一种奥利亚罗非鱼与鳜鱼的杂交方法 技术领域：
本发明涉及一种奥利亚罗非鱼与鳜鱼的杂交方法，属于人类生活必需品技术领域。
背景技术：
本发明作出以前，在已有技术中，奥利亚罗非鱼与鳜鱼通常是采用以下方式进行繁殖：
1、奥利亚罗非鱼的繁殖：
奥利亚罗非鱼的繁殖较为复杂，目前仍是采用自然产卵。在生产上，用于繁殖的奥利亚罗非鱼按雌雄比3∶1放入产卵池中，放养密度一般为每1/15公顷放养250～300克/尾的亲鱼600尾左右，育种池内不得混养肉食性鱼类。在苏南地区，每年5月底开始，罗非鱼卵子达到成熟，当池塘水温达到20℃时以上时即可自行繁殖。雌鱼排卵后，雄鱼即排出精液使卵受精，雌鱼随即将受精卵吸入口中，受精卵在雌鱼口腔中完成孵化出膜，这一过程一般需1周时间，此期间雌鱼不摄食，待鱼苗孵出后，才开始进食，雌鱼体内卵子继续发育成熟。半个月至1个月后，雌鱼又可进行产卵，一般一年可产卵3-4次。
在进行罗非鱼选育研究时，由于需进行雌雄鱼1对1的配组繁殖，故一般先从野外池塘拉网，选出卵子成熟度好的亲鱼放至室内水族箱中。待雄鱼追逐雌鱼时，注意观察，看到雌鱼排卵，立即捕出雌鱼，人工挤出卵子用于人工授精；或待雄鱼射精后，捕出雌鱼，洗出口腔中的受精卵用于人工孵化。
由于罗非鱼繁殖是自然产卵，因此，无法控制产卵时间，难以获得成熟卵用于开展杂交等的试验，只能用于一般生产。
2、鳜鱼的人工繁殖：
在催产前作好亲鱼选择工作，一般选择三龄以上、规格为1.5kg以上的镢鱼进行人工催产。判断雌、雄鳜鱼是否性成熟采用如下的方法：首先进行外形观察，成熟的雌鱼腹部向上时，卵巢轮廓明显，并略向内凹，用手压腹部松软而富有弹性，提起鳜鱼头部，卵巢有向后移动状，此为成熟较好的鱼，反之则成熟较差；成熟的雄鱼轻压腹部有乳白色的精液流出，并能立即在水中自然散开，反之则成熟较差。若外形观察难以进行，可挖卵观察，用挖卵器挖出少量卵粒，若见卵粒大小整齐，有光泽，较饱满或略扁塌，全部或大部分核偏位，即表明亲鱼性腺成熟较好，反之则成熟不够或退化。
进行人工繁殖时，为了解决鳜鱼的饵料鱼配套问题，在苏南地区，当5月中下旬，水温达到25℃左右时，挑选成熟的亲鱼，适时进行人工催产。采有人绒毛膜促性腺激素(HCG)、促黄体释放激素类似物(LRH-A2)、鱼类脑垂体(PG)等作为人工催产剂，以上二种或三种混合后分1～2次注射。注射剂量为四大家鱼催产剂量的2～3倍，注射方式采用胸腔或背鳍注射。
一般采用自然受精的方式，雌雄亲鱼配比为1∶1.5，经注射后的亲鱼移放入产卵池内，待效应时间后进行产卵。效应时间的长短随水温的高低而变化，当水温在25℃左右时，效应时间为22～28小时。在适宜的温度范围内，温度越高，受精卵脱膜越快，25℃时约2昼夜可脱膜，出膜后约70～80小时开始摄食。也可采用人工方法将卵挤入一搪瓷盆中，再将精液挤入，迅速混匀，加入生理盐水使卵受精，受精卵在孵化环道或孵化桶中孵化出膜。
发明内容：
本发明的目的在于克服上述不足之处，从而提供一种采用人工注射催产激素使罗非鱼在受控条件下产卵、与鳜鱼进行杂交、成活率高，口味好，同时，培育出来的杂交鱼比对照奥利亚罗非鱼生长快10％以上，体型短，厚，适用加工地一种奥利亚罗非鱼与鳜鱼的杂交方法。
本发明的主要解决方案是这样实现的：
本发明采用以下方法进行：
1.在水温达26℃以上时，选择后腹部饱满、生殖孔突起，体格健壮体形较好的纯种奥利亚罗非鱼作为杂交母本，杂交父本则挑选轻按腹部即有乳白色精液流出的雄鳜鱼，同时按雌雄比3∶1选雌、雄奥利亚罗非鱼，将上述亲鱼放入室内水族箱中，充气以保证溶氧；
2.采用催产剂进行人工注射，催产剂分别为：人绒毛膜促性腺激素、促黄体释放激素类似物、地欧酮、鱼类脑垂体，奥利亚罗非鱼雌、雄个体均采用一次注射，雄鳜鱼注射催产剂也可不注射催产剂；
3.将上述亲鱼注射催产激素后，把奥利亚罗非鱼雌、雄鱼分开饲养，在将达到激素效应时间前3-4小时，再将雄鱼捞入雌鱼箱中，使其追逐产卵。当水温在26℃-30℃，效应时间一般为24-30小时；
4.当奥利亚罗非鱼雌鱼排出少量卵子时，立即捞出，将成熟卵子挤入洗净并擦干的搪瓷盆中，挤入鳜鱼精液，用干净、柔软的家禽羽毛快速拌匀，倒入已充分曝气的生理盐水(氯化钠浓度在0.65％至0.9％均可)，使卵受精0.5-1分；。
5.将受精卵倒入玻璃培养皿中孵化，孵化用水采用充分曝气的冷开水，水温在26℃-30℃；
6.在孵化过程中，将死亡的卵吸去，，每隔0.5-1小时，轻轻摇动培养皿，随时将死亡的卵吸去，以防卵与培养皿表面长时间接触的一侧变色坏死；
7.杂交鱼苗出膜后，转入水族箱中饲养，养至3-5cm后移入野外池塘继续培育为杂交鱼。
本发明的催产剂分别为：
人绒毛膜促性腺激素剂量为：300-400单位/kg鱼体重、促黄体释放激素剂量为：1-5微克/kg鱼体重、地欧酮剂量为：2-3毫克/kg鱼体重、鱼类脑垂体剂量为：4-6毫克/kg鱼体重。
本发明具有以下优点：
本发明采用人工注射催产合剂使罗非鱼在受控条件下产卵，与鳜鱼进行杂交，成活率高。根据形态学和分子生物学分析，杂交鱼与奥利亚罗非鱼极为相似，但有部分可数性状与鳜鱼相似，在基因组方面，杂交鱼主要继承了奥利亚罗非鱼的遗传物质，但也有少量父本鳜鱼的遗传物质。由于该杂交鱼兼具了两种鱼的遗传性状，因而是开展鱼类遗传育种研究及开发的极佳材料。同时，培育出来的杂交鱼比对照奥利亚罗非鱼生长快10％以上，体型短、厚，适于加工。
具体实施方式：
实施例1：
本发明将每年罗非鱼从越冬室中移入野外池塘后，加强喂养约1个月；同时，也加强鳜鱼(雄)亲鱼的培育，保证塘中有充足、适口的饵料鱼。从5月下旬开始，罗非鱼亲鱼基本成熟，可以进行奥利亚罗非鱼(雌)与鳜鱼(雄)的杂交。在水温达26℃以上时，拉网检查奥利亚罗非鱼性腺发育情况。选择后腹部饱满、生殖孔突起并发红或微红、体格健壮且体形较好的纯种奥利亚罗非鱼作为杂交母本，杂交父本则挑选轻按腹部即有乳白色精液流出的雄鳜鱼，同时按雌雄比3∶1选足够数量的雄奥利亚罗非鱼。将这些亲鱼放入室内水族箱中，充气以保证溶氧。采用人工注射催产剂，催产剂为：人绒毛膜促性腺激素(HCG)剂量为300单位/kg鱼体重、促黄体释放激素类似物(LRH-A2)剂量为2微克/kg鱼体重、地欧酮(DOM)剂量为：2毫克/kg鱼体重、鱼类脑垂体(PG)剂量为：4毫克/kg鱼体重。上述催产剂进行人工注射催产，奥利亚罗非鱼雌、雄个体均采用一次注射，雄鳜鱼既可注射催产剂也可不注射，视精液量而定，精液量少即注射，量多则无需注射。注射催产激素后，奥利亚罗非鱼雌、雄鱼分开饲养，在将达到激素效应时间前3-4小时，将雄鱼捞入雌鱼箱中，使其追逐产卵。在26℃-30℃水温，效应时间一般为24-30小时，温度越高，效应时间越短。
待观察到奥利亚罗非鱼雌鱼排出少量卵子时，立即捞出，将成熟卵子挤入洗净并擦干的搪瓷盆中，迅速挤入鳜鱼精液，用干净、柔软的家禽羽毛快速拌匀，倒入已充分曝气的生理盐水(氯化钠浓度在0.65％至0.9％均可)，使卵受精0.5-分钟-1分钟。将受精卵倒入玻璃培养皿中孵化，孵化用水为充分曝气的冷开水。在孵化过程中，随时将死亡的卵吸去，以防止死卵腐败变质污染水质，每隔半小时至1小时，轻轻摇动培养皿，以防卵与培养皿表面长时间接触的一侧变色坏死。由于奥利亚罗非鱼与鳜鱼是远缘杂交，其杂交子代畸形率很高、成活率极低，在胚胎发育过程中有两个死亡率极高的时期，一是原肠期，二是出膜，并且从囊胚开始，杂交子代胚胎发育要比正常的奥利亚罗非鱼自交子代慢12个小时以上。受精卵孵化率远低于自交子代，在1‰以下。杂交鱼苗出膜后，即可转入水族箱中饲养，养至3-5cm后移入野外池塘继续培育。
本发明杂交方法的独特之处主要在于挑选性成熟的罗非鱼，通过人工注射催产激素，获得成熟卵，并与鳜鱼进行远缘杂交，成功培育获得杂交鱼。
实施例2：
在水温达26℃以上时，挑选纯种奥利亚罗非鱼作为杂交母本，杂交父本则挑选有乳白色精液流出的雄鳜鱼，同时按雌雄比3∶1选足够数量的雄奥利亚罗非鱼。将这些亲鱼放入室内水族箱中，充气以保证溶氧。采用人工注射催产剂，催产剂为：人绒毛膜促性腺激素(HCG)剂量为350单位/kg鱼体重、促黄体释放激素类似物(LRH-A2)剂量为3.5微克/kg鱼体重、地欧酮(DOM)剂量为：2.5毫克/kg鱼体重、鱼类脑垂体(PG)剂量为：5毫克/kg鱼体重。采用实施例1中的杂交方法，同样可以成功培育获得杂交鱼。
实施例3：
在水温达26℃以上时，挑选性成熟的罗非鱼作为杂交母本，杂交父本为乳白色精液流出的雄鳜鱼，通过人工注射催产剂，获得成熟卵，并与鳜鱼进行远缘杂交。人工注射催产剂分别为：人绒毛膜促性腺激素(HCG)剂量为400单位/kg鱼体重、促黄体释放激素类似物(LRH-A2)剂量为5微克/kg鱼体重、地欧酮(DOM)剂量为：3毫克/kg鱼体重、鱼类脑垂体(PG)剂量为：6毫克/kg鱼体重。并采用实施例1、2中的杂交方法，同样可以成功培育获得杂交鱼。