丹花瓣收集2000ML馏出液的量进行收集，得到的馏出液即为牡丹花露，备用；将经过水蒸气蒸。
13、馏的牡丹花瓣加水进行提取，提取液浓缩干燥后加入其重量68倍的水，溶解完全，即得到牡丹花提取液，备用；步骤三、牡丹肽饮料的制备按照重量份数分别取步骤一得到的牡丹肽溶液3040份、步骤二得到的牡丹籽壳提取液13份、牡丹花露15份和牡丹花提取液13份，再取甜味剂13份、乳化剂0103份和水4764份，备用；先向混合釜内加入水，然后加入牡丹肽溶液，再加入乳化剂，搅拌均匀，然后依次加入牡丹籽壳提取液、牡丹花露、牡丹花提取液和甜味剂，在温度为5060条件下搅拌2030MIN，过180200目筛，在压力为2030MPA下均质12次，最后在140160温度下采用超高温瞬间杀菌1520S，灌装，即完成牡丹肽饮料。
14、的制备。0006步骤一所述的蛋白酶混合物是指重量比为108120812012012的胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、碱性2709蛋白酶和中性NEUTRASE蛋白酶的混合物。0007步骤二所述的牡丹籽壳提取液的具体制备方法为取步骤一收集的牡丹籽壳，加入其重量1525倍的水，超声提取3050MIN，收集提取液并浓缩至原体积的1/41/5，得到浓缩液，备用；向浓缩液中加入其体积46倍的无水乙醇，混合后静置36H，过滤，将得到的滤液浓缩至原体积的1/31/4，喷雾干燥，得到牡丹籽壳提取物，备用；向牡丹籽壳提取物中加入其重量68倍的水，充分溶解后过180200目筛，得到的滤液即为牡丹籽壳提取液。0。
15、008步骤二所述的牡丹花露的具体制备方法为取牡丹花瓣原材料，在室温下干燥至水分含量为2030，得到干燥牡丹花瓣，备用；然后加入干燥丹花瓣重量35的食盐，揉捻后采用水蒸气蒸馏，按照每千克干燥牡丹花瓣收集2000ML馏出液的量进行收集，得到的馏出液即为牡丹花露。0009步骤二所述的牡丹花提取液的具体制备方法为向经过蒸馏的牡丹花中加入其重量的1015倍的水，超声提取2030MIN，然后将提取液浓缩至原体积的1/41/5，再向浓缩液中加入体积46倍的无水乙醇，混合静置36H，过滤，将得到的滤液浓缩至原体积的1/31/4，喷雾干燥，得到牡丹花提取物，备用；向牡丹花提取物中加入其重量68倍的水，充分溶解，。
16、过180200目筛，滤液即为牡丹花提取液。0010本发明的有益效果其一、本发明提供的牡丹肽饮料蛋白含量高、营养价值高、口味佳，含有多种具有较好保健功能的活性成分，如芍药苷、白芍苷、羟基芍药苷、羟基白芍苷等芍药苷类化合物，具有较好的抗高血脂、抗血栓形成，扩张冠状动脉，增加冠脉流量，对抗急性心肌缺血，降低血压具有较好的疗效的，另外还能够显著提高人的增强免疫力，抗炎抗溃疡、解热解痉、利尿等。而且，充分利用复合蛋白酶来水解牡丹籽饼粕蛋白，制备得到的牡丹小肽分子量较小，分布说明书CN104041901A3/11页6均匀，最大限度的保留了牡丹籽的功能，天然、高营养、易吸收，克服了植物蛋白难以消化吸收的问题。
17、，具有显著的抗氧化、抗菌和抗肿瘤等多种生物活性。0011其二、本发明是以油用牡丹，主要是凤丹和紫斑牡丹牡丹籽仁为主要原料，同时充分利用牡丹籽壳、牡丹花等其它的牡丹原料资源，实现了牡丹资源的充分利用，不会造成任何牡丹资源的浪费，且本发明在制备过程对环境不产生有毒有害排放物，制备工艺简单，适合规模化生产。具体实施方式0012一种牡丹肽饮料，按照重量份数由以下原料制成牡丹肽溶液3040份、牡丹籽壳提取液13份、牡丹花露15份、牡丹花提取液13份、甜味剂13份、乳化剂0103份和水4764份；所述的牡丹肽溶液由经过炒制的牡丹籽仁加入其重量1020倍的水磨浆后水解发酵制得；所述的牡丹籽壳提取液由牡丹籽壳。
18、提取出的经过干燥的提取物加入其重量68倍的水溶解制得；所述的牡丹花露为干燥牡丹花瓣经水蒸气蒸馏收集得到的馏出液；所述的牡丹花提取液为经过水蒸气蒸馏的牡丹花瓣提取得到的干燥提取物加入其重量68倍的水溶解而得。0013所述的牡丹肽饮料的制备方法，包括以下步骤步骤一、牡丹肽溶液的制备1）取油用牡丹籽原材料，脱壳后收集牡丹籽壳，并将得到的牡丹籽仁用PH值为8595的稀碱水浸泡除杂，再用清水洗涤34次，晾干水分后在150180的炒锅中炒制58MIN，得到炒牡丹籽仁，备用；2）将步骤1）得到的炒牡丹籽仁加入其重量1020倍的水，用160220目的研磨机中研磨24遍，得到牡丹籽浆液，备用；3）用质量浓度为2。
19、0的氢氧化钠溶液调节步骤2）得到的牡丹籽浆液的PH值为7596，然后加入培养成熟的混合蛋白酶，并使牡丹籽浆液中蛋白酶的质量百分数为0612，保持温度为4050，控制搅拌桨搅拌转数为100200R/MIN，在无菌空气下水解2448H，水解结束后升温至110120进行高温灭活，过滤除渣，即制得牡丹肽溶液，备用；步骤二、其他原料的制备取步骤一得到的牡丹籽壳加入提取液进行浸提，提取液浓缩干燥后加入其重量68倍的水，溶解完全，即得到牡丹籽壳提取液，备用；将牡丹花瓣进行水蒸气蒸馏，按照每千克干燥牡丹花瓣收集2000ML馏出液的量进行收集，得到的馏出液即为牡丹花露，备用；将经过水蒸气蒸馏的牡丹花瓣加水进行提。
20、取，提取液浓缩干燥后加入其重量68倍的水，溶解完全，即得到牡丹花提取液，备用；步骤三、牡丹肽饮料的制备按照重量份数分别取步骤一得到的牡丹肽溶液3040份、步骤二得到的牡丹籽壳提取说明书CN104041901A4/11页7液13份、牡丹花露15份和牡丹花提取液13份，再取甜味剂13份、乳化剂0103份和水4764份，备用；先向混合釜内加入水，然后加入牡丹肽溶液，再加入乳化剂，搅拌均匀，然后依次加入牡丹籽壳提取液、牡丹花露、牡丹花提取液和甜味剂，在温度为5060条件下搅拌2030MIN，过180200目筛，在压力为2030MPA下均质12次，最后在140160温度下采用超高温瞬间杀菌1520S，灌。
21、装，即完成牡丹肽饮料的制备。0014步骤一所述的蛋白酶混合物是指重量比为108120812012012的胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、碱性2709蛋白酶和中性NEUTRASE蛋白酶的混合物。0015步骤二所述的牡丹籽壳提取液的具体制备方法为取步骤一收集的牡丹籽壳，加入其重量1525倍的水，超声提取3050MIN，收集提取液并浓缩至原体积的1/41/5，得到浓缩液，备用；向浓缩液中加入其体积46倍的无水乙醇，混合后静置36H，过滤，将得到的滤液浓缩至原体积的1/31/4，喷雾干燥，得到牡丹籽壳提取物，备用；向牡丹籽壳提取物中加入其重量68倍的水，充分溶解后过180200目筛，得到的滤液即。
22、为牡丹籽壳提取液。0016步骤二所述的牡丹花露的具体制备方法为取牡丹花瓣原材料，在室温下干燥至水分含量为2030，得到干燥牡丹花瓣，备用；然后加入干燥丹花瓣重量35的食盐，揉捻后采用水蒸气蒸馏，按照每千克干燥牡丹花瓣收集2000ML馏出液的量进行收集，得到的馏出液即为牡丹花露。0017步骤二所述的牡丹花提取液的具体制备方法为向经过蒸馏的牡丹花中加入其重量的1015倍的水，超声提取2030MIN，然后将提取液浓缩至原体积的1/41/5，再向浓缩液中加入体积46倍的无水乙醇，混合静置36H，过滤，将得到的滤液浓缩至原体积的1/31/4，喷雾干燥，得到牡丹花提取物，备用；向牡丹花提取物中加入其重量6。
23、8倍的水，充分溶解，过180200目筛，滤液即为牡丹花提取液。0018本发明中所述的牡丹籽为油用牡丹籽，主要有凤丹牡丹和紫斑牡丹等。在制备牡丹肽过程中，采用的过滤方法是板框过滤或者膜过滤，水解得到的牡丹肽分子量在2005000道尔顿之间，且该牡丹肽具有抗氧化、抗肿瘤及抗菌等多种活性。0019以下结合具体实施例对本发明做进一步说明实施例1一种牡丹肽饮料，按照重量份数由以下原料制成牡丹肽溶液40份、牡丹籽壳提取液3份、牡丹花露5份、牡丹花提取液1份、甜味剂3份、乳化剂03份和水47份；所述的牡丹肽饮料的制备方法，包括以下步骤步骤一、牡丹肽溶液的制备1）取凤丹牡丹籽原材料，脱壳后收集牡丹籽壳，并将得。
24、到的牡丹籽仁用PH值为95的稀碱水浸泡除杂，再用清水洗涤4次，晾干水分后在150180的炒锅中炒制5MIN，得到炒牡丹籽仁，备用；2）将步骤1）得到的炒牡丹籽仁加入其重量20倍的水，用220目的研磨机中研磨4遍，得到牡丹籽浆液，备用；3）用质量浓度为20的氢氧化钠溶液调节步骤2）得到的牡丹籽浆液的PH值为96，然后加入培养成熟的混合蛋白酶，并使牡丹籽浆液中蛋白酶的质量百分数为12，所述的蛋白酶混合物是指重量比为1121212的胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶和说明书CN104041901A5/11页8碱性2709蛋白酶的混合物，保持温度为50，控制搅拌桨搅拌转数为200R/MIN，在无菌空。
25、气下水解48H，水解结束后升温至110120进行高温灭活，过滤除渣，即制得牡丹肽溶液，备用；步骤二、其他原料的制备取步骤一收集的牡丹籽壳，加入其重量25倍的水，超声提取50MIN，收集提取液并浓缩至原体积的1/5，得到浓缩液，备用；向浓缩液中加入其体积6倍的无水乙醇，混合后静置6H，过滤，将得到的滤液浓缩至原体积的1/4，喷雾干燥，得到牡丹籽壳提取物，备用；向牡丹籽壳提取物中加入其重量8倍的水，充分溶解后过200目筛，得到的滤液即为牡丹籽壳提取液，备用；取牡丹花瓣原材料，在室温下干燥至水分含量为30，得到干燥牡丹花瓣，备用；然后加入干燥丹花瓣重量5的食盐，揉捻后采用水蒸气蒸馏，按照每千克干燥牡。
26、丹花瓣收集2000ML馏出液的量进行收集，得到的馏出液即为牡丹花露，备用；向经过蒸馏的牡丹花中加入其重量的15倍的水，超声提取30MIN，然后将提取液浓缩至原体积的1/5，再向浓缩液中加入体积6倍的无水乙醇，混合静置6H，过滤，将得到的滤液浓缩至原体积的1/4，喷雾干燥，得到牡丹花提取物，备用；向牡丹花提取物中加入其重量8倍的水，充分溶解，过200目筛，滤液即为牡丹花提取液，备用；步骤三、牡丹肽饮料的制备按照上述重量份数分别取步骤一得到的牡丹肽溶液、步骤二得到的牡丹籽壳提取液、牡丹花露和牡丹花提取液，再取甜味剂、乳化剂和水，备用；先向混合釜内加入水，然后加入牡丹肽溶液，再加入乳化剂，搅拌均匀，。
27、然后依次加入牡丹籽壳提取液、牡丹花露、牡丹花提取液和甜味剂，在温度为60条件下搅拌30MIN，过200目筛，在压力为30MPA下均质2次，最后在160温度下采用超高温瞬间杀菌20S，灌装，即完成牡丹肽饮料的制备。0020实施例2一种牡丹肽饮料，按照重量份数由以下原料制成牡丹肽溶液30份、牡丹籽壳提取液1份、牡丹花露1份、牡丹花提取液3份、甜味剂1份、乳化剂01份和水64份；所述的牡丹肽饮料的制备方法，包括以下步骤步骤一、牡丹肽溶液的制备1）取紫斑牡丹籽原材料，脱壳后收集牡丹籽壳，并将得到的牡丹籽仁用PH值为85的稀碱水浸泡除杂，再用清水洗涤3次，晾干水分后在150180的炒锅中炒制5MIN，得。
28、到炒牡丹籽仁，备用；2）将步骤1）得到的炒牡丹籽仁加入其重量10倍的水，用160目的研磨机中研磨2遍，得到牡丹籽浆液，备用；3）用质量浓度为20的氢氧化钠溶液调节步骤2）得到的牡丹籽浆液的PH值为75，然后加入培养成熟的混合蛋白酶，并使牡丹籽浆液中蛋白酶的质量百分数为06，所述的蛋白酶混合物是指重量比为1080812的胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶和中性NEUTRASE蛋白酶的混合物，保持温度为40，控制搅拌桨搅拌转数为100R/MIN，在无菌空气下水解24H，水解结束后升温至110120进行高温灭活，过滤除渣，即制得牡丹肽溶液，备用；步骤二、其他原料的制备说明书CN104041901A。
29、6/11页9取步骤一收集的牡丹籽壳，加入其重量15倍的水，超声提取30MIN，收集提取液并浓缩至原体积的1/4，得到浓缩液，备用；向浓缩液中加入其体积4倍的无水乙醇，混合后静置3H，过滤，将得到的滤液浓缩至原体积的1/3，喷雾干燥，得到牡丹籽壳提取物，备用；向牡丹籽壳提取物中加入其重量6倍的水，充分溶解后过180目筛，得到的滤液即为牡丹籽壳提取液，备用；取牡丹花瓣原材料，在室温下干燥至水分含量为20，得到干燥牡丹花瓣，备用；然后加入干燥丹花瓣重量3的食盐，揉捻后采用水蒸气蒸馏，按照每千克干燥牡丹花瓣收集2000ML馏出液的量进行收集，得到的馏出液即为牡丹花露，备用；向经过蒸馏的牡丹花中加入其重。
30、量的10倍的水，超声提取20MIN，然后将提取液浓缩至原体积的1/4，再向浓缩液中加入体积4倍的无水乙醇，混合静置3H，过滤，将得到的滤液浓缩至原体积的1/3，喷雾干燥，得到牡丹花提取物，备用；向牡丹花提取物中加入其重量6倍的水，充分溶解，过180目筛，滤液即为牡丹花提取液，备用；步骤三、牡丹肽饮料的制备按照上述重量份数分别取步骤一得到的牡丹肽溶液、步骤二得到的牡丹籽壳提取液、牡丹花露和牡丹花提取液，再取甜味剂、乳化剂和水，备用；先向混合釜内加入水，然后加入牡丹肽溶液，再加入乳化剂，搅拌均匀，然后依次加入牡丹籽壳提取液、牡丹花露、牡丹花提取液和甜味剂，在温度为50条件下搅拌20MIN，过180。
31、目筛，在压力为20MPA下均质1次，最后在140温度下采用超高温瞬间杀菌15S，灌装，即完成牡丹肽饮料的制备。0021实施例3一种牡丹肽饮料，按照重量份数由以下原料制成牡丹肽溶液35份、牡丹籽壳提取液2份、牡丹花露3份、牡丹花提取液2份、甜味剂2份、乳化剂02份和水56份；所述的牡丹肽饮料的制备方法，包括以下步骤步骤一、牡丹肽溶液的制备1）取油用牡丹籽原材料，脱壳后收集牡丹籽壳，并将得到的牡丹籽仁用PH值为90的稀碱水浸泡除杂，再用清水洗涤3次，晾干水分后在150180的炒锅中炒制8MIN，得到炒牡丹籽仁，备用；2）将步骤1）得到的炒牡丹籽仁加入其重量20倍的水，用220目的研磨机中研磨2遍，。
32、得到牡丹籽浆液，备用；3）用质量浓度为20的氢氧化钠溶液调节步骤2）得到的牡丹籽浆液的PH值为85，然后加入培养成熟的混合蛋白酶，并使牡丹籽浆液中蛋白酶的质量百分数为09，所述的蛋白酶混合物是指重量比为1101008的胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶和碱性2709蛋白酶的混合物，保持温度为4050，控制搅拌桨搅拌转数为150R/MIN，在无菌空气下水解36H，水解结束后升温至110120进行高温灭活，过滤除渣，即制得牡丹肽溶液，备用；步骤二、其他原料的制备取步骤一收集的牡丹籽壳，加入其重量20倍的水，超声提取40MIN，收集提取液并浓缩至原体积的1/5，得到浓缩液，备用；向浓缩液中加入其体。
33、积5倍的无水乙醇，混合后静置5H，过滤，将得到的滤液浓缩至原体积的1/3，喷雾干燥，得到牡丹籽壳提取物，备用；向牡丹籽壳提取物中加入其重量6倍的水，充分溶解后过200目筛，得到的滤液即为牡丹籽壳提说明书CN104041901A7/11页10取液，备用；取牡丹花瓣原材料，在室温下干燥至水分含量为30，得到干燥牡丹花瓣，备用；然后加入干燥丹花瓣重量3的食盐，揉捻后采用水蒸气蒸馏，按照每千克干燥牡丹花瓣收集2000ML馏出液的量进行收集，得到的馏出液即为牡丹花露，备用；向经过蒸馏的牡丹花中加入其重量的10倍的水，超声提取30MIN，然后将提取液浓缩至原体积的1/4，再向浓缩液中加入体积4倍的无水乙醇。
34、，混合静置6H，过滤，将得到的滤液浓缩至原体积的1/3，喷雾干燥，得到牡丹花提取物，备用；向牡丹花提取物中加入其重量6倍的水，充分溶解，过200目筛，滤液即为牡丹花提取液，备用；步骤三、牡丹肽饮料的制备按照上述重量份数分别取步骤一得到的牡丹肽溶液、步骤二得到的牡丹籽壳提取液、牡丹花露和牡丹花提取液，再取甜味剂、乳化剂和水，备用；先向混合釜内加入水，然后加入牡丹肽溶液，再加入乳化剂，搅拌均匀，然后依次加入牡丹籽壳提取液、牡丹花露、牡丹花提取液和甜味剂，在温度为55条件下搅拌25MIN，过190目筛，在压力为25MPA下均质2次，最后在150温度下采用超高温瞬间杀菌20S，灌装，即完成牡丹肽饮料的。
35、制备。0022实施例4一种牡丹肽饮料，按照重量份数由以下原料制成牡丹肽溶液36份、牡丹籽壳提取液2份、牡丹花露3份、牡丹花提取液2份、甜味剂1份、乳化剂02份和水56份；所述的牡丹肽饮料的制备方法，包括以下步骤步骤一、牡丹肽溶液的制备1）取凤丹牡丹籽原材料，脱壳后收集牡丹籽壳，并将得到的牡丹籽仁用PH值为95的稀碱水浸泡除杂，再用清水洗涤4次，晾干水分后在150180的炒锅中炒制5MIN，得到炒牡丹籽仁，备用；2）将步骤1）得到的炒牡丹籽仁加入其重量18倍的水，用220目的研磨机中研磨4遍，得到牡丹籽浆液，备用；3）用质量浓度为20的氢氧化钠溶液调节步骤2）得到的牡丹籽浆液的PH值为96，然后。
36、加入培养成熟的混合蛋白酶，并使牡丹籽浆液中蛋白酶的质量百分数为12，所述的蛋白酶混合物是指重量比为1120812的胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶和碱性2709蛋白酶的混合物，保持温度为50，控制搅拌桨搅拌转数为200R/MIN，在无菌空气下水解48H，水解结束后升温至110120进行高温灭活，过滤除渣，即制得牡丹肽溶液，备用；步骤二、其他原料的制备取步骤一收集的牡丹籽壳，加入其重量25倍的水，超声提取50MIN，收集提取液并浓缩至原体积的1/5，得到浓缩液，备用；向浓缩液中加入其体积6倍的无水乙醇，混合后静置6H，过滤，将得到的滤液浓缩至原体积的1/4，喷雾干燥，得到牡丹籽壳提取物，备用。
37、；向牡丹籽壳提取物中加入其重量8倍的水，充分溶解后过200目筛，得到的滤液即为牡丹籽壳提取液，备用；取牡丹花瓣原材料，在室温下干燥至水分含量为30，得到干燥牡丹花瓣，备用；然后加入干燥丹花瓣重量5的食盐，揉捻后采用水蒸气蒸馏，按照每千克干燥牡丹花瓣收集2000ML馏出液的量进行收集，得到的馏出液即为牡丹花露，备用；说明书CN104041901A108/11页11向经过蒸馏的牡丹花中加入其重量的15倍的水，超声提取30MIN，然后将提取液浓缩至原体积的1/5，再向浓缩液中加入体积6倍的无水乙醇，混合静置6H，过滤，将得到的滤液浓缩至原体积的1/4，喷雾干燥，得到牡丹花提取物，备用；向牡丹花提取物。
38、中加入其重量8倍的水，充分溶解，过200目筛，滤液即为牡丹花提取液，备用；步骤三、牡丹肽饮料的制备按照上述重量份数分别取步骤一得到的牡丹肽溶液、步骤二得到的牡丹籽壳提取液、牡丹花露和牡丹花提取液，再取甜味剂、乳化剂和水，备用；先向混合釜内加入水，然后加入牡丹肽溶液，再加入乳化剂，搅拌均匀，然后依次加入牡丹籽壳提取液、牡丹花露、牡丹花提取液和甜味剂，在温度为60条件下搅拌30MIN，过200目筛，在压力为30MPA下均质2次，最后在160温度下采用超高温瞬间杀菌20S，灌装，即完成牡丹肽饮料的制备。0023活性测试试验1抗肿瘤活性研究1试验材料胎牛血清，96孔培养板，恒温箱，RPM1640培养液。
39、。00242方法对上述实施例中得到的牡丹肽进行细胞毒活性测试，采用的方法为MTT法。00253试验步骤1取对数生长期细胞，用含10胎牛血清的RPM1640培养液，制成单细胞悬液5104个/ML，将该悬液加到96孔培养板中，每孔加入1104个细胞。培养24H后，加入受试牡丹肽浓度分别为30G/ML、10G/ML。00262将平板在37，含5CO2空气及100湿度的恒温箱中孵育3天，去除培养液。00273MTT用无血清的RPM1640培养液配成1MG/ML溶液，每孔加100L，37温育4H，使MTT还原为甲臢。00284吸出上层清液，加入150LDMSO使甲臢溶解，于ELISA仪570NM处测OD。
40、值。00294试验结果表1牡丹肽细胞毒活性实验数据N3说明书CN104041901A119/11页122抗氧化活性研究1试验材料牡丹肽粉末制备方法见实施例1。0030亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、1,1二苯基2苦基苯肼DPPH、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH、吩嗪甲酯硫酸盐PMS、氯化硝基四氮唑NBT、无水乙醇、双氧水、2,6二叔丁基对甲苯酚BHT、水杨酸、三羟甲基氨基甲烷TRIS、三氯乙酸TCA、硫代巴比妥酸TBA、盐酸HC1均为分析纯，大豆卵磷脂90。00312方法1清除超氧阴离子自由基O2的测定方法用PH80、浓度50MOL/L的TRISHCL缓冲液将牡丹肽稀释成不同的浓度梯度，各取1。
41、5ML不同浓度牡丹肽溶液，然后依次加入05MLNBT300MOL/L，以PH80的TRISHCL缓冲液配制，05MLNADH468MOL/L，以PH80的TRISHCL缓冲液配制，05MLPMS60MOL/L，以PH80的TRISHCL缓冲液配制，混匀后在25中水浴5分钟，取出在波长560NM处测定吸光度，空白对照组以缓冲液代替芪类溶液。0032EO211001式中EO2为牡丹小肽对O2的清除率；A1为芪类吸光度；A0为空白吸光度。00332清除DPPH自由基的测定方法将牡丹肽稀释成不同的浓度梯度，各取2ML上述浓度的溶液于试管中，再加入2ML浓度为004MG/ML的DPPH溶液，混合均匀，反。
42、应20分钟，3500R/MIN离心分离10分钟，取上清液在波长517NM处测其吸光度为AI；另各取2ML上述浓度的牡丹肽溶液于试管中，分别加入无水乙醇2ML，反应20分钟，3500R/MIN离心分离10分钟，取上清液在波长517NM处测说明书CN104041901A1210/11页13其吸光度为AJ；以2ML004MG/MLDPPH和2ML无水乙醇反应作为参比，其吸光度记为A0。0034EDPPH11002式中EDPPH为牡丹肽对DPPH自由基的清除率；A0为2MLDPPH溶液2ML无水乙醇的吸光度；AI为2MLDPPH溶液2ML牡丹肽溶液的吸光度；AJ为2ML无水乙醇2ML牡丹肽的吸光度。0。
43、0353清除羟自由基OH的测定方法将牡丹肽用双蒸水配制成不同浓度梯度，各取2ML上述浓度的溶液，依次加入2ML6MMOL/L的FESO4、2ML6MMOL/L的H2O2，混匀后静置10分钟，再加入2ML6MMOL/L水杨酸，混匀，静置30分钟，在波长510NM处测其吸光度记为AI，当用双蒸水代替水杨酸时的吸光度记为AJ。空白对照组以双蒸水代替牡丹肽溶液吸光度记为A0。0036EOH1100式中EOH为羟自由基的清除率；AI为牡丹肽反应的吸光度；A0为空白吸光度；AJ为无水杨酸参加反应时芪类的吸光度。00373结果1清除超氧阴离子自由基O2表2牡丹肽清除超氧阴离子自由基O2活性由表2可知，在所选。
44、质量浓度范围内，牡丹肽化合物具有清除超氧阴离子自由基的能力。随着质量浓度的增大，对超氧阴离子自由基的清除作用增强，呈现量效关系，总体效果比BHT一致。00382清除DPPH自由基表3牡丹肽清除DPPH自由基活性DPPH自由基是一种很稳定的以氮为中心的自由基，对其清除的效果表明受试药物具有降低羟自由基、烷自由基或过氧自由基的有效浓度和打断脂质过氧化链反应的作用。由表3可知，牡丹肽化合物表现出很强的清除DPPH自由基的能力。说明书CN104041901A1311/11页1400393清除羟自由基OH表4牡丹肽清除羟自由基OH活性羟基自由基是最强的氧化剂，在生物体内几乎可以和所有细胞成分发生反应，对机体危害很大。由表4可知，牡丹肽清除OH效果和BHT相比稍弱一些。说明书CN104041901A14。