局部用皮肤增白美容产品 本发明涉及一种人体皮肤局部用增白美容产品以及使人体皮肤增白的方法。
许多人担心他们皮肤上的某些色素沉淀现象。例如有老年斑或皱纹的人们希望这些色斑能变得不太明显。其他人则希望降低因日晒造成的皮肤黑化，或者能使其天然肤色变浅。为满足这些要求，尝试研制了许多能降低黑素细胞中色素生成的产品。但目前发现的这些物质都有不利的副作用，例如皮肤刺激性。因此这些物质不适用于化妆品，或者仅能以一定浓度用于局部涂敷而其皮肤增白效果低于所预期的效果。人们认为将各种皮肤增白物质共用会降低副作用，但这样做的主要麻烦在于：由于各物质的竞争作用，这种共用也会使皮肤增白作用降低。因此需要对皮肤增白美容产品的效能进行改进。
英国专利公开2287405中公开了一种皮肤增白美容制剂，其中含有光果甘草提取物或相应种的植物提取物，以及α-羟基酸、β-羟基酸或酮酸，或其酰胺、盐或酯。这种混合物据说对酪氨酸酶具有协同抑制作用，从而能抑制黑色素的形成。
国际专利申请公开94/07462公开的组合物特别是皮肤增白组合物中含有视黄醇或其衍生物以及一种双羧基酸。
国际专利申请公开94/09756提出采用视黄醇或其衍生物与一种选定的皮肤增白剂共用于达到包括减轻肤色在内的某些目的。优选的皮肤增白剂是氢醌，但也提及某些其它成分，包括甘草提取物。
美国专利4990330描述的皮肤增白产品中包含曲酸，它与其它成分共用，这些成分选自一定范围，包括壬二酸。报道称这种共用对抑制黑色素合成具有协同作用。
JP63284119(Derwent文摘)提出一种具有防紫外线和增白效果的皮肤外用制剂，其中包含异阿魏酸或其盐，以及一种有机酸或其盐。
J06199646(Derwent文摘)描述了一种皮肤增白化妆品，其中包含植物提取物、脲和脲稳定剂。提取物可选自广泛的植物包括甘草根(甘草的根)。脲稳定剂也选自广泛的物组，包括脂肪族二羧酸。
迄今发现上述产品并不是广泛适用的，还需要对该领域继续进行改进。
目前我们发现将某些双羧基酸与阿魏酸或其酯、或甘草提取物共用能增进对黑色素生成的抑制作用。因此本发明提供了一种局部用皮肤增白美容产品，其中包含双羧基酸和阿魏酸、阿魏酸酯或甘草提取物，其中双羧基酸含HOOC-R-COOH结构，其中R是含5-13个碳原子的烷基或烯基。
本发明包括一种用于人体皮肤增白地美容方法，该方法是通过在皮肤上局部涂敷本发明的产品。
优选双羧基酸的R基是含6-10个碳原子的烷基。最优选的双羧基酸是壬二酸[HOOC-(CH2)7-COOH]。
阿魏酸即3-甲氧基-4-羟基肉桂酸的结构如式(Ⅰ)：双羧基酸、阿魏酸和阿魏酸酯均是可商购的。
阿魏酸酯可用于替代阿魏酸或可与阿魏酸共用。酯化基团优选含有1-30个碳原子，更优选包含2-20个碳原子。该基团可以是饱和或不饱和、直链或支链的，并且可被取代，例如被羟基化。在本发明的优选实施方案中，阿魏酸与阿魏酸酯相比，优选采用阿魏酸本身。
甘草提取物例如可根据J02204495所述的方法进行制备，例如采用10份(体积)己烷与4份(体积)丙酮或0.5-1.5份(体积)乙醇的混合溶剂提取甘草根或其水提剩余物并除去溶剂。甘草提取物是可商购的，例如购自MaruzenPharmaceutical Company,Japan。
优选该产品的pH为5-9，更优选为6-8，特别是约7。
将适用的活性成分加入适用于化妆品的载体中以制得该美容产品。载体可包括常用于护肤品的成分，例如水、液体或固体护肤剂、硅油、乳化剂、溶剂、保湿剂、增稠剂、撒粉、喷洒剂等。其它特殊的皮肤有效活性成分如防晒剂和羟基酸也可加入载体中。特别优选在本发明产品加入防晒剂，特别是当产品用于一般性皮肤增白而不是色斑护理时。载体中还可包含辅剂如香精、抗氧剂、防腐剂、着色剂和缓冲剂。该产品适宜制成常用的护肤品剂型如膏霜或乳液等。该产品也可以是被称为“洗除式产品”的产品，例如浴用凝胶，其中可能包含活性成分输送系统，能增进漂洗过程中皮肤对活性成分的吸附，但优选该产品是免洗产品，即涂敷在皮肤上后无需仔细漂洗以便从皮肤基本除去的产品。可采用常用于制备护肤品的相同方法制备该产品。适宜先将活性成分溶解或分散于组合物的一部分水或其它溶剂或者液体中。
可采用常规方法将产品盛装于例如小罐、瓶等容器中。
优选产品中双羧基酸部分与另一部分的阿魏酸成分或甘草提取物的重量比为1∶10至5000∶1，更优选为1∶1至500∶1。因此，如果采用阿魏酸，优选其用量按上述双羧基酸的相对重量计。如果不采用阿魏酸而仅采用阿魏酸酯，或将其共用，优选其用量按酯化基团的重量和计，从而限据上述的重量比确定阿魏酸基或阿魏酸部分的用量。
产品中双羧基酸的用量优选为0.001-20％(重量)，更优选为0.1-15％(重量)，特别是1-10％(重量)。产品中的阿魏酸和/或其酯(以阿魏酸部分计)或甘草提取物的用量优选为0.001-10％(重量)，更优选为0.1-8(重量)，特别是1-5％(重量)。活性成分的混合用量优选占产品的0.1-20％(重量)，更优选为1-15％(重量)，特别是3-10％(重量)。对于甘草提取物，其用量以提取物的干重计。
优选在产品中采用阿魏酸(酯)或甘草提取物，但两者不应共用。我们发现阿魏酸和甘草提取物彼此具有反作用，会降低对黑色素生成的抑制作用。
如必要，双羧基酸可以其盐或酯的形式加入本发明产品中，它可在产品中或皮肤上或者皮肤内部分解释放出酸。同样，阿魏酸也可以其盐形式应用。这样的话，应采用相应用量。但本发明优选采用双羧基酸和阿魏酸本身。
在本发明的优选实施方案中，阿魏酸和/或其酯以植物提取物形式用于产品。某些植物包含大量阿魏酸或其酯。例如阿魏(Ferula ass-foetida)精油中阿魏酸的含量据称为13000ppm。丹参植物(Salvia sp.)的种子中含高于2000ppm的阿魏酸，菠萝(Ananas comosus)中包含200-800ppm阿魏酸。植物提取物可提供用于本发明产品的全部或部分阿魏酸和/或阿魏酸酯。
可按照常规护肤品的相似涂敷方法将该产品涂敷在皮肤上。例如可将其每日1-3次涂敷在皮肤(例如面部和/或手部或手臂)上。对于色斑，用户例如可选择将该产品仅涂敷在作用部位。一般经2-3月会出现可见的皮肤增白效果，这要视皮肤的情况、产品中活性组分的浓度和产品的用量、以及涂敷频率而定。本发明产品特别适用于一般性皮肤增白，当产品用于日用时，其中还可特定地包含防晒剂。测定方法*细胞维持
在37℃、湿度饱和、5％二氧化碳存在条件下，将B16-F1小鼠黑素瘤细胞(American Type Culture Collection,Maryland,USA)在75平方厘米的含RPMI1640培养基(ICN-Flow，分类号12-60-54)的培养瓶中维持，培养基中额外加入了L-葡糖胺(4mM)和10％胎牛血清(FBS)。细胞每周经继代移植2次。*色素沉着试验
微融合的第3代和第25代间的B16细胞的接种密度达5×105细胞/75平方厘米后72小时进行采集。对细胞计数，经离心(60克)成球，并再悬浮于补加有L-葡糖胺(4mM)和10％FBS的DMEM(ICN-Flow分类号16-427-54)。将细胞再接种在含100μlDMEM的微量滴定盘的圆底孔中，接种密度为5×103细胞/孔。接种盘培养过夜。约24小时后，除去培养基并立即更换成200μl含或不含被测物的经预热的新鲜培养基。每项处理过程重复4次。将180μl已着色的培养基转移到干净的平底微量滴定盘中，在每孔中充入正辛烷蒸气以除去气泡，用微滴定盘读数器(Dynatech MR 5000)测定其在540nm下的吸光度，并用新鲜培养基的吸光发基准值校准，从而测定出约120小时后每孔中产生的黑色素量。校准的吸光度值与黑色素浓度成正比，被测的皮肤增白成分的色素沉着百分比可按下式计算：色素沉着百分比=(540nm下被测物光密度/540nm下参照物光密度)×100％其中540nm下和被测物光密度和540nm下参照物光密度是指孔中含被测物的培养基和不含被测物的培养基经校准的吸光度平均值。被测物产生的抑制百分比即为色素沉着百分比。*细胞成活率试验
可通过抑制黑色素生成过程来减少黑色素产生，细胞毒性和细胞增殖对黑色素的产生也有影响。为测定这是否存在，通过中性红色染料的吸光度来测定细胞成活率。中性红是水溶性染料，能透过完整的胞质膜并在完整细胞的溶菌体内部富集。中性红染料的吸收量与培养物中活细胞数成正比。
换除微量滴定盘中黑色素分析用的培养基后，立即将200μl含浓度为25μl/ml的中性红(购自Sigma,UK，分类号2889)的200μl经预热的新鲜培养基加入细胞中，培养3小时以维持细胞。倒置滴定盘并在吸水纸上轻拍可除去没有吸收染料的细胞。用200μlPBS洗涤细胞，然后再除去PBS。加入100μl溶剂(50％水、49％乙醇、1％乙酸)。在室温下静置20分钟，然后用微量滴定盘振荡器将各滴定盘振荡5秒钟。按上述方法测定吸光度。在对下述的被测皮肤增白成分的测定中，被测物对细胞的成活率并无显著影响。测定
下表所示的是对被测的皮肤增白成分及其混合物的测定及其用量。所有成分的用量均以mmol计，但甘草提取物的用量以百万分之一重量份(ppm)计。被测成分引起黑色素生成抑制百分比也列于表中。试验中，被测物取自柠檬酸的含水基液。首先将甘草提取物溶于DMSO。使得每孔中DMSO浓度为0.5％(重量)。当采用DMSO时，应确保对照组每孔中DMSO的用量(0.5％)也相同。先将阿魏酸和双羧基酸溶于1N氢氧化钠中。将pH调节至8.0至9.0，然后进一步稀释该溶液，得到适用的基液。其pH为7.4。对照组试验采用C18-双羧基酸。该双羧基酸产品购自Unichema Netherlands。它主要由带有含18个碳原子的直链的单-和双-不饱和双羧基酸构成，如R基带有16个碳原子。
表A：阿魏酸和壬二酸 抑制百分比 阿魏酸(mM) 0 0.001 0.01 壬二酸(mM) 0 0 5 16 0.5 12 0 37 1 13 -1 73 2 36 39 75表B：阿魏酸和柠檬酸(对照组)抑制百分比 阿魏酸(mM) 0 0.001 0.01柠檬酸(mM) 0 0 0 19 0.5 5 6 28 1 8 8 27 5 28 24 25表C：甘草提取物和壬二酸抑制百分比 甘草提取物(ppm) 0 1.8 3.5壬二酸(mM) 0 0 -2 36 0.5 -1 5 47 1 -3 20 73 2 0 23 73表D：甘草提取物和C18-双羧基酸(对照组)抑制百分比 甘草提取物(ppm) 0 1.8 3.5 C18双羧基酸(mM) 0 0 2 15 0.5 1 3 8 1 0 -7 10 1.5 11 13 19表E：甘草提取物和柠檬酸(对照组)抑制百分比 甘草提取物(ppm) 0 1.8 3.5柠檬酸(mM) 0 0 13 69 0.5 4 2 58 1 7 1 57 5 16 4 58如果两种皮肤增白成分彼此不相互反应，可以预知将其共用时的色素沉着比例(色素沉着百分比/100)应为其单独使用时色素沉着比例之和。由此可计算出共用并且无相互反应时的抑制百分比。
上述结果表明壬二酸与阿魏酸或甘草提取物的组合对抑制黑色素产生具有协同作用。相反，阿魏酸与柠檬酸的组合或甘草提取物与C18-双羧基酸或柠檬酸的组合并无协同作用。两成分似乎相互作用相反而不是产生增效作用。表E表明将甘草提取物和柠檬酸(一种α-羟基酸)共用并无相互作用，尽管根据英国专利公开GB 2 287 405的内容本应具有协同作用。加入柠檬酸还会对甘草提取物的黑色素生成抑制作用产生不利影响。
实施例1
以下组合物描述的是本发明的膏霜乳化体。化学成分全名或其CTFA命名 商标名 重量％ 壬二酸 7.0 阿魏酸 2.0 EDTA二钠 Sequesterene Na2 0.05 硅酸铝镁 Veegum Ultra 0.6 对羟苯甲酸甲酯 Methyl Paraben 0.15 单甲基聚硅氧烷 DC Antifoam Emulsion 0.01 1、3-丁二醇 Butylene Glycol 1,3 3.0 羟乙基纤维素 Natrosol 250HHR 0.5 甘油(美国药典) Glycerine USP 2.0 黄原胶 Keltrol 1000 0.2 三乙醇胺 Triethanolamine(99％) 1.2 硬脂酸 Pristerene 4911 3.0 对羟苯甲酸丙酯NF Propylparaben NF 0.1 氢化硬脂酸甘油酯 Naturechem GMHS 1.5 硬脂醇 Lanette 18 DEO 1.5 棕榈酸异硬脂醇酯 Protachem ISP 6.0 辛酸C12-15醇酯 Hetester FAO 3.0 二甲基聚硅氧烷Silicone Fluid 200(50cts) 1.0 胆留醇NF Cholesterol NF 0.5 脱水山梨醇硬脂酸酯 Sorbitan Stearate 1.0 丁基化羟甲苯 Embanox BHT 0.05 乙酸生育酚酯 Vitamin E Acetate 0.1 PEG-100硬脂酸酯 Myrj 59 2.0 硬脂酰乳酸钠 Pationic SSL 0.5 羟基辛酸Hydroxycaprylic Acid 0.1 棕榈酸视黄醇酯Vitamin A Palmitate 0.06 α-红没药醇 Alpha-bisabolol 0.2 去离子水 加至100实施例2
实施例1的组合物中，用2.0％甘草提取物替代阿魏酸。