一种用于预防和治疗阿尔茨海默病的傣药复方提取物及其应用.pdf

本发明公开了一种由大接骨草、榼藤子、文殊兰、大叶千斤拔、蜂蜜花加工制成的傣药复方提取物，该傣药复方提取物可用于预防和治疗阿尔茨海默病，本发明还公开了上述傣药复方提取物在制备预防和治疗阿尔茨海默病保健品及药物中的应用。本发明的傣药复方提取物疗效好、毒副作用小、价格便宜，适于临床广泛推广。

1.  一种用于预防和治疗阿尔茨海默病的傣药复方提取物，其特征在于，所述傣药复方提取物是由大接骨草、白鹤灵芝、榼藤子、文殊兰、大叶千斤拔、蜂蜜花加工制成；大接骨草、白鹤灵芝、榼藤子、文殊兰、大叶千斤拔、蜂蜜花的重量配比为：以重量份数计，大接骨草4-6份、白鹤灵芝4-6份、榼藤子2-4份、文殊兰2-4份、大叶千斤拔1-3份、蜂蜜花1-3份。

2.  根据权利要求1所述的傣药复方提取物，其特征在于，大接骨草、白鹤灵芝、榼藤子、文殊兰、大叶千斤拔、蜂蜜花的重量配比为：以重量份数计，大接骨草5份、白鹤灵芝5份、榼藤子3份、文殊兰3份、大叶千斤拔2份、蜂蜜花2份。

3.  一种权利要求1或2所述的傣药复方提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
(1)按照权利要求1或2所述的中药原料配比精确称取大接骨草、白鹤灵芝、榼藤子、文殊兰、大叶千斤拔、蜂蜜花六种药材；
(2)将大接骨草等六种药材混合粉碎，过药典2号筛，加入药材质量10-30倍的70％乙醇，加热回流提取，提取次数为1-3次；
(3)将提取得到的药液减压浓缩，浓缩时温度不超过70℃，得到相对密度为1.15-1.5的浸膏；
(4)将浸膏加5倍质量的水稀释后与等体积的D-101型大孔吸附树脂混合拌匀，上样于D-101型大孔吸附树脂柱中，上样量以浸膏量与树脂量之比为20-40，静态吸附30分钟，然后依次用10个柱体积的水、10个柱体积的20％乙醇和10个柱体积的50％乙醇进行洗脱，收集50％乙醇洗脱液；
(5)将洗脱液减压浓缩并干燥，浓缩和干燥时温度不超过70℃，将干燥物粉碎，即得到本发明的傣药复方提取物。

4.  一种用于预防和治疗阿尔茨海默病的药物制剂或保健品，其特征在于，所述药物制剂或保健品的主要活性成分由权利要求1或2所述的傣药复方提取 物制备而成。

5.  根据权利要求4所述的药物制剂或保健品，其特征在于，所述药物制剂或保健品的剂型是药剂学上任何一种常用的药物剂型。

6.  根据权利要求5所述的药物制剂或保健品，其特征在于，所述药物制剂或保健品的剂型是胶囊剂、片剂或颗粒剂。

7.  一种权利要求4-6中任一项所述的药物制剂或保健品的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
(1)根据权利要求3所述的方法制备傣药复方提取物；
(2)将步骤(1)制备的所述傣药复方提取物配合常用药用辅料利用常规技术手段制备所述药物制剂或保健品。

8.  权利要求1或2所述的傣药复方提取物在制备预防和治疗阿尔茨海默病药物制剂或保健品中的应用。

9.  根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物制剂或保健品的剂型是药剂学上任何一种常用剂型。

10.  根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述药物制剂或保健品的剂型是胶囊剂、片剂或颗粒剂。

一种用于预防和治疗阿尔茨海默病的傣药复方提取物及其应用
技术领域
本发明属于医药用途领域，涉及一种傣药复方提取物，具体涉及一种用于预防和治疗阿尔茨海默病的傣药复方提取物及其应用。
背景技术
阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease，简称AD，又称老年性痴呆)，是最为常见的神经退行性疾病，也是至今为止造成痴呆主要原因。在所有的痴呆病人中，有高达50％-60％为AD。AD是典型的增龄性疾病，在60-64岁年龄段的老人中，AD的发病率仅在1％以下，但是随着年龄的增长，其发病率几乎呈指数增加的状态，在西方国家中，85岁以上的人群发病率达到24％-33％之高。而从发展中国家的代表性数据来看，在这些国家里患有痴呆病的病人约有占世界总量60％甚至更多。AD非常普遍，是一个重要的公共健康问题。有数据表明，在2001年AD拥有2400万患者，随着人类寿命的增加，患者人数预计会每20年翻一番，至2040年，全球将有8100万阿尔茨海默病病患者，这将给人类社会带来巨大的负担。因此，开发预防和治疗阿尔茨海默病、改善阿尔茨海默病认知功能障碍的药物成为全球各国医疗工作者的研究重点，受到中西方医学界的高度重视。目前，治疗阿尔茨海默病的药物主要为乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制剂、抗免疫炎症、钙离子拮抗剂、抗氧化剂等药物，美国食品药品管理局已批准上市的药物如多奈哌齐、加兰他敏、尼莫地平、盐酸美金刚等，这些药物只能暂时缓解患者认识功能减退，但不能延缓疾病发展，而且上述有些药物具有严重的肝、肾毒性等不良反应，有些药物价格昂贵，患者及其家属难以承受，所以仍需要开发良好疗效，毒副作用小，且价格适宜的新药物。近年来，国内外专家学者开始关注傣药与天然药物，并尝试进行治疗阿尔茨海默病的研究。
随着民族医药的发展，天然民族药物逐渐受到关注，傣医药认为，阿尔茨海默病是由于水风两塔虚不受补，长期亏虚，导致四塔失衡，引起记忆力严重退化， 治法多采用补益药物，重点补风、水两塔，调和四塔，由根本治疗。因此，寻找组方合理、疗效确切的民族药的组方，并通过现代傣药提取技术制备成高效低毒的防治阿尔茨海默病的复方提取物，已成为一个研究热点。大接骨草，傣药名为“芽端顶”，为茜草科植物攀援耳草Hedyotis scandens Roxb.的全草。白鹤灵芝，傣药名为“芽鲁哈”，为爵床科植物白鹤灵芝Rhinacanthus nasutus(L.)Kurz的枝、叶。榼藤子，傣药名为“麻哇”，为豆科植物榼藤子Entada phaseoloides(1.)Merr.的种仁和藤。文殊兰，傣药名为“里罗囡”，为石蒜科植物文殊兰Crinum asiaticum L.var.sinicum(Roxb.ex Herb.)Baker的叶、鳞茎及花蕾。大叶千斤拔，傣药名为“嘎三比龙”，为豆科植物大叶千斤拔Flemingia macrophylla(Wal1.)Merr.的根。蜂蜜花，傣药名为“景亮”，为十字花科植物蜂蜜花Iberis pectilata L.的种子。上述六种药物配伍具有入水、风塔，进而调补四塔，增强体质，发挥预防和治疗阿尔茨海默病的作用。目前该傣药组该在预防和治疗阿尔茨海默病方面的应用并没有人报道。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种疗效良好、毒副作用小可用于预防和治疗阿尔茨海默病的傣药复方提取物。
本发明的目的之二在于提供一种用于预防和治疗阿尔茨海默病的保健品或药物制剂。
本发明的目的之五在于提供上述傣药复方提取物在制备预防和治疗阿尔茨海默病的保健品或药物制剂中的应用。
为了实现上述目的，本发明采取下列技术方案：
本发明提供了一种良好疗效、毒副作用小且价格适宜的傣药复方提取物，所述傣药复方提取物是由大接骨草(茜草科植物攀援耳草Hedyotis scandens Roxb.的全草)、白鹤灵芝(爵床科植物白鹤灵芝Rhinacanthus nasutus(L.)Kurz的枝、叶)、榼藤子(豆科植物榼藤子Entada phaseoloides(1.)Merr.的种仁和藤)、文殊兰(石蒜科植物文殊兰Crinum asiaticum L.var.sinicum(Roxb.ex Herb.)Baker的叶、鳞茎及花蕾)、大叶千斤拔(豆科植物大叶千斤拔Flemingia macrophylla(Wal1.)Merr.的根)、蜂蜜花(十字花科植物蜂蜜花Iberis pectilata L. 的种子)加工制成。所述大接骨草、白鹤灵芝、榼藤子、文殊兰、大叶千斤拔、蜂蜜花的重量配比为：以重量份数计，大接骨草4-6份、白鹤灵芝4-6份、榼藤子2-4份、文殊兰2-4份、大叶千斤拔1-3份、蜂蜜花1-3份。更优选地，所述的重量配比为：以重量份数计，大接骨草5份、白鹤灵芝5份、榼藤子3份、文殊兰3份、大叶千斤拔2份、蜂蜜花2份。
本发明还提供了上述傣药复方提取物的制备方法，所述傣药复方提取物的制备方法为：
(1)按照上述傣药原料重量配比精确称量大接骨草、白鹤灵芝、榼藤子、文殊兰、大叶千斤拔、蜂蜜花六种药材；
(2)将大接骨草等六味药材混合粉碎，过药典2号筛，加入药材质量10-30倍的70％乙醇，加热回流提取，提取次数为1-3次；
(3)将提取得到的药液减压浓缩，浓缩时温度不超过70℃，得到相对密度为1.15-1.5的浸膏；
(4)将浸膏加5倍质量的水稀释后与等体积的D-101型大孔吸附树脂混合拌匀，上样于D-101型大孔吸附树脂柱中，上样量以浸膏量与树脂量之比计算为20-40倍，静态吸附30分钟，然后依次用10个柱体积的水、10个柱体积的20％乙醇和10个柱体积的50％乙醇进行洗脱，收集50％乙醇洗脱液；
(5)将洗脱液减压浓缩并干燥，浓缩和干燥时温度不超过70℃，将干燥物粉碎即得到本发明提供的傣药复方提取物。
本发明提供了一种用于预防和治疗阿尔茨海默病的药物制剂或保健品，所述药物制剂或保健品的主要活性成分是上述傣药复方提取物。所述药物制剂或保健品是由上述傣药复方提取物配合常用的药用辅料制备而成。
本发明的上述药物制剂或保健品可以是药剂学上任何一种常用的内服药剂型，包括但不限于，片剂：糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂，胶囊剂：硬胶囊剂、软胶囊剂，口服液，糖浆剂，口含剂，颗粒剂，冲剂，丸剂，滴丸剂，散剂，膏剂，丹剂，混悬剂，粉剂，液剂，注射剂。
本发明提供了上述傣药复方提取物的胶囊剂型、片剂剂型、颗粒剂剂型。
对于本领域技术人员来说，将傣药复方提取物制备成包括胶囊剂、片剂、颗粒剂在内的常用剂型的制备方法是常用的药剂学制备方法。
本发明提供的用于预防和治疗阿尔茨海默病的胶囊含有傣药复方提取物和药用辅料，所述药用辅料包括润滑剂和填充剂，填充剂选自乳糖、微晶纤维、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、预胶化淀粉中的一种或几种；润滑剂选自十二烷基硫酸镁、二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙中的一种或几种。在本发明的一个具体的实施方案中，所述填充剂选用预胶化淀粉；所述润滑剂选用硬脂酸镁和滑石粉。上述胶囊的制备方法：(1)按照上述方法制备傣药复方提取物；(2)将傣药复方提取物过筛，加入一定量的预胶化淀粉，再加入滑石粉和硬脂酸镁，混合均匀，装入胶囊，制成粒。
本发明提供的用于预防和治疗阿尔茨海默病的片剂含有傣药复方提取物和药用辅料，所述药物辅料包括填充剂、崩解剂、润滑剂。填充剂选自乳糖、微晶纤维、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、预胶化淀粉中的一种或几种；崩解剂选自羟丙基纤维素、羟甲基淀粉钠、羧甲基纤维素钠、十二烷基硫酸钠、十六烷基硫代琥珀酸钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、磺基丁二酸二辛酯钠中的一种或几种；润滑剂选自十二烷基硫酸镁、二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙中的一种或几种。在本发明的一个具体的实施方案中，填充剂选择乳糖；崩解剂选择羟丙基纤维素；润滑剂选择硬脂酸镁。所述片剂的制备方法为：(1)按照上述方法制备傣药复方提取物；(2)将傣药复方提取物过筛，加入乳糖，再加入淀粉、羟丙纤维素，混合均匀，用乙醇制粒、干燥、整粒，加入硬脂酸镁，混合均匀，压片，制成片剂。
本发明提供的用于预防和治疗阿尔茨海默病的颗粒剂含有傣药复方提取物和药用辅料，所述药物辅料包括填充剂。填充剂选自乳糖、微晶纤维、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、预胶化淀粉中的一种或几种。在本发明的一个具体的实施方案中，填充剂选择乳糖和甘露醇。所述颗粒剂的制备方法为：(1)按照上述方法制备傣药复方提取物；(2)将傣药复方提取物过筛后，加入乳糖和甘露醇，混合均匀，用乙醇制粒、干燥、整粒。
本发明还提供了上述傣药复方提取物在制备预防和治疗阿尔茨海默病保健品或药物制剂中的应用。所述药物制剂或保健品的主要活性成分是上述傣药复方 提取物。所述药物制剂或保健品是由上述傣药复方提取物配合常用的药用辅料制备而成。
为了证明本发明的傣药复方提取物的安全性，首先对其进行了长期灌胃给药毒性实验。采用本发明的傣药复方提取物连续8周灌胃给实验大鼠，结果表明，本发明的傣药复方提取物长期灌胃对大鼠无毒副作用，表明本发明傣药复方提取物毒副作用极小，可以长期使用。
考察了本发明的傣药复方提取物对阿尔茨海默病的预防作用。采用本发明的傣药复方提取物灌胃给实验小鼠，给药14天后通过氢溴酸东莨菪碱腹腔注射致小鼠学习记忆障碍模型，通过采用水迷宫进行行为学测试，考察了不同药物对小鼠学习记忆的影响，结果表明，本发明中的傣药复方提取物和模型组相比，潜伏期和总路程均减少，且都有显著性差异。表明该傣药复方提取物对氢溴酸东莨菪碱致小鼠学习记忆障碍模型有预防及治疗作用，该傣药复方提取物对阿尔茨海默病引起的记忆障碍有预防作用。
通过APPswe转基因阿尔茨海默病小鼠模型考察了本发明的傣药复方提取物对于阿尔茨海默病的治疗作用。药效学研究表明采用本发明傣药复方提取物灌胃给予APPswe转基因阿尔茨海默病小鼠，各组给药30天后采用小鼠跳台仪和水迷宫进行行为学检测。结果表明本发明中傣药复方提取物均能缩短痴呆APPswe小鼠跳到安全平台(小鼠跳台仪)的潜伏期，提高痴呆小鼠的记忆能力。在进一步采用水迷宫进行行为学检测发现，本发明傣药复方提取物均能缩短APPswe小鼠找到安全平台(水迷宫)的潜伏时间，并能缩短其找到安全平台的总路程，该傣药复方提取物对阿尔茨海默病引起的学习记忆障碍有治疗作用。
本发明的优点和有益效果如下：(1)本发明的傣药复方提取物经实验证明疗效好、毒副作用小、价格便宜，适于临床普及使用；(2)本发明的傣药复方提取物可以制成多种形式的药物，如胶囊、片剂和颗粒剂，满足不同患者的需求。
具体实施方式
下面结合具体的实施例进一步说明本发明，本发明的实施例仅用于解释本发明，并不意味着限制本发明的保护范围。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1 傣药复方提取物的制备
1、精确称取下列原料：大接骨草4份、白鹤灵芝4份、榼藤子2份、文殊兰2份、大叶千斤拔1份、蜂蜜花1份。
2、制备方法：将人参等十味药材混合粉碎，过药典2号筛，加入药材质量10倍的70％乙醇，加热回流提取1次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩(70℃)得相对密度为1.15浸膏，将浸膏加5倍质量的水稀释后与等体积的D-101型大孔吸附树脂混合拌匀，上样于D-101型大孔吸附树脂柱中，上样量以浸膏量与树脂量之比为20倍，静态吸附30分钟，然后依次用10个柱体积的水、10个柱体积的20％乙醇和10个柱体积的50％乙醇进行洗脱，收集50％乙醇洗脱液，将洗脱液减压浓缩并干燥(70℃)，将干燥物粉碎即得到本发明提供的傣药复方提取物，收率为5％左右。
实施例2 傣药复方提取物的制备
1、精确称取下列原料：大接骨草5份、白鹤灵芝5份、榼藤子3份、文殊兰3份、大叶千斤拔2份、蜂蜜花2份。
2、制备方法：将人参等十味药材混合粉碎，过药典2号筛，加入药材质量20倍的70％乙醇，加热回流提取2次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩(60℃)得相对密度为1.20浸膏，将浸膏加5倍质量的水稀释后与等体积的D-101型大孔吸附树脂混合拌匀，上样于D-101型大孔吸附树脂柱中，上样量以浸膏量与树脂量之比为30倍，静态吸附30分钟，然后依次用10个柱体积的水、10个柱体积的20％乙醇和10个柱体积的50％乙醇进行洗脱，收集50％乙醇洗脱液，将洗脱液减压浓缩并干燥(70℃)，将干燥物粉碎即得到本发明提供的傣药复方提取物，收率为5％左右。
实施例3 傣药复方提取物的制备
1、精确称取下列原料：大接骨草6份、白鹤灵芝6份、榼藤子4份、文殊 兰4份、大叶千斤拔3份、蜂蜜花3份。
2、制备方法：将人参等十味药材混合粉碎，过药典2号筛，加入药材质量30倍的70％乙醇，加热回流提取3次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩(50℃)得相对密度为1.5浸膏，将浸膏加5倍质量的水稀释后与等体积的D-101型大孔吸附树脂混合拌匀，上样于D-101型大孔吸附树脂柱中，上样量以浸膏量与树脂量之比为40倍，静态吸附30分钟，然后依次用10个柱体积的水、10个柱体积的20％乙醇和10个柱体积的50％乙醇进行洗脱，收集50％乙醇洗脱液，将洗脱液减压浓缩并干燥(70℃)，将干燥物粉碎即得到本发明提供的傣药复方提取物，收率为5％左右。
实施例4 胶囊的制备
制备方法：
(1)按照实施例1-3的方法制备傣药复方提取物；
(2)将傣药复方提取物过40目筛，加入一定量的预胶化淀粉，再加入滑石粉和硬脂酸镁，混合均匀，装入胶囊，制成粒。
实施例5 片剂的制备
制备方法：
(1)按照实施例1-4的方法制备傣药复方提取物；
(2)将傣药复方提取物过40目筛，加入乳糖，再加入淀粉、羟丙纤维素，混合均匀，用乙醇制粒、干燥、整粒，加入硬脂酸镁，混合均匀，压片，制成片。
实施例6 颗粒剂的制备
制备方法：
(1)按照实施例1-4的方法制备傣药复方提取物；
(2)将傣药复方提取物过40目筛后，加入乳糖和甘露醇，混合均匀，用乙 醇制粒、干燥、整粒。
实施例7 傣药复方提取物八周灌胃给药毒性试验
1、方法：选用健康Wistar大鼠，雌雄各半，分别为空白对照组(灌胃给予等体积蒸馏水)、傣药复方提取物高、中、低剂量组[按实施例1制备，水混悬后灌胃，剂量分别为3.0、2.0、1.0g/kg/d(相当药材60g、40g、20g，远大于正常每日使用量)]。每组40只Wistar大鼠，雌雄各20只，每日灌胃一次，每周给药7天，连续8周。试验期间对大鼠的外观、行为、体重、摄食量等各项指标进行检测，并分别于给药结束和恢复期结束进行血液学及血液生化学各项指标检测和病理组织学检查。
2、结果：8周灌胃给予傣药复方提取物，各剂量组大鼠活动正常，行为活泼，被毛光润，所有体征与对照组比较未见差别和异常改变。各组动物摄食量与同期对照组比较，未见毒理学意义的异常变化。对体重无负面影响。血液学和血液生化学指标与同期对照组比较，均未见毒理学意义的异常改变。各组动物器官组织均无肉眼可见的病理改变。各组间所有脏器重量及脏器系数亦均无毒理学意义的异常变化。所有镜检脏器均未发现与药物相关的病理改变。恢复期未见延迟性毒性反应，亦未见与药物有关的延迟性病理改变。结果表明，本发明傣药复方提取物具有较大的安全空间，可以长期使用。
实施例8 傣药复方提取物对氢溴酸东莨菪碱致小鼠学习记忆障碍模型的药效评价
1、方法：将经过筛选合格的健康KM小鼠随机分为6组，即正常组、模型组、石杉碱甲组(剂量0.07mg·kg^-1)、傣药复方提取物低剂量组(剂量25mg·kg^-1，按实施例1方法制备)、傣药复方提取物中剂量组(剂量50mg·kg^-1按实施例1方法制备)、傣药复方提取物高剂量组(剂量75mg·kg^-1，按实施例1方法制备)，每组15只。各组均采用灌胃给药，给药体积为10mL·kg^-1，每天一次，连续14天。待各组给药9天后开始进行Morris水迷宫训练，2次/天。末次给药1小时后除正常组腹腔注射生理盐水外，其余各组均腹腔注射3mg·kg^-1的氢溴酸东莨菪碱， 20min后进行水迷宫测试，方法为保持站台位置不变自动摄像系统将记录小鼠寻找到站台的时间(潜伏期)和游泳路径(总路程)，设置300s为最大潜伏期，300s后将自动停止记录。
2、结果：
表1中的结果显示，和正常组相比，模型组小鼠潜伏期和总路程均有显著增加，有显著性差异(P<0.05)。傣药复方提取物高、低剂量组能明显减少小鼠找到安全平台的潜伏期和总路程，与模型组比较均有显著性差异(P<0.05)；傣药复方提取物中剂量组能明显减少小鼠找到安全平台的潜伏期和总路程，与模型组比较均有极显著性差异(P<0.01)，作用更优。表明本发明傣药复方提取物对氢溴酸东莨菪碱致小鼠学习记忆障碍模型有较好的预防作用，说明该傣药复方提取物对阿尔茨海默病引起的学习记忆障碍有预防作用。
表1药物对氢溴酸东莨菪碱致小鼠学习记忆障碍模型水迷宫测试结果(均值±标准差)

注：与模型组相比*P<0.05，**P<0.01
实施例9 傣药复方提取物对APPswe转基因小鼠学习记忆障碍模型的药效评价
1、药物处理：取健康成年昆明种小鼠10只，为正常组，APPswe转基因小鼠50只，随机均分为5组，分别为模型对照组、脑复康组、傣药复方提取物高、中、低剂量组(按实施例1制备)。给药剂量为脑复康对照组(600mg·kg^-1)、傣 药复方提取物高、中、低剂量组(按实施例1方法制备，剂量分别为25mg·kg^-1、50mg·kg^-1、75mg·kg^-1，以水混悬)，正常组、模型组给予等量的蒸馏水，共4周。
2、指标测定
2.1Morris水迷宫实验
取正常组及模型组小鼠，进行定向航行实验共进行7d。每天训练分上、下午两段进行，每段训练2次，训练时随机选择一个入水点，将小鼠面向池壁放入水中，观察并记录小鼠寻找并爬上平台所需时间(潜伏期)。4次训练分别从不同的入水点入水，如果小鼠在120s内未找到平台，将其引至平台稳定10s，潜伏期记录为120s，每次训练间隔60s。记录每只小鼠潜伏期的平均值。然后把站台去掉，记录2min内小鼠穿越站台位点的次数，记为穿越次数。
2.2脑组织中SOD，MAO，NO，MAD，Na⁺-K⁺-ATPase含量的测定
于“水迷宫实验项下”记忆功能测定结束后次日，脱颈椎处死动物，在冰台上快速取出小脑组织并置于灭菌后冰生理盐水中漂洗，除去血迹，滤纸拭干，精确称重后，将小脑组织迅速浸入9倍量冷生理盐水中，用匀浆器在冰浴中充分碾磨，制成10％脑组织匀浆，以3000r·min^-1离心10min，取上清液待用。按试剂盒说明书测定SOD，MAO，NO，MAD，Na⁺-K⁺-ATPase活性。
3、结果
3.1傣药复方提取物对APPswe转基因小鼠学习记忆功能的影响
由表2可见，和正常组比较，模型组小鼠学习记忆潜伏时间明显延长，平台象限游泳时间降低，穿越次数减少，有极显著性差异(P<0.01)；傣药复方提取物高剂量组能明显减少痴呆小鼠学习记忆潜伏时间，同时使平台象限游泳时间及穿越次数明显增加，与模型组比较均有极显著性差异(P<0.01)；傣药复方提取物中剂量组能明显减少痴呆小鼠学习记忆潜伏时间，同时使平台象限游泳时间及穿越次数明显增加，与模型组比较均有显著性差异(P<0.05)。说明该傣药复方提取物对阿尔茨海默病引起的学习记忆障碍有治疗作用。
表2 傣药复方提取物对衰老小鼠学习记忆功能影响(n＝10，均值±标准差)

注：与模型组比较，*P<0.05；**P<0.01
3.2傣药复方提取物对模型小鼠脑组织SOD，MAO，NO，MAD，Na+-K+-ATPase活性的影响
由表3可见，模型组小鼠脑内SOD、NO、Na+-K+-ATPase活性明显降低，MDA含量增加、MAO活性增高，与正常组比较有极显著性差异(P<0.01)；傣药复方提取物中剂量组能明显升高阿尔茨海默病小鼠脑内SOD、NO、Na⁺-K⁺-ATPase活性、降低MDA含量和MAO的活性，与模型组比较有显著性差异(P<0.05)；傣药复方提取物高剂量组能明显升高阿尔茨海默病小鼠脑内SOD、NO、Na⁺-K⁺-ATPase活性、降低MDA含量和MAO的活性，与模型组比较有极显著性差异(P<0.01)。
表3 傣药复方提取物对衰老小鼠脑组织中SOD、MAO、NO、MDA、Na+-K+-ATPase含量影响(n＝10，均值±标准差)


注：与模型组比较，*P<0.05；**P<0.01
APPswe转基因小鼠脑组织中SOD、NO、Na+-K+-ATPase活性较低，MDA含量增加、MAO活性增强，傣药复方提取物可增强APPswe转基因小鼠脑组织中SOD、NO、Na⁺-K⁺-ATPase活性，降低MDA含量，抑制MAO活性，证实了本发明傣药复方提取物通过增强APPswe转基因小鼠脑内抗氧化能力，发挥治疗阿尔茨海默病的作用。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。