一种薰衣草总黄酮的提取方法.pdf

本发明公开了一种薰衣草总黄酮的提取方法，包括以下步骤：步骤(1)，向薰衣草废渣中加入水，加热至80～100℃，回流提取，提取时间为1～3小时，提取次数为1～3次，过滤，合并提取液；步骤(2)，将步骤(1)中得到的提取液上大孔树脂，上柱完成后，洗脱，收集洗脱液，减压浓缩；步骤(3)，将步骤(2)中得到的浓缩液上聚酰胺柱，上柱完成后，洗脱，收集洗脱液，浓缩至稠膏，减压干燥，得到产品。本发明公开的提取方法具有工艺简单，环保，成本低的特点，有很强的实用性，易于推广。

1.  一种薰衣草总黄酮的提取方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤(1)，向薰衣草废渣中加入水，加热至80～100℃，回流提取，提取时间为1～3小时，提取次数为1～3次，过滤，合并提取液；
步骤(2)，将步骤(1)中得到的提取液上大孔树脂，上柱完成后，洗脱，收集洗脱液，减压浓缩；
步骤(3)，将步骤(2)中得到的浓缩液上聚酰胺柱，上柱完成后，洗脱，收集洗脱液，浓缩至稠膏，减压干燥，得到产品。

2.  如权利要求1所述的薰衣草总黄酮的提取方法，其特征在于步骤(1)中，水的体积与薰衣草废渣的质量的数值比为6～10:1。

3.  如权利要求1所述的薰衣草总黄酮的提取方法，其特征在于步骤(1)中所述的大孔树脂为HPD-100、HPD-400、HPD-500、HPD-600、D101、D1300或DM130。

4.  如权利要求1所述的薰衣草总黄酮的提取方法，其特征在于步骤(1)中所述的洗脱为二次洗脱，第一次用浓度为20％的稀乙醇洗脱，用量为薰衣草废渣质量的2～6倍；第二次用浓度为50～70％的乙醇洗脱，用量为薰衣草废渣质量的2～6倍。

5.  如权利要求1所述的薰衣草总黄酮的提取方法，其特征在于步骤(2)中所述的洗脱为二次洗脱，第一次用浓度为20％的稀乙醇洗脱，用量为薰衣草废渣质量的2～6倍；第二次用浓度为40～60％的乙醇洗脱，用量为薰衣草废渣质量的0.5～2倍。

6.  如权利要求1所述的薰衣草总黄酮的提取方法，其特征在于减压浓缩的温度为60～78℃，减压干燥的温度为60～78℃。

一种薰衣草总黄酮的提取方法
技术领域
本发明属于植物提取领域，具体涉及一种薰衣草总黄酮的提取方法。
背景技术
薰衣草(lavandula pedunculata)为唇形科薰衣草属多年生亚灌木，原产于地中海沿岸、欧洲各地及大洋洲列岛，从上个世纪60年代起薰衣草先后在河南、陕西、甘肃和新疆等地进行较大面积的区域性栽培试验，目前，新疆薰衣草的种植区域主要集中在伊犁。
薰衣草富含挥发油、香豆素、单宁、黄酮等，具有镇静、抗菌、抗脂质过氧化、降脂肪、神经保护等功效。现已从薰衣草中分离出7种黄酮类化合物。黄酮类化合物具有良好的的抗氧化能力，增强机体免疫力、防治心脑血管疾病及抗肿瘤等功能。因此合理利用薰衣草资源和研究薰衣草黄酮的提取工艺具有重要意义。
例如，公开号为CN104173433A的专利申请公开了一种薰衣草黄酮的提取方法，其采用超声波辅助，乙醇为溶剂提取黄酮，抽滤，旋转蒸发得到薰衣草黄酮提取物。关键在于超声波辅助提取(超声频率40-50KHz，温度67℃-80℃，提取25-40min)、旋转蒸发(旋转转速95-120r/min，温度70-80℃，时间13-32min)条件的选择和控制。该方法因为设备生产能力的问题不适应大量生产。
公开号为CN102688284A的专利申请公开了一种薰衣草总黄酮的制备方法，包含以下步骤：①将薰衣草置于提取罐中，以去离子水加热回流提取，提取液浓缩至溶液比重为1.1-1.2，在不断搅拌下加入4-5倍重量的95％乙醇，放置12h，过滤，减压浓缩得浸膏A；②以95％乙醇将步骤①产生的药渣加热回流提取，提取液减压浓缩后，以乙酸乙酯萃取；萃取液浓缩至浸膏后，用95％乙醇加热溶解，静置24h，过滤，滤液合并入萃取后溶液中，减压浓缩，得浸膏B；③将浸膏A或浸膏A和B合并后以去离子水溶解，上大孔树脂柱，以5倍柱体积的去离子水和5倍柱体积的10％乙醇洗脱除杂后，再以50-70％醇洗脱，收集50-70％乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得。该方法工艺繁琐，有机溶剂用量大，成本较高且所得薰衣草总黄酮含量低，因此不适宜大量生产。
现有的薰衣草总黄酮提取一般是以乙醇为溶剂提取或通过超声波辅助进行提取， 纯化一般是通过一步醇沉或萃取或大孔树脂柱层析等方法。用这些方法得到的黄酮纯度不高，工艺繁琐，成本高，不适宜大量生产。因此有必要研发出一套提取纯化效率高，工艺简单，成本低，且黄酮含量高的制备方法。
发明内容
发明目的：本发明目的在于提供一种工艺简单，环保，成本低，可适用于生产放大，易于推广具有很强的实用性的制备薰衣草总黄酮的方法。
技术方案：本发明提供了一种薰衣草总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
步骤(1)，向薰衣草废渣中加入水，加热至80～100℃，优选为80℃；回流提取，提取时间为1～3小时，优选为2小时，提取次数为1～3次，优选3次，过滤，合并提取液。所加入的水的体积与薰衣草废渣的质量的数值比为6～10:1，优选8:1。
步骤(2)，将步骤(1)中得到的提取液上大孔树脂，上柱完成后，洗脱，收集洗脱液，减压浓缩；浓缩体积为药材量的20％。所用的大孔树脂型号可为HPD-100、HPD-400、HPD-500、HPD-600，或D101、D1300、DM130。
步骤(3)，将步骤(2)中得到的浓缩液上聚酰胺柱，上柱完成后，洗脱，收集洗脱液，浓缩至稠膏，减压干燥，得到产品。所用的聚酰胺目数为60～120目，优选为100目。
在试验中发现，如果采用常规方法洗脱，效果不好，杂质与薰衣草黄酮同时被洗脱下来，使薰衣草总黄酮含量降低。因此，本发明采用二次洗脱的方式，具体的，在步骤(2)中，第一次用浓度为20％的稀乙醇洗脱，用量为薰衣草废渣质量的2～6倍(M/V)，去除大极性杂质；第二次用浓度为50～70％的乙醇洗脱，最佳浓度为60％，用量为薰衣草废渣质量的2～6倍(M/V)，优选3倍。
本发明通过正交实验筛选不同大孔树脂，不同浓度乙醇(10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％)洗脱剂进行洗脱。实验表明，浓度为20％的乙醇可以洗脱大部分极性稍大的杂质，但对黄酮成分的洗脱能力弱，而60％乙醇对总黄酮的洗脱能力最好，随着乙醇浓度增加，虽然能够洗脱出总黄酮，但是同时也会把一些其他杂质一起洗脱下来，使黄酮的纯度降低。因此，本发明确定出最佳的洗脱剂为浓度为60％的乙醇。同时，实验结果还表明D101大孔树脂除杂效果最好。
步骤(3)中，第一次用浓度为20％的稀乙醇洗脱，用量为薰衣草废渣质量的0.5～2 倍(M/V)；第二次用浓度为40～60％的乙醇洗脱，最佳浓度为50％，用量为薰衣草废渣质量的0.5～2倍(M/V)，优选1倍。
聚酰胺树脂对黄酮类化合物是一种很好的分离材料，可以选择性的分离黄酮，本发明也考察了10％、20％、40％、50％、60％不同浓度乙醇对薰衣草黄酮类化合物在聚酰胺树脂柱上的解吸附能力，以总黄酮的含量为标准，实验结果表明20％乙醇对黄酮的洗脱能力较弱，但是可以去除大部分极性大的杂质，因此本发明首先采用20％乙醇去杂，实验表明浓度为50％的乙醇对薰衣草中黄酮类化合物具有很好的洗脱能力，同样实验发现随着乙醇浓度的增加，虽然能够洗脱出黄酮，但是同时也会把一些其他杂质一起洗脱下来，使黄酮的纯度降低，最终选用50％的乙醇洗脱聚酰胺柱，
步骤(2)及步骤(3)中减压浓缩的温度为60～78℃，优选70℃，减压干燥的温度为60～78℃，优选60℃。
更进一步的，本发明的最佳技术方案为：
步骤(1)，向薰衣草废渣中加入水，加热至80℃；回流提取，提取时间为2小时，提取次数为3次，过滤，合并提取液。所加入的水的体积与薰衣草废渣的质量的数值比为8:1。
步骤(2)，将步骤(1)中得到的提取液上大孔树脂，所用的大孔树脂型号为D101的大孔树脂，上柱完成后，先用浓度为20％的稀乙醇洗脱，再用质量浓度为60％的乙醇洗脱，用量为薰衣草废渣质量的3倍(M/V)，收集洗脱液，洗脱液在70℃下减压浓缩，浓缩体积为药材量的20％。
步骤(3)，将步骤(2)中得到的浓缩液上聚酰胺柱，所用的聚酰胺目数为100目，上柱完成后，先用浓度为20％的稀乙醇洗脱，再用质量浓度为50％的乙醇洗脱，洗脱溶剂用量为药材量的1倍(M/V)，收集洗脱液，洗脱液在70℃下减压浓缩，浓缩至稠膏，在60℃下减压干燥，得到产品。
有益效果：本发明优势在于通过大孔吸附树脂柱、聚酰胺柱串联层析可以从提取过薰衣草精油的薰衣草废渣中获得高含量的薰衣草总黄酮，且大孔吸附树脂柱、聚酰胺树脂柱可以反复使用，既合理利用了资源又节约了成本。因此本方法易于推广，具有很强的实用性，适用于生产放大。
具体实施方式：
以下实施例中所用薰衣草购于新疆，含量测定用对照品中国食品药品检定研究院购买，所用乙醇为药用级，水为纯化水，其他溶剂为分析纯，所用辅料为药用级。
实施例1
取薰衣草废渣20kg，分别加水160L加热回流提取2次，每次2小时，提取液过滤，合并提取液；滤液上的D101大孔吸附树脂柱，上柱完成后，加20％乙醇去除大极性杂质后，改用60％乙醇60L洗脱，经薄层色谱检测，收集洗脱液，70℃减压浓缩至4L，备用；
取上述浓缩液上100目的聚酰胺柱，上柱完成后，加20％乙醇去除杂质后，再用50％乙醇20L洗脱，薄层色谱检测，收集洗脱液，70℃下浓缩至稠膏，60℃下减压干燥得到含量为95.1％的薰衣草总黄酮。
实施例2
取薰衣草废渣20kg，分别加水160L加热回流提取3次，每次1小时，提取液过滤，合并提取液；滤液上的DM130大孔吸附树脂柱，上柱完成后，加20％乙醇去除大极性杂质后，改用70％乙醇60L洗脱，经薄层色谱检测，收集洗脱液，70℃减压浓缩至6L，备用；
取上述浓缩液上80目的聚酰胺柱，上柱完成后，加20％乙醇去除杂质后，再用50％乙醇20L洗脱，薄层色谱检测，收集洗脱液，60℃下浓缩至稠膏，70℃下减压干燥得到含量为81.4％的薰衣草总黄酮。
实施例3
取薰衣草废渣50kg，分别加水400L加热回流提取2次，每次3小时，合并提取液；提取液过滤，滤液上HPD-100大孔吸附树脂柱，上柱完成后，加20％乙醇去除大极性杂质后，改用40％乙醇100L洗脱，经薄层色谱检测，收集洗脱液，70℃减压浓缩至5L，备用；
取上述浓缩液上120目的聚酰胺柱，上柱完成后，加20％乙醇去除杂质后，再用50％乙醇100L洗脱，薄层色谱检测，收集洗脱液，70℃下浓缩至稠膏，60℃下减压干燥得到含量为84.2％的薰衣草总黄酮。