一种盆栽红掌苗组培快繁方法 技术领域
本发明涉及一种盆栽红掌苗组培快繁方法。
背景技术
以前采用的切割扦插进行繁殖的方法，一株红掌一年只能繁殖出3～4株，因其繁殖系数低，远不能满足市场需求。因此，目前盆栽红掌的繁殖方法多采用组织培养法，它是一种利用植物细胞的全能性，离体培养植物小块组织，进行植物无性系快繁的工厂化育苗技术，具体工艺是：切下红掌的幼嫩叶片，先诱导出愈伤组织，再分化出不定芽，再培育成可以移栽驯化的壮苗。一般情况下此过程需要6个月以上，而且需要较高的生产成本(包括培养基成本和培养条件耗费等)。所以现有的盆栽红掌苗繁殖技术仍存在以下缺陷：繁殖速度较慢、成本较高。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种繁殖速度快、成本低的盆栽红掌苗组培快繁方法。
本发明所采用的技术方案是：本发明盆栽红掌苗组培快繁方法包括以下步骤：
(一)愈伤组织的诱导
(1)取红掌完全展开2～5天的幼嫩叶片作为外殖体；
(2)将所述叶片先用75％酒精处理15秒、再在0.1％升汞溶液中升汞处理7～8分钟取出，用无菌水冲洗5次后浸入无菌水中备用；
(3)将升汞处理后的所述叶片用加有BA 2.5mg/l和2，4-D 2.0mg/l地预处理液处理叶片20分钟；
(4)将预处理后的所述叶片切成0.6cm×0.6cm的叶片切块，将所述叶片切块放入无菌水中备用；
(5)将所述叶片切块并成批接种于诱导培养基上进行培养，接种时保持所述叶片切块的叶面向上，所述诱导培养基为加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D 0.1mg/l的改良MS，所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分；
(6)培养温度为23～27℃，先在连续黑暗条件下诱导60天，随后逐渐增加光照再生长30～60天，即可在所述叶片切块的边缘诱导出愈伤组织；
(二)不定芽的诱导和分化
(1)将诱导出的所述愈伤组织置于分化培养基上诱导分化出不定芽，所述分化培养基为加有BA 0.5mg/l、NAA 0.1mg/l的改良MS或加有TDZ 0.02mg/l的改良MS；
(2)培养温度为23～27℃、光照为每天12小时；
(三)无菌苗的增殖培养
将分化出的所述不定芽置于增殖培养基上增殖培养出生根的无菌苗，所述增殖培养基为加有6-BA 0.1～0.5mg/l的1/2MS或加有TDZ0.01～0.02mg/l及0.3％的活性炭的1/2MS；
(四)无菌苗的驯化移栽
(1)当所述无菌苗长至株高2～4厘米、最大叶宽0.7～0.9厘米且带有2～3条粗壮根是即可进行移栽驯化；
(2)移栽前一周打开瓶盖以使所述无菌苗逐步适应外界条件；
(3)洗净所述无菌苗根部琼脂并移栽入泥炭土与珍珠岩比例为4∶1的基质内；
(4)保持温度为20～28℃、弱光条件，移栽后的第一周用薄膜覆盖，控制湿度为85～95％。
本发明的有益效果是：由于本发明采用加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D0.1mg/l的改良MS作为诱导培养基，所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分，并且在将叶片切块接种于所述诱导培养基上前先用加有BA 2.5mg/l和2，4-D 2.0mg/l的预处理液处理20分钟，所以可以有效促进红掌叶片愈伤组织的诱导率并缩短诱导时间；由于本发明利用加有BA 0.5mg/l、NAA 0.1mg/l的改良MS或加有TDZ 0.02mg/l的改良MS作为分化培养基，所以可以提高愈伤组织快速分化出不定芽；又由于本发明采用加有6-BA 0.1～0.5mg/l的1/2MS或加有TDZ 0.01～0.02mg/l及0.3％的活性炭的1/2MS作为增殖培养基，不定芽在这两种培养基上都能旺盛增殖，且增殖培养中无菌苗都能形成气生根，具有吸收功能，可以直接用于驯化移栽，所以增殖培养快速。本发明通过缩短诱导及增殖培养的时间、简化培养条件或培养方式等工艺，可以降低生产成本，提高商品化生产的效率和利润，因此用本发明的盆栽红掌苗组培快繁方法繁殖速度快、成本低。
具体实施方式
实施例一：
本发明盆栽红掌苗组培快繁方法包括以下步骤：
(一)愈伤组织的诱导
(1)取红掌完全展开2天的幼嫩叶片作为外殖体；
(2)将所述叶片先用75％酒精处理15秒、再在0.1％升汞溶液中处理7分钟取出，用无菌水冲洗5次后浸入无菌水中备用，将叶片浸入无菌水中，是为了防止叶片褐化；
(3)将升汞处理后的所述叶片用加有BA 2.5mg/l和2，4-D 2.0mg/l的预处理液处理叶片20分钟；
(4)将预处理后的所述叶片切成0.6cm×0.6cm的叶片切块，将所述叶片切块放入无菌水中，以待成批接入培养皿中；
(5)将所述叶片切块并成批接种于诱导培养基上进行培养，接种时保持所述叶片切块的叶面向上，所述诱导培养基为加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D 0.1mg/l的改良MS，所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分；
(6)培养温度为23℃，在连续黑暗条件下诱导愈伤组织的形成，愈伤组织在黑暗条件下诱导和生长60天后，随后逐渐增加光照，靠近叶柄的叶片基部比较容易诱导愈伤组织，生长30天后，可以在叶片边缘诱导出愈伤组织。
(二)不定芽的诱导和分化
(1)将诱导出的所述愈伤组织置于分化培养基上诱导分化出不定芽，所述分化培养基为加有BA 0.5mg/l、NAA 0.1mg/l的改良MS；
(2)培养温度为23℃、光照为每天12小时；
(三)无菌苗的增殖培养
将分化出的所述不定芽置于增殖培养基上增殖培养出生根的无菌苗，所述增殖培养基为加有6-BA 0.1mg/l的1/2MS；增殖培养中无菌苗都能形成气生根，具有吸收功能，可以直接用于驯化移栽；
(四)无菌苗的驯化移栽
(1)当所述无菌苗长至株高2厘米、最大叶宽0.7厘米且带有2条粗壮根是即可进行移栽驯化；
(2)移栽前一周打开瓶盖以使所述无菌苗逐步适应外界条件；
(3)洗净所述无菌苗根部琼脂并移栽入泥炭土与珍珠岩比例为4∶1的基质内；
(4)保持温度为20℃并注意遮荫以保持弱光条件弱光条件，移栽后的第一周用薄膜覆盖，控制湿度为85％，30天成活率可达95％以上。
本发明通过缩短诱导及增殖培养的时间、简化培养条件或培养方式等工艺，可以降低生产成本，提高商品化生产的效率和利润，因此用本发明的盆栽红掌苗组培快繁方法繁殖速度快、成本低。
实施例二：
本发明盆栽红掌苗组培快繁方法包括以下步骤：
(一)愈伤组织的诱导
(1)取红掌完全展开5天的幼嫩叶片作为外殖体；
(2)将所述叶片先用75％酒精处理15秒、再在0.1％升汞溶液中处理8分钟取出，用无菌水冲洗5次后浸入无菌水中备用；
(3)将升汞处理后的所述叶片用加有BA 2.5mg/l和2，4-D 2.0mg/l的预处理液处理叶片20分钟；
(4)将预处理后的所述叶片切成0.6cm×0.6cm的叶片切块，将所述叶片切块放入无菌水中备用；
(5)将所述叶片切块并成批接种于诱导培养基上进行培养，接种时保持所述叶片切块的叶面向上，所述诱导培养基为加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D 0.1mg/l的改良MS，所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分；
(6)培养温度为27℃，先在连续黑暗条件下诱导60天，随后逐渐增加光照再生长60天，即可在所述叶片切块的边缘诱导出愈伤组织；
(二)不定芽的诱导和分化
(1)将诱导出的所述愈伤组织置于分化培养基上诱导分化出不定芽，所述分化培养基为加有BA 0.5mg/l、NAA 0.1mg/l的改良MS；
(2)培养温度为27℃、光照为每天12小时；
(三)无菌苗的增殖培养
将分化出的所述不定芽置于增殖培养基上增殖培养出生根的无菌苗，所述增殖培养基为加有6-BA 0.5mg/l的1/2MS；在添加0.1mg/l的6-BA培养基上，植株高度高于0.5mg/l的6-BA，但增殖系数低于BA 0.5mg/l；
(四)无菌苗的驯化移栽
(1)当所述无菌苗长至株高4厘米、最大叶宽0.9厘米且带有3条粗壮根是即可进行移栽驯化；
(2)移栽前一周打开瓶盖以使所述无菌苗逐步适应外界条件；
(3)洗净所述无菌苗根部琼脂并移栽入泥炭土与珍珠岩比例为4∶1的基质内；
(4)保持温度为28℃、弱光条件，移栽后的第一周用薄膜覆盖，控制湿度为95％。
其余特征同实施例一。
实施例三：
本发明盆栽红掌苗组培快繁方法包括以下步骤：
(一)愈伤组织的诱导
(1)取红掌完全展开4天的幼嫩叶片作为外殖体；
(2)将所述叶片先用75％酒精处理15秒、再在0.1％升汞溶液中处理7分钟取出，用无菌水冲洗5次后浸入无菌水中备用；
(3)将升汞处理后的所述叶片用加有BA 2.5mg/l和2，4-D 2.0mg/l的预处理液处理叶片20分钟；
(4)将预处理后的所述叶片切成0.6cm×0.6cm的叶片切块，将所述叶片切块放入无菌水中备用；
(5)将所述叶片切块并成批接种于诱导培养基上进行培养，接种时保持所述叶片切块的叶面向上，所述诱导培养基为加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D 0.1mg/l的改良MS，所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分；
(6)培养温度为25℃，先在连续黑暗条件下诱导60天，随后逐渐增加光照再生长45天，即可在所述叶片切块的边缘诱导出愈伤组织；
(二)不定芽的诱导和分化
(1)将诱导出的所述愈伤组织置于分化培养基上诱导分化出不定芽，所述分化培养基为加有BA 0.5mg/l、NAA 0.1mg/l的改良MS；
(2)培养温度为25℃、光照为每天12小时；
(三)无菌苗的增殖培养
将分化出的所述不定芽置于增殖培养基上增殖培养出生根的无菌苗，所述增殖培养基为加有6-BA 0.3mg/l的1/2MS；
(四)无菌苗的驯化移栽
(1)当所述无菌苗长至株高3厘米、最大叶宽0.8厘米且带有2条粗壮根是即可进行移栽驯化；
(2)移栽前一周打开瓶盖以使所述无菌苗逐步适应外界条件；
(3)洗净所述无菌苗根部琼脂并移栽入泥炭土与珍珠岩比例为4∶1的基质内；
(4)保持温度为24℃、弱光条件，移栽后的第一周用薄膜覆盖，控制湿度为90％。
其余特征同实施例一。
实施例四：
本发明盆栽红掌苗组培快繁方法包括以下步骤：
(一)愈伤组织的诱导
(1)取红掌完全展开2天的幼嫩叶片作为外殖体；
(2)将所述叶片先用75％酒精处理15秒、再在0.1％升汞溶液中处理7分钟取出，用无菌水冲洗5次后浸入无菌水中备用；
(3)将升汞处理后的所述叶片用加有BA 2.5mg/l和2，4-D 2.0mg/l的预处理液处理叶片20分钟；
(4)将预处理后的所述叶片切成0.6cm×0.6cm的叶片切块，将所述叶片切块放入无菌水中备用；
(5)将所述叶片切块并成批接种于诱导培养基上进行培养，接种时保持所述叶片切块的叶面向上，所述诱导培养基为加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D 0.1mg/l的改良MS，所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分；
(6)培养温度为23℃，先在连续黑暗条件下诱导60天，随后逐渐增加光照再生长30天，即可在所述叶片切块的边缘诱导出愈伤组织；
(二)不定芽的诱导和分化
(1)将诱导出的所述愈伤组织置于分化培养基上诱导分化出不定芽，所述分化培养基为加有TDZ 0.02mg/l的改良MS；
(2)培养温度为25℃、光照为每天12小时；
添加TDZ的分化培养基分化效果较好，30天就可以诱导大部分愈伤组织分化。
(三)无菌苗的增殖培养
将分化出的所述不定芽置于增殖培养基上增殖培养出生根的无菌苗，所述增殖培养基为加有TDZ 0.01mg/l及0.3％的活性炭的1/2MS，添加TDZ增殖较旺盛，而且植株生长较快，此外增殖培基中添加0.3％的活性炭可以改善植株的生长状态，起到壮苗培养的目的。
(四)无菌苗的驯化移栽
(1)当所述无菌苗长至株高2厘米、最大叶宽0.7厘米且带有2条粗壮根是即可进行移栽驯化；
(2)移栽前一周打开瓶盖以使所述无菌苗逐步适应外界条件；
(3)洗净所述无菌苗根部琼脂并移栽入泥炭土与珍珠岩比例为4∶1的基质内；
(5)保持温度为20℃、弱光条件，移栽后的第一周用薄膜覆盖，控制湿度为85％。
其余特征同实施例一。
实施例五：
本发明盆栽红掌苗组培快繁方法包括以下步骤：
(一)愈伤组织的诱导
(1)取红掌完全展开5天的幼嫩叶片作为外殖体；
(2)将所述叶片先用75％酒精处理15秒、再在0.1％升汞溶液中处理8分钟取出，用无菌水冲洗5次后浸入无菌水中备用；
(3)将升汞处理后的所述叶片用加有BA 2.5mg/l和2，4-D 2.0mg/l的预处理液处理叶片20分钟；
(4)将预处理后的所述叶片切成0.6cm×0.6cm的叶片切块，将所述叶片切块放入无菌水中备用；
(5)将所述叶片切块并成批接种于诱导培养基上进行培养，接种时保持所述叶片切块的叶面向上，所述诱导培养基为加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D 0.1mg/l的改良MS，所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分；
(6)培养温度为27℃，先在连续黑暗条件下诱导60天，随后逐渐增加光照再生长60天，即可在所述叶片切块的边缘诱导出愈伤组织；
(二)不定芽的诱导和分化
(1)将诱导出的所述愈伤组织置于分化培养基上诱导分化出不定芽，所述分化培养基为加有TDZ 0.02mg/l的改良MS；
(2)培养温度为27℃、光照为每天12小时；
(三)无菌苗的增殖培养
将分化出的所述不定芽置于增殖培养基上增殖培养出生根的无菌苗，所述增殖培养基为加有TDZ 0.02mg/l及0.3％的活性炭的1/2MS；
(四)无菌苗的驯化移栽
(1)当所述无菌苗长至株高4厘米、最大叶宽0.9厘米且带有3条粗壮根是即可进行移栽驯化；
(2)移栽前一周打开瓶盖以使所述无菌苗逐步适应外界条件；
(3)洗净所述无菌苗根部琼脂并移栽入泥炭土与珍珠岩比例为4∶1的基质内；
(4)保持温度为28℃、弱光条件，移栽后的第一周用薄膜覆盖，控制湿度为95％。
其余特征同实施例四。
实施例六：
本发明盆栽红掌苗组培快繁方法包括以下步骤：
(一)愈伤组织的诱导
(1)取红掌完全展开4天的幼嫩叶片作为外殖体；
(2)将所述叶片先用75％酒精处理15秒、再在0.1％升汞溶液中处理8分钟取出，用无菌水冲洗5次后浸入无菌水中备用；
(3)将升汞处理后的所述叶片用加有BA 2.5mg/l和2，4-D 2.0mg/l的预处理液处理叶片20分钟；
(4)将预处理后的所述叶片切成0.6cm×0.6cm的叶片切块，将所述叶片切块放入无菌水中备用；
(5)将所述叶片切块并成批接种于诱导培养基上进行培养，接种时保持所述叶片切块的叶面向上，所述诱导培养基为加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D 0.1mg/l的改良MS，所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分；
(6)培养温度为25℃，先在连续黑暗条件下诱导60天，随后逐渐增加光照再生长45天，即可在所述叶片切块的边缘诱导出愈伤组织；
(二)不定芽的诱导和分化
(1)将诱导出的所述愈伤组织置于分化培养基上诱导分化出不定芽，所述分化培养基为加有TDZ 0.02mg/l的改良MS；
(2)培养温度为25℃、光照为每天12小时；
(三)无菌苗的增殖培养
将分化出的所述不定芽置于增殖培养基上增殖培养出生根的无菌苗，所述增殖培养基为加有TDZ 0.015mg/l及0.3％的活性炭的1/2MS；
(四)无菌苗的驯化移栽
(1)当所述无菌苗长至株高3厘米、最大叶宽0.8厘米且带有3条粗壮根是即可进行移栽驯化；
(2)移栽前一周打开瓶盖以使所述无菌苗逐步适应外界条件；
(3)洗净所述无菌苗根部琼脂并移栽入泥炭土与珍珠岩比例为4∶1的基质内；
(4)保持温度为24℃、弱光条件，移栽后的第一周用薄膜覆盖，控制湿度为90％。
其余特征同实施例四。