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本发明涉及新的液体制剂，其包含取代的苯并咪唑(优选为匹莫苯)作为药物活性化合物。具体地，本发明涉及液体制剂，其包含醚化的环糊精衍生物(优选以约20％至70％(w/v)浓度)和所述的取代的苯并咪唑(优选以约0.005％至0.15％(w/w)浓度)。

1.  液体制剂，其包含醚化的环糊精衍生物和取代的苯并咪唑，其中该醚化的环糊精衍生物选自α-、β-及γ-环糊精醚。

2.  权利要求1的液体制剂，其中该醚化的环糊精衍生物为羟丙基-β-环糊精。

3.  权利要求1或2的液体制剂，其中该取代的苯并咪唑为匹莫苯、其可药用盐、衍生物、代谢物或前药。

4.  权利要求1-3中任一项的液体制剂，其中该醚化的环糊精衍生物部分占约15至70％(w/v)。

5.  权利要求4的液体制剂，其中该醚化的环糊精衍生物部分占约20至30％(w/v)。

6.  权利要求1-5中任一项的液体制剂，其中该取代的苯并咪唑部分占约0.005至0.15％(w/v)。

7.  权利要求1-6中任一项的液体制剂，其中该制剂进一步包含可药用载体、赋形剂和/或盐。

8.  权利要求1-7中任一项的液体制剂，其中该制剂是等渗的。

9.  权利要求1-8中任一项的液体制剂，其中该制剂具有约6.5至7.5的pH值以及约280至300mOsm/Kg的重量克分子渗透浓度。

10.  权利要求1-9中任一项的液体制剂，其中该制剂含有一种或多种适宜的防腐剂。

11.  权利要求1-10中任一项的液体制剂，其中该制剂包含约：
a)20至30％(w/w)的羟丙基-β-环糊精；
b)0.005至0.15％(w/w)匹莫苯、其可药用盐、衍生物、代谢物或前药；
且其中该液体的pH调节至约6.5至7.5，且该重量克分子渗透浓度为约280至300mOsm/Kg。

12.  权利要求11的液体制剂，其中该液体制剂进一步包含0.025至0.075％(w/v)的一种或多种稳定剂。

13.  一种制备权利要求1-12中任一项的液体制剂的方法，其包括以下步骤：
a)将醚化的环糊精衍生物溶于溶剂中；
b)将取代的苯并咪唑添加至步骤(a)所获得的溶液中；及
c)将步骤(b)所获得的混合物混合以获得水性溶液形式的液体制剂。

14.  权利要求13的方法，其中该溶剂为水。

15.  一种治疗和/或预防具有充血性心力衰竭的受试者的方法，该方法包括以下步骤：向有此治疗需要的受试者给药权利要求1-12中任一项的液体制剂。

16.  权利要求1-12中任一项的液体制剂用作药物的用途。

17.  权利要求15的用途，其用作兽药。

18.  权利要求1-12中任一项的液体制剂用于注射或输注的用途。

19.  权利要求1-12中任一项的液体制剂在制备用于治疗或预防有此治疗需要的受试者的选自下列的疾病的药物组合物中的用途：充血性心力衰竭(CHF)、急性充血性心力衰竭、失偿型心内膜炎(DCE)、扩张型心肌病(DCM)、无症状性(隐匿性)充血性心力衰竭、无症状性扩张型心肌病、麻醉期间心血管功能和/或肾灌注的维持、休克、胃扩张、肠扭转、心肌缺血及肾缺血。

20.  权利要求18的用途，其中有此治疗需要的受试者为马、狗或猫。

21.  权利要求1-12中任一项的液体制剂用于注射或输注的用途。

22.  一种治疗和/或预防具有充血性心力衰竭的受试者的方法，该方法包括以下步骤：向所述有此治疗需要的受试者给药权利要求1-12中任一项的液体制剂。

23.  试剂盒，其包括：
a)权利要求1至12中任一项的液体制剂；和
b)包括以下信息的包装插页：该液体制剂用于预防和/或治疗有此预防或治疗需要的受试者的充血性心力衰竭。

包含匹莫苯与环糊精的复合物的液体制剂
本申请是中国发明申请(发明名称：包含匹莫苯与环糊精的复合物的液体制剂；申请号：200780041445.2；申请日：2007.11.05)的分案申请。
技术领域
本发明涉及药物领域。具体地，本发明涉及新的液体制剂，其包含取代的苯并咪唑(优选匹莫苯(pimobendan))作为药物活性化合物。
发明背景
匹莫苯为用于治疗动物(尤其是狗)的由(例如)扩张型心肌病(DCM)或失偿型心内膜炎(DCE)引起的充血性心力衰竭(CHF)的公知化合物(WO2005/092343)。匹莫苯也为获准用于人类心血管治疗的药物。
匹莫苯(4,5-二氢-6-[2-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并咪唑-5-基]-5-甲基-3(2H)-哒嗪酮)公开于EP B-008 391(在此将其全部引入作为参考)中，且其具有下式：

如在EP A-439 030及WO 2005/08467中已描述，匹莫苯药物物质不溶于水，1g物质需要超过10000ml的水溶解。在pH 7下，匹莫苯的溶解度为约0.1mg/100ml。
该物质可通过口服途径每日给药两次。仍然无法获得包含匹莫苯的液体制剂。为了对上述所有新的适应症立即发生作用，必须通过静脉内和/或皮下途径肠胃外给药可注射溶液。为将药品通过静脉内/皮下途径给药至人或动物，需要水性制剂，具有非水性溶剂的制剂因存在严重耐受性问题的风险而既是不可接受的也不是现有技术。
在水溶液中的溶解度视pH值而定。匹莫苯的溶解度在pH 1至3下明显较高，然而，溶液中的化学稳定性降低，以致无法获得具有合理存放期的稳定溶液。此外，该制剂的局部耐受性非常差。这是因为目标剂量需要溶液中 的药物浓度仅可通过约pH 3及低于pH 3的pH值获得。在溶液中的所需的浓度比匹莫苯在水中的溶解度超出约250倍，1至1000倍可能为最大所需提高范围。
已知某些醚化的(etherified)β-环糊精衍生物可改良微溶药物的溶解度(WO85/02767)。然而，在WO85/02767中，描述了仅使用浓度至多为10％的醚化的β-环糊精衍生物。考虑了1:6至4:1的药物与醚化的β-环糊精衍生物的摩尔比。在上述指定比例内，氟苯达唑的溶解度仅增加30倍。然而，那些制剂不适于制备包含至多5mg/ml，优选0.5至3mg/ml，甚至更优选0.5至1.5mg/ml的治疗有效量的匹莫苯或其它任何取代的苯并咪唑的液体制剂。如上所述，包含至多1.5mg/ml匹莫苯的制剂需要在pH 7下的溶解度至少提高约1000倍至1500倍。
本发明的根本目的在于提供液体制剂，其包含取代的苯并咪唑(优选匹莫苯)作为药物活性化合物。
本发明的根本目的在于提供可药用溶液，其包含取代的苯并咪唑(优选匹莫苯)作为药物活性化合物。
本发明的另一根本目的在于提供可注射溶液，其包含取代的苯并咪唑(优选匹莫苯)作为药物活性化合物。
发明内容
附图说明
图1和图2示出了在pH 3、5和7下，匹莫苯(取代的苯并咪唑)在水溶液中的饱和溶解度，该水溶液包含多种浓度的醚化的环糊精衍生物羟丙基-β-环糊精(HPβCD)。
图3示出了在pH 7下，匹莫苯(取代的苯并咪唑)在水溶液中的饱和溶解度，该水溶液包含溶于10mM磷酸盐缓冲液中的多种20％至25％(w/v)醚化的环糊精衍生物羟丙基-β-环糊精(HPβCD)。
图4示出了在pH 7下，匹莫苯(取代的苯并咪唑)在水溶液中的饱和溶解度，该水溶液包含溶于10mM磷酸盐缓冲液中的24％(w/v)醚化的环糊精衍生物羟丙基-β-环糊精(HPβCD)和氯化钠。
图5示出了高压灭菌对匹莫苯(取代的苯并咪唑)的可溶性制剂的作用。
发明详述
在本发明的实施方案之前，应当理解，除非上下文有明确相反的规定，否则如本文以及所附权利要求中所使用的单数形式"一个"和"该"包括复数个所指物。因此，举例而言，"一种制剂"包括复数种此类制剂；"载体"是指一种或多种本领域的技术人员已知的载体及其等效物等。除非另有定义，否则本文中所使用的所有技术和科学术语所具有的含义与属于此领域中的本领域技术人员所了解的含义相同。除非另外指明或本领域的技术人员已知，否则所有给出的范围和值可在1％至5％变化，因此术语"约"在本说明书中省去。尽管与本文中所述的那些方法和材料类似或相当的任一方法和材料均可在本发明的实施或测试中使用，但优选现描述的方法、设备和材料。出于描述并公开可与本发明结合使用的如在公开出版物中所报导的物质、赋形剂、载体和方法的目的，将本文中所提及的所有公开出版物在此引入作为参考。这里的任何内容都不应被解释为否认本发明享有先前发明优先权的资格。
上述技术问题的解决通过以权利要求为特征的说明书和实施方案所实现。
本发明基于以下意料不到的发现：在约5或7的pH值下，羟丙基-β-环糊精(HPβCD)(醚化的环糊精衍生物)浓度的升高与匹莫苯(在结构上为取代的苯并咪唑的成员)的溶解度的增加之间存在非线性关系。含有约0.5至1.5mg/ml目标浓度的匹莫苯的溶液可通过使用最终制剂的15％以上，优选约20％(w/v)至高达70％(w/v)的HPβCD浓度而获得。如图1所示，基于此非线性关系，20％(w/v)以上的HPβCD浓度可使匹莫苯的溶解度显著提高，该匹莫苯作为对取代的苯并咪唑的示例性方式使用。一般而言，如本文中使用的"(w/v)"是指以每体积最终制剂/制剂计的物质重量。
此外，意想不到地观察到，通过HPβCD所达到的溶解度提高在升高的pH值下并未降低。匹莫苯在低pH值下的溶解度原则上高于在较高pH值下的溶解度。此效应已自WO 2005/08467获知。此亦见于包含醚化的环糊精衍生物HPβCD的溶液中(参见图1)。然而，令人吃惊的是，此效应在pH 7.0相反。匹莫苯在HPβCD存在下、在pH 5下的溶解度与pH 3相比大大降低。相反，匹莫苯在HPβCD存在下、在pH 7下的溶解度大大高于在pH 5下的溶解度。HPβCD浓度(以质量计)的增加与匹莫苯饱和溶解度的增加之间的关系在pH 3为线性关系，但在pH 7则为非线性关系(参见图1)。HPβCD浓度 越高，则匹莫苯溶解度越高。此类非线性效应容许溶解度增加1000倍以上，此系制备包含治疗有效量的匹莫苯或其它任何取代的苯并咪唑的那些活性成份的液体制剂所需要的。
因此，根据一方面，本发明涉及液体制剂，其包含醚化的环糊精衍生物以及取代的苯并咪唑，其中该醚化的环糊精衍生物选自α-环糊精醚、β-环糊精醚及γ-环糊精醚。
如本文中所使用的术语"液体制剂"简明地指制剂的大部分是以液体的形式存在的。如本文中所使用的术语"液体制剂"包括任一形式的水性溶液以及任一类型的悬浮液。若液体制剂以悬浮液形式获得，则其为分散系统。"分散系统"总的是指由两相或两相以上的相组成的系统，其中一种形式(分散相)精细地分配于另一种形式(分散剂)中。根据本发明，"悬浮液"是指固体颗粒于液体中的混合物。优选地，本发明的液体制剂为水性溶液，更优选为非醇性水性溶液。甚至更优选地，那些液体制剂为水性溶液，其适于用作供静脉内和/或皮下施药于动物内之用的可注射溶液。如本文中所使用的术语"水性溶液(aqueous solution)"简明地指制剂的大部分是以溶解的形式存在的。如本文中所使用的术语非醇性水性溶液(non-alcoholic aqueous solution)是指制剂是以溶解的形式存在的，但不包括醇性溶剂或其它有机溶剂。
因此，根据另一方面，本发明涉及水性溶液，其包含醚化的环糊精衍生物以及取代的苯并咪唑，其中该醚化的环糊精衍生物选自α-环糊精醚、β-环糊精醚及γ-环糊精醚。优选地，那些水性溶液为用于静脉内和/或皮下施药于动物内的可注射溶液，或可用于制备供静脉内和/或皮下施药于动物之用的可注射溶液。
如本文中所使用的术语"醚化的环糊精衍生物"包括但不限于α-环糊精、β-环糊精或γ-环糊精。优选地，如本文中所使用的醚化的环糊精衍生物是指醚化的β-环糊精，更优选具有下式：
(β-CD)-OR    (式I)，
其中残基R为羟基烷基，且残基R部分任选可为烷基。优选使用式I的部分醚化的β-环糊精，其中残基R为羟乙基、羟丙基或二羟丙基，残基R部分任选可为例如甲基或乙基；在β-环糊精分子中使用具有7至14个甲基的部分甲基化的β-环糊精醚因其已知于德国公开案31 18 218中而不归入本发明。若具有0.05至0.2的低取代度(如下文中所定义)，仅包含烷基(甲基、 乙基)的β-环糊精的部分醚则适用于本发明。
甚至更优选地，如本文中所使用的醚化的环糊精衍生物为羟乙基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、二羟丙基-β-环糊精。最优选地，如本文中所使用的醚化的环糊精衍生物为羟丙基-β-环糊精(HPβCD)，例如如European Pharmacopoeia(2005年第5版，European Directorate for the Quality of Medicines，EDQM，European Pharmacopoeia，226avenue de Colmar，F-67029Strasbourg，France，http://www.pheur.org)中所述。医药级的羟丙基-β-环糊精(HPβCD)例如以HP商标销售且可自Roquette,France定购。
β-环糊精为具有由7个脱水葡萄糖单元组成的环结构的化合物；其也称为环庚直链淀粉(cycloheptaamylose)。7个葡萄糖环各自在2位、3位及6位含有三个可被醚化的羟基。在根据本发明所使用的部分醚化的β-环糊精衍生物中，这些羟基中仅部分是用羟基烷基醚化，且任选进一步用烷基醚化。当经羟基烷基醚化(其可通过与相应氧化烯反应来进行)时，取代度被描述为摩尔取代度(molar substitution,MS)，亦即，每脱水葡萄糖单元的氧化烯摩尔数，参见美国专利3,459,731第4栏。在根据本发明所使用的β-环糊精的羟基烷基醚中，摩尔取代度介于0.05与10之间，优选介于0.2与2之间。尤其优选约0.40至约1.50的摩尔取代度。经烷基醚化可直接描述为每葡萄糖单元的取代度(degree of-substitution,DS)，如上所述，其为3则表示完全取代。除羟基烷基外也包含烷基、尤其甲基或乙基，多达取代度为0.05至2.0，优选0.2至1.5的部分醚化的β-环糊精可用于本发明。最优选地，经烷基取代的取代度介于约0.5与约1.2之间。
因此，根据另一方面，本发明涉及如上所述的液体制剂，其包含醚化的环糊精衍生物以及取代的苯并咪唑，其中该醚化的环糊精衍生物为醚化的β-环糊精。优选地，该醚化的β-环糊精为羟乙基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精或二羟丙基-β-环糊精。甚至更优选地，该醚化的β-环糊精为羟丙基-β-环糊精(HPβCD)，例如如European Pharmacopoeia(2005年第5版，European Directorate for the Quality of Medicines(EDQM)，European Pharmacopoeia，226avenue de Colmar，F-67029 Strasbourg，France，http://www.pheur.org)中所述。最优选地，该醚化的β-环糊精为HP(Roquette,France)。
如本文中所使用的术语"取代的苯并咪唑"是指但不限于噻苯达唑(thiabendazol)、麦穗宁(fuberidazol)、奥苯达唑(oxibendazol)、帕苯达唑 (parbendazol)、坎苯达唑(cambendazol)、甲苯达唑(mebendazol)、芬苯达唑(fenbendazol)、氟苯达唑(flubendazol)、阿苯达唑(albendazol)、奥芬达唑(oxfendazol)、诺考达唑(nocodazol)、艾斯特索(astemisol)及匹莫苯，其可药用盐、衍生物、代谢物或前药。优选地，如本文中所使用的术语"取代的苯并咪唑"是指匹莫苯或其任一可药用盐、衍生物、代谢物或前药。匹莫苯本身如上文中所述。
因此，根据另一方面，本发明涉及如上所述的液体制剂，其包含醚化的环糊精衍生物以及取代的苯并咪唑，其中：
a)该醚化的环糊精衍生物为醚化的β-环糊精，优选为羟乙基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精或二羟丙基-β-环糊精，甚至更优选为羟丙基-β-环糊精(HPβCD)，且最优选为HP(Roquette,France)；及
b)该取代的苯并咪唑为噻苯咪唑、麦穗宁、奥苯达唑、帕苯达唑、坎苯达唑、甲苯达唑、芬苯达唑、氟苯达唑、阿苯达唑、奥芬达唑、诺考达唑、艾斯特索或匹莫苯，其可药用盐、衍生物、代谢物或前药，优选为如上所述的匹莫苯或其任一可药用盐、衍生物、代谢物或前药。
该液体制剂所需的醚化的环糊精的量视最终液体制剂的pH值、取代的苯并咪唑及所用部分而定。然而，惊人地发现，将在最终制剂中使用约15-70％(w/v)的醚化的环糊精衍生物(优选为HPβCD)适于溶解治疗有效量的上述任一取代的苯并咪唑。具体地，其显示在最终制剂中使用约15-70％(w/v)的如上所述的醚化的环糊精衍生物(优选为HPβCD)适于溶解治疗有效量的匹莫苯。因此，根据另一方面，如本文中所述的任一最终液体制剂包含约15至70％(w/v)醚化的环糊精衍生物(优选为HPβCD)。优选地，该最终液体制剂的醚化的环糊精衍生物(优选为HPβCD)部分为20-50％(w/v)、更优选为20-40％、甚至更优选为20-30％(w/v)、甚至更优选为22-28％、甚至更优选为23-27％(w/v)、甚至更优选为24-26％(w/v)，例如最终制剂的该部分为15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％(w/v)或其任何分数。
如本文中所述的液体制剂的取代的苯并咪唑部分通常介于0.005％与0.15％(w/v)之间，优选介于0.01％与0.15％(w/w)之间，更优选介于0.05％与0.15％(w/w)之间，且甚至更优选介于0.075％与0.10％(w/w)之间。因此，该部分例如为0.001％、0.002％、0.003％...0.008％、0.009％等；0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％...0.08％、0.09％等；0.10％、0.11％、0.12％...0.14％、0.15％(w/v)。优选地，取代的苯并咪唑为本文中所述的那些中的任一种，优选匹莫苯。
因此，根据另一方面，本发明涉及液体制剂，其包含醚化的环糊精衍生物以及如上所述的取代的苯并咪唑，优选HPβCD及匹莫苯，其中该液体制剂包含：
a)约15至70％(w/v)，优选20-50％(w/v)、更优选20-40％、甚至更优选20-30％(w/v)、甚至更优选22-28％、甚至更优选23-27％(w/v)、最优选24-26％(w/v)的醚化的环糊精衍生物，优选HPβCD；及
b)介于0.005％与0.15％(w/v)之间，优选介于0.01％与0.15％(w/w)之间、更优选介于0.05％与0.15％(w/w)之间，且甚至更优选介于0.075％与0.1％(w/w)之间的如本文中所述的取代的苯并咪唑，优选匹莫苯。
一般治疗有效目标剂量(特别是不仅用于治疗急性充血性心力衰竭，而且可用于本文中所述的其它任一治疗用途)以动物每千克体重计为约0.05至0.5mg匹莫苯，优选约0.1至0.3mg匹莫苯，甚至更优选约0.15mg匹莫苯。药品中匹莫苯的目标浓度应设定为0.75mg/ml，从而允许给药安全且均匀的注射量。举例而言，具有10千克体重的狗可恰好接受含有1.5mg匹莫苯的2ml剂量。因此，根据另一方面，本发明涉及液体制剂，优选注射用水性溶液，其包含如上所述的醚化的环糊精衍生物，优选HPβCD及0.75mg/ml(0.075％(w/v))匹莫苯。更优选地，该液体制剂的醚化的环糊精衍生物部分包含约15至70％(w/v)，优选20-50％(w/v)、更优选20-40％(w/v)、甚至更优选20-30％(w/v)、甚至更优选22-28％(w/v)、甚至更优选23-27％(w/v)、最优选24-26％(w/v)的醚化的环糊精衍生物。最优选的为液体制剂，优选注射用水性溶液，其在最终制剂中包含0.75mg/ml(0.075％(w/v))匹莫苯以及约15至70％(w/v)，优选20-50％(w/v)、更优选20-40％(w/v)、甚至更优选20-30％(w/v)、甚至更优选22-28％(w/v)、甚至更优选23-27％(w/v)、最优选24-26％(w/v)的HPβCD。
液体制剂可容许添加缓冲剂、抗氧化剂(诸如乙二胺四乙酸钠)、等张剂(诸如氯化钠)且适于用作供静脉内和/或皮下施药于动物(尤其狗)内之用的单次使用性可注射溶液。因此，根据另一方面，本发明涉及上述任一液体制剂，优选注射用水性溶液，其包含如本文中所述的醚化的环糊精衍生物(优选HPβCD)以及如本文中所述的取代的苯并咪唑(优选匹莫苯)，其中该制剂进一步包含可药用赋形剂和/或盐。
仅举例而言，标准液体制剂中的赋形剂，特别是本发明的注射溶液中的赋形剂可为葡甲胺(meglumin)、聚乙二醇(macrogol)、泊洛沙姆188(poloxamer188)、对羟基苯甲酸酯和甘胺酸。本发明的制剂可含有络合剂作为其它成份。在本发明的范围内，络合剂意是指够形成络合键的分子。优选地，此类化合物应具有络合阳离子(最优选金属阳离子)的作用。本发明的制剂优选含有乙二胺四乙酸(EDTA)或其一种已知盐、例如二水合乙二胺四乙酸钠或乙二胺四乙酸二钠(乙二胺四乙酸钠)作为络合剂。优选地，乙二胺四乙酸钠任选以其水合物形式、更优选以其二水合物形式使用。若将络合剂用于本发明的制剂内，则其含量以10ml本发明的制剂计优选在1至20mg范围内，更优选在2至10mg范围内。优选地，本发明的制剂以10ml本发明的制剂计含有约5mg量的络合剂。当然，也可使用本领域的技术人员已知的其它赋形剂。
因此，根据另一方面，本发明涉及上述任一液体制剂，优选注射用水性溶液，其包含如本文中所述的醚化的环糊精衍生物(优选HPβCD)以及如本文中所述的取代的苯并咪唑(优选匹莫苯)，其中该制剂进一步含有一种或多种防腐剂，优选选自：葡甲胺、聚乙二醇、对羟基苯甲酸酯及乙二胺四乙酸。
在盐的情况下，此类盐为例如无机盐，诸如氯化物、硫酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、溴化物和/或硝酸盐。此外，本发明的粉末也可含有有机盐，诸如苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、乙基琥珀酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、对甲苯磺酸盐、双羟萘酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、依托酸盐(estolate)、葡庚糖酸(gluceptate)盐或乳糖酸盐(lactobionate)。同时，对应盐可含有可药用阳离子，诸如钠、钾、钙、铝、铵。
然而，本发明所示，该盐可能降低在固定量的HPβCD存在下匹莫苯的溶解度。克服此问题存在两种方式。第一种为进一步增加HPβCD的浓度。另一方式为限制盐的量。已经表明，示例性地，在添加磷酸盐从而产生约 300mOsm/Kg的重量克分子渗透浓度(osmolality)后，匹莫苯的溶解度未受影响。因此，根据另一方面，本发明涉及上述任一液体制剂，优选注射用水性溶液，其包含如本文中所述的醚化的环糊精衍生物(优选HPβCD)以及如本文中所述的取代的苯并咪唑(优选匹莫苯)，其中该液体制剂含有约250至350mOsm/Kg的重量克分子渗透浓度，优选约270至320mOsm/Kg的重量克分子渗透浓度、更优选约280至300mOsm/Kg的重量克分子渗透浓度。本领域的技术人员能够通过本领域中熟知的方式将任一此类液体制剂的重量克分子渗透浓度调节为上述范围。举例而言，包含约24％(w/v)HPβCD及0.75mg/ml匹莫苯的液体制剂可含有10mM碱式磷酸盐(alkali phoshphate)(优选磷酸钠)以将最终液体制剂的重量克分子渗透浓度调节为约290至300mOsm/kg。
本发明的液体制剂的pH值优选介于5.5与8.5之间。具体地，在可注射溶液的情况下，pH值优选介于6.5与7.5之间。可用于将pH值调节为6.5至7.5的优选缓冲系统为例如磷酸盐、乙酸盐及柠檬酸盐缓冲系统。任一此类缓冲系统的制备描述于例如European Pharmacopoeia(2005年第5版，European Directorate for the Quality of Medicines(EDQM)，European Pharmacopoeia，226avenue de Colmar，F-67029Strasbourg，France，http://www.pheur.org)。因此，根据另一方面，本发明涉及上述任一液体制剂，优选注射用水性溶液，其包含如本文中所述的醚化的环糊精衍生物(优选HPβCD)以及如本文中所述的取代的苯并咪唑(优选匹莫苯)，其中在可注射溶液的情况下该液体制剂可调节为pH 5.5至8.5，优选调节为pH 6.5至7.5。
如上所述，本发明的优选实施方案涉及已调节为pH 6至7.5的可注射溶液，其包含如本文中所述的醚化的环糊精衍生物(优选HPβCD)以及如本文中所述的取代的苯并咪唑(优选匹莫苯)。在此种情况下，更优选等张溶液的制剂。
为使取代的苯并咪唑(优选匹莫苯)对所有适宜的适应症实时发生作用(immediate onset of action)，可注射溶液必须通过静脉内和/或皮下途径肠胃外给药。为将药品通过静脉内/皮下途径给药人类或动物，需要水性制剂，具有非水性溶剂的制剂因存在严重耐受性问题的风险既是不可接受的也非现有技术。
因此，根据另一方面，本发明涉及包含如上所述的任一液体制剂的可注 射溶液，亦即供静脉内和/或皮下途径肠胃外给药之用的可注射溶液。将药物在限定时段内连续给药而不以单次注射施药给药可能是有用的。在此种情况下，通过输注给药包含取代的苯并咪唑(优选匹莫苯)的水性溶液是有利的。因此，根据另一方面，本发明涉及包含如上所述的任一液体制剂的输注用可注射溶液。
静脉内给药绝对需要溶液，悬浮颗粒具有高栓塞风险且必须排除在外。与在给药之前必须通过添加稀释剂/溶剂重构的冻干产品相比，优选即用溶液。将欲给药的药品重构将使治疗延迟几分钟，在危及生命情况下必须避免此发生。此外，局部耐受性将视制剂的等张性及pH值范围而定。通常优选约pH 7的中性范围内的pH值，实际pH值偏离此目标值越高，不可接受的局部耐受性的风险可能性越大。
因此，根据另一方面，本发明涉及本文中所述的任一液体制剂，其包含如本文中所述的醚化的环糊精衍生物(优选HPβCD)以及如本文中所述的取代的苯并咪唑(优选匹莫苯)，其中该液体溶液为即用(ready-to use)溶液。即用溶液通常调节为约6.5至7.5的pH值，优选约6.8至7.2的pH值，更优选约7.0的pH值。此外，该即用溶液也经调节为约250至350mOsm/Kg的重量克分子渗透浓度，优选约270至320mOsm/Kg的重量克分子渗透浓度、甚至更优选约280至300mOsm/Kg的重量克分子渗透浓度。惊人地发现，添加产生约300mOsm/Kg的重量克分子渗透浓度的某些盐大大降低取代的苯并咪唑(特别是匹莫苯)的溶解度。然而，本领域的技术人员会了解到，将该即用溶液的重量克分子渗透浓度稍微增至约300mOsm/Kg，例如增至约305至310mOsm/Kg，即可确保取代的苯并咪唑(特别是匹莫苯)的适宜的溶解度。
根据另一方面，本发明涉及如上文所述的液体制剂，其中该制剂包含：i)约20至30％(w/w)HPβCD；ii)约0.005至0.15％(w/w)匹莫苯、其可药用盐、衍生物、代谢物或前药；及任选iii)约0.025至0.075％(w/w)稳定剂，优选EDTA；且其中该液体制剂的pH值调节为约6.5至7.5且重量克分子渗透浓度为约280至300mOsm/Kg。
根据另一方面，本发明也涉及制备如本文中所述的任一液体制剂的制造方法。了解上述任一液体制剂的具体配方后，可根据本领域的技术人员已知的标准步骤制备那些制剂。该方法包括以下步骤：
a)将醚化的环糊精衍生物溶于溶剂中；
b)将取代的苯并咪唑添加至在步骤(a)所获得的溶液中；及
c)将步骤(b)所获得的混合物混合，以获得水性溶液形式的液体制剂。
优选地，该醚化的环糊精衍生物为HPβCD。此外，溶剂优选为注射用水。
根据更优选实施方案，该制造方法包括以下步骤：
a)称取醚化的环糊精(优选HPβCD)，置于制造容器内；
b)添加水至最终体积的约40至80％；
c)使用磁力搅拌器或桨式搅拌器进行混合直至醚化的环糊精溶解；
d)添加任一缓冲组份，用水转移且混合直至溶解；
e)检查pH值以确保其接近设定值。需要时，用氢氧化钠或盐酸调节；
f)添加取代的苯并咪唑(优选匹莫苯)，用水转移且混合直至溶解；
g)用水补足体积。
根据更优选的方面，该制造方法包括以下步骤：
h)将步骤g)的液体制剂过滤且分配于小瓶内；
i)在121℃下将小瓶高压灭菌优选30分钟。
根据另一方面，本发明涉及如本文中所述的任一液体制剂作为药物的用途。优选地，该药物为兽药。甚至更优选地，该药物为注射用溶液。根据另一方面，该注射用溶液为输注溶液。
如上文所述，在有关治疗动物及人类(尤其狗)的急性充血性心力衰竭(急性充血性心力衰竭)的药物领域中存在未满足的需求。因此，如本文中所提供的液体制剂可用于人类及兽医学中，优选用于兽医学中。迄今为止，尚未有用于此适应症的兽药获得许可。因此在危及生命情况下，急性充血性心力衰竭的治疗将为在急性病危急情况下拯救动物生命的重要创新举措。由于药物作用实时发生，因此快速目测动物状态的变化可让兽医与动物主人评估为克服事态所采取的措施是否成功。此外，在经口治疗不可行的情况下，可选择该治疗方式。在麻醉期间维持心血管功能和/或肾灌注的手术期间给药(peri-operative)以及对于休克和/或胃扩张扭转状况的治疗为具实时发生作用的匹莫苯制剂的其它潜在适应症。
因此，根据另一实施方案，本发明也涉及包含本文中所述的匹莫苯的任一液体制剂在制备用于治疗或预防有此治疗需要的受试者的疾病的药物组 合物中的用途，该疾病选自下例适应症：充血性心力衰竭(CHF)、急性充血性心力衰竭、失偿型心内膜炎(decompensated endocardiosis,DCE)、扩张型心肌病(DCM)、无症状性(asymptomatic)(隐匿性(occult))充血性心力衰竭、无症状性扩张型心肌病、麻醉期间心血管功能和/或肾灌注的维持、休克、胃扩张(gastric dilation)、肠扭转(volvulus)、心肌缺血及肾缺血。如上文所述，以动物每千克体重及每次施用计，匹莫苯的一般治疗有效量为约0.05至0.5mg匹莫苯，优选系约0.1至0.3mg匹莫苯，甚至更优选系约0.15mg匹莫苯。优选地，每日给药单次剂量。
根据另一方面，本发明也涉及治疗和/或预防其中强心药、降血压药、抗炎药和抗血栓药具有治疗益处的疾病的方法，该方法包括以下步骤：向有此治疗需要的受试者给药将如本文中所述的治疗有效量的任一液体制剂。优选地，以动物每千克体重及每次施用计，该液体制剂以约0.05至0.5mg匹莫苯的治疗有效量给药，优选以约0.1至0.3mg匹莫苯的治疗有效量给药，甚至更优选以约0.15mg匹莫苯的治疗有效量给药。优选地，每日给药单次剂量。
如上所述，匹莫苯为尤其治疗充血性心力衰竭(CHF)、失偿型心内膜炎(DCE)、扩张型心肌病(DCM)、无症状性(隐匿性)CHF、无症状性扩张型心肌病的公认药物。因此根据另一方面，本发明直接涉及一种治疗和/或预防正在遭受或具有以下病症的受试者的方法：充血性心力衰竭(CHF)、失偿型心内膜炎(DCE)、扩张型心肌病(DCM)、无症状性(隐匿性)充血性心力衰竭、无症状性扩张型心肌病、心肌缺血及肾缺血、休克，该方法包含以下步骤：向有此治疗需要的受试者给药如本文中所述的包含治疗有效量的匹莫苯的任一液体制剂。具体地，以动物每千克体重及每次施用计，治疗充血性心力衰竭的治疗有效量为约0.05至0.5mg匹莫苯，优选约0.1至0.3mg匹莫苯，甚至更优选约0.15mg匹莫苯。优选地，每日给药单次剂量。在麻醉期间心血管功能和/或肾灌注的维持、休克、胃扩张或肠扭转(例如起因于手术、尤其胃肠手术以及外伤)的情况下，该治疗也是有利的。
需要上述任一种此类治疗的受试者为哺乳动物，优选人类或动物。如本文中所使用的术语"动物"包括但不限于伴侣动物(companion animal)，诸如狗、猫、豚鼠、仓鼠、马、牛、山羊、绵羊或其类似动物。优选地，需要该治疗的受试者为狗、马或猫，最佳为狗。然而，需要该治疗的该动物也包括 动物园动物，诸如猴、象、长颈鹿及其它有蹄动物、熊、小鼠及其它小型哺乳动物。
本发明此外涉及试剂盒，其包括
a)具有如本文中所述的本发明液体制剂(优选可注射溶液)的容器，
b)及包括以下信息的包装插页：本发明的液体制剂(优选可注射溶液)欲优选经由注射(皮下或静脉内)而用于预防和/或治疗有此预防或治疗需要的受试者(优选为如上定义的哺乳动物)的充血性心力衰竭。
在治疗动物的情况下，该包装插页优选包括以下信息：匹莫苯欲以如上文所述的剂量使用，该剂量以每千克体重及每次施用计优选为约0.15mg。优选地，每日给药单次剂量。更优选地，包装插页包括如上所述的具体适应症。
根据另一方面，该容器包含2ml、5ml、10ml、50ml或250ml液体制剂。优选地，该容器包含3.75mg、7.5mg或37.5mg匹莫苯。
实施例
以下实例用于进一步示例性地说明本发明；但此类实例不应解释为对本发明所公开的范围的限制。
实施例：1
匹莫苯在不同pH值下、在羟丙基-β-环糊精(HPβCD)存在下的溶解度
在羟丙基-β-环糊精(HPβCD)的多种浓度下且在pH 3、5及7下测定匹莫苯(取代的苯并咪唑)的溶解度。使用HP(Roquette,France)作为医药级的HPβCD。在pH 3、5及7下、在10至40％(w/v)HPβCD存在下研究匹莫苯的饱和溶解度。将溶液用磷酸钠溶液缓冲。利用以下方法制备样本溶液：
a)将约3ml的测试溶液置于配有磁力搅拌棒的7ml玻璃小瓶中； 
b)用盐酸调节pH值；
c)添加过量的匹莫苯。将样本置于超声波浴中且超声波处理5分钟以确保存在过量的匹莫苯，且需要时可添加更多的匹莫苯；
d)将样本置于25℃的水浴中，并搅拌至少16小时；
e)使用0.2μm PVDF针筒过滤器过滤样本；
f)通过HPLC测定样本。 
结果示于图1及图2中。惊人地发现，由于在约5或7的pH值下HPβCD浓度的升高与匹莫苯溶解度的增加之间存在非线性关系，因此含有目标浓度的匹莫苯的溶液可通过使用15％以上的(HPβCD)浓度来获得(参见图1)。此外，意想不到地观测到，通过HPβCD所达到的溶解度提高并未随着pH值降低而增加，而是在一定HPβCD浓度下，在pH 7下的溶解度低于在pH 3下的溶解度，但高于在pH 5下的溶解度。HPβCD浓度(以质量计)的增加与匹莫苯饱和溶解度的增加之间的关系在pH 3为线性关系，但在pH 5和pH 7为非线性关系(参见图2)。
实施例：2
制剂研制
1.羟丙基-β-环糊精(HPβCD)的含量
在pH 7.0下，在10mM磷酸盐缓冲液中，在20至25％(w/v)HPβCD的条件下研究匹莫苯的饱和溶解度。对三批不同的HPβCD进行研究且每种测试溶液一式双份(参见图3)。利用以下方法制备此类溶液：
a)将约3ml的测试溶液置于配有磁力搅拌棒的7ml玻璃小瓶中； 
b)添加过量的匹莫苯。将样本置于超声波浴中且超声处理5分钟以确保存在过量的匹莫苯，且需要时可添加更多的匹莫苯；
c)将样本置于25℃的水浴中，并搅拌至少16小时；
d)使用0.2μm PVDF针筒过滤器过滤样本；
e)通过HPLC测定样本。 
将含量为22至24％(w/v)的HPβCD选用于包含0.5、0.75和1.0mg/ml匹莫苯的制剂。
2.重量克分子渗透浓度：
对于制剂需要等张溶液。含有24％(w/v)HPβCD和10mM磷酸盐缓冲液的制剂具有287mOsm/Kg的重量克分子渗透浓度。添加氯化钠以使重量克分子渗透浓度增至303mOsm/Kg。研究0.75mg/ml匹莫苯在24％(w/v)HPβCD条件下的饱和溶解度，且将结果与不补充氯化钠的那些制剂对比。结果示于图4中。可溶匹莫苯的量由约1.23mg/ml大幅降至约0.71mg/ml。
3.物理稳定性： 
将包含24％(w/v)HPβCD、0.75mg/ml匹莫苯、10mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)的最终制剂样本经由0.2μm PVDF针筒过滤器过滤至两个螺旋盖玻璃小瓶内。一个小瓶在室温下储存且另一小瓶在5℃下储存。最初、一周后及两周后对样本外观的变化以及沉淀的迹象进行评价。观测到外观无变化且无沉淀迹象。
3.过滤研究和高压灭菌研究：
A)将包含24％(w/v)HPβCD、0.75mg/ml匹莫苯、10mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)的最终制剂样本经由三个不同的过滤器(0.2μm(Pall)；0.22μm(Millipore)；及0.2μm(Pall))过滤。对于每次实验而言，将30ml测试溶液置于50ml针筒中，且接着迫使其通过罩有各类型的47mm膜的同轴(in-line)固持器。在取样点1、2、3、4、5、10、15及25ml处收集滤液样本，并分析匹莫苯含量。对于各过滤系统而言，测量到匹莫苯含量没有变化。
B)将包含24％(w/v)HPβCD、0.75mg/ml匹莫苯、10mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)的最终制剂样本经由0.2μm PVDF针筒过滤器过滤，且将滤液在121℃下高压灭菌30分钟。结果示于图5中。当高压灭菌制剂时，观测到仅少量降解。降解物含量极低且表明制剂可经高压灭菌。
实施例：3
制造方法
制备包含HPβCD及匹莫苯的最终制剂的制造方法为：
a)称取HPβCD置于制造容器内；
b)添加水至最终体积的约60％；
c)使用磁力搅拌器或桨式搅拌器进行混合直至HPβCD溶解；
d)添加缓冲组份，用水转移且混合直至溶解；
e)检查pH值以确保其接近pH 7.0。需要时，用氢氧化钠或盐酸调节；
f)添加匹莫苯，用水转移且混合直至溶解；
g)用水补足体积；
h)过滤溶液且分配入小瓶内；
i)在121℃下将小瓶高压灭菌30分钟。
实施例：4
液体制剂
A)

B)

C)


D)

E)