本发明提供一种从蝮蛇毒中制取高效低毒抗栓酶的方法，属于药品的生产方法。 抗栓酶的主要成份是精氨酸酯酶等抗凝、溶栓成份，它具有抗凝、去纤、降脂、溶栓、扩血管、改善微循环、降解血小板粘附与聚集、抗衰老和含有神经生长因子等功能。适用于脑血栓、冠心病、心肌梗塞、血栓闭塞性脉管炎、大动脉炎等常见的缺血性疾病。目前治疗这些疾病的药物很多，但尚无满意疗效。本发明生产的抗栓酶经临床一年余例病人试用总有效率达90%以上，且很少有毒副作用。目前国内外均有以蛇毒提取精氨酸酯酶的报导，并已能化作为药品出售，它们的商品名称分别为：Ancrod、Reptilase、Crotalase、但这些方法均具有生产步骤复杂，生产周期长，产量低，价格昂贵，尤其是组份单一等缺点。
本发明的目的是提供一种从蝮蛇毒中制取高效低毒抗栓酶的制备方法，该方法简便，生产周期缩短，制成的药品毒性低（比江浙蝮蛇抗栓酶低8倍），疗效高，是一种制备方法简便，疗效好的抗凝溶栓药物。
本发明的目地是这样实现的：用Tris-HCl缓冲液溶解干蛇毒，倒入平衡的DEAE-葡聚糖凝胶分子筛层析柱中，第一次用DEAEA-50调整PH，按常规上柱收集有效组分洗脱液，装入透析袋中，置于饱和硫酸胺溶液中，使蛋白完全沉淀。离心去掉上清液，装入透析袋中，置于H2O中，透析去除硫酸胺，将透析好的AE冷冻液干燥备用。第二次用G75上柱，去掉神经毒组分，收集有效组分，装入新的透析袋中，用硫酸胺脱水，沉淀蛋白，离心弃去上清液，再装透析袋中，置H2O透析三天的AE冻干，测定AE活性，按活力加稀释剂，搅拌均匀，除菌过滤，分装冷冻干燥，制成冻干粉剂或水针剂。
以下结合实施例对本发明作进一步说明。
取干蛇毒20克以1∶10的比例溶于Tris-HCl缓冲液中，再倒入已经处理好且已平衡的DEAE-葡聚糖凝胶分子筛层析柱中，用0.005M Tris-HCl做缓冲液进行洗脱，收集约500～1000ml后改换0.005M TrisHCl、0.05M HCl溶液洗脱，分别用分光光度计波长253、280测定，其AE高于0.020以上者收集，装入透析袋中置于硫酸铵溶液中浓缩、离心，去除硫酸胺。冷冻干燥，备用，再用G75装柱后用0.02M NaHCo3、0.2M NaCl平衡液平衡，取1.0～1.3克冻干后AE上柱。用自动收集器收集洗脱液每小时100～200ml，收集后测波长将有活性AE收集置于透析袋中用硫酸胺脱水沉淀蛋白离心弃去上清液，再将沉淀物取出装入透析袋中置H2O透析三天，冻干测定AE活性，按活力加稀释剂，搅拌均匀，除菌过滤，分装冷冻干燥制成冻干粉剂或水针剂。每支抗栓酶含100usp（0.25单位）。
本发明洗脱液的PH值应保持在PH7.4，操作时的温度应控制在12～14℃，防腐剂为10～12万单位/万支庆大霉素。
本发明与现有技术相比有如下优点：
1、由多次或一次上柱改为二次上柱，使生产周期由二周缩短为7天，减少了酶制剂在生产过程中的污染机会，方法简化，制剂疗效提高，副作用少。
2、洗脱液的PH为74，是最佳的条件，可使每克蛇毒制取的800支（每支活力100usP＝025u）保证产品质量。
3、操作必须在14℃温度下进行，保证产品质量。
4、在冷干或水针剂中加用适量的庆大霉素可显著减少蛋白质制品的污染，保证产品质量。
本发明所得产品经下列检验：
一、毒理学实验 LD50（半数致死量）193±1.77u/kg。
比江浙蝮蛇抗栓酶的毒性低8倍，且已除去神经毒素，达到低毒作用。
用组织酶化学光镜、电镜观察证明该药对肝脏无毒性损害。
二、药理学实验
该药具有抗凝、溶栓、降脂、扩血管和改善微循环的作用，其最佳浓度为002u/kg。
用动物狗制成冠状血管血栓模型后用该药，可使冠状血管血栓溶解，且在8小时后同样起到溶解血栓的作用，此点优于脲激酶。
三、该药已治疗脑血栓形成病人667例，总有效率达92.1%，其中急性期172例，有效率达95%，恢复期242例，有效率达88.9%，后遗症期253例，有效率74.0%，与江浙蝮蛇抗栓酶对比，该药的副作用明显减少（前者133人中有72人出现副作用，后者131人中仅有27人出现副作用）。
与低分子右旋糖酐相比治疗效果明显高，（低分子右旋糖酐的疗效为63.3%）。
适应症较江浙蝮蛇抗栓酶多，治疗急性心肌梗塞50例有效率达85%，病毒性肝炎20例有效率85%，血管神经性头痛64例，有效率100%，其中治愈率80.95%。另外对震颤性麻痹、肌萎缩等症也有疗效。
实验室试验还观察到该药含有神经生长营养物质，这是优于江浙蛇抗栓酶的。