治疗方法
发明领域
本发明涉及抑制EZH2/EZH1的化合物以及它们用于治疗T细胞介导的炎性免疫性疾病的用途。
发明背景
蛋白的翻译后修饰在调节来自受体的信号转导、染色质重塑和基因转录中发挥着关键作用。这些修改包括乙酰化，甲基化，磷酸化，泛素化，SUMO化。EZH(zeste同系物的增强子)1和2是多梳蛋白抑制复合体2(Polycomb Repressor Complex2)(PRC2)的催化亚基，并表现出能够催化赖氨酸氨基酸的甲基化的甲基转移酶活性(Margueron R,Reinberg D:The Polycomb complex PRC2and its mark in life.Nature.2011Jan20；469(7330):343-9)。
EZH1和EZH2基因在通过组蛋白H3的二或三甲基化赖氨酸27(H3K27me2/3)进行的基因表达的表观遗传长期沉默中发挥关键作用。组蛋白H3是参与真核细胞中染色质的结构的五个主要组蛋白之一。染色质是DNA和蛋白的复合物组合，其构成了染色体。发现其位于真核细胞的细胞核内，且分为异染色质(凝聚)和常染色质(伸展)。染色质的基本结构单元是核小体，其中每一个核小体是由缠绕在组蛋白八聚体的DNA的146个碱基对组成，该组蛋白八聚体由2组H2A、H2B、H3和H4组成。染色质的功能是将DNA组装至较小的体积以容纳于细胞中、加强DNA以允许有丝分裂和减数分裂，并作为一种机制来控制基因表达和DNA复制。染色质结构通过对组蛋白(特别是组蛋白H3和H4)的一系列翻译后修饰来控制，最常见的是在延伸超出芯核小体的结构的“组蛋白尾部”进行修饰。酶和衔接蛋白结合的组蛋白尾部翻译后修饰调节染色质动力学和基因表达。H3K27me3被认为是通过招募组蛋白去乙酰化酶至修饰的核小体以及通过聚合酶II停止转录伸长而沉默基因表达。因此，抑制EZH1和EZH2的酶活性可造成H3K27me3的损失和靶基因的上调。
除了在组蛋白H3修饰中的核功能外，EZH2已经涉及于导致细胞的细胞 质中肌动蛋白聚合的信号转导的调控(Su IH,Dobenecker MW,Dickinson E,Oser M,Basavaraj A,Marqueron R,Viale A,Reinberg D,Wülfing C,Tarakhovsky A：Polycomb group protein ezh2controls actin polymerization and cell signaling.Cell.2005May6；121(3):425-36)。肌动蛋白细胞骨架的重组通过促进T细胞与抗原呈递细胞或靶细胞的相互作用有助于T细胞应答。此外，肌动蛋白重塑在T细胞招募到炎症部位期间的迁移和运动中具有重要作用。EZH2蛋白的组分被发现定位于T细胞的细胞质，并与小GTP酶VAV1(其参与肌动蛋白重塑)相互作用。EZH2的遗传消除导致肌动蛋白在TCR刺激的T细胞中或在T细胞-抗原呈递细胞分裂期间的聚合受损。此外，通过EZH2过表达诱导的肌动蛋白聚合依赖于EZH2的甲基转移酶活性。响应于TCR的T细胞的增殖在没有EZH2的情况下也被削弱。因此，抑制EZH1和/或EZH2可以抑制T细胞的活化。
成熟T细胞在适当的共刺激的存在下通过抗原呈递细胞对外源肽抗原响应。由于对胸腺中的外源抗原特异的TCR指令的选择，外周自反应性T细胞克隆的耐受诱导，以及通过调节性T细胞自身抗原进行的T细胞活化的控制，它们具有在自我和非自我之间进行区分的能力。作为不同组的细胞因子和其它可溶性和细胞结合的产物的表达的结果，T细胞通过介导不同类型的适应性免疫应答，提供对抗不同种类的病原体的保护。此外，它们用作在先天免疫系统的细胞和非免疫细胞中的适当炎症和效应应答的基础放大器和诱导子。虽然这种协调一致的免疫应答可以针对病原体提供了有力的保障，也可能会造成与对自我和环境抗原和共生微生物的不需要的免疫响应相关的炎症，以及作为针对病原体的免疫响应的副作用的宿主的附带损害。CD8T细胞可裂解带有细胞内病原体的细胞，但也可能导致组织损伤和分泌促炎细胞因子，如TNF和IFNg。CD4T细胞在炎症中具有多种功能，取决于他们的特异性的细胞因子表达特性。CD4+Th1细胞对胞内病原体的清除是重要的，但也通过TNF和IFNg的表达在炎症中起关键作用。IL-17表达的CD4+Th17细胞，其介导中性粒细胞和组织重塑和修复，也已显示出参与多种炎性病症。CD4+Th2细胞通过表达介导气道高反应性，嗜酸性粒细胞招募和IgE产生的IL-13，IL-5和IL-4参与过敏性反应。因此，T细胞的活化被认为对于许多炎性免疫性疾病是关键的。因此，抑制EZH1和/或EZH2活性和抑制T细胞的活化的化合物可用于T细胞介导的炎性免疫性疾病的治疗。
用于治疗癌症的EZH1/EZH2的抑制剂已经报道于PCT申请PCT/US2011/035336、PCT/US2011/035340和PCT/US2011/035344中。
发明概述
本发明涉及一种治疗T细胞介导的炎性免疫性疾病或T细胞介导的超敏反应性疾病的方法，其包括向有此需要的人给予抑制EZH2和/或EZH1的有效量的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明涉及抑制EZH2和/或EZH1的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗T细胞介导的炎性免疫性疾病或T细胞介导的超敏反应性疾病。
在另一方面，本发明涉及抑制EZH2和/或EZH1的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗T细胞介导的炎性免疫性疾病或T细胞介导的超敏反应性疾病的药物中的用途。
附图说明
图1：EZH1/EZH2抑制剂损害T细胞受体-诱导的CD4+T细胞增殖。分裂指数在使用10μg/mLαCD3+2μg/mLαCD28刺激后6天通过CFSE荧光进行计算。数据以平均值±平均值的标准误差表示，n＝4。
图2：EZH1/EZH2抑制剂损害CD4+T细胞中T细胞受体-诱导的细胞因子产生。细胞因子产生使用10μg/mLαCD3+2μg/mLαCD28刺激后72小时进行测量。数据以平均值±平均值的标准误差表示，n＝4。
图3：EZH1/EZH2抑制剂于CD4+T细胞中损害T细胞受体-诱导的IL-2产生。IL-2产生使用10μg/mLαCD3+2μg/mLαCD28刺激18小时后进行测量。数据以平均值±平均值的标准误差表示，n＝4。
表1：EZH1/EZH2抑制剂损害CD4+T细胞中T细胞受体-诱导的细胞因子产生。细胞因子产生使用10μg/mLαCD3+2μg/mLαCD28刺激后72小时进行测量。数据以pIC50±标准误差表示；n＝4。
发明详述
本发明涉及一种如上所述的治疗T细胞介导的炎性免疫性疾病的方法。
本发明涉及一种如上所述的治疗T细胞介导的超敏反应性疾病的方法。
本发明涉及一种治疗T细胞介导的炎性免疫性疾病或T细胞介导的超敏反应性疾病的方法，其包括向有此需要的人给予有效量的式(I)化合物或其盐
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其中
X和Z独立地选自氢、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、未取代或取代的(C3-C8)环烷基、未取代或取代的(C3-C8)环烷基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、未取代或取代的(C5-C8)环烯基、未取代或取代的(C5-C8)环烯基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、(C6-C10)双环烷基、未取代或取代的杂环烷基、未取代或取代的杂环烷基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、未取代或取代的杂芳基、未取代或取代的杂芳基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、卤素、氰基、–CORa、–CO2Ra、–CONRaRb、–CONRaNRaRb、–SRa、–SORa、–SO2Ra、–SO2NRaRb、硝基、–NRaRb、–NRaC(O)Rb、–NRaC(O)NRaRb、–NRaC(O)ORa、–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–NRaNRaRb、–NRaNRaC(O)Rb、–NRaNRaC(O)NRaRb、–NRaNRaC(O)ORa、–ORa、–OC(O)Ra、和–OC(O)NRaRb；
Y为H或卤素；
R1为(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、未取代或取代的(C3-C8)环烷基、未取代或取代的(C3-C8)环烷基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、未取代或取代的(C5-C8)环烯基、未取代或取代的(C5-C8)环烯基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、未取代或取代的(C6-C10)双环烷基、未取代或取代的杂环烷基或-(C2-C8)烯基、未取代或取代的杂环烷基-(C1-C8)烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、未取代或取代的杂芳基、未取代或取代的杂芳基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、–CORa、–CO2Ra、–CONRaRb、–CONRaNRaRb；
R2为氢、(C1-C8)烷基、三氟甲基、烷氧基或卤素、其中所述的(C1-C8)烷基可被一个或两个选自下列的基团所取代：氨基和(C1-C3)烷基氨基；
R7为氢、(C1-C3)烷基或烷氧基；
R3为氢、(C1-C8)烷基、氰基、三氟甲基、–NRaRb或卤素；
R6选自氢、卤素、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、–B(OH)2、取代或未取代的(C2-C8)炔基、未取代或取代的(C3-C8)环烷基、未取代或取代的(C3-C8)环烷基-(C1-C8)烷基、未取代或取代的(C5-C8)环烯基、未取代或取代的(C5-C8)环烯基-(C1-C8)烷基、(C6-C10)双环烷基、未取代或取代的杂环烷基、未取代或取代的杂环烷基-(C1-C8)烷基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的芳基-(C1-C8)烷基、未取代或取代的杂芳基、未取代或取代的杂芳基-(C1-C8)烷基、氰基、–CORa、–CO2Ra、–CONRaRb、–CONRaNRaRb、–SRa、–SORa、–SO2Ra、–SO2NRaRb、硝基、–NRaRb、–NRaC(O)Rb、–NRaC(O)NRaRb、–NRaC(O)ORa、–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–NRaNRaRb、–NRaNRaC(O)Rb、–NRaNRaC(O)NRaRb、NRaNRaC(O)ORa、–ORa、–OC(O)Ra、–OC(O)NRaRb；
其中任一(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、环烷基、环烯基、双环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团任选被1、2或3个独立地选自下列的基团所取代：–O(C1-C6)烷基(Rc)1-2、–S(C1-C6)烷基(Rc)1-2、–(C1-C6)烷基(Rc)1-2、(C1-C8)烷基-杂环烷基、(C3-C8)环烷基-杂环烷基、卤素、(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C5-C8)环烯基、(C1-C6)卤代烷基、氰基、–CORa、–CO2Ra,–CONRaRb、–SRa、–SORa、–SO2Ra、–SO2NRaRb、硝基、–NRaRb、–NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、–NRaC(O)ORa、–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–ORa、–OC(O)Ra、–OC(O)NRaRb、杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基(C1-C4)烷基和杂芳基(C1-C4)烷基；
其中所述芳基、杂芳基、芳基(C1-C4)烷基或杂芳基(C1-C4)烷基的任一芳基或杂芳基部分任选被1、2或3个独立地选自下列的基团所取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C5-C8)环烯基、(C1-C6)卤代烷基、氰基、–CORa、–CO2Ra、–CONRaRb、–SRa、–SORa、–SO2Ra、–SO2NRaRb、硝基、–NRaRb、–NRaC(O)Rb、–NRaC(O)NRaRb、–NRaC(O)ORa、–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–ORa、–OC(O)Ra和–OC(O)NRaRb；
Ra和Rb各自独立地为氢、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C3-C8)环烷基、(C5-C8)环烯基、(C6-C10)双环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基，其中所述(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、环烷基、环烯基、双 环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团任选被1、2或3个独立地选自下列的基团所取代：卤素、羟基、(C1-C4)烷氧基、氨基、(C1-C4)烷基氨基、((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)氨基、–CO2H、–CO2(C1-C4)烷基、–CONH2、–CONH(C1-C4)烷基、–CON((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)、–SO2(C1-C4)烷基、–SO2NH2、–SO2NH(C1-C4)烷基或–SO2N((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)；
各个Rc独立地为(C1-C4)烷基氨基、–NRaSO2Rb、–SORa、–SO2Ra、–NRaC(O)ORa、–NRaRb或–CO2Ra；
或Ra和Rb与它们连接的氮一起表示5-8元饱和或不饱和环，其任选地包含选自氧、氮和硫的额外杂原子，其中所述环任选被1、2或3个独立地选自下列的基团所取代：(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、氨基、(C1-C4)烷基氨基、((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)氨基、羟基、氧代、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基，其中所述环任选地稠合至(C3-C8)环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环；
或Ra和Rb与它们连接的氮一起表示6-至10-元桥连的双环体系，其任选稠合至(C3-C8)环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环。
本发明还涉及上述方法，其中该式(I)化合物进一步如下面亚组的一种所定义：
亚组(I)(A)
X和Z选自(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、–NRaRb和–ORa；
Y为H或F；
R1选自(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基；
R2为氢、(C1-C8)烷基、三氟甲基、烷氧基或卤素，其中所述(C1-C8)烷基可被一个至两个选自下列的基团所取代：氨基和(C1-C3)烷基氨基；
R7为氢、(C1-C3)烷基或烷氧基；
R3选自氢、(C1-C8)烷基、氰基、三氟甲基、–NRaRb和卤素；
R6选自氢、卤素、氰基、三氟甲基、氨基、(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基、芳基、杂芳基、酰基氨基、(C2-C8)炔基、芳基炔基、杂芳基炔基、–SO2Ra、–SO2NRaRb和–NRaSO2Rb；
其中任一(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基、(C2-C8)炔基、芳基炔基、杂芳基炔基基团任选被1、2或3个独立地选自下列的基团所取代：–O(C1-C6)烷基 (Rc)1-2、–S(C1-C6)烷基(Rc)1-2、–(C1-C6)烷基(Rc)1-2、(C1-C8)烷基-杂环烷基、(C3-C8)环烷基-杂环烷基、卤素、(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C5-C8)环烯基、(C1-C6)卤代烷基、氰基、–CORa、–CO2Ra、–CONRaRb、–SRa、–SORa、–SO2Ra、–SO2NRaRb、硝基、–NRaRb、–NRaC(O)Rb、–NRaC(O)NRaRb、–NRaC(O)ORa、–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–ORa、–OC(O)Ra、–OC(O)NRaRb、杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基(C1-C4)烷基和杂芳基(C1-C4)烷基；
各个Rc独立地为(C1-C4)烷基氨基、–NRaSO2Rb、–SORa、–SO2Ra、–NRaC(O)ORa、–NRaRb或–CO2Ra；
Ra和Rb各自独立地为氢、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C3-C8)环烷基、(C5-C8)环烯基、(C6-C10)双环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基，其中所述(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、环烷基、环烯基、双环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团任选被1、2或3个独立地选自下列的基团所取代：卤素、羟基、(C1-C4)烷氧基、氨基、(C1-C4)烷基氨基、((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)氨基、–CO2H、–CO2(C1-C4)烷基、–CONH2、–CONH(C1-C4)烷基、–CON((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)、–SO2(C1-C4)烷基、–SO2NH2、–SO2NH(C1-C4)烷基和–SO2N((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)；
或Ra和Rb与它们连接的氮一起表示5-8元饱和或不饱和环，其任选地包含选自氧、氮和硫的额外杂原子，其中所述环任选被1、2或3个独立地选自下列的基团所取代：(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、氨基、(C1-C4)烷基氨基、((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)氨基、羟基、氧代、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基，其中所述环任选地稠合至(C3-C8)环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环；
或Ra和Rb与它们连接的氮一起表示6-至10-元桥连的双环体系，其任选稠合至(C3-C8)环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环。在此具体亚组A中的芳基或杂芳基基团独立地选自呋喃、噻吩、吡咯、![]()
唑、噻唑、咪唑、吡唑、![]()
二唑、噻二唑、三唑、四唑、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并![]()
唑、苯并噻唑、苯基、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪、四嗪、喹啉、噌啉、喹唑啉、喹喔啉和二氮杂萘或如下所述的其它芳基或杂芳基基团：
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其中，在(1)中，
A为O、NH或S；B为CH或N，和C为氢或C1-C8烷基；或
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其中，在(2)中，
D为N或C，其任选地被氢或C1-C8烷基取代；或
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其中，在(3)中，
E为NH或CH2；F为O或CO；和G为NH或CH2；或
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其中，在(4)中，
J为O、S或CO；或
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其中，在(5)中，
Q为CH或N；
M为CH或N；和
L/(5)为氢、卤素、氨基、氰基、(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基、–CORa、–CO2Ra、–CONRaRb、–CONRaNRaRb、–SO2Ra、–SO2NRaRb、–NRaRb、–NRaC(O)Rb、–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–NRaNRaRb、–NRaNRaC(O)Rb、–NRaNRaC(O)NRaRb、–ORa，
其中任一(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基基团任选被1、2或3个独立地选自下列的基团所取代：(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C5-C8)环烯基、(C1-C6)卤代烷基、氰基、–CORa、–CO2Ra、–CONRaRb、–SRa、–SORa、–SO2Ra、 –SO2NRaRb、硝基、–NRaRb、–NRaC(O)Rb、–NRaC(O)NRaRb、–NRaC(O)ORa、–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–ORa、–OC(O)Ra、–OC(O)NRaRb；其中Ra和Rb如上所定义；或
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其中，在6中，
L/(6)为NH或CH2；或
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其中，在7中，
M/(7)为氢、卤素、氨基、氰基、(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基、杂环烷基、–CORa、–CO2Ra、–CONRaRb、–CONRaNRaRb、–SO2Ra、–SO2NRaRb、–NRaRb、–NRaC(O)Rb、–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–NRaNRaRb、–NRaNRaC(O)Rb、–NRaNRaC(O)NRaRb、–ORa，
其中任一(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基、杂环烷基基团任选被1、2或3个独立地选自下列的基团所取代：(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C5-C8)环烯基、(C1-C6)卤代烷基、氰基、–CORa、–CO2Ra、–CONRaRb、–SRa、–SORa、–SO2Ra、–SO2NRaRb、硝基、–NRaRb、–NRaC(O)Rb、–NRaC(O)NRaRb、–NRaC(O)ORa、–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–ORa、–OC(O)Ra、–OC(O)NRaRb；其中Ra和Rb如上所定义；或
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其中，在(8)中，
P为CH2、NH、O,或S；Q/(8)为CH或N；和n为0-2；或
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其中，在(9)中，
S/(9)和T(9)为C，或S/(9)为C和T(9)为N，或S/(9)为N和T/(9)为C；
R为氢、氨基、甲基、三氟甲基、卤素；
U为氢、卤素、氨基、氰基、硝基、三氟甲基、(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基、–CORa、–CO2Ra、–CONRaRb、–SO2Ra、–SO2NRaRb、–NRaRb、–NRaC(O)Rb,–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–NRaNRaRb、–NRaNRaC(O)Rb、–ORa、4-(1H-吡唑-4-基)，
其中任一(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基基团任选被1、2或3个独立地选自下列的基团所取代：(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C5-C8)环烯基、(C1-C6)卤代烷基、氰基、–CORa、–CO2Ra,–CONRaRb、–SRa、–SORa、–SO2Ra、–SO2NRaRb、硝基、–NRaRb、–NRaC(O)Rb、–NRaC(O)NRaRb、–NRaC(O)ORa、–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–ORa、–OC(O)Ra、–OC(O)NRaRb；其中Ra和Rb如上所定义。
亚组(I)(B)
X和Z独立地选自(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、–NRaRb和–ORa；
Y为H；
R1为(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基或杂环烷基；
R2为氢、(C1-C3)烷基或卤素，其中所述(C1-C3)烷基可被一个至两个选自下列的基团所取代：氨基和(C1-C3)烷基氨基；
R7为氢、(C1-C3)烷基或烷氧基；
R3为氢、(C1-C8)烷基或卤素；
R6为氢、卤素、氰基、三氟甲基、氨基、(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基、芳基、杂芳基、酰基氨基、(C2-C8)炔基、芳基炔基、杂芳基炔基、–SO2Ra、–SO2NRaRb或–NRaSO2Rb；
其中任一(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基、(C2-C8)炔基、芳基炔基、杂芳基炔基基团任选被1、2或3个独立地选自下列的基团所取代：卤素、(C1-C6) 烷基、(C3-C8)环烷基、(C5-C8)环烯基、(C1-C6)卤代烷基、氰基、–CORa、–CO2Ra、–CONRaRb、–SRa、–SORa、–SO2Ra、–SO2NRaRb、硝基、–NRaRb、–NRaC(O)Rb、–NRaC(O)NRaRb、–NRaC(O)ORa、–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–ORa、–OC(O)Ra、–OC(O)NRaRb、杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基(C1-C4)烷基和杂芳基(C1-C4)烷基；
Ra和Rb各自独立地为氢、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C3-C8)环烷基、(C5-C8)环烯基、(C6-C10)双环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基，其中所述(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、环烷基、环烯基、双环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团任选被1、2或3个独立地选自下列的基团所取代：卤素、羟基、(C1-C4)烷氧基、氨基、(C1-C4)烷基氨基、((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)氨基、–CO2H、–CO2(C1-C4)烷基、–CONH2,–CONH(C1-C4)烷基、–CON((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)、–SO2(C1-C4)烷基、–SO2NH2、–SO2NH(C1-C4)烷基和–SO2N((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)；
或Ra和Rb与它们连接的氮一起表示5-8元饱和或不饱和环，其任选地包含选自氧、氮和硫的额外杂原子，其中所述环任选被1、2或3个独立地选自下列的基团所取代：(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基、氨基、(C1-C4)烷基氨基、((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)氨基、羟基、氧代、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基，其中所述环任选地稠合至(C3-C8)环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环；
或Ra和Rb与它们连接的氮一起表示6-至10-元桥连的双环体系，其任选稠合至(C3-C8)环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环。在该定义中的芳基和杂芳基选自呋喃、噻吩、吡咯、![]()
唑、噻唑、咪唑、吡唑、![]()
二唑、噻二唑、三唑、四唑、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并![]()
唑、苯并噻唑、苯基、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪、四嗪、喹啉、噌啉、喹唑啉、喹喔啉和二氮杂萘或如下所述的其它芳基或杂芳基基团：
![]()
其中，在(1)中，
A为O、NH或S；B为CH或N，和C为氢或C1-C8烷基；或
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其中，在(2)中，
D为N或C，其任选地被氢或C1-C8烷基取代；或
![]()
其中，在(3)中，
E为NH或CH2；F为O或CO；和G为NH或CH2；或
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其中，在(4)中，
J为O、S或CO；或
![]()
其中，在(5)中，
Q为CH或N；
M为CH或N；和
L/(5)为氢、卤素、氨基、氰基、(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基、–CORa、–CO2Ra、–CONRaRb、–CONRaNRaRb、–SO2Ra、–SO2NRaRb、–NRaRb、–NRaC(O)Rb、–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–NRaNRaRb、–NRaNRaC(O)Rb、–NRaNRaC(O)NRaRb、–ORa，
其中任一(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基基团任选被1、2或3个独立地选自下列的基团所取代：(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C5-C8)环烯基、(C1-C6)卤代烷基、氰基、–CORa、–CO2Ra、–CONRaRb、–SRa、–SORa、–SO2Ra、–SO2NRaRb、硝基、–NRaRb、–NRaC(O)Rb、–NRaC(O)NRaRb、–NRaC(O)ORa、–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–ORa、–OC(O)Ra、–OC(O)NRaRb，
其中Ra和Rb如上所定义；或
![]()
其中，在6中，
L/(6)为NH或CH2；或
![]()
其中，在7中，
M/(7)为氢、卤素、氨基、氰基、(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基、杂环烷基、–CORa、–CO2Ra、–CONRaRb、–CONRaNRaRb、–SO2Ra、–SO2NRaRb、–NRaRb、–NRaC(O)Rb、–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–NRaNRaRb、–NRaNRaC(O)Rb、–NRaNRaC(O)NRaRb、–ORa，
其中任一(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基、杂环烷基基团任选被1、2或3个独立地选自下列的基团所取代：(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C5-C8)环烯基、(C1-C6)卤代烷基、氰基、–CORa、–CO2Ra、–CONRaRb、–SRa、–SORa、–SO2Ra、–SO2NRaRb、硝基、–NRaRb、–NRaC(O)Rb、–NRaC(O)NRaRb、–NRaC(O)ORa、–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–ORa、–OC(O)Ra、–OC(O)NRaRb；其中Ra和Rb如上所定义；或
![]()
其中，在(8)中，
P为CH2、NH、O或S；Q/(8)为CH或N；和n为0-2；或
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其中，在(9)中，
S/(9)和T(9)为C，或S/(9)为C和T(9)为N，或S/(9)为N和T/(9)为C；
R为氢、氨基、甲基、三氟甲基、卤素；
U为氢、卤素、氨基、氰基、硝基、三氟甲基、(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基、–CORa、–CO2Ra、–CONRaRb、–SO2Ra、–SO2NRaRb、–NRaRb、–NRaC(O)Rb,–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–NRaNRaRb、–NRaNRaC(O)Rb、–ORa、4-(1H-吡唑-4-基)，
其中任一(C1-C8)烷基、(C3-C8)环烷基基团任选被1、2或3个独立地选自下列的基团所取代：(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C5-C8)环烯基、(C1-C6)卤代烷基、氰基、–CORa、–CO2Ra,–CONRaRb、–SRa、–SORa、–SO2Ra、–SO2NRaRb、硝基、–NRaRb、–NRaC(O)Rb、–NRaC(O)NRaRb、–NRaC(O)ORa、–NRaSO2Rb、–NRaSO2NRaRb、–ORa、–OC(O)Ra、–OC(O)NRaRb，其中Ra和Rb如上所定义。
亚组(I)(C)
X为甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基、三氟甲基、四氢吡喃、羟基甲基、甲氧基甲基或苄基；
Y为H；
Z为甲基、乙基、正丙基、异丙基、三氟甲基或苄基；
R1为异丙基、叔丁基、环丁基、环戊基、环己基、(1-甲基乙基)环丙基、1,1-二氧代-四氢噻吩-3-基、1-甲基-哌啶-4-基、四氢呋喃-3-基、四氢吡喃-4-基、N,N-二甲基-1-丙胺基(propanaminyl)、苄基或4-吡啶基；
R2为氢、(C1-C3)烷基或卤素，其中所述(C1-C3)烷基可被一个或两个选自下列的基团所取代：氨基和(C1-C3)烷基氨基；
R7为氢、(C1-C3)烷基或烷氧基；
R3为H、甲基或Br；和
R6为甲基、双(1,1-二甲基乙基)、双(1-甲基乙基)、环丙基、丙基、二甲 基氨基、乙基氨基、(2-羟基乙基)氨基、2-丙烯-1-基氨基、1-哌嗪基、1-哌啶基、4-吗啉基、4-哌啶基氨基、四氢-2H-吡喃-4-基氨基、苯基氨基、(苯基甲基)氨基、(4-吡啶基甲基)氨基、[2-(2-吡啶基氨基)乙基]氨基、2-(二甲基氨基)乙基]氨基、4-吡啶基氨基、4-(氨基羰基)苯基]氨基、3-羟基-3-甲基-1-丁炔-1-基、4-吡啶基乙炔基、苯基乙炔基、2-呋喃基、3-噻吩基；1H-吡唑-4-基、1H-吲唑-5-基、1H-吲唑-6-基、3-甲基-1H-吲唑-5-基、1H-1,2,3-苯并三唑-5-基、2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并咪唑-5-基、2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基、2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基、2,1,3-苯并![]()
二唑-5-基、2-氨基-6-喹唑啉基、2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢-5-嘧啶基、2-氨基-5-嘧啶基、7-氧代-1,5,6,7-四氢-1,8-二氮杂萘-3-基、苯基、2-甲基苯基、2-硝基苯基、2-苯基乙基、3-氨基苯基、4-氨基苯基、4-氯苯基、4-氟苯基、4-(甲基氧基)苯基、3-(乙酰基氨基)苯基、4-(乙酰基氨基)苯基、4-(氨基羰基)苯基、4-(1H-吡唑-4-基)苯基、4-(氨基磺酰基)苯基、4-(甲基磺酰基)苯基、4-[(二甲基氨基)磺酰基]苯基、4-[(甲基氨基)羰基]苯基、4-[(甲基氨基)磺酰基]苯基、4-[(甲基磺酰基)氨基]苯基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-(4-吗啉基)-4-吡啶基、2-氨基-4-吡啶基、5-(甲基氧基)-3-吡啶基、5-(甲基磺酰基)-3-吡啶基、5-[(环丙基磺酰基)氨基]-6-(甲基氧基)-3-吡啶基、5-[(苯基磺酰基)氨基]-3-吡啶基、6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基、6-(4-吗啉基)-3-吡啶基、6-(乙酰基氨基)-3-吡啶基、6-(二甲基氨基)-3-吡啶基、6-(甲基氧基)-3-吡啶基、6-[(甲基氨基)羰基]-3-吡啶基、6-[(甲基氨基)磺酰基]-3-吡啶基、6-甲基-3-吡啶基、4-吡啶基氧基。
本发明还涉及一种治疗T细胞介导的炎性免疫性疾病或T细胞介导的超敏反应性疾病的方法，其包括向有此需要的人给予有效量的选自以下的化合物：
6-溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-6-苯基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-6-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[2-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-(2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-环戊基-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-(3-吡啶基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-苯基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-[(4-环丙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-(1-甲基乙基)-N-{[6-甲基-4-(1-甲基乙基)-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-[(4-环丁基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-(1-甲基乙基)-N-[(4-甲基-2-氧代-6-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-苯基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-6-(6-(2-氧代吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-异丙基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(2-甲基吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-异丙基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(2-甲基嘧啶-5-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-异丙基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(6-甲基吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(4-((二甲基氨基)甲基) 苯基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-6-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(6-吗啉代吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(3-((甲基磺酰基)甲基)苯基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(2-甲基嘧啶-5-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(2-氨基嘧啶-5-基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(6-氨基吡啶-3-基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(6-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(6-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(4-氟苯基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-6-(4-(4-异丙基哌嗪-1-基)苯基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(1H-吲唑-6-基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-[(4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-{3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-N-[(4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-N-[(4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(甲基氧基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(2-甲基-5-嘧啶基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(6-氨基-3-吡啶基)-N-[(4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-[6-(二甲基氨基)-3-吡啶基]-N-[(4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(6-甲基-3-吡啶基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(1H-吡唑-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[1-(2-吡啶基甲基)-1H-吡唑-4-基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[1-(2-噻吩基甲基)-1H-吡唑-4-基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(3-(甲基磺酰胺基甲基)苯基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4-苄基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(6-乙酰胺基吡啶-3-基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(6-乙酰胺基吡啶-3-基)-1-异丙基-3-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2- 二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-异丙基-3-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(3-吡啶基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-(2-甲基-3-吡啶基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[5-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-(6-甲基-3-吡啶基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-6-(3-吡啶基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-环戊基-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-环丁基-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-环丁基-6-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-环丙基-6-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-环丙基-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-6-[6-(甲基氧基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[3-(甲基磺酰基)苯基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-环戊基-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-环戊基-6-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-4,4'-联吡啶-3-基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-{[4-(乙基氨基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-{[4-(乙基氨基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-(1-甲基乙基)-N-{[6-甲基-2-氧代-4-(1-吡咯烷基)-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-(1-甲基乙基)-N-{[6-甲基-2-氧代-4-(苯基氨基)-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-[(4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-N-[(4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙 基)-6-[6-(甲基氧基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-[6-(乙酰基氨基)-3-吡啶基]-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(4-氟苯基)-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-[4-(乙酰基氨基)苯基]-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
4-[4-({[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-6-基]苯甲酸甲酯；
5-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-基]-2-吡啶甲酸甲酯；
3-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-基]苯甲酸甲酯；
6-溴-N-((6-乙基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((6-苄基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-溴-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-((6-环丁基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-(1-甲基乙基)-N-({6-甲基-4-[(甲基氧基)甲基]-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基}甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-(1-甲基乙基)-N-({6-甲基-4-[(甲基氧基)甲基]-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基}甲基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-(1-甲基乙基)-N-({6-甲基-4-[(甲基氧基)甲基]-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基}甲基)-6-[2-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-(1-甲基乙基)-N-({6-甲基-4-[(甲基氧基)甲基]-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基}甲基)-6-(3-吡啶基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-(1-甲基乙基)-N-({6-甲基-4-[(甲基氧基)甲基]-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基}甲基)-6-[6-(4-吗啉基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-环丙基-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-环丙基-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-环丙基-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-(3-吡啶基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-异丙基-3-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(2-(哌嗪-1-基)吡啶-4-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(2-(哌嗪-1-基)吡啶-4-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-环丙基-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-6-[6-(1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
4-[4-({[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-6-基]苯甲酸甲酯；
3-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-基]苯甲酸甲酯；
5-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-基]-2-吡啶甲酸甲酯；
1-异丙基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4-苄基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-异丙基-3-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-({2-[6-(环丙基磺酰基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-基]-2-氧代乙 基}氨基)-4,6-二甲基-2(1H)-吡啶酮；
3-({2-[6-(环丙基磺酰基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-基]-2-氧代乙基}氨基)-4,6-二甲基-2(1H)-吡啶酮；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-{[6-甲基-2-氧代-4-(苯基甲基)-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-6-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-6-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-{3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-{[6-甲基-4-(4-吗啉基甲基)-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-碘-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-碘-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-乙基-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-({2-[6-氯-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-基]-2-氧代乙基}氨基)-4,6-二甲基-2(1H)-吡啶酮；
3-({2-[6-氯-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-基]-2-氧代乙基}氨基)-6-甲基-4-丙基-2(1H)-吡啶酮；
3-({2-[6-氯-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-基]-2-氧代乙基}氨基)-6-甲基-4-丙基-2(1H)-吡啶酮；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-氟-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-({2-[6-氟-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-基]-2-氧代乙基}氨基)-6-甲基-4-丙基-2(1H)-吡啶酮；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(1H-四唑-5-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-异丙基-3-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(2H-四唑-5-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-氰基-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-3-氯-1-异丙基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-3-氯-1-(1-甲基乙基)-N-({6-甲基-4-[(甲基氧基)甲基]-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基}甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-3-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-6-(4-(吗啉代甲基)苯基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(3-氟-4-(吗啉代甲基)苯基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(4-((1H-吡唑-1-基)甲基)苯基)-3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(2-氟苯基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-6-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙 基)-6-[6-(甲基氧基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-6-(3-吡啶基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-6-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[6-(甲基氧基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-6-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-1-(1-甲基乙基)-N-({6-甲基-4-[(甲基氧基)甲基]-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基}甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-1-(1-甲基乙基)-N-({6-甲基-4-[(甲基氧基)甲基]-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基}甲基)-6-[6-(甲基氧基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-1-异丙基-N-((4-(甲氧基甲基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-1-异丙基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-((4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-6-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-6-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-6-(4-(三氟甲基)苯基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(3-氟苯基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-6-(3,5-二氟苯基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-6-(3,4-二氟苯基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(4-氟-3-羟基苯基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(4-氟-3-甲氧基苯基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-6-(4-甲氧基苯基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-6-(3-甲氧基苯基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-6-(3-氰基-4-氟苯基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-6-苯基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(4-氟苯基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(3-氟-4-吗啉代苯基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(6-氟吡啶-3-基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-6-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氯-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-环丙基-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-3-氯-1-环戊基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-氰基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-{[6-甲基-4-(1-甲基乙基)-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(4-{[2-(二甲基氨基)乙基]氧基}苯基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-氟-1-(1-甲基乙 基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-3-氟-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-氟-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-氟-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-(4-哒嗪基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(6-苯基-3-吡啶基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-[3-(氨基甲基)苯基]-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[5-(4-吗啉基羰基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-{[6-甲基-4-(1-甲基乙基)-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-6-[6-(1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-(6-甲酰基-3-吡啶基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4-环丙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1-(1-甲基丙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)苯基)-1-异丙基-3-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3,6-二溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-4-[4-({[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-6-基]-L-苯丙氨酸；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[6-(1H-咪唑-1-基甲基)-3-吡啶基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(5,6,7,8-四氢-1,6-二氮杂萘-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[2-(4-甲基-1-哌嗪基)-1,3-噻唑-5-基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-{6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]![]()
嗪-8(1H)-基]-3-吡啶基}-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-(5,6,7,8-四氢-1,8-二氮杂萘-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-[6-(4-乙基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1-(1-甲基丙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-{6-[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]-3-吡啶基}-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-吗啉基甲基)-2-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-吗啉基)-2-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(6-甲基-2-吡啶基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[2-(4-吗啉基)-4-嘧啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(2-嘧啶基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-{6-[(二甲基氨基)甲基]-2-吡啶基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(6-氨基-2-吡啶基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-[2-氨基-6-(4-吗啉基)-4-嘧啶基]-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-6-[2-(甲基氨基)-4-嘧啶基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(4-嘧啶基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[2-(乙基氨基)-4-嘧啶基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(2-氨基-4-嘧啶基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(1H-苯并咪唑-5-基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[6-(4-乙基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-{6-[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]-3-吡啶基}-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-氯-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-{[6-甲基-4-(1-甲基丙基)-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-{[6-甲基-4-(1-甲基丙基)-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-{[6-甲基-4-(1-甲基丙基)-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(6-氯-3-吡啶基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[6-(1H-咪唑-1-基)-3-吡 啶基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-[6-(4-环丙基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基丙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-{6-[2-(二甲基氨基)乙基]-3-吡啶基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-{3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基丙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1-(1-甲基丙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-{6-[(3R,5S)-3,5-二甲基-1-哌嗪基]-3-吡啶基}-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-{6-[3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-3-吡啶基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基丙基)-6-[6-(1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基六氢-1H-1,4-二氮杂卓-1-基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-哌啶基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-异丙基-N-((6-甲基-2-氧代-4-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲基)-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(哒嗪-4-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(6-氨基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-氯-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(6-氨基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-溴-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-[(3R)-四氢-3-呋喃基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-{[6-甲基-2-氧代-4-(1H-吡唑-1-基甲基)-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-(1-甲基乙基)-N-{[6-甲基-2-氧代-4-(1H-吡唑-1-基甲基)-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-(3-吡啶基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-[(氨基羰基)氨基]-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-环戊基-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基丙基)-6-[6-(1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基丙基)-6-[6-(1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-环戊基-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-6-[6-(1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-[(1R)-1-甲基-2-(甲基氧基)乙基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-[(1S)-1-甲基-2-(甲基氧基)乙基]-6-[6-(1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-[(1S)-1-甲基-2-(甲基氧基)乙基]-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-[(1S)-1-甲基-2-(甲基氧基)乙基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-6-{6-[(甲基氨基)甲基]-3-吡啶基}-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-[6-(2,6-二甲基-4-吗啉基)-3-吡啶基]-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(2-甲基-4-吗啉基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲 基]-6-(7-氧代-5,6,7,8-四氢-1,8-二氮杂萘-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(6-氨基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1-(1-甲基丙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(哒嗪-4-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-氟-1-异丙基-6-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
(R)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-6-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
(S)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(1-甲氧基丙烷-2-基)-3-甲基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(1-(二甲基氨基)丙烷-2-基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(2-(二甲基氨基)丙基)-3-甲基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1-(戊烷-2-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-6-(2-甲氧基嘧啶-4-基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-甲基-3-({2-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(1,2,3,6-四氢-4-吡啶基)-1H-吲哚-4-基]-2-氧代乙基}氨基)-4-丙基-2(1H)-吡啶酮；
6-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(2-(二甲基氨基)丙基)-3-甲基-6-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(2-甲基嘧啶-4-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(2-(二甲基氨基)丙基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
(R)-6-溴-1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；和(S)-6-溴-1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-[(1S)-1-甲基丙基]-6-[6-(1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-[(1R)-1-甲基丙基]-6-[6-(1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(3-((二甲基氨基)甲基)苯基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-{3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-[(1S)-1-甲基丙基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-{3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-[(1R)-1-甲基丙基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-环戊基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-异丙基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-异丙基-3-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(4-(2-氧代哌嗪-1-基)苯基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-甲基-3-[(2-{3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-基}-2-氧代乙基)氨基]-4-丙基-2(1H)-吡啶酮；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
4-[4-({[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-6-基]-L-苯丙氨酸；
6-[6-(氨基甲基)-3-吡啶基]-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(3-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
4-[4-({[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-6-基]苯甲酸；
3-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-基]苯甲酸；
5-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-基]-2-吡啶甲酸；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4-苄基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4-苄基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-环戊基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1H-吲 哚-4-甲酰胺；
6-甲基-3-({2-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(4-哌啶基)-1H-吲哚-4-基]-2-氧代乙基}氨基)-4-丙基-2(1H)-吡啶酮；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(2-哌啶基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-环丙基-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-6-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-环戊基-6-(环丙基磺酰基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-环戊基-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-6-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-({2-[6-(环丙基磺酰基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-基]-2-氧代乙基}氨基)-4,6-二甲基-2(1H)-吡啶酮；
3-({2-[6-(环丙基磺酰基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-基]-2-氧代乙基}氨基)-4,6-二甲基-2(1H)-吡啶酮；
1-环戊基-6-(环丙基磺酰基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-环戊基-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-6-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-6-(三氟甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-异丙基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(三氟甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(4-((二甲基氨基)甲基)哌啶-1-基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(3-((二甲基氨基)甲基)吡咯烷-1-基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-环戊基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(吡咯烷-1-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(1,1-二氧化(dioxido)硫代吗啉代)-1-异丙基-3-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(吡啶-3-基氨基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(4-(4-氟苯基)哌啶-1-基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(4-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(4-氟哌啶-1-基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(4-(3-氟苯基)哌啶-1-基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(4-吗啉基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(4-吗啉基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-{[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吡唑-5-基]氨基}-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(2-二甲基氨基-乙氧基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-吡啶-3-基甲基)-酰胺；
1-异丙基-6-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙氧基]-1H-吲哚-4-甲酸(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-吡啶-3-基甲基)-酰胺；
1-异丙基-6-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-1H-吲哚-4-甲酸(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-吡啶-3-基甲基)-酰胺；
1-异丙基-6-(2-哌嗪-1-基-乙氧基)-1H-吲哚-4-甲酸(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-吡啶-3-基甲基)-酰胺；
N-{[4-(乙基氨基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-{[4-(乙基氨基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1-(1-甲基 乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-(1-甲基乙基)-N-{[6-甲基-2-氧代-4-(1-吡咯烷基)-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-(1-甲基乙基)-N-{[6-甲基-2-氧代-4-(苯基氨基)-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((6-氨基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((6-氨基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-氯-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(6-氨基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(6-氨基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-{3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(6-氨基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-溴-3-甲基-1-(1-甲基丙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(6-氨基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-溴-3-甲基-1-(1-甲基丙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(6-氨基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-溴-3-甲基-1-(1-甲基丙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(6-氨基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1-(1-甲基丙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((6-氨基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-1-异丙基-3-甲基-N-((4-甲基-6-(甲基氨基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-{6-[(2R)-2-甲基-1-哌嗪基]-3-吡啶基}-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[6-(3,4-二甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[6-(六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-3-吡啶基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[6-(六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-3-吡啶基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[6-(3,3-二甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-{6-[(2S)-2-甲基-1-哌嗪基]-3-吡啶基}-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[6-(六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)-3-吡啶基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-{6-[(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-3-吡啶基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-{6-[(1R,4R)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-3-吡啶基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-{6-[(2S,5S)-2,5-二甲基-1-哌嗪基]-3-吡啶基}-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-[6-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-3-吡啶基]-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(6-((2R,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(6-{[(2R,6S)-2,6-二甲基-4-吗啉基]甲基}-3-吡啶基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-{6-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-3-吡啶基}-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-吗啉基甲基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-溴-N-((6-(羟基甲基)-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-((6-(氨基甲基)-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲 基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-甲酸；
3-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-基]丙酸；
6-(2-氨基乙基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-{3-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟苯基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺；
[4-({[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-6-基]硼酸；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[6-(羟基甲基)-3-吡啶基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(3-氧杂环丁烷基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-{[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]氨基}-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-{[(4-甲基-1-哌嗪基)羰基]氨基}-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-{[3-(二甲基氨基)丙基]硫基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-(3-羟基-3-甲基-1-丁炔-1-基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(3-羟基-3-甲基-1-丁炔-1-基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-(环丙基乙炔基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-7-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
7-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺；
1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-7-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-7-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-氯-1-异丙基-2,3-二甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；
6-氯-2-((二甲基氨基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺；和
2-(2-氨基乙基)-6-氯-1-异丙基-3-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺，
或其药学上可接受的盐。
在此使用的术语“任选地”是指随后描述的事件可能发生或可能不发生，包括事件发生和事件不发生两种情况。
除非另有定义，在此使用的短语“任选地被取代”或其变体表示任选的取代，包括具有一个或多个取代基团的多取代度。该短语不应当被解释为此处描述和示例性的取代的重复。示例性的任选取代基包括酰基、C1-C6烷基、C1-C3烷基磺酰基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷氧基羰基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、氧代和硝基。
术语“独立地”是指当多于一个取代基选自很多可能的取代基时，那些取代基可以是相同的或不同的。
"有效量"是指由(例如)研究人员或临床人员所寻求的将会引起组织、系统、动物或人的生物学或医学响应的药物或药学试剂的量。此外，术语“治疗有效量”是指，与没有接受此类量的相应患者相比，造成疾病、病症或副作用的治疗、预防改善或减轻的任何量，或疾病或病症的进展速率的降低的任何量。术语的范围还包括增加正常生理功能的有效量。
在此使用的术语“烷基”是指具有指定碳原子数的直链或支链烃基,例如，在此使用的术语“C1-C8烷基”是指分别具有至少一个和至多8个碳原子的烷基基团。用于本发明中的此类支链或直链的烷基的实例包括，但不限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、异丁基、正丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、正庚基、和正辛基，以及后5个正烷烃的支链类似物。
在此使用的术语"烷氧基"是指–O(C1-C8烷基)，包括-OCH3、-OCH2CH3和-OC(CH3)3等，烷基如上所定义。
在此使用的术语“烷基硫基”是指–S(C1-C8烷基)，包括-SCH3、-SCH2CH3等，烷基如上所定义。
术语"酰基氧基"是指-OC(O)C1-C8烷基等，烷基如上所定义。
"酰基氨基"是指-N(H)C(O)C1-C8烷基等，烷基如上所定义。
“芳基氧基”是指–O(芳基)、-O(取代的芳基)、–O(杂芳基)或–O(取代的杂芳基)。
“芳基氨基”是指-NH(芳基)、-NH(取代的芳基)、-NH(杂芳基)或-NH(取代的杂芳基)等。
当使用术语"烯基"(或"亚烯基")时，其是指具有指定碳原子数和至少一个且至多5个碳碳双键的直链或支链烃链。实例包括乙烯基(或亚乙烯基)和丙烯基(或亚丙烯基)。
当使用术语"炔基"(或"亚炔基")时，其是指具有指定碳原子数和至少一个且至多5个碳碳叁键的直链或支链烃链。实例包括乙炔基(或亚乙炔基)和丙炔基(或亚丙炔基)。
“卤代烷基”是指被一个或多个卤素取代基取代的烷基基团，适宜地1至6个取代基。卤代烷基包括三氟甲基。
当使用“环烷基”时，其是指具有指定碳原子数的非芳香、饱和的、环状烃环。例如，术语“C3-C8环烷基”是指具有3-8个碳原子的非芳香环状烃环。用于本发明的示例性的“C3-C8环烷基”包括，但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
术语"C5-C8环烯基"是指具有指定碳原子数和至多3个碳碳双键的非芳香单环碳环(carboxycyclic ring)。"环烯基"示例性地包括环戊烯基和环己烯基。
当使用“C3-C8杂环烷基”时，其是指具有指定环原子数的非芳香杂环，其可以是饱和的或具有一个或多个不饱和度，且其含有一个或多个独立地选自O、S和N的杂原子取代。此类环可任选地稠合至一个或多个其它“杂环”或环烷基环。实例如下所示。
在此使用的术语“芳基”,除非另定义，是指芳香烃环体系。该环体系可为单环或稠合多环(例如，双环、三环等)、取代的或未取代的。在多个实施方案中，该单环芳环为C5-C10、或C5-C7、或C5-C6、其中这些碳数指的是形成 环体系的碳原子数目。C6环体系，即苯环，为适宜的芳基基团。在多个实施方案中，该多环为双环芳基基团，其中适宜的双环芳基基团为C8-C12或C9-C10。萘环(具有10个碳原子)为适宜的多环芳基基团。芳基的适宜取代基，除非另有定义，描述于下面的“任选地被取代”的定义中。
在此使用的术语“杂芳基”,除非另有定义，是指含有碳原子和至少一个杂原子的芳香环体系。杂芳基可以为单环或多环、取代的或未取代的。单环杂芳基基团可以在环中具有1-4个杂原子，而多环杂芳基可具有1-10个杂原子。多环杂芳基环可含有稠合的、螺或桥连的环连接点，例如，双杂芳基为多环杂芳基。双环杂芳基环可含有8-12个原子。单环杂芳基环可以含有5-8个原子(碳和杂原子)。示例性的杂芳基包括苯并呋喃、苯并噻吩、呋喃、咪唑、吲哚、异噻唑、![]()
唑、吡嗪、吡唑、哒嗪、吡啶、嘧啶、吡咯、喹啉、喹唑啉、喹喔啉、噻唑和噻吩。杂芳基的适宜的取代基，除非另有定义，描述于下面“任选地被取代”的定义中。
本文提供治疗或预防通过抑制EZH1和/或EZH2从而(例如)调节甲基化活化的和甲基化抑制的靶基因的表达水平或调节信号传导蛋白的活性来改善的自体免疫性和炎性病症和疾病的方法。方法可包括向人(例如有此需要的人)给予治疗有效量的本文所述的试剂。
因此，在一个方面，提供了抑制EZH2和/或EZH1的化合物或其药学上可接受的盐(即EZH2和/或EZH1抑制剂)在制备用于治疗T细胞介导的炎性免疫性疾病或T细胞介导的超敏反应性疾病的药物中的用途。
在另一方面，提供了一种在人中治疗T细胞介导的炎性免疫性疾病或T细胞介导的超敏反应性疾病的方法，包括给予治疗有效量的EZH1和/EZH2抑制剂。
炎症代表的是一组血管、细胞和神经对创伤的反应。炎症的特征在于炎症细胞如单核细胞、嗜中性粒细胞和粒细胞进入组织的运动。这通常与内皮屏障功能降低和水肿进入组织相关联。炎症可分类为急性或慢性。急性炎症是机体对有害刺激的初始响应，并通过增加血浆和白细胞从血液流动到损伤组织而实现。生物化学事件的级联传播并完成炎症反应，涉及局部血管系统，免疫系统，和受伤组织内的多种细胞。长期炎症，称为慢性炎症，导致存在于炎症部位的细胞类型的渐进转变，其特征是与炎症过程同时进行的组织的破坏和愈合。
当作为对感染的免疫反应或对创伤的急性反应的一部分发生时，炎症可以是有益的，通常是自限性的。然而，炎症在多种条件下是有害的。这包括响应于传染性物质的过量炎症产生，这导致器官显著损害和死亡(例如，在脓毒症中)。此外，慢性炎症一般是有害的，并且是众多慢性疾病的根源，造成组织严重和不可逆的损伤。在这种情况下，免疫反应往往是针对自身组织(自身免疫)，虽然对外部实体的慢性响应也可导致自身组织的旁路损伤。
因此，抗炎治疗的目标是当存在炎症时，减少这种炎症以抑制自身免疫，以及允许生理过程或愈合和组织修复的进展。
该药剂可用于治疗任何组织和身体器官的炎症，包括骨骼肌肉炎症，血管炎症，神经炎症，消化系统炎症，眼部炎症，生殖系统炎症，以及其它炎症，如下面举例说明。
肌肉骨骼炎症是指肌肉骨骼系统的任何炎性病症，特别是那些影响骨骼关节，包括手、腕、肘、肩、下颌、脊椎、颈、髋关节、膝关节、踝关节和脚的病症，以及影响连接肌肉骨骼组织(如肌腱)的炎症。可被本发明的化合物治疗的肌肉骨骼炎症的实例包括关节炎(包括，例如，骨关节炎、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、急性和慢性感染性关节炎、痛风和假痛风有关的关节炎，和幼年特发性关节炎)、肌腱炎、滑膜炎、腱鞘炎、滑囊炎、纤维织炎(纤维肌痛)、上髁炎、肌炎，和骨炎(包括，例如，佩吉特病、耻骨骨炎和囊性纤维性骨炎)。
眼部炎症是指眼睛的任何结构，包括眼睑的炎症。在本发明中可被治疗的眼部炎症的实例包括睑炎、睑皮松垂症、结膜炎、泪腺炎、角膜炎、干燥性角膜结膜炎(干眼)、巩膜炎、倒睫，和葡萄膜炎。
在本发明中可被治疗的神经系统炎症的实例包括脑炎、格-巴二氏综合征、脑膜炎、神经性肌强直、发作性睡病、多发性硬化、脊髓炎和精神分裂症。
在本发明中可被治疗的血管或淋巴系统炎症的实例包括动脉粥样硬化、关节炎、静脉炎、脉管炎，和淋巴管炎。
在本发明中可被治疗的消化系统炎症的实例包括胆管炎、胆囊炎、小肠炎、小肠结膜炎、胃炎、肠胃炎、回肠炎，和直肠炎。
在本发明中可被治疗生殖系统炎症的实例包括子宫颈炎、绒膜羊膜炎、子宫内膜炎、附睾炎、脐炎、卵巢炎、睾丸炎、输卵管炎、输卵管卵巢脓肿、 尿道炎、阴道炎、外阴炎，和外阴痛。
该药剂可用于治疗具有炎性成分的自身免疫性疾病。此类病症包括急性播散性普遍斑秃(acute disseminated alopecia universalise)、贝切特(氏)病、恰加斯(氏)病、慢性疲乏综合征、全自主神经失调症、脑脊髓炎、强直性脊柱炎、再生障碍性贫血、化脓性大汗腺炎、自身免疫性肝炎、自身免疫性卵巢炎、脂泻病、克罗恩病、1型糖尿病、巨细胞性动脉炎、古德帕斯彻(氏)综合征、格雷夫斯病、格-巴二氏综合征、桥本(氏)病、亨-舍二氏紫癜、川崎(氏)病、红斑狼疮、镜下结肠炎、镜下多动脉炎、混合性结缔组织病、多发性硬化、重症肌无力、肌阵挛综合征(opsocionus myoclonus syndrome)、视神经炎、奥德甲状腺炎(ord’s thyroiditis)、天疱疮、结节性多动脉炎、多肌痛、赖特综合征、斯耶格伦(氏)综合征、颞动脉炎、韦格纳(氏)肉芽肿病、温和体型自身免疫性溶血性贫血(warm autoimmune haemolytic anemia)、间质性膀胱炎、莱姆病、硬斑病、结节病、硬皮病、溃疡性结肠炎和白癫风。
该药剂可以用于治疗T-细胞介导的具有炎性成分的超敏反应性疾病。此类病症包括接触性超敏反应、接触性皮炎(包括由毒葛引起的那些)、荨麻疹、皮肤过敏、呼吸系统过敏(花粉热、过敏性鼻炎)和麸质敏感肠病变(乳糜泻)。
在本发明中可被治疗的其它炎性疾病包括，例如，阑尾炎、皮炎、皮肌炎、心内膜炎、纤维组织炎、牙龈炎、舌炎、肝炎、化脓性大汗腺炎、虹膜炎、喉炎、乳腺炎、心肌炎、肾炎、耳炎、胰腺炎、腮腺炎、心包炎、腹膜炎、咽炎、胸膜炎、肺炎、前列腺炎、肾盂肾炎、和口炎(stomatisi)、移植排斥(涉及器官例如肾脏、肝脏、心脏、肺、胰脏(例如胰岛细胞)、骨髓、角膜、小肠、皮肤同种异体移植物、皮肤同种移植物，和心脏瓣膜异种移植物(heart valve xengrafts)、血清病(sewrum sickness)，和移植物抗宿主病)、急性胰腺炎、慢性胰腺炎、急性呼吸窘迫综合征、赛塞里综合征(Sexary’s syndrome)、先天性肾上腺皮质增生症、非化脓性甲状腺炎、与癌症相关的高血钙症、天疱疮、大疱疱疹样皮炎(bullous dermatitis herpetiformis)、重症多型性红斑、剥脱性皮炎、脂溢性皮炎、季节性或常年性变应性鼻炎、支气管哮喘、接触性皮炎、特应性皮炎、药物超敏反应、变应性结膜炎、角膜炎、眼带状疱疹、虹膜炎和oiridocyclitis、脉络膜视网膜炎、视神经炎、症状性结节病、暴发性或播散性肺结核化疗、成人特发性血小板减少性紫癜、成人继发性血小板减少症、获得性(自身免疫性)溶血性贫血、成人白血病和淋巴瘤、 儿童急性白血病、局限性肠炎、自身免疫性血管炎、多发性硬化、慢性阻塞性肺病、实体器官移植排斥反应、脓毒症。
优选的治疗包括移植排斥、银屑病关节炎、多发性硬化、1型糖尿病、哮喘、系统性红斑狼疮、慢性肺病和伴随感染症状的炎症(例如，脓毒症)任一项的治疗。
典型地，但不是绝对地，本发明中使用的化合物的盐为药学上可接受的盐。包含在术语“药学上可接受的盐”的盐是指本发明化合物的无毒盐。本发明化合物的盐可包括酸加成盐。通常，该盐形成自药学上可接受的无机和有机酸。适宜的酸盐的更具体实例包括马来酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、高氯酸盐、富马酸盐、乙酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、乙醇酸盐、甲酸盐、乳酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、羟基马来酸盐、苯乙酸盐、谷氨酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、富马酸盐、甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、萘-2-磺酸盐、苯磺酸盐、羟基萘酸、氢碘酸盐、苹果酸盐、蝶酸盐(teroic)、鞣酸盐等。
其它代表性的盐包括乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、乙二胺四乙酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸盐、克拉维酸盐(clavulanate)、柠檬酸盐、二盐酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、glycollylarsanilate、己基间苯二酚盐、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、马来酸单钾、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐(embonate)、棕榈酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐、甲苯磺酸盐、三乙基碘化物(triethiodide)，和戊酸盐。
其它的盐，不是药学上可接受的盐，可以用于制备本发明中使用的化合物。这些盐，例如草酸盐或三氟乙酸盐，尽管它们本身不是药学上可接受的，但是它们可用于制备在获得本发明化合物以及它们药学上可接受的盐中作为中间体的盐。
药物组合物可以通过任意适宜的途径给药，例如通过口服(包括口含或舌下)、直肠、鼻内、局部(包括口含、舌下或透皮)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内或皮内)途径。此类组合物可通过药物领域内任一已知的方法制 备，例如通过将式(I)化合物与载体或赋形剂混合在一起。
适于口服给药的药物组合物可以作为分离单元例如胶囊或片剂；散剂或颗粒剂；水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；可食用泡沫(foams or whips)；或水包油型液体乳液或油包水型液体乳液存在。
胶囊可以通过如上所述制备粉末混合物和填充形成的凝胶壳而制备。助流剂和润滑剂例如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇可以加至该粉末混合物中，然后进行填充操作。崩解剂或增溶剂例如琼脂-琼脂、碳酸钙或碳酸钠也可加入以改善胶囊被吞咽时药物的利用度。
此外，当需要或必需时，适宜的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂也可以掺入到该混合物中。适宜的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖类例如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味剂、天然和合成胶例如阿拉伯树胶、黄芪胶或藻酸钠、羧基甲基纤维素、聚乙二醇、石蜡等。在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括，但不限于，淀粉、甲基纤维素、琼脂、蒙脱石、黄原胶等。片剂例如通过制备粉末混合物、制粒或预压片(slugging)、添加润滑剂和崩解剂，以及压制成片剂而配制。粉末混合物通过将化合物(适宜地研磨)与如上所述的稀释剂或基质混合而制备，任选地，与粘合剂例如羧基甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮、溶液阻滞剂例如石蜡，吸收促进剂例如季盐和/或吸附剂例如蒙脱石、高岭土或磷酸氢钙混合。该粉末混合物可以通过片剂成型模具利用添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油的方式制粒。经润滑的混合物然后压制成片剂。本发明中使用的化合物也可以与自由流动的惰性载体混合，直接压制成片剂，而不用经过制粒或预压片步骤。可以提供透明或不透明的包衣，包括虫胶的密封包衣、糖或聚合材料的包衣以及蜡的抛光包衣。可以将染料加至这些包衣中以区分不同的单位剂量。
口服流体(例如溶液、糖浆和酏剂)可以以剂量单位形式制备，从而使得给定量含有预定量的式(I)化合物。糖浆可以通过将化合物溶解于适宜调味的水溶液进行制备，而酏剂通过利用无毒醇性溶媒进行制备。悬浮液可以通过将化合物分散于无毒溶媒进行制备。增溶剂和乳化剂例如乙氧基化的异硬脂基醇和聚环氧乙烷山梨糖醇醚，防腐剂，调味添加剂如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人造甜味剂等也可以添加。
当适当时，用于口服给药的剂量单位药物组合物可以为微囊化的。该制 剂也可制备以延长或延缓释放，例如通过包衣或包埋颗粒物料于聚合物、石蜡等中。
适于直肠给药的药物组合物可作为栓剂或作为灌肠剂存在。
适于阴道内给药的药物组合物可以作为阴道栓剂、卫生棉塞、乳膏剂、凝胶剂、贴片、泡沫或喷雾制剂存在。
适于肠胃外给药的药物制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂和能够使得组合物与所欲给药的受试者血液等渗的溶质；和水性和非水性无菌悬浮液，其可包含助悬剂和增稠剂。药物组合物可以以单位剂量或多剂量容器存在，例如密封的安瓿和小瓶，可储存于冷冻-干燥(冻干)条件下，仅需添加无菌液体载体(例如注射用水)即可使用。临时注射溶液和悬浮液可由无菌散剂、颗粒剂和片剂制备。
应当理解，除了上述具体的成分外，该药物组合物可以包含本领域其它常规的成分，考虑到所涉及的制剂的类型，例如，那些适于口服给药的制剂可包括调味剂。
本发明中使用的化合物的治疗有效量取决于多种因素，包括，例如，所意欲给药的受试者的年龄和体重、需要治疗的精确病症和其严重程度、制剂的性质，和给药途径，且最终由开处药物的临床医师决定。但是，用于治疗贫血症的式(I)化合物的有效量的范围通常为每天0.001至100mg/kg受试者体重，适宜地为每天0.01至10mg/kg体重。对于70kg成年哺乳动物，每天的实际量应当适宜地为7至700mg，该量可以以每天单个剂量或每天多个(例如，两个、三个、四个、五个或六个)亚剂量给予，从而使得总日剂量是相同的。盐或溶剂合物等的有效量可按照式(I)化合物本身的有效量的比例来确定。同样类似的剂量应当适于治疗上述其它疾病。
实验
化学背景
本发明的化合物通过计算机软件如ISISdraw、ChemDraw或eLNB自动命名。本领域技术人员理解由不同的软件生成的化学名称可能稍微不同。本发明的化合物可以通过多种方法(包括标准化学)进行制备。除非另有说明，任何先前定义的变量仍将具有先前所定义的含义。示例性的通用合成方法在下面阐述，所制备的本发明的具体化合物在实施例部分给出。
通式(I)化合物可通过阐述于下列合成方案部分中的有机合成领域中的公知的方法进行制备。在所有下面所述的方案中，可以理解，在必要时按照化学基本原理使用敏感基团或反应性基团的保护基团。保护基团的使用按照有机合成的标准方法进行(T.W.Green and P.G.M.Wuts(1991)Protecting Groups in Organic Synthesis,John Wiley & Sons)。这些基团在化合物合成中的便利阶段利用本领域技术人员方便易得的方法除去。方法以及反应条件和它们执行顺序的选择与式(I)化合物的制备相一致。本领域的技术人员会认识到式(I)化合物中是否存在立体中心。相应地，本发明包括可能的立体异构体，且不仅包括外消旋化合物，还包括单个的对映异构体。本发明还包括全部或部分氘代形式的本发明化合物。当化合物需要为单个对映异构体时，其可以通过立体特异性合成或通过终产物的拆分或任何合适的中间体获得。终产物的拆分、中间体或起始原料可通过本领域中公知的适宜方法实现。参见，例如，E.L.Eliel,S.H.Wilen,和L.N.Mander的Stereochemistry of Organic Compounds by(Wiley-Interscience,1994)。
实施例
通用实验方法
下列缩写贯穿于整个实验部分，具有下列含义：
aq 水性的
BINAP 2,2’–双(二苯基膦)–1,1’-联萘
ca. 约
CDCl3-d 氯仿-d
CD3OD-d4 甲醇-d4
Cs2CO3 碳酸铯
CHCl3 氯仿
ACN 乙腈
CH3CN 乙腈
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Celite Corp.的注册商标名称，硅藻土的商标
DBU 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯
DCE 二氯乙烷
DCM 二氯甲烷
DME 1,2-二甲氧基乙烷
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DIEA 二异丙基乙基胺
DMSO-d6 二甲亚砜-d6
EtOAc 乙酸乙酯
EDC 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
h 小时
1H NMR 质子核磁共振
HCl 盐酸
HOAT 1-羟基-7-氮杂苯并三唑
HPLC 高效液相色谱
IPA 2-丙醇
K2CO3 碳酸钾
KOH 氢氧化钾
LC/MS 液相色谱/质谱
MgSO4 硫酸镁
MeOH 甲醇
min 分钟
MTBE 甲基叔丁基醚
MS 质谱
NaOH 氢氧化钠
Na2SO4 硫酸钠
NH4OH 氢氧化铵
NMM 4-甲基吗啉
NMP N-甲基-2-吡咯烷酮
Pd/C 钯(10％重量)/炭
PdCl2(dppf)-CH2Cl2 1,1'-双(二苯基膦)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物
Pd(Ph3P)4 四(三苯基膦)钯(0)
SOCl2 亚硫酰氯
SPhos 2-二环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱
下列指南适用于本文中描述的所有实验步骤。除非另有说明，所有的反应在氮气的正压下利用烘箱-干燥的玻璃仪器进行。指明的温度为外部(例如，浴温)温度且为近似的。空气和湿气敏感的液体通过注射器转移。试剂原样使用。使用的溶剂为由供应商列为“无水”的溶剂。溶液中试剂列出的摩尔浓度为近似的，且使用前没有通过相应的标准品校正。除非另有指明，所有的反应通过搅拌棒搅拌。除非另有指明，利用加热浴(含有硅油)进行加热。通过微波辐射(0–400W，2.45GHz)进行的反应利用Biotage InitiatorTM2.0设备(带有Biotage微波EXP小瓶(0.2–20mL)和反口塞和帽)进行。基于溶剂和离子电荷使用的辐射水平(即高、普通、低)基于供应商说明。利用干冰/丙酮或干冰/2-丙醇冷却至低于-70℃以下。用作干燥试剂的硫酸镁和硫酸钠为无水级，可互换使用。“在真空下”或“在减压下”除去的溶剂通过旋转蒸发仪进行。
制备型正相硅胶色谱利用Teledyne ISCO CombiFlash Companion设备(带有RediSep或ISCO Gold硅胶柱(4g-330g))或Analogix IF280设备(带有SF25硅胶柱(4g–300g))或Biotage SP1设备(带有HP硅胶柱(10g–100g))进行。除非另有说明，利用YMC-pack柱(ODS-A75x30mm)作为固相进行反相HPLC纯化。除非另有说明，使用流动相25mL/min A(乙腈-0.1％TFA)：B(水-0.1％TFA),10-80％梯度A(10min)，在214nM UV监测。
PE Sciex API150单四级杆质谱仪(PE Sciex,Thornhill,Ontario,Canada)在正离子监测模式下利用电喷雾离子化进行。雾化的气体在零级空气发生器(Balston Inc.,Haverhill,MA,USA)中产生，在65psi递送，气帘气为高纯度氮气(递送自Dewar液氮容器，50psi)。向电喷雾针施加的电压为4.8kV。进样孔(orifice)设置为25V，质谱在0.5扫描/秒的速度利用0.2amu质量步长进行扫描，收集特征数据。
方法A LCMS。样品通过配有Hamilton10uL注射器(其向Valco10-port注射阀进行注射)的CTC PAL自动进样器(LEAP Technologies,Carrboro,NC)引入到质谱仪中。HPLC泵为Shimadzu LC-10ADvp(Shimadzu Scientific Instruments,Columbia,MD)，在0.3mL/min，线性梯度4.5％A至90％B，3.2 分钟，并保持0.4分钟进行操作。流动相由100％(H2O0.02％TFA)于容器A中和100％(CH3CN0.018％TFA)于容器B中构成。固定相为Aquasil(C18)，柱尺寸为1mm x40mm。检测通过UV(214nm)、蒸发光散射(ELSD)和MS进行。
方法B,LCMS。或者，使用Agilent1100分析型HPLC系统(带有LC/MS)，在1mL/min操作，线性梯度5％A至100％B，2.2分钟，保持0.4min。流动相由100％(H2O0.02％TFA)于容器A中和100％(CH3CN0.018％TFA)于容器B中构成。固定相为Zobax(C8)，3.5μm粒径，柱尺寸为2.1mm x50mm。检测通过UV(214nm)，蒸发光散射(ELSD)和MS进行。
方法C,LCMS。或者，使用配有毛细管柱(50×4.6mm,5μm)的MDSSCIEX API2000。HPLC在Agilent-1200系列UPLC系统(配有柱ZorbaxSB-C18(50×4.6mm,1.8μm))，使用CH3CN:乙酸铵缓冲液洗脱进行。反应在微波(CEM,Discover)中进行。
1H-NMR谱在400MHz下记录，利用Bruker AVANCE400MHz设备，带有ACD Spect manager v.10用于再处理。多重性表明：s＝单峰,d＝双峰,t＝三重峰,q＝四重峰,quint＝五重峰,sxt＝六重峰,m＝多重峰,dd＝双二重峰,dt＝双三重峰等，和br表明宽峰。除非另有指明，所有的NMR为DMSO中的NMR。
分析型HPLC：产物通过Agilent1100分析型色谱系统进行分析,带有4.5x75mm Zorbax XDB-C18柱(3.5μm)，2mL/min，4分钟梯度，自5％CH3CN(0.1％甲酸)的H2O溶液(0.1％甲酸)至95％CH3CN(0.1％甲酸)的H2O溶液(0.1％甲酸)，保持1分钟。
式(I)化合物可以按照方案1或类似方法进行制备。6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(I)在碱(例如，氢化钠)的存在下利用烷基卤化物或在(氰基甲基)三甲基氯化磷和碱(例如，氢化钠)的存在下利用醇进行烷基化反应，得到式II化合物。酯利用碱水溶液的皂化反应提供式III化合物，其与多种氨基甲基吡啶酮IV利用标准肽偶联试剂(例如，EDC,HOAT,NMM)进行偶联，得到式V化合物。多种硼酸(或硼酸酯)与V的钯-介导的交叉偶联反应，提供式VI化合物。
方案1
![]()
下列实施例仅用于示例性说明的目的，并不意欲限制本发明的范围。化合物利用ACD命名软件进行命名[Advanced Chemistry Development,Inc.,(ACD/Labs),Toronto,Canada.(http://www.acdlabs.com/products/name_lab/)]。
实施例1
6-溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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1a)6-溴-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(1.0g,3.94mmol)固体于N,N-二甲基甲酰胺(25mL)中的冷却(0℃)溶液中添加氢化钠(0.173g,4.33mmol)。反应搅拌15分钟，此时添加2-溴丙烷(0.554mL,5.90mmol)。然后使得反应温热至室温，保持过夜。LCMS显示剩余约25％的起始原料。反应在45℃加热4小时，但是注意到没有进一步的转化。反应容器放置到冰浴中，搅拌15分钟。然后添加 过量的NaH(60％)，搅拌10分钟，然后添加2-溴丙烷(过量)。撤去冰浴，反应搅拌1小时。真空下除去大约一半的反应体积，倾倒至饱和NH4Cl(200mL)。其使用乙醚萃取(2x)，合并的有机物使用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩。通过柱色谱纯化(80g Isco硅胶柱；梯度B：5-25％，A：己烷，B：乙酸乙酯)，得到6-溴-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(0.53g,1.718mmol,43.7％产率)。
1b)6-溴-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸
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向6-溴-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(0.52g,1.756mmol)于甲醇(15mL)和四氢呋喃(3mL)中的溶液中通过注射器滴加3M NaOH(1.756mL,5.27mmol)(经2分钟)。溶液在室温保持2小时，此时LCMS显示仅有12％转化为产物。然后添加1.5mL3M NaOH，溶液在室温保持过夜。LCMS显示完全转化为产物。在真空下除去挥发物，将残余物溶于水，使用1M HCl缓慢酸化(固体沉淀)。使用EtOAc萃取(2x)，合并有机物，用MgSO4干燥。过滤，在真空下浓缩，得到6-溴-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸(0.50g,1.737mmol,99％产率)，为白色固体。
1c)6-溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向6-溴-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸(0.71g,2.52mmol),3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-2(1H)-吡啶酮(0.575g,3.77mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.514g,3.77mmol)和EDC(0.724g,3.77mmol)于二甲亚砜(20mL)中的混合物中通过注射器快速添加N-甲基吗啉(1.107mL,10.07mmol)。固体缓慢溶解， 反应在室温保持过夜。反应缓慢倾倒至冰-水(300mL)中，搅拌10分钟，然后静置10分钟。将固体过滤，使用水(100mL)洗涤，空气下干燥15分钟，然后在真空烘箱中在45℃干燥4小时，得到6-溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺(0.82g,1.871mmol,74.4％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)![]()
ppm1.39-1.46(m,6H)2.09-2.15(m,3H)2.21(s,3H)4.32(d,J＝5.05Hz,2H)4.82(quin,J＝6.63Hz,1H)5.88(s,1H)6.86(d,J＝3.28Hz,1H)7.51(d,J＝1.77Hz,1H)7.62(d,J＝3.28Hz,1H)7.92(s,1H)8.31(t,J＝4.93Hz,1H)11.55(br.s.,1H)。MS(ES)[M+H]+416.0。
实施例2
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺
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将6-溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺(0.10g,0.240mmol)、1-甲基-4-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2-吡啶基]哌嗪(0.087g,0.288mmol)和磷酸钾(三碱式)(0.153g,0.721mmol)于1,4-二![]()
烷(2mL)和水(0.5mL)中的混合物使用N2脱气10分钟，此时添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.029g,0.036mmol)。将反应密封，在100℃加热2小时。然后使得反应冷却至室温，静置过夜，此时其使用EtOAc稀释，通过硅藻土过滤，使用EtOAc洗涤，在真空下浓缩。残余物通过柱色谱纯化(12g Isco GOLD硅胶柱；梯度B：5-90％；A：二氯甲烷,B：含2M氨的10％氯仿的甲醇溶液)，得到N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺(94mg,0.180mmol,74.8％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.46(d,J＝6.57Hz,6H)2.12(s,3H)2.17-2.28(m,6H)2.38-2.46(m,4H)3.49-3.57(m,4H)4.37(d,J＝5.05Hz,2H)4.86-4.98(m,1H)5.88(s,1H)6.87(d, J＝3.03Hz,1H)6.93(d,J＝8.84Hz,1H)7.58(d,J＝3.28Hz,1H)7.65(d,J＝1.26Hz,1H)7.87(s,1H)7.98(dd,J＝8.97,2.65Hz,1H)8.28(t,J＝5.05Hz,1H)8.57(d,J＝2.27Hz,1H)11.55(s,1H)。MS(ES)[M+H]+513.3。
实施例3–xx通过上述实施例1和2所述的方法或其路线变型进行制备，起始于必须组分4-氨基甲基吡啶酮和6-取代的-4-吲哚甲酸酯。路线变型包括但不限于反转Suzuki类型的偶联反应的溴化物和硼酸酯偶联反应物或利用原位形成硼酸酯的一锅反应。
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实施例264
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向6-溴-N-((1,2-二氢-4,6-二甲基-2-氧代吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(2g,4.65mmol)于DMF(100mL)中的搅拌溶液中添加1-甲基-4-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)哌嗪(1.55g,5.12mmol)，接着添加碳酸钠(1.23g,11.62mmol)于水(10mL)中的溶液，内容物使用氩气脱气30分钟。之后，添加PdCl2(PPh3)2(326mg,0.464mmol)，内 容物再次使用氩气脱气10分钟。反应混合物在回流下搅拌3小时。反应混合物使用水(100mL)稀释，使用乙酸乙酯(3x150mL)萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤，并浓缩，得到粗产物(2.8g)。粗化合物通过柱色谱在硅胶上纯化(100-200目，洗脱液：0-10％MeOH:DCM)，得到的产物使用乙醚(100mL)进一步研磨，得到标题化合物，为灰白色固体(1.2g,50％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ1.493(d,J＝6.4Hz,6H),2.092(s,3H),2.286(s,3H),2.409(s,3H),2.424(s,3H),2.632(s,4H),3.621(s,4H),4.603-4.685(m,3H),5.880(s,1H),6.606(d,J＝8.8Hz,1H),7.016(s,1H),7.261(s,1H),7.433(s,1H),7.675–7.704(dd,J＝9Hz,2.4Hz,1H),8.425(d,J＝2.0Hz,1H),11.699(brs,1H)；LCMS(ES+)：525.23[M-H]。
实施例265
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺
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将6-溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺(1.9g,4.42mmol)、1-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2-吡啶基]哌嗪(1.277g,4.42mmol)和磷酸钾(三碱式)(2.81g,13.25mmol)置于150mL压力容器中，接着添加1,4-二![]()
烷40mL)和水(10.00mL)。悬浮液搅拌，在下N2脱气15分钟。(乳液)。接下来添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.361g,0.442mmol)，脱气2分钟。将反应烧瓶密封，内容物在回流下加热2小时。悬浮液过滤，真空下除去二![]()
烷。得到的油状物分配在300mL乙酸乙酯和100mL水之间，分离各层。添加脱色碳，10分钟后，有机层通过短硅胶垫过滤。添加300mL的1M HCl，使用NaOH中和(至pH～9)。内容物使用乙酸乙酯萃取。分离有机层，使用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，在真空下浓缩。产物悬浮于乙醚中，过滤。分离出标题化合物，为黄色固体(950mg, 41％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.49(br.s.,1H),8.52(d,J＝2.27Hz,1H),8.15(t,J＝5.05Hz,1H),7.95(dd,J＝2.53,8.84Hz,1H),7.73(d,J＝1.26Hz,1H),7.29(s,1H),7.19(d,J＝1.52Hz,1H),6.93(d,J＝9.09Hz,1H),5.87(s,1H),4.85(quin,J＝6.63Hz,1H),4.35(d,J＝5.05Hz,2H),3.49-3.63(m,4H),2.81-3.02(m,4H),2.24(s,3H),2.16(s,3H),2.11(s,3H),1.43(d,J＝6.57Hz,6H)；LCMS＝513.3(MH+)。
实施例266
6-溴-1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺
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依次向反应烧瓶中加入6-溴-1-(仲丁基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸(1.33g,4.29mmol)、3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-2(1H)-吡啶酮(1.213g,6.43mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.875g,6.43mmol)、EDC(1.233g,6.43mmol)，接着添加DMSO(30mL，通过注射器)，然后添加N-甲基吗啉(1.886mL,17.15mmol，通过注射器)。将内容物密封并在室温搅拌，固体逐渐溶解。内容物在室温搅拌32小时，然后在搅拌下缓慢稀释至220mL冰-水中。内容物搅拌10分钟，然后再静置10分钟。内容物过滤，过滤的固体使用额外的水(50mL)洗涤。然后将固体空气干燥10分钟，然后在真空烘箱中于50℃共干燥23小时。收集产物，1.75g(87％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)![]()
ppm0.69(t,J＝7.33Hz,3H),1.36(d,J＝6.57Hz,3H),1.77(dq,J＝10.29,7.09Hz,2H),2.12(d,J＝9.09Hz,6H),2.21(s,3H),4.30(d,J＝5.05Hz,2H),4.43-4.56(m,1H),5.86(s,1H),6.99(d,J＝1.52Hz,1H),7.30(s,1H),7.77(d,J＝1.77Hz,1H),8.25(t,J＝4.93Hz,1H),11.49(br.s.,1H)；LCMS＝444.1(MH+)。
实施例267和268
(S)-6-溴-1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲 基-1H-吲哚-4-甲酰胺(实施例267)和(R)-6-溴-1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(实施例268)
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6-溴-1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(外消旋混合物，1.9g)通过手性HPLC拆分(柱：Chiralpak AD-H,5μm,50mm x250mm,UV检测：240nM,流速：100mL/min,T＝20℃,洗脱液：60:40:0.1正庚烷:乙醇:异丙胺(isocratic))。对于每一次洗脱，将100mg的外消旋化合物溶于30体积(3.0mL)的温乙醇(加有几滴异丙胺)中。总共进行19次。对于每次洗脱都观察到了基线拆分。收集在8.3-10.1分钟洗脱的异构体(接着浓缩)，为白色固体，其在50℃干燥(<5mm Hg)，得到901mg，确定为S异构体*(实施例267；手性HPLC：>99.5％ee(没有检测到R异构体)。收集在10.8-13.0分钟洗脱的异构体，为白色固体，其在50℃干燥(<5mm Hg)，得到865mg，确定为R异构体*(实施例268；手性HPLC：99.2％ee；检测到0.4％S异构体)。1H NMR和LCMS与母体外消旋体一致。
*绝对构型由从相应的商购可得的同手性的醇通过Mitsunobu反应独立地合成各个对映异构体来确定。立体化学指认也与通过振动圆二色谱(VCD)的分析一致。
实施例269
1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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依次向反应瓶中添加6-溴-1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(0.15g,0.338mmol)、1-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)哌嗪(0.127g,0.439mmol)和磷酸钾(三碱式)(0.287g,1.350mmol)，接着添加1,4-二![]()
烷(3mL)和水(0.75mL)。悬浮液在N2下搅拌脱气10分钟，然后添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.028g,0.034mmol)。将反应瓶密封，置于加热套(95℃)，搅拌1.5小时。内容物撤去加热，冷却至室温。水层经由吸管从反应瓶的底部除去。反应混合物稀释至EtOAc(20mL)，接着添加各自为0.2g的Thiol-3silicycle树脂和硅胶。挥发物在真空下除去，残余物在高真空下干燥1小时。内容物通过硅胶色谱纯化(干装载，洗脱液：A：二氯甲烷,B：10％(2M氨的甲醇溶液)氯仿溶液，梯度B：8-95％)。得到的固体自TBME浓缩，在真空烘箱中在45℃干燥18小时。收集产物，129mg(70％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm0.73(t,J＝7.33Hz,3H),1.40(d,J＝6.57Hz,3H),1.80(dq,J＝10.07,7.08Hz,2H),2.11(s,3H),2.14-2.19(m,3H),2.24(s,3H),2.76-2.85(m,4H),3.41-3.49(m,4H),4.35(d,J＝5.05Hz,2H),4.54-4.67(m,1H),5.87(s,1H),6.88(d,J＝8.84Hz,1H),7.17(d,J＝1.26Hz,1H),7.26(s,1H),7.73(d,J＝1.26Hz,1H),7.91(dd,J＝8.84,2.53Hz,1H),8.16(t,J＝5.05Hz,1H),8.50(d,J＝2.53Hz,1H),11.48(br.s.,1H)；LCMS MH+＝527.3。
实施例270
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-[(1S)-1-甲基丙基]-6-[6-(1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向30mL微波瓶中添加(S)-6-溴-1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(100mg,0.225mmol)、1-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)哌嗪(85mg,0.293mmol)、1,2-二甲氧基乙烷(DME)(3mL)、水(1.000mL)和碳酸钠(0.338 mL,0.675mmol)，混合物通过鼓泡氮气脱气5分钟。添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(14.70mg,0.018mmol)，将试管密封。混合物在140℃辐射(微波)10分钟。混合物浓缩，残余物溶于MeOH，过滤。滤液利用反相HPLC纯化(洗脱液：25％ACN/H2O,0.1％NH4OH至60％ACN/H2O,0.1％NH4OH)，得到91mg产物，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm0.70-0.78(m,3H),1.37-1.44(m,3H),1.75-1.87(m,2H),2.11(s,3H),2.16(s,3H),2.22-2.27(m,3H),2.77-2.85(m,4H),3.41-3.49(m,4H),4.35(d,J＝5.31Hz,2H),4.56-4.68(m,1H),5.87(s,1H),6.88(d,J＝8.84Hz,1H),7.17(d,J＝1.52Hz,1H),7.26(s,1H),7.73(d,J＝1.26Hz,1H),7.91(dd,J＝8.84,2.53Hz,1H),8.16(t,J＝5.05Hz,1H),8.50(d,J＝2.53Hz,1H)；LCMS：527.8(MH+)。
实施例271
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-[(1R)-1-甲基丙基]-6-[6-(1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向30mL微波瓶中添加(R)-6-溴-1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(100mg,0.225mmol)、1-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)哌嗪(85mg,0.293mmol)、1,2-二甲氧基乙烷(DME)(3mL)、水(1.000mL)和碳酸钠(0.338mL,0.675mmol)，混合物通过鼓泡氮气脱气5分钟。添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(14.70mg,0.018mmol)，将试管密封。混合物在140℃辐射(微波)10分钟。混合物浓缩，残余物溶于MeOH，过滤。滤液利用反相HPLC纯化(洗脱液：25％ACN/H2O,0.1％NH4OH至60％ACN/H2O,0.1％NH4OH)，得到90mg产物，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm0.73(m,3H),1.41(d,J＝6.57Hz,3H),1.81(td,J＝7.14,2.91Hz,2H),2.11(s,3H),2.15-2.20(m,3H),2.24(s,3H),2.77-2.83(m,4H),3.41-3.49(m,4H),4.35(d,J＝5.05Hz,2H),4.54-4.68(m,1H),5.87(s,1H),6.88(d,J＝8.84Hz,1H),7.17(d,J＝1.52Hz,1H), 7.26(s,1H),7.73(d,J＝1.26Hz,1H),7.91(dd,J＝8.84,2.53Hz,1H),8.16(t,J＝5.05Hz,1H),8.50(d,J＝2.27Hz,1H)；LCMS：527.7(MH+)。
实施例272
1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(3-((二甲基氨基)甲基)苯基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺
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依次向反应瓶中添加6-溴-1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(0.15g,0.338mmol)、N,N-二甲基-1-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)甲胺-盐酸盐(0.131g,0.439mmol)和磷酸钾(三碱式)(0.287g,1.350mmol)，接着添加1,4-二![]()
烷4mL)和水(0.75mL)。悬浮液在N2下搅拌脱气10分钟，然后添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.028g,0.034mmol)。将反应瓶密封，置于加热套(95℃)，搅拌1.5小时。内容物撤去加热，冷却至室温。水层经由吸管自反应瓶的底部除去。反应混合物稀释至EtOAc(20mL)，接着添加各自为0.2g的Thiol-3silicycle树脂和硅胶。挥发物在真空下除去，残余物在高真空下干燥1小时。内容物通过硅胶色谱纯化(干装载，洗脱液：A：二氯甲烷，B：10％(2M氨的甲醇溶液)氯仿溶液；梯度B：8-95％)。得到的固体自TBME浓缩，得到泡沫，在真空烘箱中在45℃干燥18小时。收集产物，116mg(65％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm0.73(t,J＝7.33Hz,3H),1.41(d,J＝6.57Hz,3H),1.82(dq,J＝9.85,7.16Hz,2H),2.08-2.12(m,3H),2.15-2.21(m,9H),2.24(s,3H),3.44-3.49(m,2H),4.35(d,J＝5.05Hz,2H),4.57-4.70(m,1H),5.86(s,1H),7.19-7.26(m,2H),7.30(s,1H),7.36-7.44(m,1H),7.58-7.65(m,2H),7.76(d,J＝1.26Hz,H),8.21(t,J＝5.05Hz,1H),11.47(s,1H)；LCMS M+H＝499.3。
实施例273
6-{3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-[(1S)-1-甲基丙基]-1H-吲哚-4-甲酰胺
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将(S)-6-溴-1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(100mg,0.23mmol)、N,N-二甲基-1-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)甲胺盐酸盐(100mg,0.34mmol)和Palladium Tetrakis(26mg,0.023mmol)于DMF/水(3ml:1ml)中在氮气下搅拌10分钟。添加碳酸铯(220mg,0.68mmol)，不溶的混合物在150℃辐射(微波)15分钟。内容物蒸发，溶于DCM/MeOH(1:1)，预吸附于硅胶上，并利用硅胶色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH4OH,梯度0至80:20:2，于DCM中)。分离的产物首先使用EtOAc以及一些己烷处理。产物然后溶于MeOH，通过反相HPLC纯化(30x100Varian Polaris C18柱,洗脱液：10-80％梯度，MeCN的水溶液，含0.1％TFA)。产物级分合并，蒸发掉大部分的溶剂，添加饱和NaHCO3溶液。析出的固体过滤，空气干燥15分钟，在真空烘箱中干燥过夜。收集固体产物，87mg(75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm11.38(br.s.,1H),8.23(t,J＝4.67Hz,1H),7.77(d,J＝1.01Hz,1H),7.60-7.64(m,2H),7.40(t,J＝7.58Hz,1H),7.30(s,1H),7.20-7.26(m,2H),5.87(s,1H),4.59-4.68(m,1H),4.36(s,1H),4.35(s,1H),3.46(s,2H),2.24(s,3H),2.18(s,9H),2.11(s,3H),1.76-1.88(m,2H),1.41(d,J＝6.57Hz,3H),0.74(t,J＝7.33Hz,3H)；LCMS：499.4(MH+)。
实施例274
6-{3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-[(1R)-1-甲基丙基]-1H-吲哚-4-甲酰胺
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将(R)-6-溴-1-(仲丁基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(100mg,0.23mmol)、N,N-二甲基-1-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)甲胺盐酸盐(100mg,0.34mmol)和Palladium Tetrakis(26mg,0.023mmol)于DMF/水(3mL:1mL)中在氮气下搅拌10分钟。添加碳酸铯(220mg,0.68mmol)，不溶的混合物在150℃辐射(微波)15分钟。内容物蒸发，溶于DCM/MeOH(1:1)，预吸附在硅胶上，并利用硅胶色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH4OH,梯度0至80:20:2，在DCM中)。分离产物首先使用EtOAc以及一些己烷处理。产物然后溶于MeOH，通过反相HPLC纯化(30x100Varian Polaris C18柱,洗脱液：10-80％梯度，MeCN的水溶液，含0.1％TFA)。产物级分合并，蒸发掉大部分的溶剂，添加饱和NaHCO3溶液。析出的固体过滤，空气干燥15分钟，在真空烘箱中干燥过夜。收集固体产物，85mg(75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm11.48(s,1H)8.21(t,J＝5.05Hz,1H)7.77(d,J＝1.26Hz,1H)7.60-7.66(m,2H)7.41(t,J＝7.58Hz,1H)7.30(s,1H)7.25(d,J＝7.58Hz,1H)7.22(d,J＝1.52Hz,1H)5.87(s,1H)4.60-4.68(m,1H)4.36(s,1H)4.35(s,1H)3.49(br.s.,2H)2.24(s,3H)2.19(d,J＝8.84Hz,9H)2.11(s,3H)1.77-1.88(m,2H)1.41(d,J＝6.57Hz,3H)0.74(t,J＝7.33Hz,3H)；LCMS：499.4(MH+)。
实施例275
1-环戊基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向30mL微波瓶中添加6-溴-1-环戊基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(80mg,0.175mmol)、1-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-基)哌嗪(65.9mg,0.228mmol)、1,2-二甲氧基乙烷(DME)(3mL)、水(1.000mL)和碳酸钠(0.263mL,0.526mmol)，混合物通过鼓泡氮气脱气5分钟。添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(11.45mg,0.014mmol)，将试管密封。混合物在140℃辐射(微波)10分钟。混合物浓缩，残余物溶于MeOH，过滤。滤液利用反相HPLC纯化(洗脱液：25％ACN/H2O,0.1％NH4OH至60％ACN/H2O,0.1％NH4OH)，得到72mg产物，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)![]()
ppm1.65-1.89(m,6H),2.08-2.19(m,8H),2.24(s,3H),2.76-2.84(m,4H),3.40-3.48(m,4H),4.35(d,J＝5.05Hz,2H),4.92-5.04(m,1H),5.87(s,1H),6.88(d,J＝8.84Hz,1H),7.19(d,J＝1.26Hz,1H),7.25(s,1H),7.74(d,J＝1.26Hz,1H),7.91(dd,J＝8.84,2.53Hz,1H),8.15(t,J＝5.05Hz,1H),8.51(d,J＝2.53Hz,1H)；LCMS：539.8(MH+)。
一些实施例如上所述自包含Boc-保护的胺的硼酸(或硼酸酯)进行制备。这些实施例需要脱去Boc-保护基团以得到标题化合物。
实施例276
1-异丙基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向4-{5-[1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-基]-2-吡啶基}-1-哌嗪甲酸1,1-二甲基乙基酯(70mg,0.112mmol)于二氯甲烷(2mL)中的悬浮液中添加TFA(0.5ml,6.49mmol)，混合物搅拌1小时。混合物浓缩，残余物使用饱和NaHCO3水溶液处理，过滤。固体利用柱色谱纯化(硅胶,0至15％(9:1MeOH/NH4OH)/CH2Cl2)，得到1-异丙基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺(51mg,84％)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm0.91(m,3H),1.47(d,J＝4.00Hz,6H),1.53-1.60(m,2H),2.14(s,3H),2.89-2.98(m,4H),3.51-3.59(m,4H),4.40(d,J＝5.05Hz,2H),4.93(quin,J＝6.63Hz,1H),5.92(s,1H),6.87(d,J＝3.03Hz,1H),6.94(d,J＝8.84Hz,1H),7.60(d,J＝3.03Hz,1H),7.66(d,J＝1.26Hz,1H),7.88(s,1H),8.00(dd,J＝8.84,2.53Hz,1H),8.28(t,J＝5.05Hz,1H),8.58(d,J＝2.27Hz,1H)。MS：(M+H)+＝527.2。
实施例277–285通过上面实施例276描述的方法或其路线变型进行制备，起始于必须的N-Boc保护原料：
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一些实施例如上所述从含烷基酯的硼酸(或硼酸酯)进行制备。这些实施例需要该酯的皂化反应以提供相应的甲酸。
实施例286
4-[4-({[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-6-基]苯甲酸
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向4-[4-({[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-6-基]苯甲酸甲基酯(30mg,0.062mmol)于MeOH(2 mL)和THF(1mL)中的溶液中添加3N NaOH(0.031mL,0.185mmol)。反应在50℃加热12小时，此时将其冷却至环境温度，使用酸性的冰水处理以使pH至6。固体过滤，使用水和8:2酸性(pH2)冰水:MeOH的混合物洗涤几次。通过反相Gilson HPLC纯化(10-80％,乙腈/水+0.1％TFA,YMC ODS-A C18柱75x30mm ID S-5um,12nM柱7分钟)，得到标题化合物(12mg,0.024mmol,39.5％产率)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm12.91(br.s.,1H)11.48(br.s.,1H)8.23(t,J＝5.05Hz,1H)8.02(d,J＝8.34Hz,3H)7.87-7.94(m,4H)7.38(s,1H)7.32(d,J＝1.52Hz,1H)5.87(s,1H)4.91(quin,J＝6.63Hz,1H)4.36(d,J＝4.80Hz,2H)2.24(s,3H)2.18(s,3H)2.11(s,3H)1.44(d,J＝6.57Hz,6H)。MS(ES)[M+H]+486.1。
实施例287–288通过上述实施例286描述的方法或其路线变型进行制备，起始于必须的烷基酯。
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实施例289
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向烧瓶中在N2氛围下添加10％钯/炭(0.028g,0.026mmol)和乙醇(1mL)(至湿的催化剂)。然后向烧瓶加入6-溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺(0.11g,0.264mmol),乙醇(4mL)和四氢呋喃(1mL)。悬浮液在N2下搅拌，然后排空，再充入H2(气球)并搅拌过夜。然后将反应在氮气下放置回去，使用10％甲醇/二氯甲烷稀释。添加硅藻土(Celite)，混合物搅拌15分钟，通过硅藻土垫过滤，使用10％甲醇/二氯甲烷洗涤，并浓缩。残余物溶于二甲亚砜和乙腈(含0.1％三氟乙酸，通过Gilson prep HPLC纯化(Sunfire30x75mm；梯度B：15-75％；A：水+0.1％TFA；B：乙腈+0.1％TFA)。得到的残余物溶于10％甲醇/二氯甲烷，并使用Silicycle碳酸酯树脂处理(1.5g)。混合物搅拌30分钟，通过硅藻土过滤，使用10％甲醇/二氯甲烷洗涤，并浓缩。残余物溶于二氯甲烷，使用甲基叔丁基醚处理。通过N2气流除去溶剂，固体在真空烘箱中在45℃干燥18小时，得到N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺(56mg,0.159mmol,60％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.41-1.48(m,6H)2.09-2.15(m,3H)2.24(s,3H)4.35(d,J＝5.31Hz,2H)4.79(quin,J＝6.63Hz,1H)5.88(s,1H)6.84(d,J＝3.03Hz,1H)7.11-7.18(m,1H)7.39(d,J＝6.57Hz,1H)7.58(d,J＝3.28Hz,1H)7.65(d,J＝8.34Hz,1H)8.08(t,J＝5.31 Hz,1H)11.54(br.s.,1H)。MS(ES)[M+H]+338.6。
实施例290–295按照上述实施例289描述的方法或其路线变型进行制备，起始于必须的6-卤代吲哚、烯烃或CBz-保护的胺：
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实施例296
1-环丙基-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-6-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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在N2气流下，向小瓶中添加三氟甲磺酸铜(II)(0.084g,0.233mmol),甲烷亚磺酸钠(0.056g,0.467mmol),DMSO(1.3mL)和N,N-二甲基乙二胺(0.053mL,0.490mmol)。该深蓝色反应搅拌5分钟，然后添加6-溴-1-环丙基-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(0.10g,0.233mmol)。将该小瓶密封，在120℃加热3小时，此时使用水(50ml)将其稀释。混合物使用30％THF/EtOAc(2x)萃取(需要温热以破碎乳液)。合并的有机物，用硫酸镁干燥，通过硅藻土过滤，并浓缩。残余物通过柱色谱纯化(12g Isco GOLD硅胶柱；梯度B：5-85％；A:二氯甲烷,B：10％(2M氨的MeOH溶液)的氯仿溶液)，得到1-环丙基-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-6-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-4-甲酰胺(83mg,0.184mmol,79％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm11.50(s,1H),8.38(t,J＝5.1Hz,1H),8.06(d,J＝1.8Hz,1H),7.46(dd,J＝7.8,1.3Hz,2H),5.87(s,1H),4.34(d,J＝5.1Hz,2H),3.52(tt,J＝7.0,3.6Hz,1H),3.20(s,3H),2.23(s,3H),2.11(s,3H),2.14(s,3H),1.09(m,2H),0.96(m,2H)。MS(ES)[M+H]+427.8。
实施例297–302按照上述实施例296描述的方法或其路线变型进行制备，起始于必须的6-溴吲哚：
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方案2
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实施例303
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-6-(三氟甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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a)4-溴-1-(1-甲基乙基)-6-(三氟甲基)-1H-吲哚
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向4-溴-6-(三氟甲基)-1H-吲哚(1g,3.79mmol)于DMF(6mL)中的溶液中添加60％氢化钠(0.182g,4.54mmol)，混合物搅拌30分钟。添加2-溴丙烷(0.533mL,5.68mmol)，混合物搅拌过夜。然后使用10％NaHCO3将反应淬灭，使用EtOAc(3x)萃取。萃取物用Na2SO4干燥，并浓缩。残余物利用柱色谱纯化(硅胶,0至100％EtOAc/己烷)，得到标题化合物(460mg,40％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.56-1.61(m,6H),4.66-4.79(m,1H),6.65(d,J＝3.03Hz,1H),7.27-7.31(m,1H),7.45(d,J＝3.03Hz,1H),7.54(s,1H),7.63(s,1H)。MS：(M+H)+＝306.2。
b)1-异丙基-6-(三氟甲基)-1H-吲哚-4-甲腈
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向10-mL微波管中添加4-溴-1-(1-甲基乙基)-6-(三氟甲基)-1H-吲哚(330mg,1.078mmol)、二氰基锌(146mg,1.240mmol)、DMF(4mL)和水(0.040mL)，混合物通过鼓泡N2脱气5分钟。添加s-Phos(48.7mg,0.119mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(49.4mg,0.054mmol)。将该试管密封，混合物在120℃加热2.5小时。添加1N NaOH(3mL)，混合物使用EtOAc(3x)萃取。萃取物用Na2SO4干燥，并浓缩。残余物利用柱色谱纯化(硅胶,0至70％EtOAc/己烷)，得到标题化合物(210mg,77％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.61(m,6H),4.79(spt,J＝6.69Hz,1H),6.84(d,J＝3.28Hz,1H),7.59(d,J＝3.28Hz,1H),7.73(s,1H),7.88(s,1H)。MS：(M+H)+＝253.2。
c)1-异丙基-6-(三氟甲基)-1H-吲哚-4-甲酸
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向1-(1-甲基乙基)-6-(三氟甲基)-1H-吲哚-4-甲腈(180mg,0.714mmol)于乙醇(5mL)中的溶液中添加10％氢氧化钠(5mL,0.714mmol)，混合物在回流下加热过夜。混合物浓缩以除去EtOH，水相使用1N HCl酸化至～pH4。沉淀通过过滤收集，在高真空下干燥，得到标题化合物(167mg,86％)，为棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.43-1.60(m,6H),4.96-5.13(m,1H),7.11(d,J＝3.28Hz,1H),7.89-8.05(m,2H),8.25(s,1H),13.15(br.s.,1H)。MS：(M+H)+＝272.0。
d)N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-6-(三氟甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向1-(1-甲基乙基)-6-(三氟甲基)-1H-吲哚-4-甲酸(40mg,0.147mmol)于二甲亚砜(1mL)中的溶液中添加3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-2(1H)-吡啶酮(41.7mg,0.221mmol)、N-甲基吗啉(0.065mL,0.590mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(40.1mg,0.295mmol)和EDC(56.5mg,0.295mmol)，混合物搅拌过夜。混合物使用水(5mL)淬灭，搅拌10分钟。沉淀通过过滤收集，在高真空下干燥，得到标题化合物(39mg,63％)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.47(m,6H),2.13(s,3H),2.23(s,3H),4.36(d,J＝5.05Hz,2H),4.99(dt,J＝13.20,6.66Hz,1H),5.89(s,1H),6.98(d,J＝3.03Hz,1H),7.68(s,1H),7.86(d,J＝3.28Hz,1H),8.08(s,1H),8.45(t,J＝4.93Hz,1H),11.56(s,1H)。MS：(M+H)+＝406.1。
实施例304
1-异丙基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(三氟甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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标题化合物按照N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-6-(三氟甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺描述的方法进行制备。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm0.91(t,J＝8.00Hz3H),1.39-1.63(m,8H),2.14(s,3H),4.39(d,J＝5.05Hz,2H),4.99(dt,J＝13.26,6.76Hz,1H),5.92(s,1H),6.98(d,J＝3.28Hz,1H),7.68(s,1H),7.87(d,J＝3.03Hz,1H),8.08(s,1H),8.44(t,J＝5.05Hz,1H),11.57(s,1H)。MS：(M+H)+＝434.1。
方案3
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实施例305
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(4-((二甲基氨基)甲基)哌啶-1-基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺
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a)6-(4-((二甲基氨基)甲基)哌啶-1-基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸
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向10-mL微波试管中添加6-溴-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸(100mg,0.338mmol)、1,4-二![]()
烷(2mL)、N,N-二甲基-1-(4-哌啶基)甲胺(52.8mg,0.371mmol)和叔丁醇钠(71.4mg,0.743mmol)，混合物脱气5分钟。添加氯(2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)[2-(2-氨基乙基)苯基]Pd(11)甲基叔丁基醚加合物(13.96mg,0.017mmol)，将该试管密封。混合物在98℃搅拌20小时。混合物然后浓缩，残余物利用反相HPLC纯化(Gemini5u C18(2)100A,AXIA；30x100mm5μm；(30mL/min,7％ACN/H2O,0.1％甲酸至37％ACN/H2O,0.1％甲酸)，得到标题化合物(65mg,54％)，为浅黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.19-1.34(m,2H),1.39(d,J＝6.57Hz,6H),1.58-1.71(m,1H),1.82(d,J＝11.87Hz,2H),2.23-2.31(m,10H),2.66(td,J＝11.94,1.89Hz,2H),3.57-3.71(m,2H),4.70(quin,J＝6.63Hz,1H),7.09(d,J＝2.02Hz,1H),7.15(dd,J＝9.60,1.52Hz,2H)。MS：(M+H)+＝358.2。
b)N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(4-((二甲基氨基)甲基)哌啶-1-基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向6-{4-[(二甲基氨基)甲基]-1-哌啶基}-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸(62mg,0.173mmol)于二甲亚砜(1mL)中的溶液添加3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-2(1H)-吡啶酮(42.5mg,0.225mmol)、N-甲基吗啉(0.095mL,0.867mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(47.2mg,0.347mmol)和EDC(66.5mg,0.347mmol)，混合物搅拌过夜。混合物利用反相HPLC纯化(Gemini5u C18(2)100A,AXIA；30x100mm5μm；30mL/min,8％ACN/H2O,0.1％甲酸至38％ACN/H2O,0.1％甲酸)，得到标题化合物(52mg,55％)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)ppm1.26(m,2H),1.35-1.41(m,6H),1.57-1.71(m,1H),1.80(d,J＝11.12Hz,2H),2.10(d,J＝10.36Hz,6H),2.22(s,3H),2.26-2.33(m,8H),2.57-2.72(m,2H),3.61(d,J＝12.13Hz,2H),4.31(d,J＝5.05Hz,2H),4.58-4.72(m,1H),5.86(s,1H),6.69(d,J＝2.02Hz,1H),6.92(d,J＝1.77Hz,1H), 7.05(d,J＝1.01Hz,1H),7.92-7.99(m,1H)。MS：(M+H)+＝492.1。
实施例306–317按照上述实施例305描述的方法或其路线变型进行制备，利用必须的胺：
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方案4
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实施例318
6-(2-二甲基氨基-乙氧基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-吡啶-3-基甲基)-酰胺
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a)6-(2-二甲基氨基-乙氧基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向6-羟基-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(700mg,3mmol),2-二甲基氨基-乙醇(320mg,3.60mmol)和PPh3(948mg,3.60mmol)于THF(10mL)中的冷却(0℃)混合物中添加DEAD(620mg,3.60mmol)，在室温搅拌16小时。反应混合物在减压下浓缩，残余物通过柱色谱纯化，通过使用2％MeOH的氯仿溶液洗脱，得到标题化合物(550mg,60％)，为无色胶状物。LCMS(ES+)：m/z＝305.36[M+H]。
b)6-(2-二甲基氨基-乙氧基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸
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向6-(2-二甲基氨基-乙氧基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(500mg,1.64mmol)于THF(5mL)中的溶液中添加于水(5mL)中的LiOH.H2O(200mg, 4.93mmol)。反应在回流下加热5小时，此时在减压下除去THF。剩余的混合物使用1N HCl酸化(pH～6)，使用10％MeOH的氯仿溶液(4x30mL)萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥，并浓缩，得到6-(2-二甲基氨基-乙氧基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸(400mg)，其不用进一步纯化而在下一步骤使用。LCMS(ES+)：m/z＝291.30[M+H]。
c)6-(2-二甲基氨基-乙氧基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-吡啶-3-基甲基)-酰胺
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向6-(2-二甲基氨基-乙氧基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸(400mg,1.37mmol)于DMF(10mL)中的冷却(0℃)混合物添加EDC.HCl(310mg,1.65mmol)和HOBt.H2O(250mg,1.65mmol)。反应搅拌15分钟，然后添加DIPEA(1.2mL,6.89mmol)和3-氨基甲基-6-甲基-4-丙基-1H-吡啶-2-酮(240mg,1.37mmol)。反应温热至室温，搅拌16小时，此时使用水(20mL)将其稀释，使用DCM(2x15mL)萃取。合并的DCM层用Na2SO4干燥，并浓缩。残余物通过快速柱色谱纯化，使用3％MeOH的氯仿溶液洗脱，然后通过制备型HPLC进一步纯化得到6-(2-二甲基氨基-乙氧基)-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-吡啶-3-基甲基)-酰胺(120mg,19％)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ0.92-0.88(t,3H),1.43-1.41(d,J＝6.8Hz,6H),1.56(m,2H),2.12(s,3H),2.22(s,6H),2.55-2.53(m,2H),2.06(m,2H),4.11-4.09(t,2H),4.36-4.34(d,J＝4.8Hz,2H),4.76-4.73(m,1H),5.90(s,1H),6.74-6.73(d,J＝2.8Hz,1H),7.04(s,1H),7.20(s,1H),7.43-7.42(d,J＝3.2Hz,1H),8.10-8.07(bs,1H),11.55(bs,1H)。LCMS(ES+)：m/z＝453.23[M+H]。
实施例319–320按照上述实施例318描述的方法或其路线变型进行制备，利用必须的醇(Mitsunobu反应)和氨基甲基吡啶酮：
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实施例321
1-异丙基-6-(2-哌嗪-1-基-乙氧基)-1H-吲哚-4-甲酸(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-吡啶-3-基甲基)-酰胺
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向4-(2-{1-异丙基-4-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-吡啶-3-基甲基)-氨基甲酰基]-1H-吲哚-6-基氧基}-乙基)-哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(280mg,0.472mmol；按照实施例xx的步骤制备)于二氯甲烷(15mL)中的搅拌溶液在室温添加TFA(1.5mL)，然后在室温搅拌3小时。反应混合物在减压下浓缩，使用水(20mL)稀释，使用乙醚(2x15mL)洗涤得到的水层。水层使用饱和NaHCO3 水溶液碱化(pH～8)，使用二氯甲烷(3x20mL)萃取。合并的有机层使用盐水溶液(2x25mL)洗涤，并浓缩。通过制备型HPLC纯化，得到1-异丙基-6-(2-哌嗪-1-基-乙氧基)-1H-吲哚-4-甲酸(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-吡啶-3-基甲基)-酰胺(48mg,20％)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ0.93(t,3H),1.42(d,6H,J＝6.8Hz),1.57(m,2H),2.14(s,3H),2.45-2.2(m,4H),2.68(t,2H),2.75(t,4H),4.15-4.19(m,2H),4.35(d,2H),4.78-4.72(m,1H),5.91(s,1H),6.73(d,1H),7.03(s,1H),7.24(s,1H),7.42(d,1H),8.12(t,1H),11.58(bs,1H)。LCMS(ES+)：m/z＝494.57[M+H]。
方案5
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实施例322
N-{[4-(乙基氨基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺
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a)4-氯-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈
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利用100ml圆底(带有回流冷凝器)，将PCl5(6.7g,32mmol)、POCl3(3.0 mL,32mmol)和30ml CHCl3(无水)搅拌5分钟(参见：Heterocycles,vol.60,No.6,2003,1461-1468)。添加4-羟基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(4g,26.6mmol)，在80℃搅拌2小时。趁热淬灭反应，倾倒至1L烧杯(装有100“g”冰,24mL NH4OH,pH试纸为8-9)。搅拌5分钟，过滤。使用水洗涤固体。将固体悬浮于乙醇中，过滤，使用乙醇洗涤。得到4-氯-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(1.7g,9.58mmol,40％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm12.85(br.s.,1H)6.53(s,1H)2.28(s,3H)。MS(ES)[M+H]+168.9。
b)4-(乙基氨基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈
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向10ml微波瓶中添加4-氯-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(750mg,4.45mmol)和甲醇(1mL)，然后添加乙胺(5.56mL,11.12mmol)。添加一滴浓HCl，将小瓶盖住，反应微波至120℃，持续1小时。将反应冷却，固体过滤，使用冷MeOH洗涤，得到4-(乙基氨基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(500mg,2.77mmol,62.2％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm11.05(br.s.,1H)7.11(br.s.,1H)5.78(br.s.,1H)3.22-3.32(m,2H)2.11(s,3H)1.10(t,J＝7.07Hz,3H)。MS(ES)[M+H]+177.8。
c){[4-(乙基氨基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
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在N2下，在250ml圆底烧瓶中添加4-(乙基氨基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(500mg,2.82mmol)固体，然后添加甲醇(50mL)，在冰浴中冷却至0℃。接着添加焦碳酸二叔丁基酯(1.310mL,5.64mmol)，悬浮液搅拌5分钟。添加氯化镍-六水合物(335mg,1.411mmol)固体，接着添加NaBH4(747mg,19.75mmol)固体(分3批–在各批之间间隔1分钟因为(b/c)其变黑并有气体释放出)。在添加并在0℃搅拌～10分钟后，撤去冰浴，混合物在室温搅拌(ON)。第 二天早晨，使用二亚乙基三胺(0.613mL,5.64mmol)通过注射器淬灭反应，混合物继续搅拌20分钟。反应使用EtOAc稀释，使用饱和NaHCO3处理，搅拌10分钟。混合物转移至分液漏斗，分离出有机层，使用饱和NaHCO3洗涤(2x)。有机层在真空下浓缩至固体。固体与5％MeOH/水(50mL)一起搅拌，然后过滤。固体使用5％MeOH/水和水洗涤(2x)，干燥，得到{[4-(乙基氨基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(500mg,1.599mmol,56.7％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm10.64(br.s.,1H)7.08(br.s.,1H)6.25(br.s.,1H)5.64(s,1H)3.96(d,J＝6.06Hz,2H)3.09-3.18(m,2H)2.06(s,3H)1.38(s,9H)1.14(t,3H)[M+H]+282.5。
d)6-溴-N-{[4-(乙基氨基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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在50mL圆底中添加{[4-(乙基氨基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(500mg,1.777mmol)和二氯甲烷(DCM)(20.00mL)。添加TFA(1.095mL,14.22mmol)，反应在室温搅拌3.5小时。LCMS表明脱保护。反应蒸发除去DCM。添加二甲亚砜(DMSO)(20mL)至圆底中，接着添加6-溴-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸(501mg,1.777mmol)，向该溶液中添加N-甲基吗啉(1.172mL,10.66mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(363mg,2.67mmol)和EDC(511mg,2.67mmol)。反应在室温搅拌12小时。将反应倾倒至冰水(10mL)中，搅拌20分钟，让其静置10分钟，过滤。固体使用水(10mL)淋洗。固体通过反相Gilson HPLC纯化(10-90％乙腈/水+0.1％TFA,YMC ODS-A C18柱75x30mm ID S-5um,12nM柱7分钟)，使用0.1N NaOH中和，蒸发并从水中沉淀出后，得到所需产物，为白色固体，6-溴-N-{[4-(乙基氨基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺(240mg,0.523mmol,29.4％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm10.70(s,1 H)8.87(m,1H)7.93(s,1H)7.57-7.71(m,2H)6.89(d,J＝3.28Hz,1H)6.71(m,1H)5.66(s,1H)4.82(m,1H)4.34(d,J＝5.81Hz,2H)3.12-3.23(m,2H)2.08(s,3H)1.43(d,J＝6.57Hz,6H)1.18(t,3H)MS(ES)[M+H]+445.1。
e)N-{[4-(乙基氨基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向20mL微波瓶中，添加6-溴-N-{[4-(乙基氨基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺(70mg,0.170mmol)和1-甲基-4-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2-吡啶基]哌嗪(59.9mg,0.198mmol)。添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物14.67mg,0.018mmol)和碳酸氢钠(45.3mg,0.539mmol)，接着添加1,2-二甲氧基乙烷(DME)(5mL)和水(2mL)。将小瓶密封，反应加热至85℃，持续1小时。反应冷却并蒸发。将物质溶于甲醇/DMSO，通过acrodisk过滤，通过反相Gilson HPLC纯化(5-80％乙腈/水+0.1％TFA,YMC ODS-A C18柱75x30mm ID S-5um,12nM柱,6分钟)，收集所需级分，自0.1N NaOH蒸发，得到所需产物N-{[4-(乙基氨基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺(57mg,0.101mmol,56.2％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm10.68(s,1H)8.89(t,J＝5.94Hz,1H)8.66(d,J＝2.02Hz,1H)8.09(dd,J＝8.59,2.02Hz,1H)7.91(s,1H)7.80(s,1H)7.60(d,J＝3.03Hz,1H)6.99(d,J＝8.84Hz,1H)6.89-6.96(m,2H)5.66(s,1H)4.85-4.98(m,1H)4.39(d,J＝5.81Hz,2H)3.63(br.s.,4H)3.11-3.24(m,2H)2.7(bs,4H)2.08(s,3H)1.47(d,J＝6.57Hz,6H)1.20(t,3H)。MS(ES)[M+H]+542.4。
实施例323–324按照上述实施例322描述的方法或其路线变型进行制备，利用必须的胺：
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实施例325
N-((6-氨基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺
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a)(5-((6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺基)甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁基酯
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向(5-(氨基甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(0.40g,1.496mmol),6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸(0.44g,1.486mmol)和HOAt(0.21g,1.543mmol)于DMF(25mL)中的搅拌溶液中添加EDC游离碱(0.25g,1.610mmol)。反应在室温搅拌过夜，然后在真空下蒸发至干。剩余物通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g,0至30％EtOAc的己烷溶液)，得到产物(5-((6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺基)甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(0.81g,1.485mmol,99％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.42(s,1H),8.41(t,J＝4.8Hz,1H),7.77(d,J＝1.5Hz,1H),7.33(s,1H),7.21(s,1H),6.99(d,J＝1.8Hz,1H),4.40(d,J＝5.1Hz,2H),3.81(s,3H),2.35(s,3H),2.10(d,J＝1.0Hz,3H),1.47(s,9H),1.38(d,J＝6.6Hz,6H)。MS(ES)+m/e545.2[M+H]+。
b)N-((6-氨基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺
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在室温，向(5-((6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-氨基甲酰胺基)甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(0.80g,1.467mmol)于乙腈(20mL)中的搅拌溶液中滴加TMSI(0.50ml,3.67mmol)。连接回流冷凝器，反应使用N2除气，加热至70℃。搅拌30分钟后，LCMS表明反应完全(89％纯度，11％可能的碘化的副产物为仅有的其它的杂质)。1小时后，反应使用MeOH(5mL)淬灭，搅拌30分钟。澄清的棕色溶液在真空下蒸发至干，溶于CH2Cl2，使用Na2S2O3水溶液洗涤，(滤除形成的ppt.)，干燥(Na2SO4)，过滤，在真空下浓缩。通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-10g,0至7％(5％NH4OH/MeOH)于CH2Cl2 中)，得到产物N-((6-氨基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(59.6mg,0.138mmol,9.4％产率)，为白色固体。注意：后来表明Na2S2O3水溶液洗涤期间滤除的沉淀含有产物。该固体使用水洗涤，在真空下干燥，得到额外的产物，为灰白色固体(602mg,1.4mmol,95％,LCMS表明100％纯)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.59(br.s.,1H),8.13(t,J＝4.4Hz,1H),7.76(d,J＝1.5Hz,1H),7.33(s,1H),6.99(d,J＝1.5Hz,1H),5.83(br.s.,2H),5.19(s,1H),4.74(dt,J＝6.6,13.3Hz,1H),4.22(d,J＝4.8Hz,2H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),1.39(d,J＝6.6Hz,6H)。MS(ES)+m/e431.1[M+H]+。
实施例326–334按照上述实施例325描述的方法或其路线变型进行制备，利用必须的胺：
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实施例335
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-{6-[(2R)-2-甲基-1-哌嗪基]-3-吡啶基}-1H-吲哚-4-甲酰胺
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a)(R)-4-(5-(4-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-6-基)吡啶-2-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯
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将6-(6-氯吡啶-3-基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(131mg,0.283mmol)、(R)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(70.8mg,0.354mmol)、叔丁醇钠(59.8mg,0.623mmol)和1,4-二![]()
烷2mL)添加至微波瓶中，脱气10分钟。添加Pd XPhos(10.45mg,0.014mmol)，加热至100℃，持续16小时。浓缩，添加DCM和水。过滤，分离各相。再使用DCM萃取水相两次。合并DCM萃取液，使用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)， 过滤，旋蒸除去DCM。残余物通过Biotage纯化(0％至5％MeOH:DCM；10g-HP-硅胶柱)。得到28mg标题化合物。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.16(d,J＝6.32Hz,3H),1.44-1.57(m,15H),2.06(s,3H),2.28(s,3H),2.39(s,3H),2.87-3.36(m,3H),3.57(s,1H),3.86-4.30(m,3H),4.50(d,J＝9.35Hz,1H),4.58-4.79(m,3H),5.87(s,1H),6.64(d,J＝8.59Hz,1H),7.01(s,1H),7.45(s,1H),7.76(d,J＝8.08Hz,1H),8.46(d,J＝2.27Hz,1H),12.42(br.s.,1H)。LCMS：[M+H]+627.5。
b)N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-{6-[(2R)-2-甲基-1-哌嗪基]-3-吡啶基}-1H-吲哚-4-甲酰胺
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将三氟乙酸(1ml,12.98mmol)加至(R)-4-(5-(4-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-6-基)吡啶-2-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(57mg,0.091mmol)于DCM(3mL)中的溶液中，在室温搅拌1小时。在旋转蒸发仪上浓缩。分配于DCM和饱和Na2CO3之间，分离，使用水和盐水洗涤DCM相，干燥(MgSO4)，过滤，蒸发除去DCM。得到25mg标题化合物，为褐色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.19(d,2H),1.46-1.59(m,6H),2.21(s,3H),2.27(s,3H),2.44(s,3H),2.83(dd,J＝12.13,3.54Hz,1H),2.96-3.29(m,4H),3.90(br.s.,1H),4.47-4.76(m,5H),6.00(s,1H),6.51(d,J＝8.59Hz,1H),7.05(s,1H),7.45(s,1H),7.68(dd,J＝8.72,2.40Hz,1H),8.43(d,J＝2.27Hz,1H),10.11-12.70(m,1H)。LCMS：[M+H]+527.5。
实施例336–346按照上述实施例335描述的方法或其路线变型进行制备，利用必须的胺：
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实施例347
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(6-甲酰基吡啶-3-基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(100mg,0.219mmol)于DCM(10mL)和甲醇(2mL)中的溶液中添加吡咯烷(0.035mL,0.438mmol)，接着添加硫酸钠(31.1mg,0.219mmol)。反应在室温搅拌12小时，此时添加硼氢化钠(16.57mg,0.438mmol)，反应在室温搅拌2小时，在45℃搅拌2小时。反应使用水淬灭，使用EtOAc萃取。蒸发有机层。通过反相Gilson HPLC纯化(10-60％乙腈/水+0.1％TFA,YMC ODS-A C18柱75x30mm ID S-5um,12nM柱7分钟)，接着分离，使用EtOAc/0.1N NaOH萃取，得到N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-6-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺,其从有机层蒸发出来，为黄色泡沫固体(68mg,0.125mmol,57.0％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm11.48(br.s.,1H)9.06(d,J＝2.02Hz,1 H)8.30(dd,J＝8.08,2.27Hz,1H)8.20(t,J＝5.18Hz,1H)7.94(d,J＝1.26Hz,1H)7.60(d,J＝8.08Hz,1H)7.40(s,1H)7.32(s,1H)5.88(s,1H)4.92-4.89(m,1H)4.59(d,J＝5.56Hz,2H)4.36(d,J＝5.05Hz,2H)3.34(br.s.,4H)2.25(s,3H)2.17(d,J＝1.01Hz,3H)2.11(s,3H)1.99(br.s.,4H)1.45(d,J＝6.57Hz,6H)。LCMS：[M+H]+＝512.3。
实施例348–350按照上述实施例347描述的方法或其路线变型进行制备，利用必须的胺：
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实施例351
6-溴-N-((6-(羟基甲基)-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺
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a)6-溴-N-((6-(羟基甲基)-2-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向(5-(氨基甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)甲醇(0.29g,1.591mmol),6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸(0.48g,1.621mmol)和HOAt(0.22g,1.616mmol)于二氯甲烷(15mL)和DMF(5mL)中的搅拌溶液中添加EDC游离碱(0.30g,1.932mmol)。反应在室温搅拌3小时，然后在真空下蒸发至干。剩余物通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g,0至20％EtOAc的CH2Cl2溶液)，得到产物6-溴-N-((6-(羟基甲基)-2-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(0.73g,1.586mmol,100％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.46(t,J＝4.9Hz,1H),7.77(d,J＝1.8Hz,1H),7.33(d,J＝1.0Hz,1H),6.99(d,J＝1.5Hz,1H),6.90(s,1H),5.31(t,J＝5.9Hz,1H),4.74(quin,J＝6.6Hz,1H),4.45(d,J＝5.1Hz,1H),4.43(d,J＝5.8Hz,2H),3.83(s,3H),2.40(s,3H),2.10(s,3H),1.38(d,J＝6.8Hz,6H)。MS(ES)+m/e460.2[M+H]+。
b)6-溴-N-((6-(羟基甲基)-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向6-溴-N-((6-(羟基甲基)-2-甲氧基-4-甲基吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(500mg,1.086mmol)于四氢呋喃(5mL)中的搅拌溶液中添加6N HCl(15mL,15.00mmol)。反应在N2下在80℃搅拌18小时。反应冷却至室温，在真空下蒸发至干。剩余物通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g,4％MeOH的CH2Cl2溶液)。合并纯的级分，在真空下蒸发至干。使用少量水研磨，过滤，使用水洗涤，在真空下干燥，得到产物6-溴-N-((6-(羟基甲基)-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(189mg,0.423mmol,39.0％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝ 11.30(s,1H),8.27(t,J＝4.9Hz,1H),7.76(d,J＝1.8Hz,1H),7.33(s,1H),7.01(d,J＝1.8Hz,1H),6.05(s,1H),5.38(t,J＝5.9Hz,1H),4.74(dt,J＝6.7,13.2Hz,1H),4.32(d,J＝5.1Hz,2H),4.25(d,J＝5.8Hz,2H),2.26(s,3H),2.13(s,3H),1.39(d,J＝6.6Hz,6H)。MS(ES)+m/e446.1[M+H]+。
实施例352
N-((6-(氨基甲基)-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺
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a)((5-((6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺基)甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯
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向((5-(氨基甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯(0.55g,1.955mmol),6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸(0.63g,2.127mmol)和HOAt(0.27g,1.984mmol)于二氯甲烷(20mL)和DMF(5mL)中的搅拌溶液中添加EDC游离碱(0.34g,2.190mmol)。反应在室温搅拌2小时，然后在真空下蒸发至干。剩余物通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g,0至40％EtOAc的己烷溶液)，得到产物((5-((6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺基)甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯(1.07g,1.912mmol,98％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.47(t,J＝4.8Hz,1H),7.76(d,J＝1.8Hz,1H),7.35(t,1H),7.33(d,J＝1.0Hz,1H),6.99(d,J＝1.5Hz,1H),6.67(s,1H),4.74(quin,J＝6.6Hz,1H),4.44(d,J＝4.8Hz,2H),4.08(d,J＝6.3Hz,2H),3.85(s,3H),2.37(s,3H),2.10(s,3H),1.41(s,9H),1.38(d,J＝6.6Hz,6H)。MS(ES)+m/e559.3[M+H]+。
b)N-((6-(氨基甲基)-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向((5-((6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺基)甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯(500mg,0.894mmol)于四氢呋喃(THF)(5mL)中的搅拌溶液中添加6N HCl(15mL,15.00mmol)。反应在N2下在80℃加热搅拌18小时。反应冷却至室温，在真空下蒸发至干。剩余物通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-40g,0至10％(5％NH4OH的MeOH溶液)于CH2Cl2中)。合并纯级分，在真空下蒸发至干。使用少量CH2Cl2溶解，通过缓慢地添加己烷刮擦出来，过滤，使用己烷洗涤，在真空下干燥，得到产物N-((6-(氨基甲基)-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(328mg,0.736mmol,82％产率)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.26(t,J＝5.1Hz,1H),7.76(d,J＝1.8Hz,1H),7.33(d,J＝1.0Hz,1H),7.01(d,J＝1.5Hz,1H),6.01(s,1H),5.77(s,0H),4.74(quin,J＝6.6Hz,1H),4.32(d,J＝5.1Hz,2H),3.46(s,2H),2.25(s,3H),2.14(s,3H),1.39(d,J＝6.8Hz,6H)。MS(ES)+m/e445.2[M+H]+。
实施例353
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-甲酸
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向5ml微波瓶中添加6-氰基-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺(100mg,0.247mmol),将 KOH(41.6mg,0.742mmol)研碎，接着添加乙醇(8mL)，反应在145℃微波辐射22小时。反应倾倒至酸性冰水(20mL)，搅拌20分钟。添加EtOAc，混合物再搅拌10分钟。分离各层，产物主要在EtOAc中，蒸发EtOAc。残余物溶于MeOH(1mL)，物质使用冰析出，过滤，得到产物3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-甲酸(70mg,0.160mmol,64.9％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ？ppm11.49(br.s.,1H)8.18(s,1H)8.10(s,1H)7.53(d,J＝7.58Hz,2H)5.90(s,1H)4.76-4.90(m,1H)4.36(d,J＝4.80Hz,2H)2.55(br.s.,1H)2.18(s,3H)2.13(s,3H)1.52-1.61(m,2H)1.44(d,J＝6.57Hz,6H)0.94(t,J＝7.33Hz,3H)。MS(ES)[M+H]+423.8。
实施例354
3-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-基]丙酸
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a)(2E)-3-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-基]-2-丙烯酸乙基酯
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按照上述对于Suzuki交叉偶联反应描述的通用步骤(参见实施例2)，制备(2E)-3-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-基]-2-丙烯酸乙基酯(120mg,0.234mmol,53.6％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm11.49(s,1H)8.12(t,J＝4.93Hz,1H)7.97(d,J＝1.01Hz,1H)7.74(d,J＝15.92Hz,1H)7.43(s,1H)7.27(d,J＝1.26Hz,1H)6.61(d,J＝15.92Hz,1H)5.90(s,1H)4.78-4.86(m,1H)4.35 (d,J＝5.05Hz,2H)4.19(q,J＝7.07Hz,2H)2.53-2.58(m,2H)2.14(d,J＝11.12Hz,6H)1.53-1.62(m,2H)1.43(d,J＝6.82Hz,6H)1.27(t,J＝7.07Hz,3H)0.93-0.97(m,3H)。MS(ES)[M+H]+477.9。
b)3-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-基]丙酸乙基酯
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在50ml烧瓶中添加(2E)-3-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-基]-2-丙烯酸乙基酯(120mg,0.251mmol)和乙醇(10mL)。添加Pd(OH)2(70.6mg,0.503mmol)，反应使用N2脱气15分钟，然后鼓泡H2(通过气球)，反应搅拌12小时。反应使用N2脱气30分钟，然后通过acro disc过滤，蒸发。残余物悬浮于MeOH/水(2mL/4mL)，过滤，使用水洗涤，得到白色固体，3-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-基]丙酸乙基酯(70mg,0.146mmol,58.1％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm11.49(br.s.,1H)7.90(br.s.,1H)7.34(s,1H)7.21(s,1H)6.82(s,1H)5.90(s,1H)4.63-4.73(m,1H)4.34(d,J＝4.55Hz,2H)4.04(q,J＝7.07Hz,2H)2.92(t,J＝7.33Hz,2H)2.64(t,J＝7.45Hz,2H)2.55-2.62(m,2H)2.12(s,6H)1.52-1.62(m,2H)1.40(d,J＝6.32Hz,6H)1.16(t,J＝7.07Hz,3H)0.94(t,J＝7.20Hz,3H)。MS(ES)[M+H]+479.8。
c)3-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-基]丙酸
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按照对于Suzuki交叉偶联反应描述的通用步骤(参见实施例2)，制备3-[3-甲基-1-(1-甲基乙基)-4-({[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基}羰基)-1H-吲哚-6-基]丙酸(45mg,0.095mmol,64.9％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm12.05(br.s,1H)11.49(br.s.,1H)7.88-7.95(m,1H)7.34(s,1H)7.20(s,1H)6.82(s,1H)5.90(s,1H)4.64-4.73(m,1H)4.34(d,J＝4.80Hz,2H)2.89(t,J＝7.71Hz,2H)2.55-2.60(m,4H)2.12(s,6H)1.53-1.61(m,2H)1.40(d,J＝6.57Hz,6H)0.92-0.96(m,3H)。MS(ES)[M+H]+451.9。
实施例355
6-(2-氨基乙基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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a)6-[2-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)乙基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸
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在玻璃压力瓶中添加甲基6-溴-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸酯(1.00g,2.77mmol)、叔丁基-N-[2-(三氟甲硼烷基)乙基]氨基甲酸钾(900mg,3.58mmol)、碳酸铯(3.2g,9.82mmol)、甲苯(24mL)和水(8mL)。搅拌混合物并用N2脱气。向反应中添加乙酸钯(II)(40mg,0.178mmol)和RuPhos(160mg,0.342mmol)，将反应封盖并在95℃搅拌18hr。LCMS表明反应完全。将反应溶于EtOAc，使用水稀释，并过滤除去不溶物。除去有机相，干燥(MgSO4)，过滤并在真空下浓缩。通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g,0至20％EtOAc的己烷溶液，得到甲基酯。
向于THF(10mL)和MeOH(30mL)中的所述酯中添加1N NaOH(10mL, 10mmol)。在80℃回流下搅拌溶液24hr(缓慢皂化)。冷却至室温后，反应在真空下浓缩，使用1N HCl(10mL)中和，使用水研磨，过滤并在真空下干燥，得到产物6-[2-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)乙基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸(865mg,2.31mmol,83.0％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.69(br.s.,1H),7.43(s,1H),7.31(s,1H),7.25(s,1H),6.89(t,J＝5.6Hz,1H),4.71(dt,J＝6.6,13.3Hz,1H),3.23-3.10(m,2H),2.80(t,J＝7.3Hz,2H),2.30(s,3H),1.42(d,J＝6.6Hz,6H),1.37(s,9H)。MS(ES)+m/e361.2[M+H]+。
b)6-(2-氨基乙基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺盐酸盐
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向6-[2-({[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)乙基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸(500mg,1.387mmol)、3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-2(1H)-吡啶酮盐酸盐(340mg,1.802mmol)、HOAt(245mg,1.800mmol)于DMF(20mL)中的搅拌悬浮液中添加N-甲基吗啉(200μL,1.819mmol)和EDC游离碱(280mg,1.804mmol)。反应在室温搅拌过夜。LCMS表明反应完全。反应蒸发至干并通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-40g,0至10％CH2Cl2/20％(5％NH4OH的MeOH溶液)于CH2Cl2中)。合并纯的级分并蒸发至干。使用50％甲醇的水溶液研磨，过滤并在真空下干燥，得到Boc保护的产物，为灰白色固体。将该Boc保护的产物悬浮于少量MeOH(2mL)中并使用4N HCl的二![]()
烷(25mL)溶液处理，在室温搅拌1hr。LCMS表明反应完全。反应蒸发至干,使用Et2O研磨，过滤并在真空下干燥，得到产物6-(2-氨基乙基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺(460mg,1.067mmol,77％产率)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6+D2O)δ8.05(tJ＝5.2Hz,1H),8.00(br.s.,2H),7.39(d,J＝1.0Hz,1H),7.25(s,1H),6.86(d,J＝1.3Hz,1H),5.93(s,1H),4.69(dt,J＝6.6,13.3Hz,1H),4.34(d,J＝5.1Hz,2H),3.06(dd,J＝5.8,7.6Hz,2H),3.01-2.91(m,2H),2.25(s,3H),2.13(s,3 H),2.12(s,3H),1.41(d,J＝6.8Hz,6H)。MS(ES)+m/e394.9[M+H]+。
实施例356
6-{3-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟苯基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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a)6-(4-氟-3-甲酰基苯基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向玻璃压力容器中添加6-溴-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(500mg,1.612mmol)、4-氟-3-甲酰基苯硼酸(375mg,2.233mmol)、磷酸钾(1.1g,5.18mmol)、二![]()
烷(12mL)和水(3mL)。反应使用N2脱气，加料PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(120mg,0.147mmol)。将反应盖住，在110℃搅拌4小时。LCMS表明反应完全。反应使用水稀释，使用EtOAc萃取，使用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并在真空下浓缩。通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g,0至50％EtOAc的己烷溶液)，得到产物6-(4-氟-3-甲酰基苯基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(560mg,1.585mmol,98％产率)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.30(s,1H),8.24-8.13(m,2H),8.10(d,J＝1.5Hz,1H),7.75(d,J＝1.8Hz,1H),7.57-7.46(m,2H),4.98(quin,J＝6.6Hz,1H),3.91(s,3H),2.31(s,3H),1.46(d,J＝6.6Hz,6H)。MS(ES)+m/e354.2[M+H]+。
b)6-{3-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟苯基}-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸
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向6-(4-氟-3-甲酰基苯基)-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(550mg,1.556mmol)于CH2Cl2(25mL)中的搅拌溶液中添加2N二甲胺的THF溶液(3.0mL,6.00mmol)和乙酸(170μL,2.97mmol)。在室温搅拌1小时后，经10分钟分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.0g,4.72mmol)。反应在室温搅拌过夜。LCMS表明产物以及大量的醇和一个未鉴定的副产物。反应通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g,0至50％CH2Cl2/20％(5％NH4OH的MeOH溶液)于CH2Cl2中)。最后的级分含有所需的产物，合并，蒸发至干。使用己烷研磨，过滤，在真空下干燥，得到甲基酯产物(0.25g,0.65mMol,41％)，为灰白色固体。
将该酯溶于THF(15mL)和MeOH(5mL)，使用1N NaOH(4mL)处理。反应回流(80℃油浴)过夜。LCMS表明反应完全。反应冷却至室温，并在真空下浓缩。使用1N HCl(4mL)中和沉淀产物，其使用少量的冷水研磨，过滤，在真空下干燥，得到产物6-{3-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟苯基}-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸(210mg,0.570mmol,36.6％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.84(br.s.,1H),10.80(br.s.,1H),8.18(dd,J＝2.0,7.1Hz,1H),8.12(s,1H),8.01-7.85(m,1H),7.76(d,J＝1.3Hz,1H),7.49(s,1H),7.43(t,J＝9.1Hz,1H),4.95(dt,J＝6.6,13.1Hz,1H),4.43(br.s.,2H),2.80(s,6H),2.34(s,3H),1.46(d,J＝6.6Hz,6H)。MS(ES)+m/e369.0[M+H]+。
c)6-{3-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟苯基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向6-{3-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟苯基}-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸(210mg,0.570mmol)、3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-2(1H)-吡啶酮盐酸盐(140 mg,0.742mmol)和HOAt(100mg,0.735mmol)于DMF(15mL)中的搅拌悬浮液中添加N-甲基吗啉(82μl,0.746mmol)和EDC游离碱(110mg,0.709mmol)。反应在室温搅拌4小时，并在真空下浓缩至近干。添加水直到产物析出。悬浮液研磨，过滤，使用冷水洗涤，然后在真空下干燥，得到产物6-{3-[(二甲基氨基)甲基]-4-氟苯基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺(186mg,0.370mmol,64.9％产率)，为亮褐色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.47(br.s.,1H),8.15(t,J＝4.9Hz,1H),8.04(d,J＝5.3Hz,1H),7.90-7.86(m,1H),7.39(t,J＝9.2Hz,1H),7.35(s,1H),7.27(d,J＝1.3Hz,1H),5.87(s,1H),4.88(dt,J＝6.6,13.3Hz,1H),4.36(d,J＝5.1Hz,2H),4.26(br.s.,2H),2.69(s,6H),2.24(s,3H),2.17(s,3H),2.11(s,3H),1.44(d,J＝6.6Hz,6H)。MS(ES)+m/e503.0[M+H]+。
实施例357
6-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向10-mL微波试管中添加6-氰基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(33mg,0.088mmol)、乙二胺(1mL,14.81mmol)和五硫化磷(0.585mg,2.63μmol)，混合物脱气5分钟。将试管密封，混合物在120℃于微波中加热。混合物浓缩，残余物利用反相HPLC在酸性条件下纯化，得到32mg产物，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)ppm1.46(m,6H),2.11(s,3H),2.17(s,3H),2.24(s,3H),4.35(d,J＝5.05Hz,2H),4.75(quin,J＝6.69Hz,1H),5.87(s,1H),7.49-7.60(m,2H),8.16-8.26(m,2H),8.39(s,1H)。MS：(M+H)+＝419.9。
实施例358–366按照上述的通用方法和/或公知的确立的合成步骤进行制备：
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方案6
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实施例367
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-7-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
a)7-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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在N2氛围下，将7-甲基-1H-吲哚-4-甲酸(1g,5.71mmol)、硫酸(300μL,5.63mmol)和甲醇(50mL)在回流下加热10小时。MeOH在真空下除去，残余物溶于30mL DCM。溶液使用水和饱和NaHCO3洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩。残余物通过柱色谱纯化(Biotage；0％至100％EtOAc:己烷；25g-HP-硅胶柱)，得到标题化合物。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm2.59(s,3H),4.00(s,3H),7.08(d,J＝7.58Hz,1H),7.20-7.26(m,1H),7.38(t,J＝2.78Hz,1H),7.88(d,J＝7.58Hz,1H),8.32(br.s.,1H)。
b)7-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向7-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(260mg,1.374mmol)于DMF(20mL)中的冷(冰/水浴)溶液中添加氢化钠(43.4mg,1.718mmol)。10分钟后，添加2-碘丙烷(0.151mL,1.512mmol)，反应搅拌16小时。LCMS表明反应仅10％完成。添加氢化钠(43.4mg,1.718mmol)，接着添加2-碘丙烷(0.151mL,1.512mmol)。2小时后，LCMS表明反应15％完成。添加更多的氢化钠(43.4mg,1.718mmol)，搅拌5分钟，然后添加更多的2-溴丙烷(0.142mL,1.512mmol)。加热至70℃，持续16小时。LCMS表明反应50％完成。浓缩反应混合物。添加DCM，使用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩。残余物通过柱色谱纯化(Biotage；0％至100％DCM:己烷；25g-HP-硅胶柱)，得到137mg标题化合物。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.48-1.60(m,6H),2.78(s,3H),3.94-4.02(m,3H),5.17(dt,J＝13.20,6.66Hz,1H),6.96(d,J＝7.83Hz,1H),7.281H,7.40(d,J＝3.28Hz,1H),7.81(d,J＝7.58Hz,1H)。MS(ES)[M+H]+232.1。
c)7-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸
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向7-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(137mg,0.592mmol)于乙醇(30mL)中的溶液中添加1N氢氧化钠(2.369mL,2.369mmol)。混合物在回流下加热2小时，此时将其浓缩。残余物溶于水(20mL)，通过添加1N HCl酸化。混合物使用DCM萃取(4x30mL)，合并萃取液，使用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩，得到104mg标题化合物。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.55(d,6H),2.82(s,3H),5.11-5.28(m,1H),7.00(d,J＝7.83Hz,1H),7.31(d,J＝3.54Hz,1H),7.44(d,J＝3.28Hz,1H),7.89(d,J＝7.58Hz,1H)。MS(ES)[M+H]+218.3。
d)N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-7-甲基-1-(1-甲基乙 基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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将7-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸(52mg,0.239mmol)、3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-2(1H)-吡啶酮(56.4mg,0.299mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(65.2mg,0.479mmol)、EDC(92mg,0.479mmol)和N-甲基吗啉(0.105mL,0.957mmol)加至二甲亚砜(DMSO)(10mL)，在室温搅拌16小时。添加25ml水，搅拌10分钟。滤出固体。将固体溶于DCM，使用水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩。残余物通过柱色谱纯化(Biotage；0％至20％梯度MeOH:DCM；10g-HP-硅胶柱)，得到55mg的N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-7-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酰胺。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.49(d,6H),2.24(s,3H),2.44(s,3H),2.75(s,3H),4.63(d,J＝4.55Hz,2H),5.17(dt,J＝13.20,6.66Hz,1H),5.97(s,1H),6.91(d,J＝7.58Hz,1H),7.01(d,J＝3.54Hz,1H),7.29(d,J＝3.28Hz,1H),7.39(d,J＝7.33Hz,1H),7.69(br.s.,1H),12.59(br.s.,1H)。MS(ES)[M+H]+352.4。
实施例368
7-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺
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7-甲基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲哚-4-甲酰胺按照实施例367的步骤进行制备。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm0.95-1.07(m,3H),1.50(d,J＝6.57Hz,6H),1.63(qt,J＝7.56,7.36Hz,2H),2.27(s,3H),2.68-2.82(m,5H),4.64(d,J＝2.53Hz,2H),5.17(dq,J＝6.82,6.65Hz,1H),6.04(s,1H),6.91(d,J＝7.58Hz,1H),7.00(d,J＝3.54Hz, 1H),7.31(d,J＝3.54Hz,1H),7.39(d,J＝7.33Hz,1H),7.64(br.s.,1H),12.13(br.s.,1H)。MS(ES)[M+H]+380.2。
方案7
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实施例369
1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-7-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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a)7-(甲基氧基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚
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向7-(甲基氧基)-1H-吲哚(3g,20.38mmol)于DMF(100mL)中的冷(冰水浴)溶液中分批添加氢化钠(0.618g,24.46mmol)。15分钟后，滴加苯磺酰氯(3.94mL,30.6mmol)于20ml DMF中的溶液。反应混合物在室温搅拌24小时，此时将其浓缩。残余物溶于DCM(100ml)，使用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩。残余物通过柱色谱纯化(Biotage；0％至100％DCM:己烷；50g-HP-硅胶柱)，得到3.65g标题化合物。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm3.65(s,3H),6.60-6.75(m,2H),7.08-7.22(m,2H),7.40-7.62(m,3H),7.77 -7.92(m,3H)。MS(ES)[M+H]+288.0。
b)7-(甲基氧基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向氯化铝(8.47g,63.5mmol)于DCM(100mL)中的冷(0℃)悬浮液中滴加草酰氯(5.56mL,63.5mmol)。搅拌30分钟后，滴加7-(甲基氧基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吲哚(3.65g,12.70mmol)于DCM(15ml)中的溶液。反应在室温搅拌1小时，此时将其倾倒至盐水中，使用DCM萃取。DCM萃取液用MgSO4干燥，过滤，蒸发至干。将100ml MeOH加至残余物中，在回流下加热3小时。混合物浓缩，残余物通过柱色谱纯化(Biotage；0％至100％DCM:己烷；50g-HP-硅胶柱)，得到2.3g标题化合物。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm3.70(s,3H),3.95(s,3H),6.67(d,J＝8.59Hz,1H),7.41(d,J＝3.79Hz,1H),7.46-7.53(m,2H),7.54-7.62(m,1H),7.79-7.86(m,2H),7.94(d,J＝8.59Hz,1H),7.98(d,J＝3.54Hz,1H)。MS(ES)[M+H]+346.0。
c)1-(1-甲基乙基)-7-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向7-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(350mg,1.706mmol)于DMF(20mL)中的冷(冰/水浴)溶液中添加氢化钠(56.0mg,2.217mmol)。10分钟后，添加2-碘丙烷(0.188mL,1.876mmol)。反应在室温搅拌1小时，接着在50℃加热2小时。反应然后在冰水浴中冷却，添加更多的氢化钠(56.0mg,2.217mmol)和2-碘丙烷(0.188mL,1.876mmol)。反应在50℃加热3小时，此时将其浓缩。残余物溶于DCM，使用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩，得到400mg标题化合物。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.49(d,6H),3.95(s,3H),4.01(s,3H),5.46(dt,J＝13.39,6.69Hz,1H),6.66(d,J＝8.34Hz,1H),7.15 (d,J＝3.03Hz,1H),7.34(d,J＝3.28Hz,1H),7.87(d,J＝8.34Hz,1H)。MS(ES)[M+H]+248.2。
d)1-(1-甲基乙基)-7-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酸
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将1N氢氧化钠(6.47mL,6.47mmol)加至1-(1-甲基乙基)-7-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(400mg,1.618mmol)于乙醇(30mL)中的溶液中，在回流下加热3小时。EtOH在真空下除去，残余物溶于20ml水。通过添加1NHCl酸化溶液，使用DCM萃取。合并的萃取液使用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩，得到350mg标题化合物。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.51(d,6H),4.03(s,3H),5.47(dt,J＝13.39,6.69Hz,2H),6.70(d,J＝8.34Hz,2H),7.23(d,J＝3.28Hz,2H),7.37(d,J＝3.03Hz,2H),7.99(d,J＝8.34Hz,2H)。MS(ES)[M+H]+234.0。
e)1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-7-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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将1-(1-甲基乙基)-7-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酸(160mg,0.686mmol),3-(氨基甲基)-6-甲基-4-丙基-2(1H)-吡啶酮(186mg,0.857mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(187mg,1.372mmol)、EDC(263mg,1.372mmol)和N-甲基吗啉(0.302mL,2.74mmol)加至DMSO(10mL)中，混合物在室温搅拌16小时。添加25ml水，搅拌10分钟。滤出固体，在真空下干燥。固体通过柱色谱纯化(Biotage；0％至15％梯度MeOH:DCM；10g-HP-硅胶柱)，得到165mg的1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-7-(甲基氧 基)-1H-吲哚-4-甲酰胺。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.01(t,3H),1.45(d,J＝6.57Hz,6H),1.63(m,J＝7.45,7.45,7.45,7.45,7.33Hz,2H),2.24(s,3H),2.74(t,J＝7.58Hz,2H),3.96(s,3H),4.64(br.s.,2H),5.45(quin,J＝6.63Hz,1H),5.97(s,1H),6.62(d,J＝8.08Hz,1H),6.94(d,J＝3.28Hz,1H),7.24(d,J＝3.28Hz,1H),7.53(d,J＝8.08Hz,1H),7.74(br.s.,1H),12.46(br.s.,1H)。MS(ES)[M+H]+395.7。
实施例370
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-7-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-7-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酰胺按照实施例369描述的方法进行制备。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.45(d,6H),2.21(s,3H),2.43(s,3H),3.96(s,3H),4.63(d,J＝5.56Hz,2H),5.35-5.57(m,1H),5.94(s,1H),6.61(d,J＝8.34Hz,1H),6.94(d,J＝3.28Hz,1H),7.23(d,J＝3.03Hz,1H),7.52(d,J＝8.08Hz,1H),7.66(br.s.,1H),12.73(br.s.,1H)。MS(ES)[M+H]+368.1。
实施例371
6-氯-1-异丙基-2,3-二甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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a)6-氯-1-异丙基-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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在N2下，向2-溴-6-氯-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(0.50g,1.451mmol)、三甲基环三硼氧烷(0.30mL,2.146mmol)和碳酸钾(0.31g,2.243mmol)于1,4-二![]()
烷(20mL)中的搅拌溶液添加palladium tetrakis(0.18g,0.156mmol)。反应加热至110℃，搅拌18小时。3小时后，添加额外的100uL三甲基环三硼氧烷。反应在真空下浓缩，溶于EtOAc，使用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并在真空下浓缩。通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g,0至10％EtOAc的己烷溶液)，得到产物6-氯-1-异丙基-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(0.33g,1.180mmol,81％产率)，为澄清稠油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.80(d,J＝2.0Hz,1H),7.28(d,J＝1.8Hz,1H),4.81(dt,J＝6.9,13.9Hz,1H),3.87(s,3H),2.39(s,3H),2.13(s,3H),1.51(d,J＝7.1Hz,6H)。
MS(ES)+m/e280.1[M+H]+。
b)6-氯-1-异丙基-2,3-二甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向6-氯-1-异丙基-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(320mg,1.144mmol)于甲醇(12mL)和四氢呋喃(THF)(4mL)中的搅拌溶液中添加1N NaOH(4mL,4.00mmol)。反应回流(70℃油浴)18小时。反应在真空下浓缩，使用水稀释，使用1N HCl(4mL)酸化，过滤，使用水洗涤，在真空下干燥，得到所述甲酸(0.30g,1.14mmol,100％)，为亮黄色固体。MS(ES)+m/e266.1[M+H]+。
向上述甲酸添加3-(氨基甲基)-6-甲基-4-丙基吡啶-2(1H)-酮(230mg,1.276mmol)、HOAt(160mg,1.176mmol)、二氯甲烷(12mL)和N,N-二甲基甲酰胺(4.00mL)以溶解。在搅拌下添加EDC游离碱(210mg,1.353mmol)，反应在室 温搅拌3小时。LCMS表明反应完全。反应在真空下蒸发至干，然后通过硅胶色谱纯化(SF25-40g,50至100％EtOAc的CH2Cl2溶液)(快速洗脱(streaked off))。合并纯的级分，在真空下蒸发。剩余的固体使用25％CH2Cl2的己烷溶液研磨，过滤，使用己烷洗涤，在真空下干燥，得到产物6-氯-1-异丙基-2,3-二甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺(431mg,1.007mmol,88％产率)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.49(s,1H),8.16(t,J＝5.1Hz,1H),7.58(d,J＝1.8Hz,1H),6.82(d,J＝1.8Hz,1H),5.89(s,1H),4.75(dt,J＝6.9,13.9Hz,1H),4.31(d,J＝5.1Hz,2H),2.52(2H under DMSO),2.33(s,3H),2.12(s,3H),2.04(s,3H),1.61-1.51(m,2H),1.49(d,J＝6.8Hz,6H),0.94(t,J＝7.3Hz,3H)。MS(ES)+m/e428.3[M+H]+。
实施例372
6-氯-2-((二甲基氨基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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a)6-氯-2-((二甲基氨基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向2-溴-6-氯-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(1.0g,2.90mmol),((二甲基氨基)甲基)三氟硼酸钾(0.5g,3.03mmol)和磷酸钾(1.9g,8.95mmol)用N2脱气))于二![]()
烷(3mL)和水(3mL)中的搅拌混合物中添加乙酸钯(II)(25mg,0.111mmol)和sPhos(90mg,0.219mmol)。反应加热至100℃，在N2下搅拌18小时。LCMS表明反应完全。反应使用EtOAc和水稀释，过滤以除去不溶物。除去EtOAc相，干燥(Na2SO4)，过滤，并在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-40g,0至2％(5％NH4OH/MeOH)于CH2Cl2)。合并产物级分，在真空下蒸发至干，得到产物6-氯-2-((二甲基氨基)甲基)-1-异丙基-3- 甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(0.45g,1.394mmol,48.0％产率)，为亮黄色油状物(LCMS表明仅84％纯度)。其按原样在下一反应中使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.82(d,J＝1.8Hz,1H),7.28(d,J＝1.8Hz,1H),4.96(dt,J＝7.1,14.1Hz,1H),3.88(s,3H),3.52(s,2H),2.17(s,3H),2.16(s,6H),1.53(d,J＝7.1Hz,6H).MS(ES)+m/e323.2[M+H]+,278.1[M+H]+-45(HNMe2)。
b)6-氯-2-((二甲基氨基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸盐酸盐
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向6-氯-2-((二甲基氨基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(0.44g,1.363mmol)中添加6N HCl(20ml,120mmol)。反应使用N2脱气，连接回流冷凝器，加热至80℃，搅拌18小时。LCMS表明反应完全。反应冷却至室温，使用等体积的水稀释，使用EtOAc洗涤，在真空下蒸发至干，得到产物6-氯-2-((二甲基氨基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸盐酸盐(0.42g,1.216mmol,89％产率)，为米色固体。(LCMS表明86％纯度，含有～10％来自前一反应的脱氯副产物)。其按原样在下一反应中使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝13.19(br.s.,1H),10.45(br.s.,1H),7.90(d,J＝1.8Hz,1H),7.33(d,J＝1.8Hz,1H),4.91(quin,J＝6.9Hz,1H),4.58(d,J＝5.6Hz,2H),2.79(d,J＝4.8Hz,6H),2.34(s,3H),1.58(d,J＝6.8Hz,6H)。MS(ES)+m/e309.2[M+H]+,264.1[M+H]+-45(HNMe2)。
c)6-氯-2-((二甲基氨基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向6-氯-2-((二甲基氨基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸盐酸盐(0.42g,1.216mmol)、3-(氨基甲基)-6-甲基-4-丙基吡啶-2(1H)-酮(0.22g,1.221 mmol)、HOAt(0.17g,1.249mmol)中添加二氯甲烷(16mL)、N,N-二甲基甲酰胺(4mL)和N-甲基吗啉(135μL,1.228mmol)。混合物搅拌，添加EDC游离碱(0.20g,1.288mmol)。搅拌2小时后，LCMS表明反应完全。反应在真空下蒸发至干，通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g,0至8％(5％NH4OH的MeOH溶液)于CH2Cl2中)。合并纯的级分，蒸发至干，然后溶于20％EtOAc的己烷溶液。刮擦结晶出产物，将其过滤，使用己烷洗涤，得到产物6-氯-2-((二甲基氨基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺(362mg,0.769mmol,63.2％产率)，为灰白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.49(s,1H),8.24(t,J＝4.9Hz,1H),7.61(d,J＝1.8Hz,1H),6.83(d,J＝1.8Hz,1H),5.89(s,1H),4.91(quin,J＝7.0Hz,1H),4.31(d,J＝5.1Hz,2H),3.47(s,2H),2.52(2H under DMSO),2.14(s,6H),2.12(s,3H),2.10(s,3H),1.62-1.53(m,2H),1.51(d,J＝7.1Hz,6H),0.94(t,J＝7.3Hz,3H)。MS(ES)+m/e471.3[M+H]+。
实施例373
2-(2-氨基乙基)-6-氯-1-异丙基-3-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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a)2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)-6-氯-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向2-溴-6-氯-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(0.37g,1.074mmol),(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)三氟硼酸钾(0.30g,1.195mmol)和Cs2CO3(1.0g,3.07mmol)(用N2脱气)于甲苯(12mL)和水(4mL)中的的搅拌混合物中添加乙酸钯(II)(20mg,0.089mmol)和RuPhos(80mg,0.171mmol)。将反应加热至95℃，在N2下搅拌18小时。LCMS仍显示有SM。添加另一份的乙酸钯(II)(20mg, 0.089mmol)和RuPhos(80mg,0.171mmol)，反应在95℃再搅拌18小时。LCMS显示几乎反应完全。反应使用EtOAc和水稀释，过滤以除去不溶物。除去EtOAc相，干燥(MgSO4)，过滤，并在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g,0至25％EtOAc的己烷溶液)。收集三个级分。第一个级分含有大量的脱溴产物，第二个级分为未知的混合物，最后一个级分含有产物(注意：与TLC的顺序相反)。合并产物级分，在真空下蒸发至干，使用己烷研磨，过滤，在真空下干燥，得到产物2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)-6-氯-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(148mg,0.362mmol,33.7％产率)，为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.81(d,J＝1.5Hz,1H),7.28(d,J＝1.8Hz,1H),7.00(t,J＝5.6Hz,1H),3.87(s,3H),3.07(q,J＝6.7Hz,2H),2.97-2.85(m,2H),2.13(s,3H),1.56(d,J＝7.1Hz,6H),1.36(s,9H)。MS(ES)+m/e409.2[M+H]+。
b)2-(2-氨基乙基)-6-氯-1-异丙基-3-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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向3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸酯(140mg,0.342mmol)于甲醇(9mL)和四氢呋喃(3mL)中添加1N NaOH(2mL,2.000mmol)。反应回流(70℃油浴)18小时(与仅1mL1N NaOH在60℃进行地非常缓慢的反应)。反应在真空下浓缩，使用水稀释，使用1N HCl(2mL)酸化，过滤，使用水洗涤，在真空下干燥，得到所述甲酸(0.14g,0.354mmol,100％)，为白色固体。MS(ES)+m/e395.0[M+H]+。
向上述甲酸添加3-(氨基甲基)-6-甲基-4-丙基吡啶-2(1H)-酮(80mg,0.444mmol)、HOAt(60mg,0.441mmol)、二氯甲烷(12mL)和N,N-二甲基甲酰胺(3.00mL)以溶解。在搅拌下添加EDC游离碱(70mg,0.451mmol)，反应在室温搅拌过夜。LCMS表明反应完全。反应在真空下蒸发至干，然后通过硅胶色谱纯化(SF25-40g,50至100％EtOAc的CH2Cl2溶液)，得到Boc保护的终产物 (0.20g,3.59mmol,100％)，为白色固体。MS(ES)+m/e557.3[M+H]+。
将上述产物溶于MeOH(5mL)，然后在搅拌下使用4N HCl的二![]()
烷溶液(10mL,40.0mmol)处理。反应搅拌30分钟，然后在真空下蒸发至干。固体使用Et2O研磨，过滤，使用己烷洗涤，在真空下干燥，得到产物2-(2-氨基乙基)-6-氯-1-异丙基-3-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1H-吲哚-4-甲酰胺盐酸盐(161mg,0.326mmol,95％产率)，为亮黄色固体。MS(ES)+m/e457.2[M+H]+。
中间体
中间体1
3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-2(1H)-吡啶酮盐酸盐
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将钯/炭(10％)(3.24g)加至2L无水Parr瓶中，添加少量的乙酸。接下来添加4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-吡啶-3-甲腈(30g,202.7mmol)、乙酸钠(30.75g,375.0mmol)、氧化铂(0.218g)和乙酸(1L)。将瓶盖住，置于Parr装置上，在H2气氛下(100psi)摇动2天。反应混合物过滤。除去溶剂，得到残余物，其使用150mL浓HCl处理，形成的固体过滤。黄色滤液浓缩。向该粗化合物中添加30mL浓HCl和150mL EtOH，将内容物冷却至0℃，在0℃搅拌2小时。形成的固体过滤，使用冷EtOH和乙醚洗涤，干燥。收集产物36g。将该批与更小规模制备的其它批次合并，使用乙醚研磨，得到51g纯化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm11.85(br s,1H)8.13(br s,3H)5.93-6.01(m,1H)3.72-3.80(m,2H)2.22(s,3H)2.16(s,3H)。
中间体2
3-(氨基甲基)-6-甲基-4-(三氟甲基)-2(1H)-吡啶酮
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在氮气流下，向干燥的500mL Parr瓶(装配有氮气入口)中添加乙酸钠(1.502g,18.30mmol)、10％钯/炭(1.579g,0.742mmol)、氧化铂(IV)(0.011g, 0.049mmol)和少量的乙酸以润湿催化剂。接着添加2-羟基-6-甲基-4-(三氟甲基)-3-吡啶甲腈(2.0g,9.89mmol)，接着同时在氮气氛下添加乙酸(175mL)。将内容物密封，置于Parr振荡器上，在40psi的H2下持续约6小时，保持H2psi在20和40psi之间(容器重新填充两次)。将容器利用氮气脱气，反应混合物通过硅藻土过滤，滤垫再使用少量乙酸洗涤。挥发物在真空下除去，得到残余物，其在高真空下干燥45分钟。将固体悬浮于浓HCl(12mL)，搅拌，过滤。澄清滤液在真空下浓缩，残余物在高真空下干燥。收集的固体悬浮于浓HCl(2mL)，使用EtOH(13mL)稀释。内容物振荡，在约0℃(冰箱)储存30分钟，得到白色固体。将固体过滤，使用冷乙醇(5mL)洗涤。将固体过滤，在真空烘箱中干燥1小时，得到3-(氨基甲基)-6-甲基-4-(三氟甲基)-2(1H)-吡啶酮(0.95g,40％)。LCMS E-S(M+H)＝206.9。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.31(s,3H),3.40-3.62(m,2H),3.87(d,J＝5.05Hz,2H),8.12-8.37(m,3H)。
中间体3
3-(氨基甲基)-4-环己基-6-甲基-2(1H)-吡啶酮
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3a)4-环己基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈
向CrCl2(58g,472.8mmol)于THF(1500mL)中的搅拌悬浮液中添加1,1-二氯-2-丙酮(10g,78.8mmol)和环己烷甲醛(8.84g,78.8mmol)的THF溶液(500mL)。反应混合物在回流下加热2小时，然后通过添加1.0M HCl淬灭。反应混合物通过硅藻土垫过滤，在真空下浓缩。将该粗残余物(10g)添加至含t-BuOK(7.5g,65.7mmol)和氰基乙酰胺(6.1g,72.3mmol)的DMSO(150mL)溶液，在室温搅拌30分钟。添加另外的t-BuOK(22.5g,197.1mmol)，反应混合物在氧气氛下再搅拌1小时。内容物使用氩气脱气，使用4倍体积的H2O稀释，然后5倍体积的4N HCl稀释(缓慢添加)。反应混合物过滤，使用水洗涤，干燥，得到4-环己基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(4.5g,32％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm6.25(s,1H),2.61-2.65(m,1H),2.22(s,3H),1.66-1.79(m,4H),1.24-1.46(m,6H)。
3b)3-(氨基甲基)-4-环己基-6-甲基-2(1H)-吡啶酮
向步骤1得到的产物(2g,9.26mmol)的冰浴冷却的THF(100mL)中的溶液中添加NaBH4(0.81g,21.3mmol)和I2(2.3g,9.26mmol)，混合物搅拌30分钟。然后反应混合物在回流下加热3小时，然后冷却至室温。冷却至0℃后，反应混合物通过缓慢添加3N HCl(1mL)酸化。反应混合物在真空下浓缩，粗产物通过反相HPLC纯化，得到3-(氨基甲基)-4-环己基-6-甲基-2(1H)-吡啶酮，为固体(0.5g,25％)。LCMS E-S(M+H)＝221.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm11.8–11.9(br s,1H),7.80-7.93(br s,3H),6.07(s,1H),3.69(s,2H),2.67-2.75(m,1H),2.17(s,3H),1.58-1.72(m,5H),1.19–1.41(m,5H)。
中间体4
3-(氨基甲基)-4-环丙基-6-甲基-2(1H)-吡啶酮
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标题化合物按照3-(氨基甲基)-4-环己基-6-甲基-2(1H)-吡啶酮(中间体3)描述的相同的方法，利用4-环丙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(5g,28.7mmol)进行制备。得到0.50g(10％)。LCMS E-S(M+H)＝179.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm11.76–11.78(br s,1H),7.82–7.92(br s,3H),5.61(s,1H),3.94–3.99(m,2H),2.11(s,3H),1.98–2.05(m,1H),0.95–1.01(m,2H),0.74–0.79(m,2H)。
中间体5
3-(氨基甲基)-6-甲基-4-丙基-2(1H)-吡啶酮
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5a)6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶甲腈
向含t-BuOK(20g,178mmol)和氰基乙酰胺(16.5g,196mmol)的DMSO(300mL)溶液中添加(3E)-3-庚烯-2-酮(20g,178mmol)，内容物在室温搅拌30 分钟。添加另外的t-BuOK(60g,534mmol)，将反应混合物在氧气氛下放置另外1小时。反应混合物使用氩气脱气，使用4倍体积的H2O稀释，然后5倍体积的4N HCl稀释(缓慢添加)。反应混合物过滤，使用水洗涤，干燥，得到6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(10g,32％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm12.25–12.40(br s,1H),6.18(s,1H),2.53(t,2H),2.22(s,3H),1.57–1.64(m,2H),0.84(t,3H)。
5b)3-(氨基甲基)-6-甲基-4-丙基-2(1H)-吡啶酮
标题化合物按照3-(氨基甲基)-4-环己基-6-甲基-2(1H)-吡啶酮(中间体3)描述的相同方法，利用6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(2g,11.2mmol)进行制备。得到1.2g(60％)。LCMS E-S(M+H)＝181.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.85–7.95(br s,3H),5.99(s,1H),3.80–3.85(m,2H),2.42(t,2H),2.14(s,3H),1.43–1.49(m,2H),0.86(t,3H)。
中间体6
3-(氨基甲基)-6-甲基-4-苯基-2(1H)-吡啶酮
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标题化合物按照3-(氨基甲基)-6-甲基-4-丙基-2(1H)-吡啶酮(中间体5)描述的相同方式，利用(3E)-4-苯基-3-丁烯-2-酮(20g,137mmol)进行制备。LCMSE-S(M+H)＝215.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm12.2–12.3(br s,1H),7.88–8.00(br s,3H),7.43–7.51(m,3H),7.29–7.38(m,2H),6.08(s,1H),3.67–3.70(m,2H),2.23(s,3H)。
中间体7
3-(氨基甲基)-6-甲基-4-(1-甲基乙基)-2(1H)-吡啶酮
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标题化合物按照3-(氨基甲基)-6-甲基-4-丙基-2(1H)-吡啶酮(中间体5)描述的相同方式，利用(3E)-5-甲基-3-己烯-2-酮(20g,137mmol)进行制备。LCMS E-S(M+H)＝181.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm11.8–11.9(br s,1H),7.86–7.96(br s,3H),6,.10(s,1H),3.82–3.86(m,2H),3.02–3.09(m,1H),2.17(s,3H),1.08(d,6H)。
中间体8
3-(氨基甲基)-4-甲基-6-丙基-2(1H)-吡啶酮
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8a)4-甲基-2-氧代-6-丙基-1,2-二氢-3-吡啶甲腈
在30℃，向NaNH2(32.5g,862mmol)于无水乙醚(500mL)中的溶液中滴加丁酸乙基酯(50g,431mmol)和丙酮(37.5g,646.5mmol)的混合物。添加后，反应混合物搅拌4小时。反应混合物在搅拌下倾倒至冰水中。添加额外的乙醚，分离各层。水层使用2N HCl酸化至pH5.0，然后使用Na2CO3碱化至pH7.5。水层然后使用乙醚萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，在真空下浓缩。将粗产物2,4-庚烷二酮(20g,156mmol)和2-氰基乙酰胺(13.12g,156mmol)在75℃悬浮于EtOH(160mL)，接着添加哌啶(13.2g,156mmol)。将内容物搅拌，在回流下加热1小时。混合物冷却至室温，过滤。收集的固体悬浮于水，搅拌1小时。混合物过滤，干燥，得到4-甲基-2-氧代-6-丙基-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(11g,40％)。LCMS E-S(M+H)＝181.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm12.3–12.4(br s,1H),6.25(s,1H),3.64(s,3H),2.50(t,2H),1.63(m,2H),0.94(t,3H)。
8b)3-(氨基甲基)-4-甲基-6-丙基-2(1H)-吡啶酮
将乙酸钠(3.5g,42.6mmol)、钯/炭(0.81g)和氧化铂(0.1g)置于干燥的Parr瓶(充有氮气)中，接着添加少量乙酸(用于润湿催化剂)。将4-甲基-2-氧代-6-丙基-1,2-二氢-吡啶-3-甲腈(5g,28mmol)于乙酸中的溶液添加至该Parr瓶中，接着添加另外的乙酸(200mL)。将该容器盖住，置于Parr装置上，在45psi氢化12小时。反应混合物过滤，滤液在真空下浓缩。粗产物通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(TFA盐)，4.1g(87％)。LCMS E-S(M+H))＝181.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm11.8–11.9(br s,1H),7.83–7.88(br s,3H),5.99(s,1H),3.77–3.81(m,2H),2.37(t,2H),1.53(m,2H),0.83(t,3H)。
中间体9
3-(氨基甲基)-6-环丙基-4-甲基-2(1H)-吡啶酮盐酸盐
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9a)1-环丙基-1,3-丁烷二酮
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在35℃，通过滴液漏斗经25分钟向THF(100mL)的搅拌溶液中添加叔丁醇钾(5.60g,49.5mmol)，接着添加环丙基甲基酮(3.27mL,33mmol)和乙酸乙酯(9.69mL,99mmol)于30mL THF中的混合物。内容物加热，在60℃搅拌。3小时后，内容物撤去加热，冷却至室温。反应混合物小心地使用30mL2N HCl稀释，搅拌10分钟。混合物使用乙醚(3x50mL)萃取，合并的有机层使用盐水(1x50mL)洗涤。有机层用MgSO4干燥，过滤，在真空下浓缩。通过硅胶色谱纯化(洗脱液：0至15％EtOAc的己烷溶液)，良好分离得到1-环丙基-1,3-丁二酮，为亮黄色油状物，3.9g，～75％纯度(残余溶剂)，总产率70％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm0.89–0.96(m,2H),1.09-1.15(m,2H),1.59-1.69(m,1H),2.04(s,3H),5.63(s,1H),15.5–16.0(br s,1H)。
9b)6-环丙基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈
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向乙醇(5mL)的搅拌溶液中添加1-环丙基-1,3-丁二酮(505mg,3.00mmol)和氰基乙酰胺(252mg,3.00mmol)，异相的内容物加热直到为均相(约75℃)。添加哌啶(0.395mL,4.00mmol)，混合物在回流下加热30分钟。反应混合物冷却至室温，其中发生沉淀。将固体沉淀过滤，放置在一边。滤液在真空下浓缩，油状残余物使用少量EtOAc处理，然后用10mL己烷处理，得到第二批固体。将各批固体产物合并，悬浮于水(7mL)中，剧烈搅拌，真空过滤，得到6-环丙基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈，近白色固体(380mg,73％)。 LCMS E-S(M+H)＝175.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.01-1.09(m,2H),1.28(dd,J＝8.59,2.27Hz,2H),1.95-2.01(m,1H),2.43(s,3H),5.82(s,1H)。
9c)[(6-环丙基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
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将6-环丙基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(0.35g,2.01mmol)加至甲醇(20mL)中，搅拌的内容物冷却至-10℃。接着添加二-叔丁基氧基羰基(0.933mL,4.02mmol)，悬浮液搅拌15分钟。接着添加固体NiCl2-6H2O(0.055g,0.201mmol)，搅拌5分钟。然后分6批在5分钟内添加NaBH4(0.532g,14.06mmol)。各批之间递增。然后撤去冰浴，内容物搅拌温热至室温过夜。反应混合物返回至-10℃,接着再添加3批NaBH4(0.532g,14.06mmol)。撤去冰浴，混合物在室温搅拌1小时。内容物通过添加乙二胺(0.218mL,2.01mmol)淬灭，在室温搅拌45分钟。挥发物在真空下除去，残余物悬浮于EtOAc和饱和NaHCO3中。有机层使用其它的NaHCO3洗涤。分离各层，有机层用MgSO4干燥，过滤，在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱纯化(洗脱液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)。收集的产物在高真空下干燥1小时，然后使用乙醚处理，过滤。在真空烘箱中于45℃干燥2小时后，得到[(6-环丙基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(0.28g,50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm0.73-0.80(m,2H),0.88-0.96(m,2H),1.36(s,9H),1.70-1.82(m,1H),2.11(s,3H),3.95(d,J＝5.31Hz,2H),5.66(s,1H),6.51(t,J＝4.80Hz,1H),11.50(br.s.,1H)。
9d)3-(氨基甲基)-6-环丙基-4-甲基-2(1H)-吡啶酮盐酸盐
将[(6-环丙基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(0.28g,1.006mmol)加至EtOAc(9mL)和甲醇(1.0mL)中。悬浮液在室温搅拌5分钟，接着添加4M HCl的二![]()
烷溶液(5.03mL,20.12mmol)，内容物在室温搅拌过夜。然后挥发物在真空下除去，得到固体。固体使用乙醚研磨，过滤，在真空烘箱中于45℃干燥4小时。得到标题化合物(0.22g, 100％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm0.78-0.86(m,2H),0.95-1.03(m,2H),1.83(tt,J＝8.46,5.05Hz,1H),2.16-2.22(m,3H),3.75(q,J＝5.47Hz,2H),5.79(s,1H),8.02(br.s.,3H),11.92(br.s.,1H)。
中间体10
3-(氨基甲基)-4-乙基-6-甲基-2(1H)-吡啶酮盐酸盐
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10a)己-3-烯-2-酮
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在室温，向1-(三苯基膦烯(triphenylphosphoranylidene))-2-丙酮(100g,307mmol)于DCM(500mL)中的搅拌溶液中添加丙醛(140mL,1929mmol)。然后反应混合物在室温搅拌18小时。反应通过TLC监测。溶剂(DCM)利用常规蒸馏法蒸馏除去。然后残余物利用在真空下(～450mbar)分馏，分离得到所需产物。在110℃得到标题化合物己-3-烯-2-酮(20g,66％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δppm1.071-1.121(t,3H,J＝7.4Hz),2.250-2.299(m,5H),6.054-6.094(d,1H,J＝16Hz),6.823-6.895(m,1H)。
10b)4-乙基-1,2-二氢-6-甲基-2-氧代吡啶-3-甲腈
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在氩气氛下在室温，向t-BuOK(22.85g,204.08mmol)和氰基乙酰胺(18.8g,224.1mmol)于DMSO(300mL)中的搅拌溶液中添加己-3-烯-2-酮(20g,204.08mmol)。然后反应混合物在室温搅拌30分钟，然后添加额外的t-BuOK(68.5g,612.05mmol)。将氩气替换为氧气，混合物在室温在氧气存在下搅拌48小时。反应通过TLC监测。反应混合物冷却至0℃，使用水(100mL)稀释，接着添加4N HCl(120mL)。混合物搅拌15分钟，得到的固体过滤。固体使 用水(1L)洗涤，干燥，得到标题化合物4-乙基-1,2-二氢-6-甲基-2-氧代吡啶-3-甲腈(10.5g,31％)，为灰白色固体。1H NMR(CDCl3,400MHz)：δppm1.148-1.185(t,3H,J＝7.4Hz),2.237(s,3H),2.557-2.614(m,2H),6.211(s,1H),12.330(brs,1H)。MS(ES)[M+H]+161.06。
10c)3-(氨基甲基)-4-乙基-6-甲基吡啶-2(1H)-酮
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向兰尼镍(6g)于甲醇(200mL)中的悬浮液中添加4-乙基-1,2-二氢-6-甲基-2-氧代吡啶-3-甲腈(10g,61.7mmol)和甲醇氨(750mL)。反应混合物在氢气氛(80psi)下在室温搅拌48小时。反应混合物通过硅藻土过滤，使用甲醇(250mL)洗涤。滤液在减压下浓缩，残余物通过过滤柱利用硅胶(60–120目)纯化，使用10％MeOH的CHCl3溶液洗脱，得到3-(氨基甲基)-4-乙基-6-甲基吡啶-2(1H)-酮(5.6g,54％)，为灰白色固体。1H NMR(DMSO-D6,400MHz)(游离胺)：δppm1.063-1.101(t,3H,J＝7.6Hz),2.101(s,3H),2.412-2.449(m,2H),3.448(s,2H),5.835(s,1H)。MS(ES)[M+H]+167.06。
10d)3-(氨基甲基)-4-乙基-6-甲基吡啶-2(1H)-酮盐酸盐
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将3-(氨基甲基)-4-乙基-6-甲基吡啶-2(1H)-酮(5.6g,33mmol)悬浮于DCM(560mL)，不溶的内容物/颗粒过滤。滤液浓缩并干燥。残余物溶于DCM(10mL)，在0℃添加4M HCl的1,4-二![]()
烷溶液(16mL,66mmol)，搅拌10分钟，此时反应混合物在高真空下浓缩并干燥。得到的粗产物固体使用己烷(150mL)研磨，过滤。固体在真空下干燥。得到3-(氨基甲基)-4-乙基-6-甲基吡啶-2(1H)-酮盐酸盐(5.9g,86％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.082-1.120(t,3H,J＝7.6Hz),2.179(s,3H),2.503-2.544(m,2H),3.785-3.798(d,2H,J＝5.2 Hz),6.024(s,1H),7.985(brs,2H),11.858(brs,1H)。MS(ES)[M+H]+167.2。
中间体11
3-(氨基甲基)-6-乙基-4-甲基-2(1H)-吡啶酮
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11a)4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈
在N2氛下在室温，向t-BuOK(17.2g,153mmol)和氰基乙酰胺(13g,153mmol)于CH3CN(225mL)中的溶液中添加(3E)-3-己烯-2-酮(15g,153mmol)。反应混合物搅拌30分钟。再向反应混合物添加额外的t-BuOK(51.4g)，将N2替换为氧气。不用外部冷却搅拌1小时后，混合物使用4N HCl稀释，其在良好搅拌下缓慢添加。混合物过滤，使用EtOH洗涤，干燥，得到6-乙基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(5g,21％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.33(br.s.,1H),6.18(s,1H),2.45(q,2H),2.30(s,3H),1.11(t,3H)。
11b)3-(氨基甲基)-6-乙基-4-甲基-2(1H)-吡啶酮
向6-乙基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(7g,43.2mmol)的冰浴冷却的THF溶液(200mL)中添加NaBH4(4.2g,108mmol)和I2(11.2g,43.2mmol)，内容物搅拌30分钟。然后反应混合物在回流下加热过夜。反应混合物冷却，在0℃通过缓慢滴添加4N HCl小心地中和。混合物用MgSO4干燥，过滤，在真空下浓缩。产物通过HPLC纯化，得到3-(氨基甲基)-6-乙基-4-甲基-2(1H)-吡啶酮，为TFA盐(1.9g，26.4％)。LCMS MH+＝167.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.82(br.s.,1H),7.82(br s,3H),5.97(s,1H),3.75-3.77(m,2H),2.39(q,2H),2.17(s,3H),1.09(t,3H)。
中间体12
3-(氨基甲基)-6-甲基-4,4'-联吡啶-2(1H)-酮
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12a)(2Z)-3-羟基-1-(4-吡啶基)-2-丁烯-1-酮
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35-40℃，向4-吡啶甲酸乙基酯(30g,198mmol)和丙酮(34.58g,595mmol)于THF(150mL)中的溶液中在缓慢添加NaOMe(12.87g,238mmol)。混合物在室温搅拌0.5小时，然后在回流下加热3小时。混合物冷却至室温，过滤，得到固体，其使用t-BuOMe洗涤，溶于H2O。溶液使用乙酸酸化，得到的油状产物使用CHCl3萃取。溶剂在真空下除去，得到粗产物(12g,37％)，不用进一步纯化直接使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(d,2H),7.76(d,2H),6.63(s,1H),2.21(s,3H)；注意：没有出现烯醇的OH。
12b)6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-4,4'-联吡啶-3-甲腈和4-甲基-6-氧代-1,6-二氢-2,4'-联吡啶-5-甲腈
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在N2于75℃，向(2Z)-3-羟基-1-(4-吡啶基)-2-丁烯-1-酮(8g,粗产物,49mmol)和氰基乙酰胺(4.12g,49mmol)于无水EtOH(100mL)中的溶液中添加哌啶(4.17g,49mmol)。混合物在回流下加热1小时然后冷却至室温。过滤后，得到固体，使用H2O洗涤，得到粗产物(4g)，为两种异构体。通过HPLC分离后，得到1.8g的6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-4,4'-联吡啶-3-甲腈和1.2g的4-甲基-6-氧代-1,6-二氢-2,4'-联吡啶-5-甲腈。6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-4,4'-联吡啶-3-甲腈的确认通过nOE分析确定。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.79(br.s.,1H),8.75(d,2H),7.58(d,2H),6.37(s,1H),2.31(s,3H)。
12c)3-(氨基甲基)-6-甲基-4,4'-联吡啶-2(1H)-酮
向6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-4,4'-联吡啶-3-甲腈(4g,18.9mmol)的冰浴冷却的THF(100mL)溶液中添加NaBH4(1.43g,37.9mmol)和I2(4.81g,18.9mmol),混合物搅拌0.5小时。然后反应混合物在回流下加热4小时。冷却至0℃后,反应混合物使用4N HCl调节至pH5。混合物在真空下浓缩，得到粗化合物，其通过HPLC纯化，得到3-(氨基甲基)-6-甲基-4,4'-联吡啶-2(1H)-酮(1.9g,31％)，为TFA盐。LCMS MH+＝216.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6的D2O溶液)δ8.87(d,2H),7.87(d,2H),6.13(s,1H),3.65(br s,2H),2.17(s,3H)。
中间体13
3-(氨基甲基)-6-环丁基-4-甲基-2(1H)-吡啶酮
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13a)环丁烷甲酸乙基酯
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在室温，向环丁烷甲酸(50g,500mmol)于EtOH(1.2L)中的溶液中缓慢添加H2SO4(20mL)。溶液在回流下搅拌过夜，然后冷却，倾倒至H2O中。水层使用乙醚萃取。合并的有机层使用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，在真空下浓缩，得到环丁烷甲酸乙基酯，为无色油状物(44g,69％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d3)δ4.04(q,2H),3.04(m,1H),2.12(m,4H),1.88(m,2H),1.18(t,3H)。
13b)1-环丁基-1,3-丁二酮
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在N2下于30℃，向NaNH2(11.7g,91mmol)于无水乙醚(150mL)中的溶液滴加环丁烷甲酸乙基酯(19.2g,150mmol)和丙酮(21.75g,375mmol)的混合 物。添加后，反应混合物搅拌4小时，然后在搅拌下倾倒至冰水中。添加乙醚，将未反应的组分萃取到有机相中。澄清的水相萃取物使用2N HCl酸化至pH5.0，然后使用Na2CO3碱化至pH7.5。溶液使用乙醚萃取。合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，并浓缩，得到粗产物1-环丁基-1,3-丁二酮(9.7g,76％)，其不用进一步纯化直接在下一步骤中使用。1H NMR(400MHz,CDCl3-d3)δ5.42(s,1H),3.66(s,1H),2.11-2.23(m,4H),2.02(s,3H),1.93-1.99(m,2H)。
13c)6-环丁基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈和4-环丁基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈
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向1-环丁基-1,3-丁二酮(1.5g,10.7mmol)和氰基乙酰胺(1.07g,12.8mmol)于EtOH(25mL)中的溶液中在75℃添加哌啶(1.08g,12.8mmol)。添加后，混合物在搅拌下加热回流。1小时后，混合物冷却至室温，期间出现沉淀。内容物过滤，过滤的固体悬浮于水，搅拌1小时。异相的混合物过滤，干燥，得到6-环丁基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈和4-环丁基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈的混合物(1.14g,57％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6的D2O溶液)δ12.15-12.30(br s,2H),6.39(s,1H),6.34(s,1H),2.40-2.28(m,7H),2.23-2.25(m,3H),2.18-2.21(m,4H),1.99-2.11(m,2H),1.84-1.90(m,2H)。
13d)3-(氨基甲基)-6-环丁基-4-甲基-2(1H)-吡啶酮和3-(氨基甲基)-4-环丁基-6-甲基-2(1H)-吡啶酮
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向6-环丁基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈和4-环丁基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(6g,32mmol)的冰浴冷却的THF(100mL)溶液中添加NaBH4(2.73g,71.8mmol)和I2(8.3g,32mmol)，混合物搅拌30分钟。然后反应 混合物在回流下加热3小时。冷却至0℃后，反应混合物使用6N HCl调节至pH5。内容物干燥，过滤，在真空下浓缩。粗产物通过HPLC纯化，得到3-(氨基甲基)-6-环丁基-4-甲基-2(1H)-吡啶酮和3-(氨基甲基)-4-环丁基-6-甲基-2(1H)-吡啶酮的混合物(5.6g,91％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.60-11.70(br s,2H),7.85(br s,4H),6.15(s,1H),6.03(s,1H),3.72-3.79(m,2H),3.29-3.33(m,2H),2.16(s,6H),2.05-2.10(m,6H),1.88-1.93(m,4H),1.69-1.79(m,4H)。
13e)[(6-环丁基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯和[(4-环丁基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯
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向3-(氨基甲基)-6-环丁基-4-甲基-2(1H)-吡啶酮和3-(氨基甲基)-4-环丁基-6-甲基-2(1H)-吡啶酮(3.5g,18mmol)于THF(10mL)和DMF(10mL)中的冰浴冷却的溶液中添加Boc2O(4.68g,21.8mmol)和三乙胺(5.4g,54mmol)。内容物然后在30℃搅拌30分钟。反应通过添加冰水淬灭，期间出现沉淀。反应混合物过滤，干燥，得到粗产物混合物。粗产物通过HPLC分离，得到[(6-环丁基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(2.1g,20％)和[(4-环丁基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(1g,9.5％)。[(6-环丁基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯的数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.28(br s,1H),6.49(br s,1H),5.86(br s,1H),3.85(br s,2H),1.97-2.14(m,7H),1.87-1.94(m,1H),1.72-1.77(m,1H),1.28(s,9H)。
13f)3-(氨基甲基)-6-环丁基-4-甲基-2(1H)-吡啶酮盐酸盐
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将[(6-环丁基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(2.1g,7.2mmol)于4N HCl(于15mL1,4-二![]()
烷中)中的溶液加热至60 ℃，持续1小时。混合物冷却至室温。混合物过滤，干燥，得到3-(氨基甲基)-6-环丁基-4-甲基-2(1H)-吡啶酮，为HCl盐(1.95g,90％)。LCMS MH+＝193.1。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.70(br s,1H),8.01(s,3H),6.04(s,1H),3.74(d,2H),3.32-3.39(m,1H),2.22(s,3H),2.17-2.20(m,2H),2.06-2.11(m,2H),1.85-1.95(m,1H),1.71-1.79(m,1H)。
中间体14
3-(氨基甲基)-6-甲基-4-[(甲基氧基)甲基]-2(1H)-吡啶酮
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14a)1-(甲基氧基)-2,4-戊二酮
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在-5℃，向钠(5.83g,243.3mmol)于无水甲苯(62.5mL)中的溶液中添加(甲基氧基)乙酸乙基酯(24g,203.4mmol)。搅拌3小时后，缓慢添加丙酮(14g,231.4mmol)，此时混合物变为棕色和粘稠。接着添加72mL叔丁基甲基醚，反应混合物在室温搅拌12小时，此后钠盐沉淀出来。收集后，使用额外的叔丁基甲基醚洗涤，将该钠盐溶于46mL的20％H2SO4中。内容物使用叔丁基甲基醚萃取，有机层浓缩，得到1-(甲基氧基)-2,4-戊二酮(9.76g,36.9％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d3)δ5.76(s,1H),3.96(s,2H),3.38(s,3H),2.07(s,3H)。
14b)6-甲基-4-[(甲基氧基)甲基]-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈
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将1-(甲基氧基)-2,4-戊二酮(9.51g,73.12mmol)和氰基乙酰胺(6.17g,73.12mmol)溶于EtOH(76mL)，加热直到为均相(约75℃)。添加哌啶(6.25g,73.12mmol)，反应混合物在回流下加热20分钟，接着冷却至室温。内容物过滤，得到固体，将其悬浮于140mL水中，剧烈搅拌20分钟。异相混合物过滤，得到6-甲基-4-[(甲基氧基)甲基]-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(7.8g,65.6％)。 LCMS MH+＝179.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.47(br s,1H),6.26(s,1H),4.40(s,2H),3.29(s,3H),2.25(s,3H)。
14c)3-(氨基甲基)-6-甲基-4-[(甲基氧基)甲基]-2(1H)-吡啶酮
将6-甲基-4-[(甲基氧基)甲基]-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(1.000g,5.61mmol)悬浮于乙酸(150ml)中，在50psi和60℃，以1mL/min的速度将溶液通过H-cube设备(带有Raney-Ni短柱)。18小时后，在减压下除去乙酸，剩余的残余物溶于MeOH。将该甲醇溶液通过0.2μm特氟龙注射过滤器。该甲醇滤液通过反相HPLC纯化(Gemini50x1005μm柱。Run1：3分钟，90-10％。Run2,5min0-10％。Run3,10分钟，0-20％。产物级分在Genevac HT-4设备上浓缩至干，得到3-(氨基甲基)-6-甲基-4-[(甲基氧基)甲基]-2(1H)-吡啶酮，为浅灰色蜡状固体(900mg,70.2％产率)。LCMS MH+＝183.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(br.s.,1H),6.10(s,1H),4.39(s,2H),3.66(br.s.,2H),3.32(s,3H),2.19(s,3H)。
中间体15
3-(氨基甲基)-6-甲基-4-(苯基甲基)-2(1H)-吡啶酮和3-(氨基甲基)-4-甲基-6-(苯基甲基)-2(1H)-吡啶酮
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15a)1-苯基-2,4-戊二酮
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在N2于-5℃，在剧烈搅拌下向NaNH2(19.02g,480mmol)于无水乙醚(400mL)中的溶液中滴加苯基乙酸乙基酯(19.2g,150mmol)，然后滴加丙酮(21.23g,370mmol)。添加后，反应混合物在室温搅拌过夜。然后混合物使用1N HCl酸化至pH4.0-5.0。分离有机层，在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱纯化，得到1-苯基-2,4-戊二酮(18.32g,44％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d3)δ15.49(br s,1H),7.33-7.45(m,5H),5.53(s,1H),3.66(s,2H),2.10(s,3H)。
15b)6-甲基-2-氧代-4-(苯基甲基)-1,2-二氢-3-吡啶甲腈和4-甲基-2-氧代-6-(苯基甲基)-1,2-二氢-3-吡啶甲腈
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将1-苯基-2,4-戊二酮(18.32g,104mmol)和氰基乙酰胺(8.74g,104mmol)溶于EtOH(104mL)，加热直到为均相(约75℃)。添加哌啶(8.86g,104mmol)，反应混合物在回流下加热15-30分钟。接着冷却至室温，期间出现沉淀。该异相内容物过滤，得到固体，将其悬浮于200mL水中，剧烈搅拌20分钟。将该异相混合物过滤，得到6-甲基-2-氧代-4-(苯基甲基)-1,2-二氢-3-吡啶甲腈和4-甲基-2-氧代-6-(苯基甲基)-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(12.06g,52％)。LCMS MH+＝225.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)(化合物混合物)δ7.21-7.31(m,10H),6.06(s,2H),3.89(s,2H),3.79(s,2H),2.24(s,3H),2.15(s,3H)。
15c)3-(氨基甲基)-6-甲基-4-(苯基甲基)-2(1H)-吡啶酮和3-(氨基甲基)-4-甲基-6-(苯基甲基)-2(1H)-吡啶酮
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将乙酸钠(6.14g,74.8mmol),Pd/C(0.65g,1mmol)和氧化铂(II)(45mg,1mmol)置于干燥Parr瓶(带有氮气入口)中。添加少量的乙酸以润湿催化剂。将6-甲基-2-氧代-4-(苯基甲基)-1,2-二氢-3-吡啶甲腈和4-甲基-2-氧代-6-(苯基甲基)-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(6g,26.7mmol)于乙酸(300mL)中的溶液加至该容器中。将内容物密封，在Parr振动器上在45psi氢化12小时。反应混合物过滤，使用乙酸洗涤。滤液在减压下除去。残余物使用甲醇洗涤，过滤，得到3-(氨基甲基)-6-甲基-4-(苯基甲基)-2(1H)-吡啶酮和3-(氨基甲基)-4-甲基-6-(苯基甲基)-2(1H)-吡啶酮的粗混合物。反应再重复进行一次，总共回收14.5g。在0℃向上述粗产物混合物(4.0g,17.5mmol)于THF(10mL)和DMF(10mL)中的溶 液中添加二-叔丁氧基羰基酸酐(5.0g,23.4mmoL)和三乙胺(5.2g,52.5mmol)。反应混合物在搅拌下温热至室温，然后再搅拌4小时。内容物使用冰水稀释，然后过滤。收集的固体干燥，产物通过HPLC分离，得到1.2g的{[4-甲基-2-氧代-6-(苯基甲基)-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.55-1.60(br s,1H),7.20-7.29(m,5H),5.85(s,1H),3.92(s,2H),3.90(s,2H),2.10(s,3H),1.32(s,9H)和1.0g的{[6-甲基-2-氧代-4-(苯基甲基)-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.50-11.55(br s,1H),7.18-7.25(m,5H),5.75(s,1H),4.02(s,2H),3.85(s,2H),2.05(s,3H),1.32(s,9H)。
15d)3-(氨基甲基)-4-甲基-6-(苯基甲基)-2(1H)-吡啶酮盐酸盐
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将{[4-甲基-2-氧代-6-(苯基甲基)-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(1.2g,3.66mmol)于4N HCl(于15mL1,4-二![]()
烷中)中的溶液加热至60℃，持续1小时。混合物冷却至室温。混合物过滤，干燥，得到3-(氨基甲基)-4-甲基-6-(苯基甲基)-2(1H)-吡啶酮，为HCl盐(0.725g,87％)。LCMS MH+＝229.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.9-12.0(br s,1H),7.99(br s,3H),7.20(s,5H),5.97(s,1H),3.72-3.75(m,4H),2.17(s,3H)。
15e)3-(氨基甲基)-6-甲基-4-(苯基甲基)-2(1H)-吡啶酮盐酸盐
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将{[6-甲基-2-氧代-4-(苯基甲基)-1,2-二氢-3-吡啶基]甲基}氨基甲酸1,1-二甲基乙基酯(1.0g,3.0mmol)于4N HCl(于15mL1,4-二![]()
烷中)中的溶液加热至60℃，持续1小时。混合物冷却至室温。混合物过滤，干燥，得到3-(氨基甲基)-6-甲基-4-(苯基甲基)-2(1H)-吡啶酮，为HCl盐(0.600g,86％)。LCMS MH+＝229.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.9-12.0(br s,1H),8.03(br s,3H), 7.16-7.30(m,5H),5.84(s,1H),3.91(s,2H),3.81(s,2H),2.10(s,3H)。
中间体16
3-(氨基甲基)-6-甲基-4-(4-吗啉基甲基)-2(1H)-吡啶酮
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a)5-(4-吗啉基)-3-戊炔-2-酮
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在N2下，通过注射器向4-(2-丙炔-1-基)吗啉(2.2g,17.58mmol)于THF(5mL)中的冷(-40℃,CH3CN/CO2)溶液中滴加2M异丙基氯化镁的THF溶液(10mL,20.00mmol)。反应搅拌1小时，然后一次性添加N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(2.2mL,20.69mmol)于THF(5mL)中的溶液。反应搅拌2小时(使其缓慢温热至室温)，使用NH4Cl水溶液淬灭，使用EtOAc萃取，使用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，在真空下蒸发至干。残余物通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g,0至80％EtOAc的己烷溶液)。合并纯的级分，蒸发至干，得到产物5-(4-吗啉基)-3-戊炔-2-酮(2.09g,12.50mmol,71.1％产率)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.62-3.57(m,4H),3.56(s,2H),2.49-2.43(m,4H),2.34(s,3H)。MS(ES)+m/e168.0[M+H]+。
b)6-甲基-4-(4-吗啉基甲基)-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈
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向21重量％乙醇钠的EtOH溶液(4.2g,12.96mmol)于EtOH(30mL)中的搅拌溶液中添加2-氰基乙酰胺(1.1g,13.08mmol)。反应搅拌15分钟。然后将5-(4-吗啉基)-3-戊炔-2-酮(2.0g,11.96mmol)于EtOH中的溶液一次性加至该反应中。(反应快速变为暗红色)。反应在室温搅拌过夜，使用6N HCl(2.17mL,13.02mmol)中和，在真空下蒸发至干。在真空下干燥过夜。残余的黑色固体使用(9:1)CH2Cl2:MeOH(50mL)的溶液研磨，滤除不溶的物质，使用(9:1)CH2Cl2:MeOH洗涤，滤液在真空下蒸发至干。褐色固体使用(1:1)EtOAc的己 烷溶液研磨，过滤，使用(1:1)EtOAc的己烷溶液洗涤，在真空下干燥，得到棕色固体(除去很多快速出来的非极性杂质)。粗产物通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g,0至15％CH2Cl2/20％(5％NH4OH的MeOH溶液)的CH2Cl2溶液)。合并纯的级分,蒸发至干,使用己烷研磨，在真空下干燥，得到产物6-甲基-4-(4-吗啉基甲基)-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(0.90g,3.86mmol,32.3％产率)，为亮褐色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.44(br.s.,1H),6.34(s,1H),3.63-3.56(m,4H),3.48(s,2H),2.45-2.36(m,4H),2.27(s,3H)。MS(ES)+m/e234.1[M+H]+。
c)3-(氨基甲基)-6-甲基-4-(4-吗啉基甲基)-2(1H)-吡啶酮
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将6-甲基-4-(4-吗啉基甲基)-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶甲腈(0.60g,2.57mmol)于HOAc(20mL)中的澄清溶液在H-Cube设备(50psi,60℃,1mL/min.,兰尼镍短柱)上处理18小时。LCMS表明反应完全。反应蒸发至干，溶于少量的MeOH中，使用4N HCl的二![]()
烷溶液(5mL,20.00mmol)处理。混合物在真空下蒸发至干(在蒸发期间开始沉淀出来),使用Et2O研磨,过滤，在真空下干燥，得到产物3-(氨基甲基)-6-甲基-4-(4-吗啉基甲基)-2(1H)-吡啶酮(0.76g,2.450mmol,95％产率)，为亮灰色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.39(s,1H),4.28(s,2H),3.99(s,2H),3.87(br.s.,4H),3.27(br.s.,4H),2.22(s,3H)。MS(ES)+m/e238.0[M+H]+(弱),221.3[M+H]+-NH3(强)。
中间体17
(5-(氨基甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁基酯
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a)4-乙氧基-2-氧代戊-3-烯酸乙基酯
向2,4-二氧代戊酸乙基酯(36.5g,231mmol)和三乙基原甲酸酯(41mL, 246mmol)于乙醇(60mL)中的搅拌溶液添加氯化铵(3.7g,69mmol)。悬浮液在室温搅拌过夜。LCMS表明几乎反应完全。(在LCMS有一定程度的水解？)反应在真空下浓缩。残余的油状物溶于Et2O(300mL),过滤以除去不溶物，使用Et2O淋洗，并在真空下浓缩。产物通过在真空下短程蒸馏得到(bp70-77℃，在0.09mmHg)，得到产物4-乙氧基-2-氧代戊-3-烯酸乙基酯(36.5g,47.3mmol,79％产率)，为亮黄色油状物。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ6.24(s,1H),4.32(q,J＝7.2Hz,2H),4.02(q,J＝6.9Hz,2H),2.41(s,3H),1.41(t,J＝7.1Hz,3H),1.39(t,J＝7.2Hz,3H).MS(ES)+m/e186.8[M+H]+,208.8M+Na+。
b)5-氰基-4-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-甲酸乙基酯
向4-乙氧基-2-氧代戊-3-烯酸乙基酯(22.5g,121mmol)和2-氰基乙酰胺(9.0g,107mmol)于丙酮(250mL)中的搅拌溶液中添加碳酸钾(15.8g,114mmol)。反应回流(85℃油浴)10小时(于深红色溶液中，反应形成粘稠沉淀)。将该浆状物加至冷的1N HCl(230mL)的冰溶液中。搅拌30分钟后，悬浮液过滤,使用水洗涤，在真空下干燥，得到产物5-氰基-4-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-甲酸乙基酯(14.51g,70.4mmol,65.7％产率)，为亮粉色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.60(br.s.,1H),7.05(br.s.,1H),4.34(q,J＝7.1Hz,2H),2.45(s,3H),1.32(t,J＝7.1Hz,3H)。MS(ES)+m/e206.8[M+H]+。
c)5-氰基-6-甲氧基-4-甲基吡啶甲酸乙基酯
向5-氰基-4-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-2-甲酸乙基酯(2.0g,9.70mmol)于CH2Cl2(25mL)中的搅拌悬浮液中添加三甲基氧鎓四氟硼酸盐(2.0g,13.52mmol)。反应使用CH2Cl2淋洗，在室温搅拌24小时。(反应最终澄清。)向该反应中添加1N NaOH(75mL)。搅拌10分钟后，将该混合物倾倒至分液漏斗中。除去CH2Cl2相，干燥(Na2SO4),过滤，并在真空下浓缩。通过硅胶色谱纯化(Analogix SF25-40g,50至100％CH2Cl2的己烷溶液)，得到产物5-氰基-6-甲氧基-4-甲基吡啶甲酸乙基酯(1.13g,5.13mmol,52.9％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.75(s,1H),4.37(q,J＝7.1Hz,2H),4.03(s,3H),2.55(s,3H),1.33(t,J＝7.2Hz,3H)。MS(ES)+m/e221.2[M+H]+。
d)5-氰基-6-甲氧基-4-甲基吡啶甲酸
向5-氰基-6-甲氧基-4-甲基吡啶甲酸乙基酯(1.0g,4.54mmol)于MeOH(30mL)和THF(10mL)中的搅拌溶液中添加6N NaOH(2mL,12.00mmol)。将悬浮液加热至60℃，搅拌2小时。(反应立即澄清。)LCMS表明反应完全。反应冷却至室温，并浓缩至近干。该浆状物使用6N HCl(2mL)中和，使用水稀释,过滤,使用水洗涤，在真空下干燥，得到产物5-氰基-6-甲氧基-4-甲基吡啶甲酸(0.76g,3.95mmol,87％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.65(br.s.,1H),7.73(s,1H),4.03(s,3H),2.54(s,3H)。MS(ES)+m/e192.9[M+H]+。
e)(5-氰基-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁基酯
向5-氰基-6-甲氧基-4-甲基吡啶甲酸(0.75g,3.90mmol)于叔丁醇(25mL)中的搅拌溶液中添加三乙胺(0.7mL,5.02mmol)。反应变为澄清后，经5分钟滴加DPPA(1mL,4.64mmol)。反应缓慢加热至100℃，搅拌4小时。反应冷却至室温，在真空下蒸发至干。通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g,0至20％EtOAc的己烷溶液)，自己烷研磨和过滤后，得到产物(5-氰基-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(0.61g,2.317mmol,59.4％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.20(s,1H),7.44(s,1H),3.91(s,3H),2.40(s,3H),1.48(s,9H)。MS(ES)+m/e264.0[M+H]+。
f)(5-(氨基甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁基酯
将(5-氰基-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(0.60g,2.279mmol)于HOAc(5mL)和乙醇(20mL)中的澄清溶液在H-Cube设备(50psi,40℃,1mL/min,兰尼镍短柱)上处理18小时。LCMS表明反应完全(86％纯)。反应在真空下蒸发至干。通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g,0至12％(5％NH4OH/MeOH)的CH2Cl2溶液)。合并纯的级分，在真空下蒸发至干，得到产物(5-(氨基甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(0.42g,1.571mmol,68.9％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.33(s,1H),7.16(s,1H),3.80(s,3H),3.57(s,2H),2.28(s,3H),1.46(s,9H)。MS(ES)+m/e268.1[M+H]+。
中间体18
[5-(氨基甲基)-4-甲基-6-(甲基氧基)-2-吡啶基]甲醇
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a)6-(羟基甲基)-2-甲氧基-4-甲基烟腈
在0℃的冰浴中，向5-氰基-6-甲氧基-4-甲基吡啶甲酸乙基酯(5.0g,22.70mmol)和氯化钙(10g,90mmol)于四氢呋喃(50mL)和乙醇(50.0mL)中的搅拌悬浮液中添加硼氢化钠(2.5g,66.1mmol)。反应缓慢温热至室温，搅拌18小时。形成大量的沉淀，LCMS表明反应完全。添加等体积的EtOAc，反应搅拌1小时。悬浮液通过硅藻土垫过滤，使用EtOAc洗涤。滤液转移至分液漏斗，使用NH4Cl水溶液、盐水洗涤,干燥(Na2SO4),过滤，并在真空下浓缩。通过纯化硅胶色谱(Analogix,SF40-120g,0至30％EtOAc的CH2Cl2溶液)，得到产物6-(羟基甲基)-2-甲氧基-4-甲基烟腈(3.75g,21.05mmol,93％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.16(s,1H),5.61(t,J＝5.8Hz,1H),4.51(d,J＝5.8Hz,2H),3.94(s,3H),2.47(s,3H)。MS(ES)+m/e179.1[M+H]+。
b)(5-(氨基甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)甲醇
将6-(羟基甲基)-2-甲氧基-4-甲基烟腈(0.50g,2.81mmol)于HOAc(5mL)和乙醇(20mL)中的澄清溶液在H-Cube设备(50psi,40℃,1mL/min,兰尼镍短柱)上处理18小时过夜。LCMS表明反应完全(粗产物含有57％产物和43％二聚副产物)。反应在真空下蒸发至干。通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-40g,0至12％(5％NH4OH的MeOH溶液)的CH2Cl2溶液)(逐步梯度至8％，以洗脱二聚副产物，然后至12％，以洗脱产物)。合并纯的级分，在真空下蒸发至干，得到产物(5-(氨基甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)甲醇(0.30g,1.646mmol,58.7％产率)，为白色固体。MS(ES)+m/e183.1[M+H]+,166.1[M+H]+-NH3。
中间体19
((5-(氨基甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯
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a)6-((1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基)-2-甲氧基-4-甲基烟腈
在0℃冰浴中，向6-(羟基甲基)-2-甲氧基-4-甲基烟腈(1.50g,8.42mmol),邻苯二甲酰亚胺(1.3g,8.84mmol)和三苯基膦(2.3g,8.77mmol)于四氢呋喃(THF)(50mL)中的搅拌溶液中滴加DIAD(1.8mL,9.26mmol)。数分钟内形成白色悬浮液。加入额外的THF(～50mL)使其能够搅拌。反应温热至室温，搅拌3小时。LCMS表明反应完全。反应在真空下蒸发至干。剩余的固体使用少量的EtOAc研磨，过滤,使用少量的EtOAc洗涤，然后在真空下干燥，得到产物6-((1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基)-2-甲氧基-4-甲基烟腈(2.12g,6.90mmol,82％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.00-7.92(m,2H),7.92-7.87(m,2H),7.15(s,1H),4.86(s,2H),3.74(s,3H),2.43(s,3H)。MS(ES)+m/e308.2[M+H]+。
b)((5-氰基-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯
向6-((1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基)-2-甲氧基-4-甲基烟腈(2.1g,6.83mmol)于乙醇(100mL)中的搅拌悬浮液中添加一水合肼(1.4ml,28.9mmol)。反应在室温搅拌18小时。LCMS表明反应已经完成。粘稠白色悬浮液过滤，加压干燥，使用EtOH洗涤，滤液在真空下蒸发至干。剩余的固体溶于二氯甲烷(50ml)，过滤以除去额外的不溶物质，使用CH2Cl2洗涤。在搅拌下向该澄清滤液添加Boc2O(1.809ml,7.79mmol)。在室温搅拌1小时后，LCMS表明反应完全。反应在真空下浓缩，通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60,0至10％EtOAc的己烷溶液)。合并纯的级分，蒸发至干，得到产物((5-氰基-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯(1.42g,5.12mmol,74.9％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.48(t,J＝6.1Hz,1H),6.91(s,1H),4.16(d,J＝6.1Hz,2H),3.96(s,3H),2.45(s,3H),1.41(s,9H).MS(ES)+m/e278.2[M+H]+。
c)((5-(氨基甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯
将((5-氰基-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯(0.65g, 2.344mmol)于HOAc(5mL)和乙醇(20mL)中的澄清溶液在H-Cube设备(50psi,40℃,1mL/min.,兰尼镍短柱)上处理18小时过夜。LCMS表明反应完全。反应在真空下蒸发至干。通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g,0至10％(5％NH4OH/MeOH)的CH2Cl2溶液)。合并纯的级分，在真空下蒸发至干，得到产物((5-(氨基甲基)-6-甲氧基-4-甲基吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯(0.58g,2.061mmol,88％产率)，为透明粘稠油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.31(t,J＝6.1Hz,1H),6.63(s,1H),4.06(d,J＝6.3Hz,2H),3.84(s,3H),3.61(s,2H),2.29(s,3H),1.53(br.s.,2H),1.41(s,9H)。MS(ES)+m/e282.2[M+H]+。
中间体20
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标题化合物按照3-(氨基甲基)-4-乙基-6-甲基-2(1H)-吡啶酮(中间体10c)描述的相同方式制备。LCMS(ES+)m/z＝195.22(M+H)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ0.809-0.774(t,3H,J＝6.8Hz),1.113-1.097(d,3H,J＝6.4Hz),1.504-1.468(t,2H,J＝7.2Hz),2.184(s,3H),2.839-2.822(d,1H,J＝6.8Hz),3.822(s,2H),6.059(s,1H),8.315(bs,2H)。
方案8
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中间体21
6-溴-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
a)5-溴-2-甲基-3-硝基-苯甲酸
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向2-甲基-3-硝基苯甲酸(300g,1647mmol)于浓H2SO4(1.5L)中的搅拌溶液中添加1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮(258g,906mmol)，混合物在室温搅拌5小时。反应混合物缓慢添加至冰水(4L),固体沉淀析出。滤出固体，使用水(1.2L),石油醚(1L)洗涤，干燥，得到标题化合物，为白色固体(411g,96％)，其不用进一步纯化直接使用。1H NMR(DMSO,400MHz)：δ2.446(s,3H),8.136(s,1H),8.294(s,1H)。LCMS(ES-)m/z＝257.93(M-H)-。
b)6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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在室温向5-溴-2-甲基-3-硝基-苯甲酸(140g,538.4mmol)于DMF(550ml)中的搅拌溶液中添加DMF-DMA(599mL,4846mmol)。反应混合物在115℃搅拌18小时。然后反应混合物在真空下浓缩。残余的内容物(176g,536.5mmol)溶于乙酸(696mL)，在50℃加至铁(329.2g,5902mmol)于乙酸(1.4L)中的悬浮液中。添加结束后，反应混合物在80-90℃搅拌4小时。然后反应混合物通过硅藻土垫过滤。滤液倾倒至冰水(1L)中，使用乙醚(3x700ml)萃取。合并的有机层使用饱和NaHCO3,盐水洗涤,用无水Na2SO4干燥,过滤,在真空下蒸发。粗产物通过硅胶色谱纯化(洗脱液：10％乙酸乙酯的石油醚溶液)，得到标题化合物，为固体(80g,59％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ：3.980(s,3H),7.168(d,J＝3.2Hz,1H),7.334(d,J＝3.2Hz,1H),7.734(s,1H),8.017(s,1H),8.384(brs,1H)；LCMS(ES-)m/z＝251.9(M-H)。
c)6-溴-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(100g,393.7mmol)于DMF(800mL)中的搅拌溶液中添加2-碘丙烷(160g,944.8mmol)，接着在0℃添加分批添加氢化钠(20.4g,511.8mmol)。反应混合物在室温搅拌18小时。反应混合物使用冷水稀释，使用乙酸乙酯(200mL x4)萃取，最后有机层使用冷水,盐水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物，其通过柱色谱利用硅胶(60-120目)纯化，使用5％EtOAC:石油醚作为洗脱液洗脱，得到6-溴-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(65g,55.7％)，为固体。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.53(d,6H,J＝6.4Hz),3.973(s,3H),4.598-4.664(m,1H),7.111(d,1H,J＝2.4Hz),7.338(d,1H,J＝2.8Hz),7.711(s,1H),7.987(s,1H)。
d)6-溴-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸
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向6-溴-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(0.52g,1.756mmol)于甲醇(15mL)和四氢呋喃(3mL)中的溶液中通过注射器滴加3M NaOH(1.756mL,5.27mmol)(经2分钟)。溶液在室温保持2小时，此时LCMS表明仅12％转化为产物。然后添加1.5mL3M NaOH，溶液在室温保持过夜。LCMS表明完全转化为产物。在真空下除去挥发物，将残余物溶于水，使用1M HCl缓慢酸化(固体沉淀)。使用EtOAc(2x)萃取,合并有机物，用MgSO4干燥，过滤，在真空下浓缩，得到6-溴-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸(0.50g,1.737mmol,99％产率)，为白色固体.
或者，吲哚氮的烷基化反应能够按照如下进行：向6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(10g,39.4mmol)和(氰基甲基)(三甲基)氯化磷(14.91g,98mmol)于THF(400mL)中的冷(0℃)悬浮液中添加2-丙醇(6.06mL,79mmol),接着添加氢化钠(3.46g,87mmol)。混合物在室温搅拌2小时，此时LCMS表明没有产物 形成。在50℃加热18小时。LC/MS显示反应完全。过滤反应混合物并在真空下浓缩。残余物使用二氯甲烷稀释，通过硅胶垫(使用二氯甲烷洗涤)。通过快速色谱纯化(Analogix SF65-200g；5-10％EtOAc/己烷)，得到6-溴-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(9.7g,31.4mmol,80％产率)。MS(ES)[M+H]+296.2,298.4。
实施例22–23按照上述中间体16或其路线变化描述的方法进行制备，起始于必要的2-甲基-3-硝基苯甲酸：
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方案9
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中间体24
6-溴-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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24a)6-溴-3-甲酰基-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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在0℃向DMF(1.04L)的搅拌溶液中添加POCl3(40.3g,263mmol)，搅拌20分钟。然后在0℃将于DMF(260mL)中的6-溴-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(65g,219.5mmol)加至反应混合物中。反应混合物在室温搅拌3小时。使用冷水稀释反应混合物，使用2N NaOH溶液调节至PH～8，使用乙酸乙酯(4x1L)萃取。有机层使用冷水、盐水溶液洗涤,用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩，得到所需的产物6-溴-3-甲酰基-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(65g,91.3％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)：δ1.588(d,6H,J＝6.8Hz),3.994(s,3H),4.634-4.701(m,1H),7.760(d,1H,J＝1.6Hz),7.958(d,1H,J＝1.6Hz),8.122(s,1H),10.446(s,1H)。LC-MS(ES+)m/z＝324.02(M+H)。
24b)6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向6-溴-3-甲酰基-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(60g,185mmol)于DMF(220mL)中的搅拌溶液中添加对甲苯磺酸一水合物(4.57g,24mmol)、对甲苯磺酰肼(44.8g,240mmol)，接着添加环丁砜(220mL)。混合物在100℃搅拌1小时。内容物冷却至室温，然后经25分钟的时间分批添加氰基硼氢化钠(46.5g,740mmol)。然后混合物在100℃搅拌2小时。然后反应混合物在室温搅拌16小时。反应混合物使用水稀释，使用20％EtOAc:石油醚萃取， 最后的有机层使用冷水、盐水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，并浓缩。粗化合物通过柱色谱利用硅胶纯化(100-200目)，20％DCM:石油醚作为洗脱液，得到所需的产物6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(24g,89.2％纯度),(16g,62.2％纯度)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ1.486(d,J＝6.4Hz,6H),2.361(s,3H),3.947(s,3H),4.535-4.602(m,1H),7.080(s,1H),7.619(s,1H),7.684(s,1H)。LCMS(ES+)m/z＝310.07(M+H)。
24c)6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸
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向6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(24g,77.4mmol)于乙醇(400mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化钠(4.02g,100.6mmol)、水(11mL)，混合物在回流条件下搅拌6小时。蒸馏除去乙醇，残余物使用水稀释,使用乙酸乙酯(40mL)萃取，水层使用1N HCl调节至PH～3，使用乙酸乙酯(3x250mL)萃取，最后有机层使用盐水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，并浓缩。粗产物使用石油醚洗涤,过滤固体，干燥，得到所需的产物6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸(20.6g,89.8％)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ1.407(d,J＝6.4Hz,6H),2.296(s,3H),4.754-4.819(m,1H),7.455(s,1H),7.472(s,1H),7.938(s,1H),12.950(brs,1H)。LCMS(ES+)m/z＝296.15(M+H)。
中间体25
6-溴-1-(仲丁基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸
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a)6-溴-1-仲丁基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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在0℃向氢化钠(5.66g,141.7mmol)于DMF(100mL)中的搅拌悬浮液中添加6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(4)(30g,118.1mmol)于DMF(50mL)中的溶液，搅拌20分钟。然后在0℃添加2-溴丁烷(29.1g,212.5mmol)，反应混合物在室温搅拌16小时。反应混合物使用冷水稀释，使用乙酸乙酯(4x150mL)萃取。合并的有机层使用冷水(150mL)、盐水(100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物，其通过柱色谱在硅胶(60-120目)上纯化，利用5％EtOAc:石油醚作为洗脱液，得到标题化合物6-溴-1-仲丁基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯,5(14g,40.1％)，为浅黄色固体。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ0.843-0.870(m,3H),1.512(d,J＝6.4Hz,3H),1.844-1.926(m,2H),3.976(s,3H),4.333-4.385(m,1H),7.132(d,J＝3.2Hz,1H),7.302(d,J＝3.6Hz,1H),7.707(s,1H),7.984(d,J＝1.6Hz,1H)。
b)6-溴-1-仲丁基-3-甲酰基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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在0℃将POCl3(8.3g,54.3mmol)添加至于圆底烧瓶中的无水DMF(230mL)中，搅拌30分钟。在0℃将6-溴-1-仲丁基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯,5(14g,45.3mmol)于DMF(60mL)中的溶液加至反应混合物中，在室温搅拌2.5小时。反应混合物使用冷水稀释,使用2N NaOH溶液调节至pH～8，使用乙酸乙酯(4x200mL)萃取。合并的有机层使用冷水(2x100mL)、盐水(100mL)洗涤,用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩，得到所需的产物6-溴-1-仲丁基-3-甲酰基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯,6(15.2g,99％)，为浅黄色固体。其不用纯化直接在下一步骤中使用。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(0.831-0.859(m,3H),1.515-1.574(d,J＝6.8Hz,3H),1.729-1.972(m,2H)3.997(s,3H),4.394-4.445(m,1H),7.756(d,J＝1.2Hz,1H),7.958(d,J＝2Hz,1H),8.079(s,1H),10.452(s,1H)。
c)6-溴-1-仲丁基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向6-溴-1-仲丁基-3-甲酰基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(15g,44.6mmol)于DMF(115mL)中的搅拌溶液中添加对甲苯磺酸一水合物(1.1g,5.8mmol),对甲苯磺酰肼(10.8g,58mmol)，接着在室温添加环丁砜(115mL)，反应混合物在100℃搅拌1小时。反应混合物冷却至室温,经5分钟使用氰基硼氢化钠(11.9g,178.5mmol)分批处理，在100℃搅拌2小时。反应混合物冷却至室温，在相同温度搅拌16小时。反应混合物使用水稀释，使用30％EtOAc：石油醚萃取。有机层使用冷水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物，其通过柱色谱在硅胶上纯化(100-200目)，利用5％EtOAc:石油醚作为洗脱液，得到标题化合物6-溴-1-仲丁基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(7.88g,54.6％)，为浅黄色胶状物。1H NMR(CDCl3,400MHz)：δ0.804-0.841(t,J＝7.4Hz,3H),1.454-1.470(d,J＝6.4Hz,3H),1.865-1.884(m,2H),2.363(s,3H),3.950(s,3H),4.265-4.316(m,1H),7.038(s,1H),7.609(d,J＝1.2Hz,1H),7.671(d,J＝2Hz,1H)。MS(ES+)：324.19[M+H]离子存在。
d)6-溴-1-(仲丁基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸
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将6-溴-1-(仲丁基)-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(3.24g,9.99mmol)溶于甲醇(30mL)和四氢呋喃(THF)(7mL)中。内容物搅拌5分钟，然后通过滴液漏斗经3分钟添加3N NaOH水溶液(19.99mL,60.0mmol)。内容物快速变为黄色悬浮液，在室温搅拌65小时。挥发物在真空下除去，残余物溶于水(60mL)。内容物使用乙醚(1x50mL)洗涤。水层在冰浴中冷却，使用1M HCl调节至pH3-4，从其中沉淀出来油状残余物。内容物使用EtOAc(2x60mL)萃取。合并的有机层用硫酸镁干燥,通过硅藻土过滤,在真空下浓缩。将得到的残余物使 用TBME处理,在真空下浓缩,然后在高真空下干燥，得到黄色泡沫，为3.08g(93％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm0.70(t,J＝7.33Hz,3H),1.39(d,J＝6.82Hz,3H),1.71-1.86(m,2H),2.30(s,3H),4.48-4.62(m,1H),7.40-7.49(m,2H),7.96(d,J＝1.77Hz,1H),12.99(s,1H)；LCMS＝310.0/312.0(MH+)。
实施例26–27按照上述中间体16或其路线变型描述的方法进行制备，起始于必需的6-取代的吲哚：
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中间体28
6-溴-1-环丙基-1H-吲哚-4-甲酸
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a)6-溴-1-环丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向烘箱干燥的100ml RBF(配有搅拌棒、密封塞和氮气入口)中添加6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(0.508g,2.0mmol)和1,2-二氯乙烷(7mL)。溶液搅拌15分钟，然后添加环丙基硼酸(0.344g,4.00mmol)和碳酸钠(0.424g,4.00mmol)。将乙酸铜(II)(0.363g,2.000mmol)和2,2'-联吡啶(0.312g,2.000mmol)稀释于1,2-二氯乙烷(12mL),加热该混合物,将该热悬浮液加至反应。反应在70℃加热，通过LCMS监测。6小时后停止加热，在室温下放置3天。向反应中加入饱和NH4Cl和水。使用DCM(2x)萃取。合并的有机物使用盐水洗涤,用硫酸镁干燥,过滤，在真空下浓缩。残余物通过柱色谱纯化(24g Isco硅胶柱；梯度B：3-25％，A:己烷，B：乙酸乙酯)，得到6-溴-1-环丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(0.43g,1.433mmol,71.6％产率)，为黄色残余物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)![]()
ppm0.96-1.01(m,2H)1.06-1.12(m,2H)3.52(dt,J＝7.20,3.47Hz,1H)3.90(s,3H)6.85-6.91(m,1H)7.57(d,J＝3.03Hz,1H)7.82(d,J＝1.77Hz,1H)8.04(d,J＝1.01Hz,1H)。MS(ES)[M+H]+294.1。
b)6-溴-1-环丙基-1H-吲哚-4-甲酸
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向6-溴-1-环丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(0.43g,1.462mmol)于MeOH(12mL)和THF(3mL)中的溶液中添加3M NaOH(1.949mL,5.85mmol)。反应在室温搅拌18小时，此时挥发物在真空下除去。残余物使用水稀释，使用1N HCl缓慢酸化至pH4-5，然后使用EtOAc(2x)萃取。合并的有机相使用盐水洗涤,用硫酸镁干燥,过滤,并浓缩，得到6-溴-1-环丙基-1H-吲哚-4-甲酸(0.376g,1.315mmol,90％产率)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm0.92-1.01(m,2H)1.05-1.12(m,2H)3.51(tt,J＝7.07,3.66Hz,1H)6.89(d,J＝2.53Hz,1H)7.52(d,J＝3.03Hz,1H)7.80(d,J＝1.77Hz,1H)7.99(d,J＝1.01 Hz,1H)13.05(br.s.,1H)。MS(ES)[M+H]+280.1。
中间体29
6-溴-1-环丁基-1H-吲哚-4-甲酸
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a)6-溴-1-环丁基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向烘箱干燥的100ml RBF(配有搅拌棒、密封塞和氮气入口)中添加6-溴-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(1.0g,3.94mmol)和(氰基甲基)(三甲基)氯化磷(1.491g,9.84mmol)。加入THF(40mL)，搅拌悬浮液5分钟。反应使用冰浴冷却10分钟，然后添加环丁醇(0.616mL,7.87mmol),接着分批添加氢化钠(0.346g,8.66mmol)。撤去冰浴，反应在室温搅拌45分钟，然后在50℃加热18小时。LCMS表明大部分为SM。在75℃加热24小时。反应冷却至室温，然后倾倒至水(200ml)中，使用EtOAc(2x)萃取。合并的有机物用硫酸镁干燥,过滤,浓缩。残余物通过柱色谱纯化(40g Isco硅胶柱；梯度B：2-25％；A:己烷,B：EtOAc)，得到6-溴-1-环丁基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(0.3g,25％产率,HPLC表明～45％纯)。MS(ES)[M+H]+308.2。
b)6-溴-1-环丁基-1H-吲哚-4-甲酸
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向6-溴-1-环丁基-1H-吲哚-4-甲酸乙基酯(0.3g,0.973mmol)(自上面得到的粗残余物)于MeOH(8mL)和THF(2mL)中的溶液中添加3M NaOH(1.298mL,3.89mmol)。反应在室温搅拌16小时，此时挥发物在真空下除去。残余物 使用水稀释，使用1N HCl缓慢酸化至pH3-4。固体过滤，在高真空下干燥16小时，得到6-溴-1-环丁基-1H-吲哚-4-甲酸(0.21g,0.535mmol,55.0％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.79-1.89(m,2H)2.34-2.46(m,2H)3.84(s,1H)5.08(t,J＝8.21Hz,1H)6.99(d,J＝3.03Hz,1H)7.75-7.79(m,1H)7.81(d,J＝3.03Hz,1H)8.01-8.05(m,1H)13.03(br.s.,1H)。MS(ES)[M+H]+294.1。
中间体30
1-异丙基-3-甲基-6-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-4-甲酸
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向30-mL微波试管中添加6-溴-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(490mg,1.580mmol)、甲烷亚磺酸(212mg,2.054mmol)、DMSO(7mL)、N,N'-二甲基-1,2-乙二胺(18.10mg,0.205mmol),混合物通过鼓泡N2脱气5分钟。添加三氟甲磺酸铜(I)苯复合物(63.6mg,0.126mmol)，将试管密封。混合物在165℃搅拌下加热过夜。混合物冷却，过滤，利用纯化反相HPLC(Gemini5u C18(2)100A,AXIA；30x100mm5μm；30mL/min,30％ACN/H2O,0.1％甲酸至60％ACN/H2O,0.1％甲酸)，得到标题化合物(118mg,25％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)ppm1.47(d,J＝8.00Hz,6H),2.30-2.41(m,3H),4.94(quin,J＝6.63Hz,1H),7.80(s,1H),7.88(d,J＝1.77Hz,1H),8.24(d,J＝1.52Hz,1H),13.17(br.s.,1H).MS：(M+H)+＝296.3。
中间体31
1-异丙基-6-(甲基磺酰基)-1H-吲哚-4-甲酸
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向10-mL微波试管中添加6-溴-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(160mg,0.540mmol)、甲烷亚磺酸钠(80mg,0.702mmol)、DMSO(2mL)和N,N'-二甲基-1,2-乙二胺(6.19mg,0.070mmol),混合物通过鼓泡N2脱气5分 钟。添加三氟甲磺酸铜(I)苯复合物(25.6mg,0.043mmol)，混合物在搅拌下加热至165℃，持续2小时。混合物过滤，DMSO溶液利用反相HPLC纯化，得到14mg产物，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)ppm1.51(d,J＝4.00Hz,6H),4.90-5.11(m,1H),7.13(d,J＝3.03Hz,1H),7.98-8.08(m,1H),8.15-8.23(m,1H),8.32-8.46(m,1H),13.19(br.s.,1H).MS：(M+H)+＝281.9。
中间体32
6-(环丙基磺酰基)-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸
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1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.03(dd,J＝7.71,2.40Hz,2H),1.17(dd,J＝7.20,3.41Hz,2H),1.50(d,6H),2.83-2.97(m,1H),5.02(dt,J＝13.14,6.57Hz,1H),7.17(d,J＝2.27Hz,1H),7.99(d,J＝3.03Hz,1H),8.13(s,1H),8.28(s,1H)。MS：(M+H)+＝308.3。
中间体33
6-羟基-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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将新鲜制备的甲醇钠(500mg于5mL甲醇中)加至6-溴-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(500mg,1.68mmol)和CuI(480mg,2.53mmol)于NMP(8mL)中的搅拌悬浮液中，然后在120℃加热2小时。反应混合物冷却至室温,使用水(5mL)稀释，使用1N HCl酸化。反应混合物通过硅藻土过滤，使用EtOAc(5mL)洗涤。自滤液分离EtOAc层，用无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩，得到粗1-异丙基-6-甲氧基-1H-吲哚-4-甲酸(700mg),其不用进一步纯化在下一步骤中直接使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ1.44(d,J＝6.4Hz,6H),3.84(s,3H),4.80-4.76(m,1H),6.87(d,1H),7.33(t,J＝3.2Hz,2H),7.49(d,J＝3.2Hz,1H),12.65(bs,1H)。LCMS(ES+)：m/z＝234.11[M+H]。
向1-异丙基-6-甲氧基-1H-吲哚-4-甲酸(700mg,3.00mmol)于MeOH中的搅拌悬浮液中添加H2SO4(440mg,4.50mmol)，然后在回流下加热3小时。在减压下完全蒸馏除去甲醇，残余物使用饱和NaHCO3水溶液碱化，使用乙酸乙酯(2x5mL)萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤，并浓缩。残余物通过柱色谱纯化(SiO2，100-200)，通过5％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱，得到1-异丙基-6-甲氧基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(240mg,32.4％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ1.45(d,J＝6.8Hz,6H),3.84(s,3H),3.88(s,3H),4.81-4.78(m,1H),6.86(d,J＝3.2Hz,1H),7.34(d,J＝2.4Hz,1H),7.39(d,J＝2Hz,1H),7.54(d,J＝3.6Hz,1H)。LCMS(ES+)：m/z＝248.16[M+H]。
中间体34
1-异丙基-6-甲氧基-1H-吲哚-4-甲酸
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在室温向1-异丙基-6-甲氧基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(320mg,1.29mmol)于THF(2mL)中的搅拌溶液中添加于水(2mL)中的LiOH.H2O(160mg,3.88mmol)，在回流下加热2小时。在减压下除去THF，得到的水层使用1N HCl酸化(pH～6)，使用乙酸乙酯(2x5mL)萃取。合并的有机层用无水Na2SO4干燥，并浓缩，得到1-异丙基-6-甲氧基-1H-吲哚-4-甲酸(210mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ1.42(d,6H),3.88(s,3H),4.85(m,1H),6.81(d,J＝2.8Hz,1H),7.26(s,2H),7.45(s,1H),12.68(s,1H)。
中间体35
6-羟基-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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在室温向1-异丙基-6-甲氧基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(1.9g,7.69mmol)于甲苯(20mL)中的搅拌溶液中添加无水氯化铝(5.11g,38.4mmol)，然后加热回 流2小时。反应混合物使用水稀释，使用乙酸乙酯(2x20mL)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱纯化，通过3-15％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱，得到标题化合物6-羟基-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(1.5g,83％)，为黄色胶状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ1.43(d,J＝6.8Hz,6H),3.86(s,3H),4.65-4.61(m,1H),6.81(d,J＝2.8Hz,1H),7.11(s,1H),7.29(s,1H),7.44(d,J＝2.8Hz,1H),9.32(bs,1H)。LCMS(ES+)：m/z＝234.09[M+H]。
中间体36
3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酸
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向6-溴-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(1.3g,4.19mmol)和碘化铜(I)(1.0g,5.25mmol)中添加NMP(8mL)。在搅拌下向该混合物中滴加甲醇钠25重量％的甲醇溶液(4.0mL,17.49mmol)。反应加热至120℃，搅拌1.5小时。反应冷却，当温度到达80℃时，添加水(200uL)。反应继续冷却至室温，搅拌过夜。反应使用1N HCl(17mL)酸化，使用水和EtOAc稀释。混合物通过硅藻土过滤，使用EtOAc洗涤。滤液倾倒至分液漏斗中，分离有机相，使用盐水洗涤,干燥(MgSO4),过滤,并在真空下浓缩。通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g,20to50％EtOAc的己烷溶液)，浓缩、使用己烷研磨、过滤并在真空下干燥后，得到3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(甲基氧基)-1H-吲哚-4-甲酸(825mg,3.34mmol,80％产率)，为亮黄色固体。MS(ES)+m/e248.3[M+H]+。
中间体37
6-碘-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸
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向6-溴-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(1.1g,3.71mmol)于二![]()
烷 (50mL)中的搅拌溶液中添加碘化钠(1.2g,8.01mmol)、N,N'-二甲基乙二胺(200μL,1.858mmol)和碘化铜(I)(150mg,0.788mmol)。反应使用N2脱气，然后回流(110℃油浴)过夜。LCMS表明反应90％完成，剩余6％的SM。添加另外0.75g碘化钠和75mg碘化铜(I)，反应再回流24小时。(LCMS表明少于4％溴化物SM。)反应在真空下浓缩，溶于EtOAc,使用水、盐水洗涤,干燥(MgSO4),过滤，并在真空下浓缩。通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF25-60g，0至10％EtOAc的己烷溶液)，得到酯产物，为亮黄色油状物(1.27g,100％)。MS(ES)+m/e344.0[M+H]+。
将上述酯溶于40mL(3:1)MeOH:THF中，使用1N NaOH(15mL)处理。反应回流过夜,冷却至室温，并在真空下浓缩。使用1N HCl(15mL)中和，得到白色悬浮液，过滤,使用冷水洗涤，在真空下干燥，得到产物6-碘-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸(1.12g,3.40mmol,92％产率)，为亮黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.94(br.s.,1H),8.20(s,1H),7.94(d,J＝1.5Hz,1H),7.66(d,J＝3.3Hz,1H),6.97(d,1H),4.86(quin,J＝6.6Hz,1H),1.44(d,J＝6.6Hz,6H)。MS(ES)+m/e330.0[M+H]+。
中间体38
6-氰基-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸
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a)6-氰基-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向10ml微波瓶中添加6-溴-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(500mg,1.612mmol),二氰基锌(150mg,1.277mmol)和DMF(5mL)。混合物脱气，在室温在N2下搅拌15分钟。向该混合物中添加palladium tetrakis(118mg,0.102mmol)，反应在95℃搅拌1小时。反应冷却，倾倒至饱和Na2CO3水溶液(50mL)和EtOAc(50mL)，搅拌20分钟。混合物使用乙醚(100ml)和EtOAc (100ml)(1:1)萃取，接着过滤，蒸发，得到残余物。残余物通过硅胶色谱纯化(Analogix IF280,0-8％EtOAc/己烷,SF25-40g,30分钟)，得到6-氰基-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(130mg,0.497mmol,38.9％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm8.38(d,J＝1.52Hz,1H)7.82(s,1H)7.71(d,J＝1.52Hz,1H)4.85-4.97(m,1H)3.90(s,3H)2.29(s,3H)1.45(d,J＝6.57Hz,6H)。MS(ES)[M+H]+257.4。
b)6-氰基-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸
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向50ml圆底烧瓶中添加6-氰基-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(230mg,0.897mmol),接着添加甲醇(1mL)和THF(1mL)。向该溶液中添加3M NaOH(0.449mL,2.69mmol)。反应在室温搅拌20小时。反应蒸发，使用酸性水处理至pH5。棕色固体迅速析出，通过过滤收集。固体为杂质。液体的pH调节至3，蒸发液体剩下残余物。使用水研磨残余物,接着过滤，得到6-氰基-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸(155mg,0.576mmol,64.2％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-δ6)δppm13.16(br.s.,1H)8.33(s,1H)7.78(s,1H)7.66(s,1H)4.81-4.98(m,1H)2.33(s,4H)1.45(d,J＝6.57Hz,6H)。MS(ES)[M+H]+243.3。
中间体39
1-异丙基-3-甲基-6-(1H-四唑-5-基)-1H-吲哚-4-甲酸
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a)1-异丙基-3-甲基-6-(1H-四唑-5-基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向于小瓶中的6-氰基-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(0.50g,1.951mmol)于叠氮基三甲基硅烷(1.0mL,7.53mmol)中的搅拌悬浮液添加四丁基氟化铵三水合物(300mg,0.951mmol)。反应加热至85℃，搅拌18小时(连接至小回流冷凝器)。(反应变为半-固体物质)。反应溶于EtOAc(75mL),使用1N HCl(75mL)洗涤(搅拌直到溶解)。除去有机相，干燥(Na2SO4),过滤，并在真空下浓缩。通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF40-80g,0至3％MeOH/CH2Cl2，含有0.1％HOAc)，得到产物1-异丙基-3-甲基-6-(1H-四唑-5-基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(0.28g,0.935mmol,48.0％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝1.3Hz,1H),8.15(d,J＝1.5Hz,1H),7.69(s,1H),4.86(quin,J＝6.6Hz,1H),3.94(s,3H),2.33(s,3H),1.50(d,J＝6.6Hz,6H)。MS(ES)+m/e300.3[M+H]+。
b)1-异丙基-3-甲基-6-(1H-四唑-5-基)-1H-吲哚-4-甲酸
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向1-异丙基-3-甲基-6-(1H-四唑-5-基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(0.27g,0.902mmol)于MeOH(15mL)和四氢呋喃(5mL)中的搅拌溶液中添加1N NaOH(5mL,5.00mmol)。反应加热至60℃，搅拌48小时。LCMS表明反应完全。反应在真空下浓缩至几乎近干，使用1N HCl(5mL)酸化，研磨，过滤，使用少量水洗涤，在真空下干燥，得到产物1-异丙基-3-甲基-6-(1H-四唑-5-基)-1H-吲哚-4-甲酸(0.26g,0.911mmol,101％产率)，为亮黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.04(br.s.,1H),8.36(d,J＝1.5Hz,1H),8.13(d,J＝1.3Hz,1H),7.65(s,1H),4.85(quin,J＝6.6Hz,1H),2.36(s,3H),1.50(d,J＝6.6Hz,6H)。MS(ES)+m/e286.1[M+H]+。
中间体40
6-溴-3-氯-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸
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向100ml圆底烧瓶中添加6-溴-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(1.100g,3.71mmol)于THF中的溶液和磁力搅拌棒。向其中添加1-氯-2,5-吡咯烷二酮(0.546g,4.09mmol)，体系在室温搅拌过夜。在减压下除去溶剂，残余物溶于EtOAc(60ml)，使用饱和NaHCO3(20ml)和盐水(8ml)洗涤。有机层用Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残余物通过柱色谱纯化，得到6-溴-3-氯-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(为粘稠金色油状物)，其在下一步骤中使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.15(d,J＝1.52Hz,1H),7.93(s,1H),7.50(d,J＝1.77Hz,1H),4.90(quin,J＝6.63Hz,1H),3.89(s,3H),1.43(d,J＝6.57Hz,6H)。MS(ES)[M+H]+332.2。
向6-溴-3-氯-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(1.2g,3.63mmol)于THF(2.368ml)和MeOH(14.21ml)中的溶液中添加3N NaOH(1.573ml,4.72mmol)。得到的混合物在55℃加热4小时。反应撤去加热，溶剂在真空下除去。剩余的残余物溶于水(12ml)，滴加1N HCl调节为酸性。产物沉淀，浆液变得太粘稠不能搅动，使用水(10ml)稀释。沉淀停止后，不再加入更多的酸。固体通过真空过滤得到，使用水洗涤，在真空下干燥过夜，得到6-溴-3-氯-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-4-甲酸(650mg,2.033mmol,56.0％产率，2步骤)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.22(s,1H),8.09(d,J＝1.77Hz,1H),7.89(s,1H),7.45(d,J＝1.77Hz,1H),4.88(quin,J＝6.63Hz,1H),1.43(d,J＝6.57Hz,6H)。MS(ES)[M+H]+316.0。
中间体41
2-溴-6-氯-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向6-氯-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(2.5g,9.41mmol)于DMF(25mL)中的搅拌溶液中添加NBS(1.7g,9.55mmol)。反应搅拌18小时，然后 在真空下蒸发至干。反应通过硅胶色谱纯化(Analogix,SF40-80g,0至5％EtOAc的己烷溶液)，然后(Analogix,SF25-60g,25％CH2Cl2的己烷溶液)，得到产物2-溴-6-氯-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(1.79g,5.19mmol,55.2％产率)，为澄清油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.98(d,J＝1.8Hz,1H),7.41(d,J＝1.8Hz,1H),5.05(dt,J＝6.7,13.4Hz,1H),3.89(s,3H),2.22(s,3H),1.57(d,J＝7.1Hz,6H)。MS(ES)+m/e344.0[M+H]+。
中间体42
1-异丙基-3-甲基-6-(哒嗪-4-基)-1H-吲哚-4-甲酸
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a)1-异丙基-3-甲基-6-(哒嗪-4-基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向50ml圆底烧瓶中添加6-溴-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(150mg,0.484mmol),PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(39.5mg,0.048mmol)和1,4-二![]()
烷(4836μl)，接着添加4-(三丁基锡)哒嗪(179mg,0.484mmol)和磁力搅拌棒。烧瓶装配有回流冷凝器和废气鼓泡器，加热至105℃。反应溶液在30分钟变为暗棕色。LCMS(105C-3h)表明反应完成。反应在真空下除去溶剂，剩下的残余物溶于DMSO(1.5ml)。DMSO溶液通过反相HPLC纯化，利用Phenomenex Gemini100x30mm柱,中性乙腈和0.1％甲酸的水溶液,40-70％,10分钟梯度。所需的级分在Genovac EZ-2蒸发仪上干燥，合并固体残余物。得到产物1-异丙基-3-甲基-6-(哒嗪-4-基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯，为白色固体。1H NMR(400MHz,甲醇-δ4)δ9.68(δ,J＝1.26Hz,1H),9.19(d,J＝5.56Hz,1H),8.20(d,J＝1.52Hz,1H),8.13(dd,J＝2.53,5.56Hz,1H),7.98(d,J＝1.52Hz,1H),7.48(s,1H),4.96(dt,J＝6.60,13.33Hz,1H),4.00(s,3H),2.39(s,3H),1.56(d,6H)。MS(ES)[M+H]+310.2。
b)1-异丙基-3-甲基-6-(哒嗪-4-基)-1H-吲哚-4-甲酸
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向100ml圆底烧瓶中添加1-异丙基-3-甲基-6-(哒嗪-4-基)-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(74.0mg,0.239mmol)、甲醇(1595μl)、四氢呋喃(THF)(3189μl)和磁力搅拌棒。向其中添加氢氧化锂，H2O(30.1mg,0.718mmol)，混合物在55℃搅拌。反应进程通过LCMS监测。LCMS(周末)表明50％转化。向该反应混合物中添加氢氧化锂,H2O(20.08mg,0.478mmol)。反应继续搅拌，加热至55℃。完全转化后，除去反应溶剂，剩下的残余物溶于水(1.5ml)。水溶液滴加1N HCl调节为酸性，直到沉淀完全。固体通过真空过滤得到，使用水(5ml)洗涤。固体在真空空气下(under vacuum open to the air)干燥过夜。得到产物1-异丙基-3-甲基-6-(哒嗪-4-基)-1H-吲哚-4-甲酸(68mg,0.228mmol,95％产率),为棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-δ6)δ9.71-9.83(m,1H),9.23(dd,J＝1.26,5.56Hz,1H),8.32(s,1H),8.11(dd,J＝2.65,5.43Hz,1H),7.86(s,1H),7.58(s,1H),4.90-5.09(m,1H),2.34(s,3H),1.47(d,J＝6.82Hz,6H)。MS(ES)[M+H]+296.2。
中间体43
6-溴-3-氟-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸
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a)6-溴-3-氟-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯
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向20ml小瓶中添加6-溴-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(50.0mg,0.169mmol)、(selectfluor)1-(氯甲基)-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷二(四氟硼酸)盐(78mg,0.219mmol)，接着添加磁力搅拌棒和硝基乙烷(2ml)。将小瓶密封，反应在室温搅拌。反应进程通过LCMS监测。反应完全后，在真空下除去反应溶剂。残余物溶于DCM(1.4ml)。DCM溶液加至analogix Si35SF10-8g柱上。 化合物使用EtOAc/己烷洗脱,5-15％,20分钟。所需产物和副产物MW629一起洗脱出来。混合物溶于DMSO(1ml)，通过反相HPLC纯化，利用Gemini5μ30x100mm柱,中性乙腈/0.1％甲酸的水溶液,50-80％,7分钟梯度。所需产物在6.8分钟洗脱，副产物MW629在9.5分钟洗脱。所需的级分浓缩至残余物。LCMS和NMR支持所需结构且分析型HPLC表明100％纯度。得到产物6-溴-3-氟-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(11mg,0.035mmol,20.53％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.95(t,J＝1.77Hz,1H),7.78(d,J＝1.77Hz,1H),7.47(d,J＝2.53Hz,1H),4.76-4.84(m,J＝1.64,6.65,6.65,13.36Hz,1H),3.96(s,3H),1.50(d,6H)。
MS(ES)[M+H]+315.1。
b)6-溴-3-氟-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸
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向100ml圆底烧瓶中添加6-溴-3-氟-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸甲基酯(33.0mg,0.105mmol)、甲醇(700μl)、四氢呋喃(THF)(1401μl)和磁力搅拌棒。向其中添加氢氧化锂,H2O(13.22mg,0.315mmol)，混合物在室温搅拌。反应进程通过LCMS监测。LCMS(18小时)表明60％转化。反应在铝加热套中在搅拌下加热至50℃。完全转化后，在真空下除去溶剂，剩下的残余物溶于水(1ml)，滴加1N HCl(9滴)直到沉淀停止。该精细的浅黄色固体通过真空过滤得到。LCMS和HPLC表明100％纯度，NMR支持所需结构。得到产物6-溴-3-氟-1-异丙基-1H-吲哚-4-甲酸(24mg,0.080mmol,76％产率)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.07(br.s.,1H),8.12(t,J＝1.89Hz,1H),7.77(d,J＝2.27Hz,1H),7.66(d,J＝1.77Hz,1H),4.88(qd,J＝5.31,6.65Hz,1H),1.40(d,6H)。MS(ES)[M+H]+300.1。
中间体44
N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺
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试制备：将于20mL微波瓶中的6-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(1.0g,2.32mmol,1当量)、联硼酸频哪醇酯(bis(pinacolato)diboron)(0.71g,2.79mmol,1.2当量)、KOAc(0.47g,4.76mmol,2当量)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(104mg,00.13mmol,0.1当量)于10mL二![]()
烷混合物使用氮气鼓泡10分钟，接着封盖，在油浴中于80℃加热3小时。LCMS表明完全转化。仅检测到4％脱溴副产物。
制备：将6-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-3-甲基-1H-吲哚-4-甲酰胺(22.0g,51.1mmol,1当量)、联硼酸频哪醇酯(15.58g,61.3mmol,1.2当量)、KOAc(10.29g,105mmol,2当量)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(2.30g,2.81mmol,0.1当量)于190mL二![]()
烷中的混合物脱气并回充氮气(重复4次)。混合物在油浴中于90℃加热2小时。该暗棕色混合物与上述小试的粗混合物合并，通过硅藻土过滤(使用EtOAc淋洗)。滤液在真空下浓缩。残余物溶于CHCl3，分为9等份。将一份吸附于硅藻土装填的干装载的短柱上。在SF40-80g硅胶柱上进行纯化，利用25％EtOAc的己烷溶液至100％EtOAc梯度洗脱(梯度：0-5分钟，25％EtOAc,5-20分钟，线性梯度25-100％EtOAc,25-65分钟，100％EtOAc)。所需的产物在100％EtOAc(具有长拖尾)洗脱。DASI部分在该过程中凝聚，需要除去以继续色谱过程，造成物质损失。因此放弃使用FCC，改为重力柱。
剩下的8份重新合并，溶于CHCl3,接着添加至硅胶柱(500g粗级硅胶，封装于25％EtOAc的己烷溶液)，然后使用1L25％EtOAc的己烷溶液、1L50％EtOAc、1L75％EtOAc的己烷溶液、2L100％EtOAc、1L EtOAc、25mL递增的MeOH洗脱。所需的产物在100％EtOAc、25mL-100mL的MeOH的EtOAc级分中洗脱。
该EtOAc级分与FCC纯化的物质合并。混合物在真空下浓缩。残余物溶于MTBE(5mL)和己烷(100mL)形成悬浮液，将其过滤。滤饼使用己烷(30mL)洗涤，在真空下室温干燥4小时，得到N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶 基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚-4-甲酰胺(14.01g)，为亮米色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.31(s,12H),1.41(d,J＝6.8Hz,6H),2.11(s,3H),2.16(s,3H),2.22(s,3H),4.33(d,J＝8Hz,2H),4.79(quin,J＝6.6Hz,1H),5.87(s,1H),7.23(s,1H),7.40(d,J＝1.0Hz,1H),7.75(s,1H),8.04(t,J＝5.1Hz,1H),11.46(s,1H).
测试方案
评价本文中所含的化合物抑制PRC2复合物复合物内的EZH2的甲基转移酶活性的能力。人PRC2复合物通过在Sf9细胞中共表达5个成员蛋白(FLAG-EZH2、EED、SUZ12、RbAp48、AEBP2)中的每一个后共纯化而制备。酶活性在闪烁亲近测定法(SPA)中测定，其中氚化甲基从3H-SAM转移到单核小体(从HeLa细胞中纯化)的组蛋白H3的一个赖氨酸残基上。单核小体在SPA珠上捕获，由此产生的信号在Viewlux读板器读取。
部分A.化合物制备
1.从固体制备化合物在100％DMSO中的10mM储备液。
2.对于各个测试化合物，于384孔板于100％DMSO中建立的11-点系列稀释液(1:3稀释,最大浓度10mM)，剩下6和18列用于DMSO对照。
3.将100nL化合物从稀释板分配至反应板(Grenier Bio-One,384-孔,Cat#784075)。
部分B.试剂制备
制备下列溶液：
1.50mM Tris-HCl,pH8：每1L基础缓冲液(base buffer),含有1M Tris-HCl,pH8(50mL)和蒸馏水(950mL)。
2.1x测试缓冲液：每10mL1x测试缓冲液,含有50mM Tris-HCl,pH8(9958uL),1M MgCl2(20uL),2M DTT(20uL),和10％吐温20(2uL)，以得到最终浓度为50mM Tris-HCl,pH8,2mM MgCl2,4mM DTT,0.002％吐温20。
3.2x酶溶液：每10mL2x酶溶液,含有1x测试缓冲液和PRC2复合物，以得到最终酶浓度为10nM。
4.SPA珠悬浮液：每1mL SPA珠悬浮液,含有PS-PEI涂覆的LEADSeeker珠(40mg)和ddH2O(1mL)，以得到最终浓度为40mg/mL。
5.2x底物溶液：每10mL2x底物溶液,含有1x测试缓冲液(9728.55uL),800ug/mL单核小体(125uL),1mM冷SAM(4uL),和7.02uM3H-SAM(142.45uL；0.55mCi/mL)，以得到最终浓度为5ug/mL核小体,0.2uM冷SAM,和0.05uM3H-SAM。
6.2.67x淬灭/珠混合物：每10mL2.67x淬灭/珠混合物,含有ddH2O(9358uL),10mM冷SAM(267uL),40mg/mL珠悬浮液(375uL)，以得到最终浓度为100uM冷SAM和0.5mg/mL SPA珠。
部分C.在384-孔Grenier Bio-one板中的测试反应
化合物添加
1.将100nL/孔的100x化合物分配至测试孔(如上所述)。
2.将100nL/孔的100％DMSO分配至6&18列分别用于高和低对照。
测试
1.将5uL/孔的1x测试缓冲液分配至18列(低对照反应)。
2.将5uL/孔的2x酶溶液分配至1-17,19-24列。
3.在500rpm快速旋转测试板～1分钟。
4.把测试板叠起来，覆盖顶层板。
5.在室温将化合物/DMSO与酶孵育30分钟。
6.将5uL/孔的2x底物溶液分配至1-24列。
7.将测试板在500rpm快速旋转～1分钟。
8.把测试板叠起来，覆盖顶层板。
9.将测试板在室温孵育1小时。
淬灭/珠添加
1.将5uL/孔的3x淬灭/珠混合物分配至1-24列。
2.使用粘性TopSeal密封各个测试板的顶部。
3.将测试板在500rpm快速旋转～1分钟。
4.平衡各板>20分钟。
读板
1.在Viewlux Plate Reader上利用613nm发射滤器，300s读数时间，读取测试板。
试剂添加可以手动完成或利用自动液体操作器进行。
*在该测试中的最终DMSO浓度为1％。
*阳性对照为6列；阴性对照为18列。
*化合物的最终起始浓度为100μM。
部分D.数据分析
相对于DMSO对照计算各个化合物浓度的抑制百分数，得到的值使用ABASE数据拟合软件包利用标准IC50拟合参数进行拟合。
本发明的例示的化合物通常根据上述或类似测试进行测试，发现它们为EZH2的抑制剂。IC50值范围为约1nM至约10μM；更加具有活性的化合物的IC50值范围为约1nM至约500nM；最具有活性的化合物为小于50nM。如前述测试或类似测试中所测试的，各个实施例的化合物，得到在上表中的化合物pIC50数据或下列段落的IC50数据。重复测试可能造成一定程度的差异。
实施例78,1800；实施例174,18；实施例211,14；实施例212,9；实施例234,1000；实施例244,29；实施例264,13；实施例265,13；实施例266,25；实施例267,20；实施例268,40；实施例269,4；实施例270,4；实施例271,8；实施例272,13；实施例273,10；实施例274,32；实施例275,3；实施例339,13。
T细胞增殖和细胞因子生成研究中测试的具体化合物的制备(化合物A,B和C):
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯基)-1-异丙基-1H-吲唑-4-甲酰胺
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将6-溴-N-(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-异丙基-1H-吲唑-4-甲酰胺(80mg,0.19mmol)、N,N-二甲基-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙胺(84mg,0.29mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(7.8mg,0.009mmol)于二![]()
烷/水(3ml:1ml)中在氮气下搅拌10分钟。添加碳酸氢钠(48.3mg,0.58mmol)，该不溶混合物在微波于100℃辐射20分钟。反应混合物蒸发,溶于DCM/MeOH(1:1),预吸附在硅胶上，利用硅胶色谱纯化(洗脱液：DCM/MeOH/NH4OH；梯度0至80:20:2，于DCM中)。分离的产物溶于热DMSO/MeOH，利用反相HPLC纯化(25-80％梯度，MeCN的水溶液，含0.1％TFA)。自合并的产物级分蒸发大部分的溶剂，添加饱和NaHCO3溶液,过滤析出的固体,空气干燥15分钟，在真空烘箱中干燥过夜。收集产物，为白色固体(56mg,56％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)TMppm11.54(br.s.,1H)8.64(t,J＝4.80Hz,1H)8.35(s,1H)8.05(s,1H)7.81-7.84(m,2H)。LC-MS(ES)m/z＝528.1[M+H]+。
化合物A可以按照类似于上述实施例进行制备：
化合物A：1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲唑-4-甲酰胺
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标题化合物按照与上述实施例描述的类似方式进行制备：自6-溴-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吲唑-4-甲酰胺(90mg,0.202mmol)和1-甲基[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2-吡啶基]哌嗪(92mg,0.303mmol)。收集最终产物，为亮棕色固体(54mg,49％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)TMppm1H NMR(400MHz,DMSO-d6)![]()
ppm11.54(br.s.,1H)8.65(d,J＝2.27Hz,1H)8.61(t,J＝4.80Hz,1H)8.36(s, 1H)8.04-8.08(m,2H)7.83(s,1H)6.96(d,J＝9.09Hz,1H)5.92(s,1H)5.14(quin,J＝6.57Hz,1H)4.42(d,J＝4.80Hz,2H)3.53-3.59(m,4H)2.53-2.61(m,2H)2.40-2.45(m,4H)2.23(s,3H)2.14(s,3H)1.51-1.58(m,2H)1.50(s,3H)1.49(s,3H)0.88(t,J＝7.33Hz,3H)。LC-MS(ES)m/z＝542.2[M+H]+。
化合物B：N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-3-甲基-1-(1-甲基乙基)-6-[6-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-吡啶基]-1H-吲哚-4-甲酰胺
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化合物B可以按照上述实验部分描述的通用步骤进行制备。
6-环丙基-1-(1-甲基乙基)-N-[(4-甲基-2-氧代-6-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲酰胺
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将6-环丙基-1-(1-甲基乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲酸(167mg,0.680mmol)、3-(氨基甲基)-4-甲基-6-丙基-2(1H)-吡啶酮三氟乙酸盐(200mg,0.680mmol)、HOAT(139mg,1.019mmol)、EDC(195mg,1.019mmol)和N-甲基吗啉(0.299mL,2.72mmol)溶于DMF(6mL)，在40℃搅拌24小时。反应混合物倾倒至水(20mL)，使用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，并浓缩为橙色油状物。残余物溶于DMSO，通过反相HPLC纯化(流动相：40-60％ACN的H2O溶液,0.1％TFA)。分离的产物在真空烘箱中干燥，得到标题化合物的TFA盐，为白色固体,0.113g(32％)。LCMS E-S(M+H)＝408.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm0.80-0.98(m,3H),1.06(d,J＝7.07Hz, 4H),1.46(d,J＝6.82Hz,6H),1.52-1.67(m,2H),2.17-2.31(m,4H),2.37(t,J＝7.58Hz,2H),4.36(d,J＝4.80Hz,2H),5.02-5.27(m,1H),5.91(s,1H),7.43(s,1H),8.21(s,1H),8.62-8.87(m,1H),11.54(br.s.,1H)。
化合物C可以按照与上述实施例类似的步骤进行制备：
6-环丙基-1-(1-甲基乙基)-N-[(6-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲酰胺
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实施例
增殖研究：
EZH1/EZH2抑制剂,化合物A和化合物B,浓度-依赖性地损害T细胞受体-诱导的CD4+T细胞的增殖，pIC50分别为5.30±0.06和4.93±0.05(n＝4；图1)。不同的是，化合物C对T细胞受体-诱导的CD4+T细胞的增殖没有作用(n＝4)。
细胞因子产生研究：
EZH1/EZH2抑制剂，化合物A和化合物B，浓度-依赖性地损害T细胞受体-诱导的IL-10、IL-13、IL-17、IFN & TNF在CD4+T细胞中的产生，pIC50值的范围分别为5.65±0.06-5.23±0.03和5.21±0.09-4.94±0.03(n＝4；图2&表1)。不同的是，化合物C对T细胞受体-诱导的IL-17或IFN在CD4+T细胞中的产生没有作用(n＝4)。高浓度的化合物C(即>15μM)降低了IL-10、IL-13 & TNF的产生(n＝4)。
EZH1/EZH2抑制剂，化合物A和化合物B，浓度-依赖性地损害T细胞受体-诱导的IL-2在CD4+T细胞中的产生，pIC50值分别为6.24±0.24和5.76±0.25(n＝4；图3)。化合物C也损害T细胞受体-诱导的IL-2在CD4+T细胞 中的产生，尽管pIC50没有能够计算出来(n＝4；图3)。
方法：
CD4T细胞自人血的分离：
将15ml ficoll加至8x50mL Accuspin试管(每个供体)中，在2000RPM离心1分钟。全血样品(200mL+1％肝素)收集自人供体。大约25ml血加至各个ficoll预填充的50ml falcon试管(带有过滤器)，在1500RPM离心20分钟，松开制动以避免扰乱细胞分离。将45ml(含有PBS)加至各个试管的PBMC级分中，在1500RPM离心10分钟(具有制动)。弃去上清液，将细胞沉淀物再悬浮于2ml PBS中。将各个供体的细胞悬浮液重新填充于一个falcon试管，用PBS补足至45ml，在1500RPM离心10分钟。利用获自Miltenyi Biotech的CD4T细胞分离试剂盒，按照制造商的方案，通过负消耗进行分离CD4+T细胞。
增殖研究：
在4℃使用10μg/mL抗CD3+2μg/mL抗CD28涂覆96-孔平底板过夜。第二天，各板使用PBS洗涤。对于增殖研究，细胞根据制造商的方案使用CFSE(Invitrogen)转染。然后在EZH1/EZH2抑制剂(化合物A &化合物B),无活性对照化合物(化合物C)或载体(0.1％DMSO)的存在下，以0.2x106细胞/孔将细胞加至抗CD3+抗CD28预包被的96-孔板，在37℃/5％CO2孵育6天。然后将细胞转移至96-孔圆底板，洗涤，然后通过流式细胞仪分析。
细胞因子产生研究：
在4℃使用10μg/mL抗CD3+2μg/mL抗CD28涂覆96-孔平底板过夜。第二天，各板使用PBS洗涤。对于细胞因子产生研究，在EZH1/EZH2抑制剂或载体的存在下，以0.4x106细胞/孔将细胞添加至抗CD3+抗CD28预涂覆的96-孔板，在37℃/5％CO2下孵育。按照制造商的方案，在18小时(IL-2)或72小时(IL-10、IL-13、IL-17、IFN、TNF)取出上清液，通过获自Mesoscale discovery的multiplex ELISA测定细胞因子产生。
药物和材料
抗CD3(HU CD3NALE MAB UCHT1；Cat#555329)和抗CD28(HU CD28NALE MAB CD28.2；Cat#：555725),获自于BD Pharmingen，溶于Dulbecco’s磷酸盐缓冲盐水(含有Ca2+/Mg2+；Gibco)。Ficoll-paque(Cat#17-1440-03)获自于GE Healthcare。CD4+T细胞分离试剂盒(Cat#130-091-155)获自于Miltenyi Biotec。细胞在RPMI1640(含10％FCS+1％pen/strep+1％L-谷氨酰胺)中培养。CellTrace CFSE细胞增殖试剂盒(Cat#C34554)获自于Invitrogen。
化合物A,化合物B和化合物C均在室内合成并溶于100％DMSO。
数据分析
增殖研究：
使用Flowjo软件利用荧光强度计算分裂指数。数据以平均值±平均值的标准误差表示；n值为所用的人供体的数量。pIC50值利用GraphPad Prism软件和非线性sigmoid剂量曲线拟合生成。
细胞因子产生研究：
数据利用Excel分析，以平均值±平均值的标准误差表示；n值为所用的人供体的数量。pIC50值利用GraphPad Prism软件和非线性sigmoid剂量曲线拟合生成。