草本水杨梅的制备亚硝酸盐清除剂用途.pdf

本发明涉中药领域，特别涉及一种草本水杨梅的制备亚硝酸盐清除剂用途。该草本水杨梅亚硝酸盐清除剂对亚硝酸根具有较强的清除能力，可进一步开发为用于长期吸烟（吸烟促使致癌物质烟草特异性N-亚硝酸盐分泌到胆管）或其它亚硝酸盐高摄入人群，降低其癌症发病率，以及针对亚硝酸盐中毒的食品、保健食品或药品，其对亚硝酸根的清除能力与维生素C相当。

1.  草本水杨梅在制备亚硝酸盐清除剂中的用途。

草本水杨梅的制备亚硝酸盐清除剂用途
技术领域
本发明涉及中药领域，特别涉及亚硝酸盐清除剂。
背景技术
亚硝胺（NAS）是人和动物的强致癌物质，一般可通过食品和饮品进入机体内。近些年来胃癌，食道癌，鼻咽癌和膀胱癌等癌症疾病频发，其与机体内的N-亚硝基化合物的含量有直接性关系。其中N-二甲基亚硝胺（NDMA）是食品中最常见的致癌的NAS。二甲胺（DMA）和亚硝酸盐是致癌NDMA的直接前体。而二甲胺，二乙胺，三甲胺和三甲胺氧化物多存在于鱼类和海洋生物中如鱿鱼，章鱼等。在食物中，亚硝酸盐几乎存在于所有腌制品、肉类制品、泡菜及采收以后的蔬菜中，亚硝酸盐也常被用作食物防腐剂，亚硝酸盐每天都会随着粮食、蔬菜、鱼、肉制品、蛋奶的摄入而进入人体。蔬菜中亚硝酸盐的平均含量大约为4mg/kg，肉类约为3mg/kg，蛋类约5 mg/kg，豆粉的平均含量可达10 mg/kg，咸菜中的平均含量也在7 mg/kg以上。另外，主要来源于蔬菜和蔬菜制品的硝酸盐，其本身基本是无毒的，但硝酸盐摄入量的5%会在口腔中转化为更毒的亚硝酸盐，而亚硝酸盐可与仲胺在胃的酸性条件下生成NAS。
此外，摄入过量亚硝酸盐引起的中毒叫做亚硝酸盐中毒，又叫紫绀症、肠原性青紫病等。本病发病急，病情发展快，主要表现为全身乏力、心慌、气短、腹胀、口唇及指甲青紫；严重者出现痉挛、抽搐、血压下降、大小便失禁及昏迷等，若抢救不及时，则易造成死亡。
目前也有许多调节内源性N-亚硝基化合物的化学催化剂，如硫氰酸盐等；也有抑制剂，如抗坏血酸（Vc），烯丙基硫化合物等。对天然药用植物的清除亚硝酸盐或其前体的作用也有一定的报道，如果某种药用植物具有清除亚硝酸盐或其前体的作用，那么这种植物就可能具有防癌的作用。研究表明，金樱子、肉苁蓉、淫羊藿、山楂、桑白皮、洋葱、苹果等均对亚硝酸盐具有清除作用。但上述物质清除亚硝酸盐，或不能克服高温失效的问题，或清除作用不强，或用量偏大。
我们在对长白山地区的近百种植物活性筛选过程中，发现了几种具有较强亚硝酸盐清除活性的植物，其中就包括草本水杨梅。
蔷薇科水杨梅属植物草本水杨梅Geum aleppicum Jacq.，以全草或根入药。味辛、甘，性平。清热解毒，消肿止痛。用于肠炎，痢疾，小儿惊风，腰腿痛，跌打损伤，月经不调，白带；外用治疔疮，痈肿。产于黑龙江、吉林、辽宁；内蒙古、山西、陕西、甘肃；新疆、山东、河南、湖北、四川、贵州、 云南、西藏。生在山坡草地、沟边、地边、河滩、林间隙地及林缘，海拔200—3500米。目前关于草本水杨梅的生物活性、产品开发的文献报道较少，关于草本水杨梅的亚硝酸盐清除活性的研究更是空白。
发明内容
基于以上原因，本发明的目的之一是提供草本水杨梅或其提取物的新应用，该应用解决了亚硝酸盐的清除问题。
为了实现上述目的，本发明的技术方案为：
草本水杨梅或草本水杨梅提取物用于清除亚硝酸盐的应用。
本发明的目的之二是提供草本水杨梅或其提取物的另一种应用，该应用为治疗由亚硝酸盐引起的疾病提供一种新的食品、保健食品、药品。
为了实现上述目的，本发明的技术方案为：
草本水杨梅或草本水杨梅提取物用于制备清除亚硝酸盐的食品、保健食品、药品的应用。
所述的草本水杨梅或草本水杨梅提取物用于制备清除亚硝酸盐的食品、保健食品、药品的应用，可以通过下述方法制备：
1. 取草本水杨梅，干燥，粉碎，制成片剂、胶囊剂、散剂、丸剂等药学上可以接受的剂型。
2. 取草本水杨梅，以水或乙醇等溶剂提取，浓缩至干，得到草本水杨梅提取物，以该提取物为原料，附加药学可以接受的辅料，制成片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、软胶囊等药学上可以接受的剂型。
3. 取草本水杨梅，以水、乙醇等提取，浓缩至干，得到草本水杨梅提取物，以该提取物为原料制成液体饮料、固体饮料等食品、保健食品可以接受的形式。
具体实施方式
为了更详细的说明本发明，给出下述制备实例。但本发明的范围并不局限于此。
实施例1：草本水杨梅清除亚硝酸盐的应用
1. 草本水杨梅亚硝酸盐清除剂的制备
收取新鲜草本水杨梅，阴干，以75%乙醇超声提取三次，每次30分钟，过滤，合并滤液，蒸干，粉碎，制成硬胶囊制剂。
2. 草本水杨梅清除亚硝酸盐活性研究
2.1 材料和方法
2.1.1 实验材料
原料：草本水杨梅亚硝酸盐清除剂。
试剂：Vc、对氨基苯磺酸、盐酸萘乙二胺、亚硝酸钠、磷酸氢二钠、柠檬酸、乙醇等试剂均为分析纯。
仪器：电子天平，旋涡混合仪，数控超声波清洗器，自动酶标仪。
2.1.2 实验方法
2.1.2.1 供试品溶液的制备
取草本水杨梅亚硝酸盐清除剂内容物5 mg，精密称定，加400 μL 磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液（pH = 3），使其全部溶解，其浓度为10 mg·mL^-1，备用。
2.1.2.2 亚硝酸根清除实验试剂的配制
a. 0.4 %对氨基苯磺酸溶液的制备：准确称取0.4 g对氨基苯磺酸，用20 %盐酸定容至100 mL，混匀，避光保存，待用。
b. 0.2% N-1-萘乙二胺盐酸盐溶液的制备：准确称取0.2 g N-1-萘乙二胺盐酸盐，用蒸馏水定容至100 mL，混匀，避光保存，待用。
c. NaNO₂标准液 (50 mg·L^-1) 制备：精密准确称取干燥的NaNO₂ 0.005 g，用蒸馏溶解，定容至100 mL，待用。
2.1.2.3 在体外模拟胃液pH条件下的NO₂^- 清除反应
将供试品溶液稀释成5.0、1.0、0.2、0.04、0.008 mg·mL^-1 5个不同的浓度，准确取50 mg·L^-1的NaNO₂标准液1.0 mL于两支10 mL比色管中，其中一支加入2.0 mL 供试品提取液，而另一支则不加；另取一只比色管，仅加入2.0 mL 供试品提取液而不加NaNO₂标准液；分别向上述三只比色管中加入2.0 mL蒸馏水，用pH 3.0的柠檬酸钠盐酸缓冲液定容至10 mL，置于37℃水浴1 h；取出冷却至室温，准确吸取上述液体1.0 mL加入10 mL比色管中，加入0.4%对氨基苯磺酸2.0 mL，摇匀，并于5 min后加入0.2 % N-1-萘乙二胺盐酸盐1.0 mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀静置15 min后于538 nm波长处测定吸光度。清除率/%=[ A₀ - ( Aa – Aa₀)]/A₀ * l00
式中：A₀为未加供试品溶液体系的吸光度，Aa为加入供试品溶液反应体系的吸光度，Aa₀为供试品本底反应体系的吸光度。亚硝酸根清除率用IC₅₀表示，IC₅₀ 为对亚硝酸根清除率达到50%时供试品溶液的浓度。
2.1.2.4 维生素C（Vc）对NO₂^- 清除作用
将Vc 配置成浓度为0.1、0.3、0.6、1、1.5、2 mg·mL^-1的溶液，按2.1.2.3项下测定其对NO₂^- 的清除率。
2.1.2.5 数据统计分析
实验数据用平均值±标准差表示(n=3)，运用ORIGIN软件计算IC₅₀值，IC₅₀值越小, 表示其清除NO₂^- 的能力越强。
2.2 结果与分析
通过以上实验，测定的草本水杨梅亚硝酸盐清除剂内容物对亚硝酸根的清除率IC₅₀为0.298±0.045 mg·mL^-1，而相同条件下Vc对亚硝酸根的清除率IC₅₀为0.267±0.036 mg·mL^-1，草本水杨梅亚硝酸盐清除剂对亚硝酸根的清除能力与Vc相当。
2.3 结论
草本水杨梅亚硝酸盐清除剂对亚硝酸根具有较强的清除能力，可进一步开发为用于长期吸烟（吸烟促使致癌物质烟草特异性N-亚硝酸盐分泌到胆管）或其它亚硝酸盐高摄入人群，降低其癌症发病率，以及应对亚硝酸盐中毒的食品、保健食品或药品，其对亚硝酸根的清除能力与Vc相当。
实施例2：草本水杨梅软胶囊的制备
收取新鲜草本水杨梅，阴干，以乙醇超声提取三次，每次30分钟，过滤，合并滤液，蒸干，以大豆油作为溶解超声混悬复溶，制成软胶囊。
实施例3：草本水杨梅袋泡茶的制备
收取新鲜草本水杨梅，阴干，粉碎、过40目筛，24目筛筛选，紫外线灯杀菌，机械装袋，包装，喷印日期，塑封，入库。