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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410839349.4(22)申请日 2014.12.30C07D 493/22(2006.01)(71)申请人 云南中医学院地址 650500 云南省昆明市呈贡区呈贡新城雨花路 1076 号(72)发明人 周志宏 杨竹雅 马晓霞 谭文红陈海丰(74)专利代理机构 昆明知道专利事务所 ( 特殊普通合伙企业 ) 53116代理人 姜开侠 何晓钧(54) 发明名称一种獐牙菜内酯 IK 的制备方法(57) 摘要本发明公开了一种獐牙菜内酯 I K 的制备方法，是采用獐牙菜苦苷为原料，通过热处理使其发生转化，产生大量的獐牙菜内酯化合物，转化产。
2、物经硅胶、Rp-18、MCI-gel 填料进行分离，获得獐牙菜内酯 I K。与现有从青叶胆植物中提取制备獐牙菜内酯化合物的方法相比，本发明所述的化学转化法生产周期短、可进行大批量生产、所得产品纯度高；且獐牙菜苦苷广泛存在于多种植物中，来源广泛。解决了因獐牙菜内酯 I K 在植物中含量低，难以通过植物提取法进行产业化生产的难题。(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书3页(10)申请公布号 CN 104497004 A(43)申请公布日 2015.04.08CN 104497004 A1/1 页21.一种獐牙菜内酯 IK 的制备方法，其。
3、特征在于包括以下步骤 ：A、取獐牙菜苦苷，加入重量比 1 20 倍的水，于 80以上回流 5 7h 至獐牙菜苦苷完全消失得到转化液 ；B、将转化液冷却、过滤得到滤液和滤渣，滤渣中加入滤渣重量比 0.1 2倍的80 120 目的硅胶拌样，上硅胶柱，以体积配比153:1的石油醚-丙酮溶液进行梯度洗脱，再以体积配比 200:1 的氯仿 - 甲醇溶液进行梯度洗脱，TLC 监测收集洗脱液，分离得到 14 个组分 AN；C、取其中M部分，加入重量比0.12倍的80120目的硅胶拌样，上硅胶柱，以体积配比102:1的氯仿-丙酮溶液进行梯度洗脱，TLC监测收集洗脱液，分离得到17个部分M1M17 ；D、取 M。
4、13 部分，上硅胶柱，以体积配比 8 2:1 的氯仿 - 丙酮溶液进行梯度洗脱，再以体积配比 1:1.3 的石油醚 - 乙酸乙酯洗脱，洗脱液减压浓缩得到獐牙菜内酯 I ；E、取 M14 部分，经分离纯化得到獐牙菜内酯 J 和獐牙菜内酯 K。2.根据权利要求 1 所述的獐牙菜内酯 IK 的制备方法，其特征在于 A 步骤中所述的回流的温度为 90100。3.根据权利要求 1 所述的獐牙菜内酯 IK 的制备方法，其特征在于 A 步骤中所述的獐牙菜苦苷完全消失的监测是采用 TLC 监测。4.根据权利要求 1 所述的獐牙菜内酯 IK 的制备方法，其特征在于 B 步骤中所述的石油醚 - 丙酮溶液的体积配比。
5、为 15:1、10:1、8:1、5:1、3:1。5.根据权利要求 1 所述的獐牙菜内酯 IK 的制备方法，其特征在于 B 步骤中所述的氯仿 - 甲醇溶液的体积配比为 20:1、15:1、10:1、5:1、3:1、0:1。6.根据权利要求 1 所述的獐牙菜内酯 IK 的制备方法，其特征在于 C 步骤中所述的氯仿 - 丙酮溶液的体积配比为 10:1、7:1、5:1、2:1。7.根据权利要求 1 所述的獐牙菜内酯 IK 的制备方法，其特征在于 D 步骤中所述的氯仿 - 丙酮溶液的体积配比为 8:1、6:1、4:1、2:1。8.根据权利要求 1 所述的獐牙菜内酯 IK 的制备方法，其特征在于 E 步骤。
6、中所述的分离纯化是采用依次经 Rp-18、MCI-gel 分离，以体积配比 0100:1000 的甲醇 - 水溶液进行梯度洗脱。9.根据权利要求 8 所述的獐牙菜内酯 IK 的制备方法，其特征在于所述的甲醇 - 水溶液的体积配比为 1:100、20:80、40:60、60:40、80:20、100:0。权 利 要 求 书CN 104497004 A1/3 页3一种獐牙菜内酯 IK的制备方法技术领域0001 本发明属于药物化学技术领域，具体涉及一种獐牙菜内酯 IK 的制备方法。背景技术0002 獐牙菜内酯为一类多手性、高氧化、高稠和的复杂结构天然产物，多数具有抗乙肝病毒活性，近年从抗肝炎药物青叶。
7、胆中分离得到。该类成分在植物体含量非常低微，不具备产业化生产和商业化应用价值，由于其结构复杂亦不能通过化学合成得到。0003 中国专利（申请号为 201010587969.5）“獐牙菜内酯 H K，其药物组合物及其用途”公开了 4 个獐牙菜内酯化合物的制备方法及用途 ：将青叶胆全草干燥粉碎后用乙醇容易回流提取，提取液减压浓缩后悬浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，乙酸乙酯部分用反复经硅胶柱层析，分离得到 4 个獐牙菜内酯化合物，所得化合物量少、且生产周期长，难以产业化生产。因此，提供一种操作简便、成本低廉的产业化制备獐牙菜内酯的方法对于獐牙菜内酯的推广应用具有重要意义。发明内容000。
8、4 本发明的目的在于提供一种獐牙菜内酯 IK 的制备方法。0005 本发明的目的是这样实现的，包括以下步骤 ：A、取獐牙菜苦苷，加入重量比 1 20 倍的水，于 80以上回流 5 7h 至獐牙菜苦苷完全消失得到转化液 ；B、将转化液冷却、过滤得到滤液和滤渣，滤渣中加入滤渣重量比 0.1 2倍的80 120 目的硅胶拌样，上硅胶柱，以体积配比153:1的石油醚-丙酮溶液进行梯度洗脱，再以体积配比 200:1 的氯仿 - 甲醇溶液进行梯度洗脱，TLC 监测收集洗脱液，分离得到 14 个组分 AN；C、取其中M部分，加入重量比0.12倍的80120目的硅胶拌样，上硅胶柱，以体积配比102:1的氯仿-。
9、丙酮溶液进行梯度洗脱，TLC监测收集洗脱液，分离得到17个部分M1M17 ；D、取 M13 部分，上硅胶柱，以体积配比 8 2:1 的氯仿 - 丙酮溶液进行梯度洗脱，再以体积配比 1:1.3 的石油醚 - 乙酸乙酯洗脱，洗脱液减压浓缩得到獐牙菜内酯 I ；E、取 M14 部分，经分离纯化得到獐牙菜内酯 J 和獐牙菜内酯 K。0006 本发明的有益效果 ：本发明采用獐牙菜苦苷为原料，通过热处理使其发生转化，产生大量的獐牙菜内酯化合物，转化产物经硅胶、Rp-18、MCI-gel填料进行分离，获得獐牙菜内酯IK。与现有从青叶胆植物中提取制备獐牙菜内酯化合物的方法相比，本发明所述的化学转化法生产周期短。
10、、可进行大批量生产、所得产品纯度高 ；且獐牙菜苦苷广泛存在于多种植物中，来源广泛。解决了因獐牙菜内酯 I K 在植物中含量低，难以通过植物提取法进行产业化生产的难题。具体实施方式0007 下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，说 明 书CN 104497004 A2/3 页4基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。0008 本发明所述的獐牙菜内酯 IK 的制备方法，包括以下步骤 ：A、取獐牙菜苦苷，加入重量比 1 20 倍的水，于 80以上回流 5 7h 至獐牙菜苦苷完全消失得到转化液 ；B、将转化液冷却、过滤得到滤液和滤渣，滤渣中加入滤渣重。
11、量比 0.1 2倍的80 120 目的硅胶拌样，上硅胶柱，以体积配比153:1的石油醚-丙酮溶液进行梯度洗脱，再以体积配比 200:1 的氯仿 - 甲醇溶液进行梯度洗脱，TLC 监测收集洗脱液，分离得到 14 个组分 AN；C、取其中M部分，加入重量比0.12倍的80120目的硅胶拌样，上硅胶柱，以体积配比102:1的氯仿-丙酮溶液进行梯度洗脱，TLC监测收集洗脱液，分离得到17个部分M1M17 ；D、取 M13 部分，上硅胶柱，以体积配比 8 2:1 的氯仿 - 丙酮溶液进行梯度洗脱，再以体积配比 1:1.3 的石油醚 - 乙酸乙酯洗脱，洗脱液减压浓缩得到獐牙菜内酯 I ；E、取 M14 部。
12、分，经分离纯化得到獐牙菜内酯 J 和獐牙菜内酯 K。0009 A 步骤中所述的回流的温度为 90100 .A 步骤中所述的獐牙菜苦苷完全消失的监测是采用 TLC 监测。0010 B 步骤中所述的石油醚 - 丙酮溶液的体积配比为 15:1、10:1、8:1、5:1、3:1。0011 B 步骤中所述的氯仿 - 甲醇溶液的体积配比为 20:1、15:1、10:1、5:1、3:1、0:1。0012 C 步骤中所述的氯仿 - 丙酮溶液的体积配比为 10:1、7:1、5:1、2:1。0013 D 步骤中所述的氯仿 - 丙酮溶液的体积配比为 8:1、6:1、4:1、2:1。0014 E步骤中所述的分离纯化是。
13、采用依次经Rp-18、MCI-gel分离，以体积配比0100:1000 的甲醇 - 水溶液进行梯度洗脱。0015 所述的甲醇 - 水溶液的体积配比为 1:100、20:80、40:60、60:40、80:20、100:0。0016 下面以实施例对本发明进行进一步说明 ：实施例 1取獐牙菜苦苷 20kg，加入 15 倍重量的水，升温至 95进行转化反应，经检测獐牙菜苦苷完全消失后，反应停止，冷却至室温，过滤得滤渣 ；滤渣中加入 1.5 倍重量的硅胶拌样，烘干后装入硅胶柱，先用石油醚 - 丙酮（15:1、10:1、8:1、5:1、3:1）5 个梯度进行洗脱，再用氯仿 - 甲醇（20:1、15:1、。
14、10:1、5:1、3:1、0:1）6 个梯度进行洗脱，得到 14 个组分 A N。将组分 M 经硅胶柱色谱分离，采用氯仿 - 丙酮（10:1、7:1、5:1、2:1）4 个梯度进行洗脱，得到 17个部分 M1M17；取 M13部分，经硅胶柱色谱分离，依次用氯仿 - 丙酮（8:1、6:1、4:1、2:1）4 个梯度进行洗脱、再用石油醚 - 乙酸乙酯（1:1.3）洗脱，得 4.63 g 獐牙菜内酯 I ；取 M14部分，依次经 Rp-18、MCI-gel 分离，采用甲醇 - 水（1:100、20:80、40:60、60:40、80:20、100:0）6 个梯度进行洗脱，得到 57.76mg 獐牙菜。
15、内酯 J、600.88mg 獐牙菜内酯 K。经检测獐牙菜内酯 I、J、K 纯度为别为 98.7%、97.6%、98.8%。0017 实施例 2取獐牙菜苦苷 15kg，加入 20 倍重量的水，升温至 100进行转化反应，经检测獐牙菜苦苷完全消失后，反应停止，冷却至室温，过滤得滤渣 ；滤渣中加入 2 倍重量的硅胶拌样，烘干后装入硅胶柱，先用石油醚 - 丙酮（15:1、10:1、8:1、5:1、3:1）5 个梯度进行洗脱，再用氯仿 - 甲醇（20:1、15:1、10:1、5:1、3:1、0:1）6 个梯度进行洗脱，得到 14 个组分 A N。将组分 M 经硅胶柱色谱分离，采用氯仿 - 丙酮（10:1。
16、、7:1、5:1、2:1）4 个梯度进行洗脱，得到 17说 明 书CN 104497004 A3/3 页5个部分 M1M17；取 M13部分，经硅胶柱色谱分离，依次用氯仿 - 丙酮（8:1、6:1、4:1、2:1）4 个梯度进行洗脱、再用石油醚 - 乙酸乙酯（1:1.3）洗脱，得 .67g 獐牙菜内酯 I ；取 M14部分，依次经 Rp-18、MCI-gel 分离，采用甲醇 - 水（1:100、20:80、40:60、60:40、80:20、100:0）6 个梯度进行洗脱，得到 44.32mg 獐牙菜内酯 J、451.66mg 獐牙菜内酯 K。经检测獐牙菜内酯 I、J、K 纯度为别为 98.2。
17、%、98.6%、97.8%。0018 实施例 3取獐牙菜苦苷 10kg，加入 5 倍重量的水，升温至 90进行转化反应，经检测獐牙菜苦苷完全消失后，反应停止，冷却至室温，过滤得滤渣 ；滤渣中加入 2 倍重量的硅胶拌样，烘干后装入硅胶柱，先用石油醚 - 丙酮（15:1、10:1、8:1、5:1、3:1）5 个梯度进行洗脱，再用氯仿 - 甲醇（20:1、15:1、10:1、5:1、3:1、0:1）6 个梯度进行洗脱，得到 14 个组分 A N。将组分 M 经硅胶柱色谱分离，采用氯仿 - 丙酮（10:1、7:1、5:1、2:1）4 个梯度进行洗脱，得到 17个部分 M1M17；取 M13部分，经硅胶柱色谱分离，依次用氯仿 - 丙酮（8:1、6:1、4:1、2:1）4 个梯度进行洗脱、再用石油醚 - 乙酸乙酯（1:1.3）洗脱，得 2.43g 獐牙菜内酯 I ；取 M14部分，依次经 Rp-18、MCI-gel 分离，采用甲醇 - 水（1:100、20:80、40:60、60:40、80:20、100:0）6 个梯度进行洗脱，得到 44.32mg 獐牙菜内酯 J、299.32mg 獐牙菜内酯 K。经检测獐牙菜内酯 I、J、K 纯度为别为 98.9%、97.6%、98.8%。说 明 书CN 104497004 A。