一种灰树花多糖硫酸酯及其制备方法与应用 【技术领域】
本发明涉及一种真菌多糖衍生物及其制备方法与应用，更具体地说涉及一种灰树花多糖硫酸酯及其制备方法与在提高免疫和抗癌中的应用。
背景技术
灰树花(Grifola.frondosa)属于多孔菌属，担子菌，为名贵食用和药用真菌，利用液体发酵方法可以获得大量灰树花菌丝体。研究表明，灰树花中含有多种结构不同的多糖，如水溶性多糖和水不溶性多糖等。水溶性多糖中含有β-1，3-葡聚糖结构，水不溶性多糖的结构尚不明确。灰树花水溶性多糖的结构与活性研究较多，但灰树花不溶性多糖的结构与活性研究较少。一篇论文(无锡轻工大学学报，2003年)曾披露了一种灰树花多糖硫酸酯的制备方法，所得产品中糖残基之间的连接方式主要为1，6-糖苷键，多糖中单糖组成也不明确。目前，关于灰树花水不溶性多糖硫酸酯的结构与活性研究尚未见报导。
【发明内容】
本发明的目的是提供一种灰树花多糖硫酸酯以及制备方法与应用，能弥补现有技术的上述不足。
一种灰树花多糖硫酸酯，其特征是它的糖链中含有葡萄糖、甘露糖和木糖，主链为α-1，3-糖苷键，支链为α-1，4-糖苷键。
一种灰树花多糖硫酸酯的制备方法，其特征是将灰树花水不溶性多糖加入到磺化剂中，在50-75℃下酯化反应2-8小时，经乙醇沉淀，中和，洗涤，干燥。
灰树花多糖硫酸酯用作免疫调节剂。
灰树花多糖硫酸酯用作抗肿瘤药物。
本发明的产品结构独特，具有免疫调节和抗癌活性。该产品制备方法简单，容易操作，所用的原料来源丰富。
【具体实施方式】
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
向100克灰树花菌丝体中加入2000毫升浓度为85％(重量百分比，下同)的乙醇水溶液，于80℃提取2小时，离心收集沉淀，然后向该沉淀中加入1500毫升蒸馏水，于100℃回流提取2小时，离心收集沉淀，然后向该沉淀中加入1500毫升浓度为8％的NaOH水溶液，于4℃搅拌提取8小时，离心收集上清液，该上清液用稀醋酸中和并离心收集沉淀，用水洗涤，加入无水乙醇脱水干燥得到灰树花水不溶性多糖。取甲酰胺60mL置于250mL三口瓶中，用冰盐浴冷却，搅拌条件下缓慢滴加12mL氯磺酸，控制滴加速度使反应体系温度低于5℃，继续搅拌30min得到磺化剂。称取4g经干燥粉碎的上述多糖，将上述磺化剂升温并加入上述多糖，控制反应温度65℃，并搅拌反应3h，反应结束后取出烧瓶冷至室温，加入四倍体积的95％乙醇，出现沉淀，将此沉淀用少量水溶解，用NaOH调pH至8，反复醇沉水溶4次，于60℃烘干即得本发明的灰树花多糖硫酸酯。该产品的分子量10万-25万道尔顿，有机硫含量8-18％。
本实施例中所述的甲酰胺可用吡啶代替；氯磺酸与甲酰胺或吡啶的体积比为1∶5-10，所述的酯化反应温度为50-75℃，反应时间为2-8小时。
用本发明地产品按现有的方法对小鼠作了免疫调节和抗癌活性实验，结果如表1和表2所示。从表1和表2实验结果可以看出，本发明的产品能明显提高荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数，抑瘤率达51％，具有明显的提高免疫和抗癌活性。
表1灰树花多糖硫酸酯对小鼠免疫器官的影响组别 瘤株给药途径和剂量 胸腺指数 (mg/g) 脾指数 (mg/g)生理盐水组 S180 8.25 1.92顺铂 S180 ip(2mg/kg) 3.63 0.66天地欣 S180 ip(2mg/kg) 6.67 1.84灰树花多糖硫酸酯 S180 ip(1mg/kg) 8.61 2.83
表2灰树花多糖硫酸酯对小鼠抑瘤率的影响 组别 瘤株 给药途径和剂量 抑瘤率，％ 生理盐水组 S180 0 顺铂 S180 ip(2mg/kg) 85 天地欣 S180 ip(2mg/kg) 29 灰树花多糖 硫酸酯 S180 ip(1mg/kg) 51