以植物细胞为基础的发酵活力增强的细胞制品制备方法及应用.pdf

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摘要
申请专利号:

CN91105974.1

申请日:

1991.08.23

公开号:

CN1062762A

公开日:

1992.07.15

当前法律状态:

撤回

有效性:

无权

法律详情:

|||公开|||

IPC分类号:

C12N5/04; A23K1/16; C12P7/06; C12P7/56; C12P19/32; A61K35/66; A61K7/02

主分类号:

C12N5/04; A23K1/16; C12P7/06; C12P7/56; C12P19/32; A61K35/66; A61K7/02

申请人:

M·撒尔维奥尼;

发明人:

克里斯塔·莱尔; 法兰西斯科·鲁道史·帕瑟尔

地址:

西班牙米诺尔加市

优先权:

1990.12.28 DE P4042157.0

专利代理机构:

上海专利事务所

代理人:

曾建成

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内容摘要

本发明提供以植物细胞为基础的发酵活力增强的细胞制品、制备方法及应用。该制品系经部分脱水且已不再有繁殖能力的植物细胞,它对于厌氧发酵的葡萄糖分解能力至少可提高50%。它可作增强剂特别是放在饲料中,可用于发酵且可用于在含有腺苷及磷酸盐的酵母悬浮液中生产ATP,还可用在生物系统中用作抗氧化剂。

权利要求书

1: 1、用于提高发酵活力的植物细胞制品,系经部分脱水并且已不再有繁殖能力的植物细胞,它对于厌氧发酵的葡萄糖分解能力至少可提高50%。 2、根据权项1的细胞制品,其特征在于它至少含有一种盐类,其阳离子的离子半径最大为
2: 33 (埃)。 3、根据权项1或2之一的细胞制品,其特征在于它至少包含一种碳水化合物源,可选自单醣类、双醣类;多元的醇及它的氧化产物以及配合的混合物。 4、根据权项1至3之一的细胞制品,其特征在于,它包含氮源,可选自蛋白胨、肽类和氨基酸进行配合。 5、根据权项1至4之一的细胞制品,其特征在于,其盐份含量约为总重量的0.2-4.5%(重量)。 6、根据权项1至5之一的细胞制品,其特征在于,将植物细胞经高频场的作用,使部分脱水。 7、根据权项1至6之一的细胞制品,其特征在于,该植物细胞最好在温度30-70℃范围内,至少使部分加热脱水。 8、根据权项1至7之一的细胞制品,其特征在于,植物细胞的平均含水量最高达到原始含水值的65%。 9、根据权项1至8之一的细胞制品,其特征在于,它显示pH值在4.5-7.0范围内。 10、根据权项1至9之一的细胞制品,其特征在于,它可经透析而进行部分脱水。 11、根据权项1至9之一的细胞制品,其特征在于,它可进行喷雾干燥。 12、根据权项1至11之一的细胞制品,其特征在于,它的发酵提高因子至少为2,较好的是在
3: 5-4.0范围内。 13、根据权项1至12之一的细胞制品,其特征在于,可将种子、胚芽或果实作为植物细胞进行脱水。 14、根据权项1至13之一的细胞制品,其特征在于,可将真菌及/或海藻特别是酵母菌用作植物细胞,进行脱水。 15、根据权项1至14之一的细胞制品,其特征在于,制品中总的含水量在10-75%范围内。 16、根据权项1至15之一的细胞制品,其特征在于,,它经层析色谱分析证明它富集4-6个碳原子的α-胺基羧酸。 17、根据权项1至16之一的细胞制品,其特征在于,它富集核苷及/或核苷酸,诸如腺嘌呤核苷或腺嘌呤核苷磷酸以及有据可查的,证实有核酸-基-腺嘌呤,胸腺嘧啶及/或黄嘌呤。 18、根据权项1至17之一的细胞制品,其特征在于,它含有盐类混合物,其阳离子为Na、Mg及Mn族,其中Mg/Na之比约为0.05∶1至0.2∶1,以及Mn/Mg之比约为1∶25至1∶10。 19、根据权项18的细胞制品,其特征在于,Na/Mg/Mn之比约为1∶0.1∶0.005。 20、根据权利1至19之一的细胞制品的生产方法,其特征在于,在有繁殖能力的带有完整的细胞内部水分的植物细胞中至少添加一种盐,其阳离子的离子半径最高为1.33 ,通过将这种混合物进一步匀浆化,同时置于加热作用下,将细胞内部的水分抽出,使含量至少约10-75%,原来状态的水分作100%计。 21、根据权项20的方法,其特征在于在混合物均浆化之前,至少添加一种碳源和一氮源。 22、根据权项20或21的方法,其特征在于经添加4-6个碳原子的α-氨基羧酸,在热处理后,在混合物中补充。 23、根据权项20至22之一的方法,其特征在于经添加核苷酸及/或核酸基础的补充物,在热处理后在混合物中补充核酸。 24、根据权项20至23之一的方法,其特征在于将细胞内部水分抽去的混合物,直至干品含量为25%重量,或干燥物更少。 25、根据权项1至19之一的细胞制品,可用作机能增强剂,特别是放在饲料中。 26、根据权项1至19之一的细胞制品,可用于发酵。 27、根据权项1至19之一的细胞制品,可用于在含有腺苷及磷酸盐的酵母悬浮液中生产ATP。 28、根据权项1至19之一的细胞制品,可在生物系统中用作抗氧化剂。 29、根据权项1至19之一的细胞制品,可用以提高生殖力及男性性功能。 30、根据权项1至19之一的细胞制品,可用于化妆品(整容剂)。

说明书


本发明涉及一种植物细胞制品,当它进入发酵系统时,出乎意料地呈现发酵活力增强,此外,还论及这种植物细胞制品的生产方法以及以特定的目的应用于药物,化妆品及饮食产品。这种制品可用于非一般性的,多种不同用途,且效应特别好。此外也能用于促性欲及皮肤病学方面。也可作为营养剂或可添加于饲料中。

    这种新型的细胞制品有这样的能力,它能增高其他细胞的代谢活力。它对厌氧发酵的葡萄糖分解率至少可提高50%。

    曾有过以动物源制造的制品系列,它能促进机体的细胞代谢。对照德国专利DE-PS1076888、DE-OS  3341840,美国US-PS,3937816及其他。也曾有报告关于酵母对细胞呼吸作用的增强;对照德国专利DE-OS  3402169。然而,人们对厌氧发酵葡萄糖分解能力的影响,特别是对发酵效率的提高作用却至今未曾观察到。

    本发明导致以下的课题,即开发出一种制品,它能加强厌氧发酵葡萄糖的酶分解,并参与发酵过程,提高发酵生产能力。

    可以看出,低级植物或高级植物所产生的植物细胞制品是处在这样一个情况中,当它们部分脱水后-假如他们先前还存在生长能力地话-是不能再复制的了。然而新的细胞制品对有机体能发生影响,并能影响有机体的代谢活力,同样地,它与皮屑的物质交换,以及肠道菌丛,激素的物质交换及其他代谢过程的活力均有极大关系。

    图Ⅰ表示在厌氧发酵试验中,在应用不同溶液组成时的CO2生成和时间的关系。其中溶液(Ⅱ)及(Ⅲ)为本发明实施例所表示的。

    根据本发明所述的明显的发酵增强作用,可以发现,按照开头所述的发酵作用,在厌氧发酵中添加本发明制品,这样,特别是在起始相时期,可使发酵加速。

    图Ⅱ描述通过在培养过程中,ATP的产生和时间的关系。

    图Ⅲ及图Ⅳ显示薄层层析色谱,在图Ⅲ为本发明(实施例Ⅰ)的制品的氨基酸展开图谱,以及在图Ⅳ为起始物质的氨基酸展开图谱,图Ⅲa系描述实施例8的透析液薄层层析色谱,在图Ⅲ及图Ⅳ所测定的氨基酸为丙氨本(1),赖氨酸(2),精氨酸(3),丝氨酸(4),辅氨酸(5),甘氨酸(6),蛋氨酸(7),组氨酸(8),苏氨酸(9),异亮氨酸(10),天冬酸(11),亮氨酸(12),苯丙氨酸(13),色氨酸(14),谷氨酸(15),缬氨酸(16),酪氨酸(17),丙氨酸(18),天冬酰胺(19),4-氨基丁酸(20),2-氨基异丁酸(21),瓜氨酸(23),2-氨基丁酸(25),α氨基葵酸(28)。

    图Ⅴ及Ⅵ可确定的核酸为腺嘌呤(1),腺苷(2)、胞嘧啶(3)、胸腺嘧啶(7)、尿嘧啶(9)、2,6二羟基嘌呤(11)、6-羟基嘌呤(13),肌苷(14),腺苷-5'磷酸(15),2'去氧胸苷5'磷酸(16)、尿苷5'磷酸(17)、胞苷5'磷酸(18),鸟苷5'磷酸(19),肌苷5'-磷酸(20)、黄质核苷5'-磷酸(21)、胱氧鸟苷(24),腺苷2'(3')磷酸(25),鸟苷2'(3')磷酸(27),尿苷2'(3')磷酸。

    图Ⅴ及图Ⅵ显示核酸的薄层层析色谱,图Ⅴ是本发明实施例1的制品;图Ⅵ为起始原料)。

    图Ⅶ显示剖面线面积(PA)以及线长度(LLA)依赖于细胞制品透析液(重量%)的变化百分率(横座标)该图象分析系以例8所指定的配方。

    在厌氧发酵葡萄糖的消耗;为人们理解到作为糖解同时作为发酵反应或者发酵反应链的标志。这是包括在下述发酵的最重要途径。

    (1)酒精发酵

    (2)乳酸生产的发酵

    (3)琥珀酸生产的发酵。

    在酒精发酵中从所周知葡萄糖(1摩尔)和酵母作用后转化成2摩尔的乙醇和2摩尔的CO2。哺乳动物细胞在糖解时的生化反应链最初是相似的,仅仅是最后产品不同。在这里糖解的最后产品为2摩尔丙酮酸(带有3个C-原子)。葡萄糖分解的进行过程已在有关的教科书上得知。对于乳酸及丁二酸发酵是运用丙酮酸使经中间生成的NaOH而达L-乳酸或和CO2加成后NaND和丙酮酸作用而至富马酸以至最后生成丁二酸。

    对于厌氧发酵葡萄糖消耗程序是一系列酶参与的过程,其活性是受外界影响的。很明显,采用本发明的植物细胞制品可使用一个或几个因素影响葡萄糖分解。其中,不能确定个别特殊反应所受到的影响。

    这种产生的影响作用是可以说明的,本发明的植物制品关于它的发酵活力的提高,可进行试验得出所谓发酵提高因子。

    本发明植物制品的发酵活力提高因子(亦即以其1∶2透析液喷雾干燥形式)至少可提高50%(或者说1.5),较佳的是至少2.0,同时可达到更多的,2.5至4.0范围的值。

    发酵活力提高因子是作为在瓦尔堡试验中,在一个给定CO2体积的系统中得到的CO2体积,和在同样系统中未加制品所得的CO2体积之比。该比较的基础是传统的发酵模式。

    发酵活力提高因子的测定是在1只给定体积的瓦尔堡容器中进行,放入由2.5克葡萄糖,0.4克酪蛋白,50毫克MgSO4·7H2O以及50毫克面包酵母,用自来水加至50毫升所制成的溶液。将该室量的测试制品注入,在30℃培养测定与时间有关的CO2的量,再换算到标准状态,同时以对比试验中同样条件,而不加入测试制品,所得的标准状态的CO2量整除。

    该可以测定的本发明制品的发酵活力是极为明显的可从下表(Ⅰ)看出,

    表一

    试样号  发酵提高因子

    (来源)

    对照  1.0

    制品(实施例1)  3.83

    制品(实施例2)  3.63

    图1是在瓦尔堡试验中经历时间和CO2生成的关系,其中有两组对照试验,即是,经过常规发酵而无制品的试液,和没有酵母而用制品的试验,这对发酵并无值得重视的影响。

    溶液的组成如下所述

    溶液Ⅰ:50ml基础料+50mg面包酵母

    溶液Ⅱ:10ml溶液Ⅰ+50微升根据实施例1的制品

    溶液Ⅲ:10ml溶液Ⅰ+50微升根据实施例2的制品

    溶液Ⅳ:10ml基础料+50微升根据实施例1的制品

    溶液Ⅴ:10ml基础料+50微升根据实施例2的制品

    基础料的组成已为前述,它用于标准试验中求取发酵活力提高因子。

    可以设想,本发明制品具有一个或多个因素,这些因素在厌氧发酵中有促使葡萄糖分解活力提高的使用。厌氧葡萄糖分解中产生ATP(厌氧葡萄糖分解作用的能量平衡总计为2ATP),所以细胞以ATP形式提供大量能量,因而在ATP参与下所进行的反应,在厌氧发酵葡萄糖分解时,可使反应效应提高。并且它对厌氧葡萄糖分解及需氧的系列反应均产生积极的影响。

    以上也许可能是一个线素来阐明本发明的植物细胞制品的各种作用。

    根据本发明的植物细胞制品显示出,在适当的系统中对ATP的生产具有出乎意料的明显的影响,例如,在含有葡萄溏及磷酸盐的酵母悬浮液中。

    当人们用1克面包酵母,4.0毫升磷酸缓冲液(pH7.4),0.1毫升细胞制品(如实施例1所制),1毫克葡萄糖酸镁及0.1毫升硫酸镁,在30℃培养60分钟,然后加入2.0毫升以30毫克腺苷及200毫克葡萄糖所组成的溶液。同时将该混合物在37℃调节pH为7.4,培养270分钟,在一定时间后可看到ATP的产生,其时磷酸盐及腺苷含量相应的降低。在图Ⅱ中是在90'、120'、180'、240'及270'测定的ATP生成增加的结果。其时,试样以合适的方式参加工作,每次进行ATP的生成量,及腺苷的耗损量及磷酸盐减少量的测定。如无本发明的细胞制品加入,在同样条件下,实际上不能测得ATP的生成量(图Ⅱ中用虚线表示)。

    这样,加入植物细胞制品,使本发明开拓了一条特别简单和经济可行的途径,即在酵母悬浮液培养基中加入腺苷及磷酸盐,用生物化学方法生产ATP。用相似的方法也可制备其他核苷酸,如GTP,CTP,及TTP。

    重要的是,植物细胞须部分脱水,众所周知植物细胞可在一定条件下把一部分细胞内的水份抽去,这里可采取多次沉淀,通过皱缩过程使细胞体积缩小。大部分的子束菌纲属一般具有弹性很足的细胞膜,所以在排出水后细胞缩小,该过程也可称作“反膨胀作用”。利用脱水方法在确定条件下关于细胞组成物也可进行化学变化,以可能导致释放或形成活性因子,这在那方面可有系统中施加催化效应或以别的方法可解释的效应。这样使厌氧发酵的葡萄糖分解。细胞组份的化学变化是可控制的同时也可清楚地表明的,如果同时发生热效应,渗透效应及/或通过一定化学物质发生的效应。人们也提及化学渗透热的质壁分离方面的问题。当同时使用渗透,加热的水份抽出的条件并产生效应,改变程度是最大的。

    已证实特别有利的是在含有0.5至2.5%无机或有机盐,包括单糖、双糖及寡糖系列的碳水化合物以及至少一元或多元醇类的植物细胞悬浮液中,应用微波作用使抽出植物细胞的水份,两种微波范围是特别能良好地应用的,其辐射频率是10至45MHz及400至2500MHz。

    植物细胞制品的水含量应减少至原来水含量的约65%,或更低的数值,如50%,40%,最好是少于30%,的是特别有利的。另一方面,对于发展新型性能,其水份适宜小于10重量%。

    有机盐及无机盐的作用是不同的,须要指出的是盐带有小的阳离子,它的离子半径不能超过一定的值,主要活性物质是作为阳离子-阴离子对,带有较大阴离子,最佳的一组阳离子是铍、镁、钙、锶、锰、锂、钠及钾。最好是应用三种不同阳离子的盐类混合物,它们的阳离子是Na,Mg,Mn族,重量比为Na/Mg/Mn约为1∶0.1∶0.05是特别合适。作为阴离子无机性的为氯,硫酸根,磷酸根,碳酸根,或有机的如乙酸基、丙酸,丙烯酸,苹果酸(Molert),富马酸,琥珀酸,柠檬酸,葡萄糖酸的基,盐的含量约为0.8至50%(重量)的范围。表示为无水的盐以及涉及制品中的干燥物质。

    活力特别高的本发明细胞制品,在典型的方法中含有可变含量的氨基酸和/或核酸,部份是富集的O-氨基羧酸。如O-氨基丁酸或2-氨基丁酸。值得注意的是核酸基的存在,如腺嘌呤,胸腺嘧啶及2,6-二羟基嘌呤。通过外部加入的方法而不增加有4-6个碳原子的O-氨基羧酸的含量及/或核苷和核酸基的含量,这是允许的,有时也是有利的。

    在图Ⅲ至Ⅵ是一个起始物质和本发明制品(实施例1)的相应的薄层层析色谱图,其中没有辅助材料。令人惊奇的是,非典型的氨基酸及核组份经外部添加,能最佳地得到一种植物细胞制品同时其活力能明显提高。

    本发明植物细胞制品的特性是肽类含量高至少大于1重量%(干物质计),根据这样高的肽类含量,使本发明的细胞制品促进了其抗氧特性,这样可作为天然的防腐材料,可以全部或至少部份替代苯酚类抗氧剂。肽类含量高的制品,可能与蛋白质分解产品的存在有关。将氨基酸,肽类的含量,提高到超出天然的量是可能的。对于蛋白质,氨基酸及蛋白水解物可参见S.J.Bishov及其合作者[Food  Res,25174(1961);J.Food  Aci  16,198,(1961)及Food  Tech  nol.21,148A(1967)已经阐明的抗氧化活力。

    人们应用由S.J.Bishov及A.S.Hennicd在J.Ammer,oil  Chem,soe.43,477(1966)所术的方法,在一套模型系统中采用50毫升水,1克羧甲基纤维素,1克玉米油(不含维生素E),包括10%本发明实施例1的细胞制品在一只250毫升圆底烧瓶内高速搅拌3分钟,然后冷冻干燥,即可很好地证实这一抗氧效应。将冷冻干燥的残余物在65℃用分子氧气处理,直至140小时后才有50%氧化,以同样组成但不含本发明的细胞制品,在24小时即省50%氧化(以50%氧消耗量计)。

    图Ⅲ及图Ⅳ表示细胞制品中所含氨基酸图谱,该图谱显示了本发明制品和对比物质的薄层层析图。图Ⅲa是细胞制品透析物的薄层析图谱与图Ⅲ略有区别。

    本发明的植物细胞制品显示出有一种促性欲作用,该作用可借助于雄鼠(大鼠)的试验证明使用根据实施例1加2的制品)。

    对交配不特别感兴趣的雄鼠,每天对其给予0.1克/公斤体重剂量的细胞制品,共14天。从第九天起,该雄鼠与不给细胞制品只给普通饲料的对照组比较,射精次增加数。该效果能维持2星期,如果继续用细胞制品处理,效果能持续不断。

    在另一用大鼠进行的试验中,通过在饮水中加入圆酵母-酒精酵母,以抑制雄鼠的性交能力,这是很久以来从文献中已知的,可参见R.Rienschneidn  Milt  physio  log-chem,Institut  Borlin  1946。该抑制的男性交能力可通过给予本发明细胞制品(根据实施例1)而得到提高,这样又重新可上升到正常水平。

    可以设想,上面所提到的效应与所观察到的生源性胺类(多巴胺,酪胺及其他)的吸收障碍密切相关。基于这一原因,本发明的植物细胞制品也适用于老年男性,同时可阻止由于年老引起的大脑中多巴胺浓度的降低,从而提高其性欲。

    本发明的细胞制品一般也可视作一种机能增强剂。向种植物的注水中加入1或2%(重量)本发明植物细胞制品,然后有规律地用这种经改进的水浇注种植物,与用普通水浇注的植物及花卉比较,其生长力显著增强。

    这种以本发明的植物细胞制品对哺乳动物有增强机能的作用,甚至可以归入有增强机能性质的抗应激类药物,可从下列2项研究中说明。

    a)在马饮料槽的饮水中,加入0.2%细胞制品,经短时间后,显示该动物的食物吸收及饲料利用明显改善。该动物显得恬静,毛色发亮,体型符合机能强健动物。所得到的结果是,当向动物饲料中添加细胞制品后,能达到起兴奋作用的效果。

    b)在游泳试验中,处于有生命威胁的应激状态中的小鼠,与未给予本发明细胞制品的动物比较,其生存能力明显改善。

    本发明的细胞制品,可从放绿菌细胞制取(如酵母细胞制品)。由于其具有较高的代谢活性和增强机能的作用,显示出对饲养动物(鸡、猪、绵羊、牛、鱼特别是年轻的动物)有明显的生长效应,可由下列实施例说明。

    实施例1

    一种用酵母液(100公斤,20%固体含量)和1.5公斤盐(NaCl,MgCl2,MgSO4重量比约为6.5∶0.3∶0.7)在60-70℃处理片刻,得细胞制品(实施例1),冷却后将pH值调节为5.5。薄层层析色谱图在图Ⅲ描出。它有明显的胺基酸指纹图谱,特别显著的是含有2-氨基丁酸,该酸在初始产品中不能检出。

    这种制品的发酵提高因子为约3.8。该细胞制品的透析液显示发酵提高因子为3.7。

    实施例2

    采用如例1的制备方法,取100公斤压缩酵母及2公斤盐制取细胞制品,采用同样的色谱层析法证实2-胺基丁酸含量为3.6。

    从试验室研究转移至中间试规模,所得结果完全可重演(参见下述)。制品溶液经温和条件下蒸发或喷雾干燥;将干燥物质重新配成溶液并在发酵系统检验,其发酵活性提高指数实际上未变。

    在中间试验中采用3种试验系列,每种用100公斤甜菜糖蜜并用各种不同添加物,在32℃发酵。在最后体积为500升中,发酵添加物接近100公斤。甜菜糖蜜及2.5公斤(具有约27%HTS)的酵母。

    试验系列A:从实施例1的制法,产品为15公斤;

    试验系列B:没有添加物;

    试验系列C:酵母自溶物15公斤。

    发酵在pH值为5.3时进行发酵,经5及10小时发酵后pH值为5.0。在发酵过程,通过追踪CO2取出的称量。所确定的结果参见下表。

    表一CO2取出量(kg)

    在下列小时内  试验系列

    A  B  C

    5  2.20  1.37  1.71

    10  18.20  11.73  14.01

    实施例3

    用一只橱房用混合机把10公斤土豆搅碎再混入5升自来水,再加入150克盐,将混合物加热,至不超过40℃,经较长时间作用后,将所得悬浮液喷雾干燥。在发酵试验中进行测试。发酵提高因子为100%(2.1)。

    将土豆悬浮液似前处理,制品中加入2-氨基丁酸(L-型)发酵提高因子为2.3。

    实施例4

    将10公斤大豆胚芽粉碎并用水混和,然后,向其中加入160克盐,并将混合物在35℃加热4小时。喷雾干燥作发酵试验。它显示发酵提高因子为2.5。

    再用大豆胚芽作进一步试验,用上述操作方法并加入下列盐类或盐类混合物处理,在含有添加的重量为150克:

    葡萄糖酸钙/氯化钾(1∶10)

    苹果酸镁/硫酸钠(1∶0.75)

    氯化锂/醋酸钠(1∶5)

    氯化锂/氯化镁(1∶5)

    氯化锰/氯化钠(0.1∶5)。

    不管发酵活性提高因子的变化(从1.8至3.3),于正常的厌氧发酵中无论怎样均会显示出有效的影响作用,可与不加制品或面包酵母的相应试验作对照比较。

    实施例5

    将270克大豆胚芽放在一只厨房用混合器中搅碎,加入250毫升蒸馏水混合,然后加入一种稀的对一羟基苯甲酸脂溶液(0.01%)放置,并以250克上述混合物用一只超速-Tourries-均浆器在20,000pm时进行10分钟匀浆化。再在38℃水浴中向混合物加入按比例9.9克NaCl,1.6克MgSO4及5毫克MnSO4,再将混合物继续搅拌。开始时混合物稍稍液化,将水浴温度提高至约62℃,并在61℃持续搅拌1小时。一小时后将混合物缓缓冷却,其时将其从水浴中取出,使冷至室温。可用细胞制品或干燥产品的浴液进行发酵试验。其发酵提高因子为2.9。

    实施例6

    向100公斤植物细胞混合物中,例如从10%土豆汁及90%酵母液(固体含量22%),加入1.2kg混合盐类,它含有5%蔗糖,5%硫酸镁,89%氯化钠及1%硫酸锰加琥珀酸钠(1/10之比),并快速加热至57℃。进一步搅拌并使之冷却,以后再加入足够的防腐剂。上述悬浮液显示有较高的物质代谢活性。

    1)发酵提高固子:2.9;

    2)呼吸提高因子,根据豚鼠肝脏匀浆显示(=1.0):3.1;

    3)鱼群的生长试验:(4天龄)在正常饲料中添加上述实施例的0.2%悬浮液,3星期后观察用细胞制品处理的动物和对照组比较(对照组食料中未加细胞制品),增重20%。

    4)生长刺激试验,用2天龄的小鸡,放在良好的单独培养环境,将以上实施例中的细胞制品悬浮液2份,喷入甘油水(98份)中(重量比2∶4∶94),令其作用45分钟。接着饲养50天,与未喷入悬浮液的对照组比较,增重量3%,动物的死亡减少7%。

    在第二试验中,在喷射后再给予小鸡含0.2%细胞制品的饲料,50天后与对照比较,增重12%,在进一步试验中增重17%。每次试验动物数为每组10,000只。上述增加值系统计平均值。

    5)南非爪蟾性交能力的提高:性成熟的蟾蜍类动物性交时会引起常见的并发症且要求在正常情况下以一种激素处理。将这些实施例中的细胞制品放入性交动物所生存的水缸的水中与以激素处理比较可得到较好的生殖力效应。

    表:生育的卵子数

    试验次数  试验组  对照组

    (加入0.4%细胞制品)  (用促性腺激素处理)

    1  2050  1200

    2  710  308

    3  1100  810

    4  330  28

    5  709  577

    6  810  670

    7  222  66

    8  406  377

    实施例7

    将3公斤白甘蓝放入厨房用混和机搅碎;其中加入0.5公斤圆酵母和1.0公斤酒精酵母并加入3000毫升水,进行良好地搅匀。并用0.1%尼泊金防腐,再用一只超速-Turrax混合器在20,000rpm下混合12分钟使成匀浆。加入35克混合盐类(相当于在例6中的组成),并搅拌30分钟,然后加热至40℃。紧接着加热至63℃将混合物浸入深冷浴中,在搅拌下使快速冷却至15℃。在25℃真空蒸发浓缩至60%体积。该悬浮液在瓦尔保(Warbarg)试验中显示发酵增强因子为2.8,以及呼吸增强因子为3.5。呼吸增强因子相对肝脏匀浆用文献中已知方法进行测定。

    实施例8

    将500克黄豆胚芽在一只混合器中搅拌,浸入10公斤94er酵母(酵母菌)加30升水)的悬浮液中并紧接着加入0.5公斤NaCl,苹果酸镁及硫酸锰的盐类混合物(1∶0.08∶0.004重量比)并经剧烈搅拌(涡轮式混合器)下逐渐加热,也观察到有自身发热现象。将冷却的用0.1%尼泊金防腐的细胞制品注入透析管,比例为1∶2(内部/外部;外部为0.1%尼泊金及蒸馏水组成的尼泊金溶液)在15℃透析二天。

    外部的透析物具有下列性能

    pH  5.5

    干残渣  41%

    含N  0.2%

    含肽类  大于0.25%

    发酵增强因子  2.5

    呼吸增强因子  2.8

    薄层层析  见图Ⅲa

    采用这些透析物经相应的处理可得到无热源制品,可用其进行以下的试验,由于这些制品的特性可用作化妆品的添加剂。

    巴德堡(Padberg)试验:

    在巴德堡试验中可借助于亚甲蓝的量求取皮屑粗糙性的值。亚甲蓝依赖于皮屑的条件被皮肤吸收。

    从“主体的粗糙皮肤”或“被表面活性剂”损害的皮肤的研究,得出皮肤吸吸亚甲蓝的量和皮肤粗糙度是成比例的。经良好处理的皮肤(例如用油膏处理)只吸收小量亚甲蓝。

    马德堡试验可进行如下的工作:

    1)确定试验场地;

    2)用1%非离子化表面活性剂液进行预处理;

    3)用热水(34℃)冲洗试验场地;

    4)将试验场地擦干净;

    5)使主体受试者在22℃相对湿度65%适应环境30分钟;

    6)在30秒钟内涂上20毫升显色溶液,该溶液含有20%的0.5%亚甲蓝及80%的1%非离子化表面活性剂;

    7)涂上染色剂后干燥40秒钟;

    8)将上面剩余的染色剂用0.25%的非离子化表活性剂液洗去;

    9)用2.4%月桂酸钠,48.6%纯水,49%异丙醇所组成的月桂酸钠溶液洗脱,每次2ml在60秒钟内洗脱2次;

    10)用一只分光光度计在660nm测定洗脱液的吸光值。

    11)结果:未处理皮肤的吸收值;

    12)一只试样须每天处理贰次,即早晨晚上各一次,重复20天,在受试前三天及受试期间,受试人员应该不用其他化妆品;

    13)在第21天,求值前4小时须完成操作步骤1至9;

    14)皮肤粗糙度%= (涂以药物后的吸收值)/(未处理皮肤的吸收值) ×100

    下表系对每一人员在涂以药物之前及之后的吸收值比例%。这些指出,所有制品有非常有利的作用

    表:在巴德堡试验中,采用含有1%细胞制品透析液(如例8已去臭味)的w/o油膏对皮屑的作用(平均值)。

    受试人员年龄  采用含细胞制品透析液的w/o油膏  安慰剂

    50  59.5  92.4

    40  60.6  96.6

    59  55.8  90.4

    46  58.7  95.0

    47  64.6  76.7

    43  48.0  80.1

    61  40.7  76.6

    66  70.4  79.9

    49  62.0  90.1

    图象分析:

    采用不同浓度的含细胞制品的乳化液制品对人体皮肤表面结构的影响

    为了进行试验,将30位受试者年龄在40岁至63岁进行培养训,她们被告知:在开始试验前4天,和在受试期间在测试者前臂测试区不能用其他化妆品。每一受试者的两只前臂胡4个试验区,每只前臂两个区并作好记号。这种制品在30个受试者每个分成四个受试区施药。

    除了试验用乳化液区,空白试验区将用以测定空白试验值在两个星期内的早晨及晚上受试者应用制品及对照物(安慰剂)。最后一次应用之后的4个小时作图象分析试验。

    方法:受试者在22℃空调环境和65%相对湿度下45分钟之后在身上试验区上涂上一种硅油,厚度为500微米,并在试验区揿压。印入物在2分钟内硬化。在2星期后把同样的操作再重复一次。所得到的印入物通过透视显微镜用图象分析计值。用一只电视摄像机在计算机内把图像经电子转化,使之在显微镜内现出一个图形的黑暗的断面线(相应参数PA=断面线面积,断面线的平面)而它在图形中的长度(作为总长度参数LLA=线长度)可被测定。

    这种图像分析方法包括相对的肉眼可见的皮肤表面特性,即是在干燥及增湿过程中出现的断面线的变动,剖面图的贫化,表示在皮肤干燥时PA及LLA的减弱,当增湿时出现相反的效应。剖面图将足够的断面线,在最后应用产品4小时后,可消除产品本身叠加的“涂油润滑效应”。这样在每一个时间点上可测量皮肤剖面图。在图Ⅶ中显示PA和LLA的变动百分率和实施例8的细胞制品(透析液)的浓度的关系。可有充分数据查明,是可用统计学计值,每一个皮肤印模可取得5个图象(在不同的位置),所以这样可在未处理的时间点上和已处理的时间点上求得每一个残余的物质浓度PA和LLA数据,并储存起来(总计大于2000个数据)。这些数据常常不能满足正常分配的条件,而将未处理数据对每个产品以成对方式,在一个W1Lcoson-余项下就其重要的区别进行试验,求得对于每一个产品用于30受试者的参数PA及LLA的平均值和标准偏离。其时算出“未处理”对“已处理的”变动百分率,以及确定了空白值的纠正数(参见图Ⅶ)。采用从实施例8的细胞制品(透析液)的1.5%及2%的配方显示出皮肤结构有明显改善。PA数据表示出一个较佳的差别。

    实施例9

    向50公斤酵母液(啤酒酵母,固体含量为19%)及100公斤压缩酵母(35er面包酵母)中加入2.6公斤的混合盐,它包括86重量%碱金属氯化物,8重量%碱土金属硫酸盐,5重量%蔗糖及1重量%的其他的盐类周期表中7族及/或8族的金属硫酸盐以及琥珀酸钠;例如MgSO4/琥珀酸钠/硫酸钴之比为1∶8.0∶0.001),及0.9升线粒体萃取液(MitoplassolR含有0.75重量%线粒体抽提物固体);在搅拌下加热至61℃。经在约58℃搅拌50至200分钟后使之冷却。将该酵母细胞制品悬浮液在4℃下保存。产量:148升。

    一部份这种细胞制品悬浮液用作小鸡的饲养研究。一如下所述:在这里将该悬浮液用喷雾器喷洒。将大部分的细胞制品-悬浮液在喷入热的转筒中进行干燥;这样成为粉末,它显示9重量%的水以及其总组成基本上相当于干酵母的组成。这种固体产品以0.18%(重量)混入鸡饲料中。

    饲养研究:

    以两组小鸡,每组100,000动物进行研究,第一组100,000小鸡作为对照组,第二组包括100,000只试验动物,将根据上述实施例的酵母细胞制品以固体/液体型式施用。

    根据实施例使用液体酵母细胞制品,对100,000鸡用喷雾器喷洒,这样除了食用饲料之外还能吸入细胞悬浮液的微粒。当小鸡为2天龄时,作一次喷洒处理,紧接着的46天给予含0.18重量%的固体酵母细胞制品的饲料。

    与对照组比较,试验组的鸡显示出增重约为1.4%,同样地营养物消耗显示出经济效益的改善,一可用公斤营养品/公斤体重来表示:

    试验组  2.29

    对照组  2.61

    试验组的死亡率为3.1%,相对于对照组的死亡率为8.5%。

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本发明提供以植物细胞为基础的发酵活力增强的细胞制品、制备方法及应用。该制品系经部分脱水且已不再有繁殖能力的植物细胞,它对于厌氧发酵的葡萄糖分解能力至少可提高50。它可作增强剂特别是放在饲料中,可用于发酵且可用于在含有腺苷及磷酸盐的酵母悬浮液中生产ATP,还可用在生物系统中用作抗氧化剂。。

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