制备持续释放制剂的方法 本发明主要涉及制备持续释放微胶囊的方法，该微胶囊可在服药后即以恒定的速率在很长的时间内释放生物活性物质，并且可抑制服药后生物活性物质最初的过量释放。
PCT国际专利申请公开No.W08904673〔Tokuhyo(国际专利申请的译文公开)503315/1990〕公开了一种制备固体聚合物制剂的方法，该制剂在不低于聚合物组分的玻璃化点的温度下保存。
EPA No.0586238公开了一种从包括含生物活性物质的内部水相和含生物降解聚合物的外部油相的w/o乳液制备持续释放微胶囊的方法，该方法的特点是在不低于所述生物降解聚合物的玻璃化点但不高到导致微胶囊聚集地温度下加热，使所述生物活性物质与所述生物降解聚合物微囊包封而形成微胶囊。
理想的含生物降解聚合物的持续释放微胶囊应能抑制生物活性物质的最初释放，特别是第1天的过量释放，并且可在相当长的时期内选择性地控制生物活性物质的释放。然而，从上述专利公开的描述中不能制备那种在服药后即以恒定的速率在很长的时期内释放生物活性物质，特别是具有高分子量的多肽，并能抑制服药后最初产生的生物活性物质的过量释放的完全令人满意的持续释放微胶囊。
为了解决上述问题，通过深入细致的调查研究，本发明人发现通过掺入不少于60％(w/w)的生物降解聚合物并在不低于上述聚合物玻璃化点的温度下将微胶囊加热或烘干约24到120小时可制备具有在服药后即以恒定的速率在非常长的时期内释放生物活性物质并能意想不到地明显抑制服药后最初产生的生物活性物质的过量释放以及最低限度地保留有机溶剂的优异临床药学特性的持续释放微胶囊。根据这一发现，本发明者进一步研究，发展了本发明。
(1)一种制备持续释放微胶囊的方法，该方法包括得到含有被生物降解聚合物包封的生物活性物质的微胶囊，并将所得微胶囊在不低于生物降解聚合物的玻璃化点的温度下烘干约24到约120小时，以得到含有相对于持续释放微胶囊的重量不低于60％(w/w)的生物降解聚合物的持续释放微胶囊。
(2)一种(1)的制备方法，其中所述生物活性物质为分子量约200到20,000的肽。
(3)一种(1)的制备方法，其中所述生物活性物质为黄体化激素释放激素或其类似物。
(4)一种(1)的制备方法，其中所述生物活性物质为式(I)表示的肽或其盐：
(Pyr)Glu-R1-Trp-Ser-R2-R3-R4-Arg-Pro-R5 (I)
其中R1表示His，Tyr，Trp或P-NH2-Phe；R2表示Tyr或Phe；R3表示Gly或D型氨基酸残基；R4表示Leu，Ile或Nle；和R5表示Gly-NH-R6(R6表示氢原子或带有或不带有羟基的低级烷基)或NH-R6(R6定义与上述相同)。
(5)一种(1)的制备方法，其中所述生物活性物质为：
(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHCH2-CH3或其盐。
(6)一种(1)的制备方法，其中所述生物活性物质为式(II)表示的肽或其盐：
其中X表示氢原子或四氢呋喃基羧酰氨基；Q表示氢原子或甲基；A表示烟酰基或N，N′-二乙基脒基；和B表示异丙基或N，N’ -二乙基脒基。
(7)一种(6)的制备方法，其中X为四氢呋喃基羧酰氨基。
(8)一种(6)的制备方法，其中X为(2S)-四氢呋喃基羧酰氨基。
(9)一种(6)的制备方法，其中X为(2S)-四氢呋喃基羧酰氨基，Q为甲基，A为烟酰基，和B为异丙基。
(10)一种(1)的制备方法，其中所述生物活性物质为甲状腺激素释放激素。
(11)一种(1)的制备方法，其中所述生物降解聚合物含量不低于70％(w/w)。
(12)一种(1)的制备方法，其中所述生物降解聚合物为α-羟基羧酸或其盐的均聚物或共聚物。
(13)一种(1)的制备方法，其中所述生物降解聚合物为乳酸/羟基乙酸的比率约100/0到50/50mol％的乳酸/羟基乙酸的均聚物或共聚物。
(14)一种(1)的制备方法，其中所述生物降解聚合物是乳酸的均聚物。
(15)一种(1)的制备方法，其中所述生物降解聚合物的平均分子量为3,000到30,000。
(16)一种(1)的制备方法，其中微胶囊是在从所述生物降解聚合物的玻璃化点到玻璃化点之上约30℃的温度范围内烘干的。
(17)一种(1)的制备方法，其中微胶囊是在从所述生物降解聚合物的玻璃化点到玻璃化点之上5℃的温度范围内烘干的。
(18)一种(1)的制备方法，其中微胶囊被烘干约48到120小时。
(19)一种(1)的制备方法，其中微胶囊是由水干法(in-waterdrying method)得到的。
(20)一种(1)的制备方法，其中相对于持续释放微胶囊的生物活性物质含量为0.01到40％(w/w)。
(21)一种(4)的制备方法，其中持续释放微胶囊最终含有5-15％(w/w)的生物活性物质和80-95％(w/w)的生物降解聚合物。
(22)由制备方法(1)得到的持续释放微胶囊。
(23)用于注射的(22)的微胶囊。
(24)一种含有(22)的持续释放微胶囊的用于治疗或预防与性激素有关的疾病的或避孕的药剂。
(25)一种(24)的药剂，其中所述的与性激素有关的疾病为前列腺肥大，前列腺癌，子宫肌瘤，子宫内膜异位，痛经，性早熟或乳腺癌。
(26)一种治疗或预防与性激素有关的疾病的方法，该方法包括对需要者使用有效量的(22)微胶囊。
(27)(22)的微胶囊用于制备治疗或预防与性激素有关的疾病的或避孕的药剂的用途。
(28)一种由(22)中要求的微胶囊制备的，用于治疗或预防与性激素有关的疾病的或避孕的组合物。
(29)一种处理含有被生物降解聚合物包封的生物活性物质的微胶囊的方法，该方法包括将微胶囊在不低于生物降解聚合物的玻璃化点的温度下烘干约24到约120小时，其中微胶囊最终含有不低于60％(w/w)的生物降解聚合物。
本申请说明书中使用的氨基酸，保护基等的缩写来自the IUPAC-IUBCommission on Biochemical Nomenclature所记载的缩写或有关领域通常使用的缩写。当存在光学异构体时，除非另有说明，氨基酸为L-构型。
本申请说明书中使用的其他缩写定义如下：
NAcD2Nal：N-乙酰基-D-3-(2-萘基)丙氨酰
D4ClPhe：D-3-(4-氯苯基)丙氨酰
D3Pal：D-3-(3-吡啶基)丙氨酰
NMeTyr：N-甲基酪氨酰
DLys(Nic)：D-(ε-N-烟酰)赖氨酰
Lys(Nisp)：(ε-N-异丙基)赖氨酰
DhArg(Et2)：D-(N，N′-二乙基)高精氨酰
用于本发明的生物活性物质包括，但不限于，生物活性肽，抗肿瘤剂，抗菌素，解热镇痛消炎剂，镇咳祛痰药，镇静药，肌肉松弛剂，抗癫痫药，抗溃疡药，抗抑郁药，抗过敏药，强心剂，抗心律失常药，血管舒张药，低血压利尿剂，抗糖尿病药，抗凝剂，溶血素，抗结核药，激素，麻醉剂成瘾拮抗剂，骨吸收抑制剂和血管生成抑制剂。
本发明的生物活性物质优选地为生物活性肽。优选地，上述肽由2或更多个氨基酸组成并且有约200到80,000的分子量。更优选约300到40,000。最优选的生物活性物质为分子量约为1,000到20,000的多肽。
这样的肽包括黄体化激素释放激素(LH-RH)及其类似物如LH-RH兴奋剂和LH-RH拮抗剂。典型的LH-RH兴奋剂包括式(I)所示的肽或其盐：
(Pyr)Glu-R1-Trp-Ser-R2-R3-R4-Arg-Pro-R5 (I)
其中R1表示His，Tyr，Trp或P-NH2-Phe；R2表示Tyr或Phe；R3表示Gly或D-型氨基酸残基；R4表示Leu，Ile或Nle；R5表示Gly-NH-R6(R6为氢原子或带有或不带有羟基的低级烷基)或NH-R6(R6定义同上)〔下文中有时简称为肽(I)〕〔见US Patent Nos.3,853,8374,008,209和3,972,859，British Patent No.1,423,083，Proceedings of theNational Academy of Science of the United States of America，Vol.78，PP，6509-6512(1981)〕。
关于肽(I)，由R3表示的D-型氨基酸残基的例子有具有至多9个碳原子的α-D-氨基酸(例如，D-Leu，Ile，Nle，Val，Nval，Abu，Phe，Phg，Ser，Thr，Met，Ala，Trp，α-Aibu)。如果合适，这些氨基酸残基可带有保护基(例如，叔-丁基，叔-丁氧基，叔-丁氧羰基)。肽(I)的酸式盐(例如，碳酸盐，碳酸氢盐，乙酸盐，丙酸盐)和金属配合物(例如，铜配合物，锌配合物)也可作为肽(I)使用。
典型的肽(I)的例子包括其中R1为His，R2为Tyr，R3为D-Leu，R4为Leu，和R5为NHCH2-CH3的肽(这种肽的乙酸盐已知为亮丙瑞林乙酸盐，下文中也称作TAP-144)。
生物活性肽包括LH-RH拮抗剂(见US Patent Nos.4,086,219，4,124,577，4,253,997和4,317,815)，如式(II)表示的肽或其盐：
其中X表示氢原子或四氢呋喃羧酰氨基；Q表示氢原子或甲基；A表示烟酰基或N，N′-二乙基脒基；B表示异丙基或N，N′-二乙基脒基〔下文中简称为肽(II)〕。
关于肽(II)，X优选四氢呋喃基羧酰氨基，更优选(2S)-四氢呋喃基羧酰氨基。而且，A优选烟酰基；B优选异丙基。
当肽(II)具有一个或多个不对称碳原子时，存在两个或更多的光学异构体。这样的光学异构体和其混合物也包括在本发明的范围中。
肽(II)或其盐可通过已知方法制备。这样的方法包括Japanese PatentUnexamined Publication No.101695/1991和the Journal of MedicinalChemistry，Vol. 35，P，3942(1992)及其他公开文献中描述的方法，及相似方法。
肽(II)的盐优选药学上可接受的盐。这样的盐包括与无机酸(例如，盐酸，硫酸，硝酸)，有机酸(例如，碳酸，重碳酸，琥珀酸，乙酸，丙酸，三氟乙酸，双羟萘酸)等形成的盐。更优选地，肽(II)的盐为与有机酸(例如碳酸，重碳酸，琥珀酸，乙酸，丙酸，三氟乙酸，双羟萘酸)形成的盐，最优选与乙酸形成的盐。尽管这些盐可为单至三盐，但优选二至三盐。
下面给出肽(II)或其盐的优选实施例。
其中m表示1到3的实数。
(3)NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-Tyr-DhArg(Et2)-Leu-
hArg(Et2)-Pro-DAlaNH2
(4)NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-Tyr-DhArg(Et2)-Leu-
hArg(Et2)-Pro-DAlaNH2·n(CH3COOH)
其中n表示从1到3的实数。
肽(II)或其盐优选上述(1)或(2)。
生物活性的肽的例子包括胰岛素，生长抑素，生长抑素衍生物(见USPatent Nos.4,087,390，4,093,574，4,700,117和4,253,998)，生长激素，催乳激素，促皮质激素(ACTH)，黑素细胞促进激素(MSH)，甲状腺激素释放激素〔由结构式(Pyr)Gln-His-ProNH2表示，下文中也称TRH〕及其盐和衍生物〔见Japanese Patent Unexamined PnblicationNos.121273/1975(USP NO.3959247)和116465/1977(USP NO.4100152)〕，甲状腺促进激素(TSH)，黄体化激素(LH)，卵泡促进激素(FSH)，加压素，加压素衍生物〔去氧加压素，见FoliaEndocrinologica Japonica，Vol.54，No.5，PP.676-691(1978)〕，缩宫素，降钙素，甲状旁腺激素，高血糖素，胃泌素，胰泌素，促胰酶素，缩胆囊素，血管紧张素，人类胎盘催乳激素，人类绒膜促性激素(HCG)，脑啡肽，脑啡肽衍生物(见US Patent No.4,277,394和European Patent PublicationNo.31567)，内啡肽，京都酚，干扰素(例如，α-，β-和γ-干扰素)，白细胞介素(例如白细胞介素I，II，和III)，特夫素，胸腺生成素，胸腺素，胸腺刺激素，胸腺体液因子(THF)，血液胸腺因子(FTS)及其衍生物(见US Patent No.4,229,438)，其他胸腺因子〔Igaku noAyumi，Vol.125，No.10，PP.835-843(1983)〕，肿瘤坏死因子(TNF)，集落刺激因子(CSF)，促胃动素，daynorphin，铃蟾肽，神经降压肽，雨蛙肽，缓激肽，尿激酶，天冬酰胺酶，激肽释放酶，物质P，神经生长因子，细胞生长因子，神经营养因子，凝血因子VIII和IX，溶菌酶氯化物，多粘菌素B，粘菌素，短杆菌肽，杆菌肽，红细胞生成素(EPO)，和内皮肽拮抗肽(见European Patent Publication Nos.436189,457195和496452，和Japanese Patent Unexamined Publication Nos.94692/1991和130299/1991)。
抗肿瘤剂的例子包括博来霉素，甲氨蝶呤，放线菌素D，丝裂霉素C，硫酸长春碱，硫酸长春新碱，柔红霉素，阿霉素，新制癌菌素，阿糖胞苷，氟尿嘧啶，四氢呋喃基-S-氟尿嘧啶，云芝多糖，Picivanil，香菇多糖，左旋米唑，贝他定，甘草酸，PolyI：C，PolyA：U和PolyICLC。
抗菌素的例子包括庆大霉素，地贝卡星，硫酸卡那霉素B，利维霉素，妥布霉素，阿米卡星，硫酸新霉素，紫苏霉素，盐酸四环素，盐酸土霉素，吡甲四环素，盐酸强力霉素，氨苄西林，哌拉西林，替卡西林，头孢噻吩钠，头孢替安，头孢磺定，头孢甲肟，头孢美唑，头孢唑林，头孢噻肟，头孢哌酮，头孢唑肟，mochisalactam，沙纳霉素，sulfazecin和氨曲南。
解热镇痛消炎剂的例子包括水杨酸，安乃近，氟芬那酸，双氯芬酸，吲哚美辛，吗啡，盐酸哌替啶，酒石酸左啡诺和羟吗啡酮。
镇咳祛痰剂的例子包括盐酸麻黄碱，盐酸甲麻黄碱，盐酸那可丁，磷酸可待因，磷酸二氢可待因，盐酸阿洛拉胺，盐酸氯苯达诺，盐酸哌吡苯胺，氯苄哌醚，盐酸胡椒喘定，盐酸异丙肾上腺素，sulbutamol sulfate和特布他林。
镇静剂的例子包括氯丙嗪，丙氯拉嗪，三氟拉嗪，硫酸阿托品和溴甲东莨菪碱。
肌肉松弛剂的例子包括甲磺酸普立地诺，氯化筒箭毒碱和泮库溴铵。
抗癫痫药的例子包括苯妥英，乙琥胺，乙酰唑胺钠和氯氮。
抗溃疡药的例子包括甲氧氯普胺和盐酸组氨酸。
抗抑郁药的例子包括米帕明，氯米帕明，诺昔替林和硫酸苯乙利定。
抗过敏药的例子包括盐酸苯海拉明，马来那敏，盐酸苄吡二胺，盐酸克立咪唑，盐酸二苯拉林和盐酸喘咳宁。
强心剂的例子包括tran s-pai-oxocamphor，茶碱醋酸钠，氨茶碱和盐酸乙苯福林。
抗心律失常药的例子包括propranol，烯丙心安，丁呋心安和烯丙氧心安。
血管舒张药的例子包括盐酸麻黄苯丙酮，硫氮酮，盐酸苄唑啉，克冠二胺和硫酸丁酚胺。
低血压利尿药的例子包括溴己双铵，戊双吡铵，盐酸美加明，盐酸乙肼苯哒嗪和氯压定。
抗糖尿病药的例子包括降糖嘧啶钠，吡磺环己脲，盐酸苯乙双胍，盐酸丁二胍和二甲双胍。
抗凝剂的例子包括肝素钠和枸橼酸钠。
溶血素的例子包括凝血激酶，凝血酶，亚硫酸亚钠甲萘醌，维生素K4，ε-氨基己酸，凝血酸，肾色氨脲磺钠和肾上腺色素单氨基胍甲磺酸盐。
抗结核药的例子包括异烟肼，乙胺丁醇和对氨基水杨酸。
激素的例子包括强的松龙，强的松龙磷酸钠，硫酸钠地噻米松，信他米松磷酸酯，磷酸己烷雌酚，醋酸己烷雌酚和甲巯咪唑。
麻醉剂成瘾拮抗剂的例子包括酒石酸烯丙左吗喃，盐酸烯丙吗啡和盐酸烯丙羟吗啡酮。
骨吸收抑制剂的例子包括(含硫烷基)氨基亚甲基双膦酸。
血管生成抑制剂的例子包括血管生成抑制类甾醇〔见 Science，Vol.221，P，719(1983)〕，烟曲霉素(见European Patent Publication No.325199)和Fumagillol衍生物(见European Patent Publication Nos.357061,359036,386667和415294)。
在这些生物活性物质中，对于本发明的应用优选水溶性的。这是因为水溶性生物活性物质的制剂常常显示出过量的最初释放。
生物活性物质的水溶性由水-辛醇分配比表示。本发明优选使用水-辛醇溶度比不低于0.1，更优选不低于1的生物活性物质。油-水分配比可通过“Butsuri Kagaku Jikkenho(Physiochemical ExperimentalMethod)”，by Sitsnsaburo Samejima，Pubushed by Shokabo，1961中描述的方法来确定。具体地，将正辛醇和PH5.5的缓冲液(1∶1体积比混合物)放入试管中。缓冲液的例子包括Soerenzen缓冲液〔Ergeb.Physiol.12，393(1912)〕，Clark-Lubs缓冲液)〔J.Bact.，2(1)，109，191，(1917)〕，MacIlvaine缓冲液〔J.Biol.Chem.，49，183，(1921)〕，Michaelis缓冲液〔Die Wasser-stoffionenkonzentration)，P，186(1914)〕和Rolthoff缓冲液〔Biochem，Z.，179，410(1926)〕。将适当量的上述生物活性物质放入试管，将其塞好，在频繁剧烈摇动下在恒温室(25℃)中浸渍。当见到生物活性物质溶于达到平衡的两个液相时，将液体混合物静置或离心；从上层和下层中各移出给定的量，分析每一液层的生物活性物质浓度，得到生物活性物质在正辛醇层与水层中的浓度的比，即油-水分配比。
可使用生物活性物质本身或其药理学上可接受的盐(例如，当生物活性物质具有碱性基团如氨基时，与无机酸如盐酸，硫酸和硝酸形成的盐，与有机酸如碳酸和琥珀酸形成的盐；当生物活性物质具有酸性基因，如羧基时，与无机碱形成的盐如钠，钾和其他碱金属的盐，与有机碱化合物如三乙胺及其他有机胺形成的盐)。
持续释放微胶囊中生物活性物质如肽的含量，取决于所使用的肽的种类，所期望的药理作用，作用时间和其他因素，优选为微胶囊重量的约0.01到40％(w/w)，更优选为微胶囊重量的0.1到30％(w/w)。
本发明使用生物降解聚合物作为微胶囊的基质。
本发明优选使用在一端具有游离羧基的生物降解聚合物。一端具有游离羧基的生物降解聚合物被定义为其由GPC测量确定的数均分子量与通过端基定量分析确定的数均分子量几乎一致的生物降解聚合物。
通过端基定量分析，数均分子量计算如下：
将约1到3g的生物降解聚合物溶于丙酮(25ml)和甲醇(5ml)的混合溶剂中，在室温(20℃)及搅拌下，以酚酞作为指示剂，将该溶液用0.05N氢氧化钾醇溶液快速滴定，以确定末端羧基的含量；使用下列公式计算数均分子量：
根据端基定量分析测定的数均分子量＝20000×A/B
A：生物降解聚合物的重量(g)
B：滴定结束时所加入0.05N氢氧化钾醇溶液的量(ml)
例如，当聚合物一端具有游离羧基，并通过无催化剂脱水聚合缩合从一种或多种α-羟基酸而被合成时，根据GPC测量所得的数均分子量与根据端基定量分析所得的数均分子量几乎一致。另一方面，当聚合物一端基本上无游离的羧基，并通过使用催化剂的开环聚合从环状二聚体而被合成时，根据端基定量分析所得的数均分子量明显大于根据GPC测量所得的数均分子量，这种差异可清楚地区别一端具有游离羧基的聚合物和一端没有游离羧基的聚合物。
根据端基定量分析得到的数均分子量为绝对值，而根据GPC测量得到的数均分子量为一个相对值，它的变化取决于各种分析条件(例如，流动相的种类，柱的种类，参比物，切片宽度的选择，基线的选择)；因而后者具有不同的绝对数值的表示。然而，根据GPC测量得到的数均分子量与根据端基定量分析所得的数均分子量几乎一致这一事实显示根据端基定量分析得到的数均分子量与根据GPC测量得到的数均分子量相比的值的范围为约0.4到2倍，优选0.5到2倍，更优选0.8到1.5倍。而且，根据端基定量分析所得的数均分子量明显高于根据GPC测量所得的数均分子量这一事实显示根据端基定量分析所得的数均分子量为根据GPC测量所得的数均分子量的2倍或更高。
上述生物降解聚合物的数均分子量优选为3,000到30,000，更优选5,000到25,000，甚至更优选7,000到20,000。
生物降解聚合物的分散度(重均分子量/数均分子量)优选约1.2到4.0，更优选约1.5到3.5。
一端具有游离羧基的生物降解聚合物的例子包括由一种或多种α-羟基酸，通常为α-羟基羧酸(例如，羟基乙酸，乳酸，羟基丁酸)，羟基二羧酸(例如，苹果酸)，羟基三羧酸(例如，枸橼酸等)，通过无催化剂脱水聚合缩合合成的均聚物和共聚物，其混合物，聚-α-氰基丙烯酸酯，聚氨基酸(例如，聚-γ-苄基-L-谷氨酸)和马来酐共聚物(例如，苯乙烯-马来酸共聚物)。
聚合可为无规，嵌段或接枝型的。当上述α-羟基酸，羟基二羧酸和羟基三羧酸分子结构中具有光学活性中心时，它们可为D-，L-或DL-构型。
例如，本发明的生物降解聚合物可通过已知方法，如Japanese PatentUnexamined Pubication Nos.17525/1975，45920/1981(EPA26599)，118512/1982(EPA 52510)，150609/1982(EPA 58481)，28521/1986(EPA172636)和54760/1987(EPA 202065)，以及European Patent PublicationNo.481732所述的方法，或这些方法的改进方法来制备。
一端具有游离羧基的生物降解聚合物优选(1)乳酸均聚物，(2)乳酸/羟基乙酸共聚物或(3)含羟基乙酸共聚物和式III表示的羟基羧酸：
其中R表示具有2到8个碳原子的烷基的混合物(下文中称羟基乙酸共聚物(A))，和聚乳酸(下文中称为聚乳酸(B))的生物降解聚合物。
更优选地，一端具有游离羧基的生物降解聚合物为乳酸均聚物或乳酸/羟基乙酸共聚物。
当使用乳酸/羟基乙酸共聚物或均聚物作为生物降解聚合物时，其含量比(乳酸/羟基乙酸)(mol％)优选地为约100/0到50/50，更优选约90/10到60/40。乳酸/羟基乙酸的含量比(mol％)最优选地为约80/20到70/30。乳酸均聚物也是优选的。
上述乳酸均聚物和乳酸/羟基乙酸共聚物可按已知方法，如JapanesePatent Unexamined Publication No.28521/1986(EPA172636)所述的方法制备。
乳酸均聚物的分解/消去速率可有很大变化，取决于分子量。为了得到长效型(例如，1-4个月)的持续释放制剂，优选使用重量平均分子量在上述范围之内的乳酸均聚物。
乳酸/羟基乙酸共聚物的分解/消去速率可有很大变化，取决于组成或分子量。但是，通过降低羟基乙酸比率或增加分子量可延长药物释放期，这是因为当降低羟基乙酸比率时通常延缓分解/消去。相反，通过增加羟基乙酸的比率或降低分子量可缩短药物的释放期。为了得到相对长效型(例如，1个月)的持续释放制剂，优选使用含量比率和重量平均分子量落入上述范围的乳酸/羟基乙酸共聚物。如果选择比其含量比率和重量平均分子量落入上述范围的共聚物更易分解的乳酸/羟基乙酸共聚物时，最初的破裂难以抑制；如果选择比其含量比率和重量平均分子量落入上述范围的共聚物更难分解的乳酸/羟基乙酸共聚物时，很可能在某个时期无有效量的药物被释放出来。
关于上述式(III)，具有2到8个碳原子，由R表示的直链或支链烷基的例子有乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，异戊基，新戊基，叔戊基，1-乙基丙基，己基，异己基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3，3-二甲基丁基和2-乙基丁基。优选地，使用具有2到5个碳原子的直链或支链烷基。这样的烷基包括乙基，丙基，异丙基，丁基和异丁基。更优选地，R为乙基。
式(III)表示的羟基羧酸的例子有2-羟基丁酸，2-羟基戊酸，2-羟基-3-甲基丁酸，2-羟基己酸，2-羟基异己酸和2-羟基癸酸，其中优选2-羟基丁酸，2-羟基戊酸，2-羟基-3-甲基丁酸和2-羟基己酸，更优选2-羟基丁酸。尽管羟基羧酸可以为D-，L-或D，L-构型，但优选使用其中D-/L-构型的比率(mol％)优选地落在约75/25到25/25，更优选地在约60/40到40/60，甚至更优选地在约55/45到45/55的范围内的D-和L-构型的混合物。
关于羟基乙酸共聚物(A)，聚合可为无规，嵌段或接枝型的。优选无规共聚物。
式(III)表示的羟基羧酸可为一种或多种给定比率的混合物。
关于羟基乙酸共聚物(A)中羟基乙酸和式(III)表示的羟基羧酸的含量比，优选羟基乙酸约为10到75mol％，而羟基羧酸为剩余部分。更优选地，羟基乙酸为约20到75mol％，甚至更优选地为约40到70mol％。羟基乙酸共聚物(A)的重量平均分子量通常为约2,000到50,000，优选约3,000到40,000，更优选约8,000到30,000。羟基乙酸共聚物(A)的分散度(重量平均分子量/数均分子量)优选地在约1.2到4.0，更优选约1.5到3.5。
上述羟基乙酸共聚物(A)可按已知方法，如Japanese PatentUnexamined Publication No.28521/1986(EPA172636)所述的方法制备。
尽管聚乳酸(B)可为D-或L-构型或它们的混合物，但D-/L-构型的比率(mol％)优选地落在约75/25到20/80的范围内。D-/L-构型的比率(mol％)更优选地为约60/40到25/75，甚至更优选地为约55/45到25/75。聚乳酸(B)的重量平均分子量优选地为约1,5000到30,000，更优选地为2,000到20,000，甚至更优选地为约3,000到15,000。而且，聚乳酸(B)的分散度优选地为约1.2到4.0，更优选地约为1.5到3.5。
对于制备聚乳酸(B)，已知两种方法，乳酸，乳酸二聚体的开环聚合和乳酸的脱水聚合缩合。为了得到本发明的相对低分子量的聚乳酸(B)，优选使用乳酸直接脱水聚合缩合。该方法，例如，在Japanese PatentUnexamined Publication No.28521/1986(EPA172636)中有述。
羟基乙酸共聚物(A)和聚乳酸(B)可以混合物的形式使用，其中(A)/(B)比率(％重量比)落在约10/90到90/10的范围内。该混合比(％重量比)优选地为约20/80到80/20，更优选约30/70到70/30。如果组分(A)或(B)过量，所得制剂显示不同于单独使用(A)或(B)时的生物活性物质释放方式；将在药物释放的最后阶段从混合基质得到非线性释放方式。尽管羟基乙酸共聚物(A)和聚乳酸(B)的分解/消去速率的变化很大，取决于分子量或组分，但可通过提高聚乳酸(B)的分子量或降低(A)/(B)混合比而延长药物释放期，这是因为羟基乙酸共聚物(A)的分解/消去速率通常高于聚乳酸(B)。相反地，通过降低所加入的聚乳酸的分子量或增加混合比(A)/(B)可缩短药物释放期。也可通过改变式(III)表示的羟基羧酸的种类和含量比来调节药物释放期。
关于持续释放微胶囊，生物降解聚合物的含量比的变化取决于聚合物的种类等，但相对于微胶囊不少于60％(w/w)，更优选不少于70％(w/w)。
特别地，在以式(I)的肽作为生物活性物质的持续释放微胶囊中，相对于持续释放微胶囊最终产物，优选的生物活性物质的最终含量比为5-15％(w/w)，生物降解聚合物的最终含量比为80-95％.(w/w)。
关于重量平均分子量和分散度，本申请说明书认为前者基于采用重量平均分子量分别是120,000，52,000，22,000，9,200，5,050，2,950，1,050，580和162的9种聚苯乙烯作为参比物，通过凝胶渗透色谱法(GPC)得到的聚苯乙烯，而后者可由此计算出来。测量中使用KF804 LX2GPC柱(Produced by Showa Denko)和L-3300RI监测器(Producedby Hitachi Ltd.)用氯仿作为流动相。
下面将详细地描述本发明的制备方法。
本发明中，含生物活性物质和生物降解聚合物的微胶囊可，例如，从以生物活性物质溶液作为内部水相而含生物降解聚合物的溶液作为油相的W/O乳液制备。具体地，下述已知的微胶囊化的方法，如水干法(in-waterdrying method)，相分离法和喷雾干燥法，以及它们的改进可被使用。
首先，将生物活性物质溶于或分散于水中，需要时，将药物载体或保留药物的物质，如明胶，琼脂，藻酸，聚乙烯醇或碱性氨基酸(例如，Lys，His)，溶解或悬浮，得到内部水相。药物载体优选明胶。
内部水相中药物浓度优选地为0.1到200％(w/v)，更优选地为20到110％(w/v)，甚至更优选地为30到100％(w/v)。
药物载体和生物活性物质的重量比一般为100∶1到1∶100，优选10∶1到1∶50，更优选10∶1到1∶10。
内部水相中可添加下列pH调节剂以保持生物活性物质的稳定性或溶解性，如碳酸，乙酸，草酸，枸橼酸，磷酸，盐酸，氢氧化钠，精氨酸，赖氨酸或其盐。另外，作为生物活性物质稳定剂，可加入清蛋白，明胶，构橼酸，乙二胺四乙酸，糊精，亚硫酸氢钠，多羟基化合物如聚乙二醇等，作为防腐剂，可加入常用的对羟基苯甲酸酯(例如，羟苯甲酸甲酯，对羟苯甲酸丙酯)，苄基醇，氯丁醇，乙基汞硫代水杨酸钠。
将所得内部水相加入含生物降解聚合物的溶液(油相)中，然后乳化，得到w/o乳液，乳化通过已知的分散方法完成。可使用的分散方法包括间歇振摇法，使用混合器，如螺旋桨搅拌器或汽轮均相混合器的方法，胶体磨法，均化器法和超声破碎法。
通过将聚合物溶于有机相可制备上述含生物降解聚合物的溶液(油相)。任何沸点不高于约120℃，与水不混溶并能溶解生物降解聚合物的有机溶剂都可使用。这样的溶剂包括卤代烃(例如，二氯甲烷，氯仿，氯代乙烷，三氯乙烷，四氯化碳)，脂肪酸酯(例如，乙酸乙酯，乙酸丁酯)，醚(例如乙醚，异丙醚)和芳香烃(例如，苯，甲苯，二甲苯)。这些溶剂可混合使用。优选使用的有机溶剂为卤代烃，更优选二氯甲烷。
尽管油相中的聚合物浓度没有限制，取决于所述聚合物的分子量和溶剂的种类，只要最终微胶囊中生物降解聚合物的浓度不低于60％，优选70到99％(w/w)即可，但是油相中聚合物浓度优选地为约0.1到80％(w/w)，更优选1到70％(w/w)，最优选约10到60％(w/w)。
接着，将这样得到的w/o乳液进行微胶囊化。
(1)水干法(In-water drying method)。
为了通过水干法从w/o乳液制备微胶囊，例如，可将w/o乳液加入另一水相(外部的水相)，即，第三相，得到w/o/w乳液，此后从油相中蒸发溶剂，得到微胶囊。
w/o乳液通过与制备w/o乳液时使用的相同的乳化法制备。
从油相中蒸发溶剂可按已知方法进行；包括在常压下或逐渐减压下，在使用螺旋桨搅拌器，磁搅拌器等搅拌下蒸发溶剂的方法，和使用旋转蒸发器等调整真空度蒸发溶剂的方法。
外部水相的体积通常为制备w/o乳液时的1到约10,000倍，优选约10到2,000倍，更优选50到500倍。
加入w/o乳液之前，可将外部水相的温度调整到约10到20℃。
可将乳化剂加入第三相，水相。乳化剂可为能形成稳定的o/w乳液的任何乳化剂。这样的乳化剂包括阴离子表面活性剂(例如，油酸钠，硬脂酸钠，十二烷基硫酸钠)，非离子表面活性剂〔例如，聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯(Tween 80，Tween 60，Atlas Powder Company)，聚氧乙烯蓖麻油衍生物(例如，HCD-60，HCD-SO，Nikko Chemicals)〕，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇，羧甲基纤维素，卵磷脂和明胶。这些乳化剂可单独使用或混合使用。乳化剂优选聚乙烯醇。相对于外部水相，合适的乳化剂的浓度(w/v)可选自从约0.01％到20％，优选从约0.05到10％的范围。
将所得微胶囊离心或过滤分出，然后将其用蒸馏水洗涤数次，除去附着在微胶囊表面的游离生物活性物质，药物添加剂，乳化剂等。然后将微胶囊再次分散于蒸馏水等中并冷冻干燥。为了防止冷冻干燥期间颗粒相互聚集，可加入抗凝聚剂〔例如，水溶性糖类如甘露糖醇，乳糖，葡萄糖和淀粉(例如，玉米淀粉)，氨基酸如甘氨酸和丙氨酸，蛋白如明胶，血纤维蛋白和胶原蛋白，和无机盐如氯化钠，溴化钠和碳酸钾〕。抗凝聚剂优选甘露糖醇。微胶囊和抗凝聚剂的混合比(重量)通常为约50∶1到1∶1，优选约20∶ 到1∶1，更优选约10∶1到5∶1。
(2)相分离法
为了使用相分离法制备微胶囊，在搅拌下将凝聚剂逐渐加入上述w/o乳液中，以沉淀和固化高分子聚合物。
与溶解高分子聚合物但不溶解包封聚合物的溶剂混溶的聚合的，矿物油或植物油的化合物都可用作抗凝聚剂。这样的抗凝聚剂包括硅油，芝麻油，豆油，玉米油，棉籽油，椰子油，亚麻子油，矿物油，正己烷和正庚烷。可两种或更多种混合使用。将所得微胶囊过滤分离后，用庚烷等反复洗涤，除去凝聚剂。然后按与水干法中相同的方法除去游离的药物和溶剂。
(3)喷雾干燥法
为了使用喷雾干燥法制备微胶囊，经喷嘴将上述w/o乳液喷入喷雾干燥器的干燥室，以在很短的时间内以微小的液滴挥发有机溶剂和水，得到微小的微胶囊。喷嘴的例子有双射流喷嘴，压力喷嘴和旋转圆盘喷嘴。为了防止微胶囊凝聚或聚集，可在w/o乳液喷雾的同时将上述抗凝聚剂水溶液经另一个喷嘴喷入。
为了制备式(I)肽作为生物活性物质的持续释放微胶囊，优选地，可通过水干法进行微胶囊化。
这样得到的微胶囊可带有水，如果需要，可在减压下通过加热升温除去溶剂。
将由上述水干法，相分离法和喷雾干燥法得到的微胶囊在不低于用作基质的生物降解聚合物的玻璃化点的温度下烘干，在此温度下上述微胶囊的粒子不会熔化，不会相互粘连，当需要时，在减压下，以保证从微胶囊中除去水和有机溶剂，提高持续释放的性质。所剩有机溶剂优选地被降至小于1000ppm，更优选小于500ppm，最优选小于100ppm的程度。
玻璃化点被定义为使用差示扫描量热计(DSC)在以每分钟10或20℃的速率升高温度的条件下得到的中间玻璃化点(Tmg)。
尽管加热优选地在持续释放微胶囊冷冻干燥或烘干之后进行，但并不限于这种方式；例如加热可在微胶囊分配后进行。
如果加热温度低于用作基质的生物降解聚合物的玻璃化点，生物活性物质的最初的过量释放不能被改善；如果加热温度过高，微胶囊熔化，变形，生物活性物质分解，变质的危险增加。尽管加热温度取决于各种条件，但可以根据用作基质的生物降解聚合物的物理性质(例如，分子量，稳定性)，生物活性物质，微胶囊的平均粒度大小，加热时间，微胶囊干燥的程度，加热方法等，适当地确定。优选地，将微胶囊在不低于用作基质的生物降解聚合物的玻璃化点的温度下烘干，在此温度下上述微胶囊的粒子不会熔化，不会相互粘连，更优选地，在从用作基质的生物降解聚合物的玻璃化点到高于玻璃化点约30℃的温度范围内烘干。特别是当使用(1)乳酸均聚物或(2)乳酸/羟基乙酸共聚物时，为了得到良好的持续释放性质，加热温度优选地在从所用聚合物的玻璃化点到高于该玻璃化点5℃的温度范围内，更优选地在从所用聚合物的玻璃化点到高于该玻璃化点3℃-4℃的范围内。
此外，为了避免和抑制微胶囊凝聚和聚集，加热优选地在高于玻璃化点3℃-4℃的温度下进行，这是因为当在高于玻璃化点5℃以上的温度下加热时，更可能发生这类凝聚和聚集，特别是在存有更多的有机溶剂的烘干的早期。
加热烘干时间也可有变化，取决于加热温度，被处理的微胶囊的量等因素，通常优选在微胶囊达到给定温度下加热烘干约24到120小时，更优选约48到96小时。特别地，关于加热时间的上限，为了将剩余的有机溶剂和水的含量降至低于可接受的水平，加热可继续进行，但是优选只要有机溶剂和水的含量降至可接受的水平，即停止烘干，以避免或尽量减少软化的微胶囊间的物理接触和由软化的微胶囊堆积而产生的压力导致的变形。
可使用能使微胶囊均匀加热的任何加热方法。优选的烘干方法包括在恒温室，流化床室，流动相或窑内进行烘干的方法，和使用微波进行烘干的方法，更优选在恒温室中进行烘干的方法。
尽管根据本发明的方法制备的持续释放微胶囊可以本身大小的微细颗粒给生物体服用，但是它们也可在制成各种剂型后使用，也可用作制备这些药剂的原料。
这样的制剂包括注射剂，口服制剂(例如，粉末，颗粒，胶囊，片剂)，鼻腔制剂和栓剂(例如，直肠栓剂，阴道栓剂)。尽管这些制剂中生物活性物质的量随生物活性物质的种类，剂型，所治疗的疾病等变化，但通常每一剂量单位为约0.001mg到5g，优选约0.01mg到2g。
这些制剂可按药学上常用的已知方法制备。
例如，通过将本发明方法制备的持续释放微胶囊与分散剂〔例如，Tween 80，HCO 60(Nikko Chemicals生产)，羧甲基纤维素，藻酸钠〕，防腐剂(例如，羟苯甲酸甲酯，对羟苯甲酸丙酯，苯甲醇，氯丁醇)，等渗剂(例如，氯化钠，甘油，山梨糖醇，葡萄糖)等分散于水中得到含水悬浮液，或通过分散于植物油如橄榄油，芝麻油，花生油，棉籽油或玉米油，丙二醇，等中得到含油悬浮液，而将其制成注射剂。
再者，可将用本发明的方法制备的持续释放微胶囊装入注射器的腔室中或与该注射器另一腔室中的含有分散剂的水一起装入腔室，即所谓的双腔室注射器中。
此外，上述持续释放微胶囊的注射剂可在除上述组合之外的赋形剂(如抗凝剂如甘露糖醇，山梨糖醇，乳糖，葡萄糖)的存在下再分散，然后将其冷冻干燥或喷雾干燥固化，使用时加入注射用蒸馏水或适当的分散剂，得到更稳定的持续释放制剂。
通过，例如，按已知方法将赋形剂(例如，乳糖，蔗糖，淀粉)，崩解剂(例如，淀粉，碳酸钙)，粘合剂(例如，淀粉，阿拉伯树胶，羧甲基纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，羟丙基纤维素)或润滑剂(例如，滑石，硬脂酸镁，聚乙二醇6000)加入按本发明方法制备的持续释放微胶囊，将此混合物压制成形，如果需要，接着按已知方法涂膜掩蔽异味或赋于肠溶或持续释放性质。有用的涂膜剂包括羟丙基甲基纤维素，乙基纤维素，羟甲基纤维素，羟丙基纤维素，聚氧乙二醇，Tween 80，Pluronic F68，乙酸邻苯二甲酸纤维素，邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素，乙酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素，Eudragit(Robm Company，West Germany，异丁烯酸-丙烯酸共聚物)，和染料如钛白和铁红。
按照已知方法，通过本发明方法制备的鼻腔制剂可为固体，半固体或液体。例如，研磨持续释放微胶囊本身或与赋形剂(例如，葡萄糖，甘露糖醇，淀粉，微晶纤维素)，增稠剂(例如，天然橡胶，纤维素衍生物，丙烯酸聚合物)等的混合物可制备固体鼻腔制剂。按与注射剂几乎相同的方式，可制备含油或含水悬浮液形式的液体鼻腔制剂。半固体鼻腔制剂优选含水或含油凝胶或软膏。所有这些制剂都可含有pH调节剂(例如，碳酸，磷酸，枸橼酸，盐酸，氢氧化钠)，防腐剂(例如，对羟苯甲酸酯，氯丁醇，苯扎氯铵)等。
按照已知方法，由通过本发明的方法制备的持续释放微胶囊制备的栓剂可为含油或含水固体，半固体或液体。任何不溶解上述微胶囊的油性基质都可用来制备栓剂。这样的油性基质包括高级脂肪酸甘油酯〔例如，可可脂，Witepsol-系列产品(Dynamite Nobel Company)〕，中等脂肪酸〔例如，MIGLYOL-系列产品(Dynamite Nobel Company)〕和植物油(例如，芝麻油，大豆油，棉籽油)。水性基质包括聚乙二醇和丙二醇。水性凝胶基质包括天然橡胶，纤维素衍生物，乙烯基聚合物和丙烯酸聚合物。
本发明方法制备的持续释放微胶囊优选使用其注射剂形式。
当使用本发明的方法制备的持续释放微胶囊的注射用悬浮液形式时，例如，它们的平均颗粒大小选自从约0.1到500μm的范围，只要分散度的要求与针头通道相符合即可。优选地，平均粒度为约1到300μm，更优选约2到200μm。
本发明的方法制备的持续释放微胶囊可在从几天到约1年的长时期内释放生物活性物质，因此可按几天或一周一次到甚至一年一次，通常一月一次到数月一次的用药时间表使用。
本发明方法制备的持续释放微胶囊制剂毒性低，可被安全地使用。
尽管可根据活性组分生物活性物质的种类和含量，剂型，药物释放期，被治疗的动物的种类(例如，温血哺乳动物如小鼠，大鼠，马，牛和人)，所治疗的疾病(例如，与性激素有关的疾病如前列腺癌，前列腺肥大，子宫内膜异位，痛经，性早熟和乳腺癌，和避孕)和其它因素而有很大变化，本发明方法制备的持续释放微胶囊制剂的剂量可以定在任何水平，只要活性组分可产生效果。每次用药的剂量可根据需要在每个成人(体重50Kg)约1mg到10g，优选从约5mg到2g的范围选择。当持续释放制剂为注射悬浮液时，它的体积可根据需要从约0.1到5ml，优选从约0.5到3ml的范围内选择。
用于本发明的肽(I)或(II)或其盐具有LH-RH兴奋剂或拮抗剂的活性；按本发明制备方法制备的含肽(I)或(II)及其盐的持续释放微胶囊制剂可用作治疗与性激素有关的疾病如前列腺肥大，前列腺癌，子宫肌瘤，子宫内膜异位，痛经，性早熟和乳腺癌的药剂，以及用于避孕。特别地，当肽(I)或其盐用作治疗上述疾病或避孕的药剂的生物活性物质时，肽(I)的成人(体重50Kg)单位剂量的范围为1mg到100mg，优选2mg到50mg。
实施例
下面通过下列实施例更详细地描述本发明。
在以下描述中，Tmg表示定义如上的中间玻璃化点。
实施例1
在加热条件下，将一克乙酸亮丙瑞林(TAP-144)和157.5mg明胶溶于先加热到70-80℃的1.0ml蒸馏水中。当被轻微地温热到明胶液化的程度时，在该溶液中加入7.85g乳酸/羟基乙酸共聚物(乳酸/羟基乙酸＝75/25mol％，粘度0.155，重量平均分子量约11,000，粘度和重量平均分子量按下述方式测定，Wako Pure Chemical)在13.15g二氯甲烷中形成的21g溶液，接着用小型均化器搅拌乳化数分钟，得到w/o乳液。冷却到10-20℃后，将该乳液注射到5000ml先调到10-20℃的0.1％(w/v)聚乙烯醇水溶液中，接着用汽轮型均相混合器搅拌，得到w/o/w乳液。将该乳液在20-35℃搅拌，挥发二氯甲烷，固化内部w/o乳液，然后将其用离心机收集。将收集到的固体再分散于蒸馏水中并离心，在此之后，冲洗掉游离药物，聚乙烯醇等。将收集到的微胶囊分散于小量蒸馏水中，在其中溶入1.5g甘露糖醇，将所得微胶囊悬浮液在减压下冷冻干燥得到微胶囊。
重量平均分子量：
将0.20g共聚物溶于10ml四氢呋喃(THF)并使用该溶液作为样品溶液。分别地，将0.1g各种标准的聚苯乙烯制剂〔Toso(Japan)，Catalog No.F-10，F-2，A-5000和A-1000，具有约96400，约5570，约19600和约820的重量平均分子量，分别被使用〕溶于10ml THF，并使用该溶液作为标准溶液A。而且，将0.1g各种其他标准聚苯乙烯制剂〔Toso(Japan)，Catalog No.F-4，F-1，A-2800和A-500，具有约37900，约9100，约2980和约500的重量平均分子量，分别被使用〕溶于10ml THF，并使用该溶液作为标准溶液B。在如下所示的操作条件下通过凝胶渗透色谱法分析100μl各个样品溶液和标准溶液A和B，重量平均分子量(Mw)的测定如下所示：
(操作条件)：
检测器：RI检测器(Shodex RI SE-51，Showa Deuko)或相当的仪器
柱：连接的前置柱Shodex A-800p(50×6mmi.d.)与Shimadzu HSG-30(500×7.9mmi.d.)，Shimadzu HSG-20-(500×7.9mmi.d.)，Shimadzu HSG-15(500×7.9mmi.d.)和Shimadzu HSG-10(500×7.9mmi.d.)，按填充物孔径大小下行排列，或相当的柱。
柱温：约50℃恒温
流动相：四氢呋喃
流速：1.0ml/分
注射体积：100μl
(计算)
标绘与对数分子量相对的标准聚苯乙烯溶液A和B的保留时间，以画出工作标准曲线。接着，以30秒的间隔将从样品溶液洗脱出的共聚物组分分成若干份，通过自动面积积分法确定各份的面积。
粘度：
精确称取约1.0g共聚物，溶于氯仿精确地得到100ml溶液，使用该溶液作为样品溶液。通过粘度测定法使用Ubbelohde’s粘度计在25℃测量样品溶液和氯仿的下落时间，并按下式确定粘度：
实施例2
使用乳酸/羟基乙酸共聚物(乳酸/羟基乙酸＝75/25，粘度0.154、重量平均分子量约10300，粘度和重量平均分子量按与实施例1所述相同的方式确定)代替实施例1所用共聚物，以与实施例1相同的方式制备微胶囊。
实施例3
使用乳酸/羟基乙酸共聚物(乳酸/羟基乙酸＝75/25，粘度0.155，重量平均分子量约11500，粘度和重量平均分子量按与实施例1所述相同的方式确定)代替实施例1所用共聚物，以与实施例1相同的方式制备微胶囊。
实施例4
将实施例1所得微胶囊在50℃，高于乳酸/羟基乙酸共聚物基质Tmg(℃)3℃的温度下烘干24小时，得到粉末状持续释放微胶囊制剂。
实施例5
将实施例1所得微胶囊在50℃，高于乳酸/羟基乙酸共聚物基质Tmg(℃)3℃的温度下烘干48小时，得到粉末状持续释放微胶囊制剂。
实施例6
将实施例1所得微胶囊在50℃，高于乳酸/羟基乙酸共聚物基质Tmg(℃)3℃的温度下烘干96小时，得到粉末状持续释放微胶囊制剂。
实施例7
将实施例1所得微胶囊在50℃，高于乳酸/羟基乙酸共聚物基质Tmg(℃)3℃的温度下烘干120小时，得到粉末状持续释放微胶囊制剂。
按照本发明的制备方法，可以提供具有非常理想的临床药学特性的持续释放微胶囊，在使用该微胶囊后即以恒定的速率在从几天到一年，通常为从一周到数月的非常长的时期内释放生物活性物质，并能明显地抑制服药后最初产生的生物活性物质的过量(例如50％)释放以及最低限度地保留有机溶剂。