一种喜来越橘组织培养增殖培养基及其制备方法.pdf

摘要
申请专利号：	CN201410309154.9	申请日：	2014.07.02
公开号：	CN104082142A	公开日：	2014.10.08
当前法律状态：	授权	有效性：	有权
法律详情：	授权\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):A01H 4/00申请日:20140702\|\|\|公开
IPC分类号：	A01H4/00	主分类号：	A01H4/00
申请人：	江苏农林职业技术学院
发明人：	王姗; 王永平; 颜志明; 鲍华鹏; 许建民
地址：	212400 江苏省镇江市句容市文昌东路19号江苏农林职业技术学院
优先权：
专利代理机构：	南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204	代理人：	王云
PDF下载：	PDF下载

内容摘要

本发明公开了一种喜来越橘组织培养的增殖培养基：改良WPM培养基+NAA0.5mg/L+GA0.2mg/L+ZT2-3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L，pH为5.2；每升改良WPM培养基中含大量元素：893mg硝酸钾、119mg硫酸铵、370mg硫酸镁、278mg四水合硝酸钙、170mg磷酸二氢钾；铁盐：74.6mg乙二胺四乙酸二钠、55.6mg硫酸亚铁；微量元素：22.3mg硫酸锰、8.6mg硫酸锌、0.025mg硫酸铜、0.25mg钼酸钠、6.2mg硼酸；0.415mg碘化钾；有机物：0.5mg烟酸、0.5mg盐酸硫胺素、0.5mg盐酸毗哆醇、l00mg肌醇、2mg甘氨酸，采用该培养基30d增殖倍数达到12倍以上。

权利要求书

1.  一种喜来越橘组织培养的增殖培养基，其特征在于，包括如下组分：改良WPM培养基+ NAA 0.5 mg/L+GA 0.2 mg/L+ZT 2-3mg·L^-1+蔗糖30 g·L^-1+琼脂7 g·L^-1，pH为5.2。

2.  根据权利要求1所述的喜来越橘组织培养的增殖培养基，其特征在于：所述的改良WPM培养基包括如下组分：
大量元素：893mg·L^-1硝酸钾、119 mg·L^-1硫酸铵、370 mg·L^-1硫酸镁、278 mg·L^-1硝酸钙、 170mg·L^-1磷酸二氢钾；
微量元素：22.3 mg·L^-1硫酸锰、8.6 mg·L^-1硫酸锌、0.025 mg·L^-1硫酸铜、0.25mg·L^-1钼酸钠、6.2 mg·L^-1硼酸；0.415 mg·L^-1碘化钾；
铁盐：74.6mg·L^-1乙二胺四乙酸二钠、55.6 mg·L^-1硫酸亚铁；
有机物：0.5 mg·L^-1烟酸、0.5 mg·L^-1盐酸硫胺素、0.5 mg·L^-1盐酸毗哆醇、l00 mg·L^-1肌醇、2 mg·L^-1甘氨酸。

3.  权利要求1所述的喜来越橘组织培养的增殖培养基的制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
（1）配制改良WPM培养基：
(11)50倍大量元素母液的配制：分别称取44.65g硝酸钾、5.95g硫酸铵、18.5g硫酸镁、然后用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅰ；
称取13.9g四水合硝酸钙，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅱ；
称取8.5g磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅲ；
使用时配制每升增殖培养基取母液Ⅰ，母液Ⅱ，母液Ⅲ各20ml；
(12)250倍的微量元素母液的配制：称取5.575g硫酸锰，2.15g硫酸锌，0.00625g硫酸铜，0.0625g钼酸钠，1.55g硼酸，0.10375 g碘化钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅳ，使用时配制每升增殖培养基取4ml母液Ⅳ；
(13)100倍的EDTA-铁盐母液的配制：称取乙二胺四乙酸二钠，7.46g；硫酸亚铁5.56g，分别溶解，混合定容至1000mL，配成母液Ⅴ，使用时配制每升增殖培养基取10ml母液Ⅴ；
(14)100倍的有机成分母液的配制：称取0.2g甘氨酸，0.005g盐酸硫胺素，0.005g盐酸吡哆醇，0.005g烟酸，10g肌醇，用蒸馏水溶解后混合定容至1000ml，配成母液Ⅵ，使用时配制每升增殖培养基取10ml母液Ⅵ；
(2)激素母液的配制：称取50mg NAA，先用5ml体积浓度95%酒精溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL^-1的NAA母液，使用时配制每升增殖培养基取1mlNAA母液；称取5mg GA，先用5ml体积浓度95%酒精溶解，然后加水定容至100ml，配成0.05mg·mL^-1的GA母液，使用时配制每升增殖培养基取4mlGA母液；称取50mg玉米素，先用少量0.1mol·L^-1NaOH溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL^-1的玉米素母液，使用时配制每升增殖培养基取4-6ml玉米素母液；
(3)按上述步骤（11）至步骤（14）中配制每升增殖培养基的用量加入后，再加入琼脂7g，蔗糖30g，NAA母液1ml，GA母液 4ml，加热溶解后定容至1L，用0.lmol·L^-1盐酸调pH至5.2，灭菌；待培养基温度降至60-70℃时，在接种台上采用过滤灭菌法添加步骤（2）中配制的玉米素母液，每升增殖培养基加4ml-6ml玉米素母液，然后在接种台上分装培养基。

4.  权利要求1所述喜来越橘组织培养的增殖培养基的使用方法，其特征在于，将无菌苗在超净台上接种至配制好的灭菌的增殖培养基上，在光照强度2000Lux的条件下培养，培养条件为：温度25-27℃，每日光照时间为14小时。

说明书

一种喜来越橘组织培养增殖培养基及其制备方法
技术领域
本发明涉及植物组培快繁技术领域，主要是一种适宜喜来越橘组培苗增殖的培养基。
背景技术
越橘是杜鹃花科(Ericaceae)越橘属(Vaccinium)灌木类小浆果果树。其果实为蓝色或红色，酸甜适中，果实低能量且含有多种抗氧化成份，具有极高的营养价值和医疗保健作用。越橘果实内的生物活性物质具有明目、消除眼睛疲劳、增强视力的功能。目前，全国各地的科研单位及企业开展了大量蓝毒组培快繁方面的研究，能够迅速的推广新优品种成为蓝莓苗的主要育苗手段。由于蓝莓品种较多，所适用的增殖培养基也不尽相同，目前很多工厂化生产所采用的都是统一的培养基配方，针对性不强，导致不同品种快繁速度不同，大大影响了蓝莓的工厂化生产，从而增加了生产成本。喜来是越橘的一个品种，适应性广，是北方地区的主栽品种，通常采用组织培养的方法进行快速繁殖。但由于采用现有的常规组培快繁技术，喜来增殖倍数低，生长速度慢，影响了喜来越橘的快速发展，优化喜来越橘培养基配方显得极其重要。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种既能提高喜来越橘的增殖倍数，又能缩短增殖周期，且增殖苗生长健壮的喜来越橘增殖的培养基配方。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：一种喜来越橘组织培养的增殖培养基，包括如下组分：改良WPM培养基+ NAA(萘乙酸)0.5 mg/L+GA （赤霉素）0.2 mg/L+玉米素（ZT）2-3mg·L^-1+蔗糖30 g·L^-1+琼脂7 g·L^-1，pH为5.2。
上述改良WPM基本培养基包括如下组分：
大量元素：893mg·L^-1硝酸钾、119 mg·L^-1硫酸铵、370 mg·L^-1硫酸镁、96 mg·L^-1四水合硝酸钙、 170mg磷酸二氢钾；
微量元素：22.3 mg·L^-1硫酸锰、8.6 mg·L^-1硫酸锌、0.025 mg·L^-1硫酸铜、0.25mg·L^-1钼酸钠、6.2 mg·L^-1硼酸；
铁盐：74.6mg·L^-1乙二胺四乙酸二钠、55.6 mg·L^-1硫酸亚铁；
有机物：0.5 mg·L^-1烟酸、0.5 mg·L^-1盐酸硫胺素、0.5 mg·L^-1盐酸毗哆醇、l00 mg·L^-1肌醇、2 mg·L^-1甘氨酸。
上述喜来越橘组织培养的增殖培养基的制备方法，该方法包括如下步骤：
（1）配制改良WPM培养基：
(11)50倍大量元素母液的配制：分别称取44.65g硝酸钾、5.95g硫酸铵、18.5g硫酸镁、然后用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅰ；
称取13.9g四水合硝酸钙，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅱ；
称取8.5g磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅲ；
使用时配制每升增殖培养基取母液Ⅰ，母液Ⅱ，母液Ⅲ各20ml；
(12)250倍的微量元素母液的配制：称取5.575g硫酸锰，2.15g硫酸锌，0.00625g硫酸铜，0.0625g钼酸钠，1.55g硼酸，0.10375 g碘化钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅳ，使用时配制每升增殖培养基取4ml母液Ⅳ；
(13)100倍的EDTA-铁盐母液的配制：称取乙二胺四乙酸二钠，7.46g；硫酸亚铁5.56g，分别溶解，混合定容至1000mL，配成母液Ⅴ，使用时配制每升增殖培养基取10ml母液Ⅴ；
(14)100倍的有机成分母液的配制：称取0.2g甘氨酸，0.005g盐酸硫胺素，0.005g盐酸吡哆醇，0.005g烟酸，10g肌醇，用蒸馏水溶解后混合定容至1000ml，配成母液Ⅵ，使用时配制每升增殖培养基取10ml母液Ⅵ；
(2)激素母液的配制：称取50mg NAA，先用5ml体积浓度95%酒精溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL^-1的NAA母液，使用时配制每升增殖培养基取1mlNAA母液；称取5mg GA，先用5ml体积浓度95%酒精溶解，然后加水定容至100ml，配成0.05mg·mL^-1的GA母液，使用时配制每升增殖培养基取4mlGA母液；称取50mg玉米素，先用少量0.1mol·L^-1NaOH溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL^-1的玉米素母液，使用时配制每升增殖培养基取4-6ml玉米素母液；
(3)按上述步骤（11）至步骤（14）中配制每升增殖培养基的用量加入后，再加入琼脂7g，蔗糖30g，NAA母液1ml，GA母液 4ml，加热溶解后定容至1L，用0.lmol·L^-1盐酸调pH至5.2，灭菌；待培养基温度降至60-70℃时，在接种台上采用过滤灭菌法添加步骤（2）中配制的玉米素母液，每升增殖培养基加4ml-6ml玉米素母液，然后在接种台上分装培养基。
本发明的增殖培养基的使用方法为：将无菌苗在超净台上接种至配制好的灭菌的增殖培养基上，在光照强度2000Lux的条件下培养，培养条件为：温度25-27℃，光照时间为14小时。
有益效果：与现有技术相比，本发明的优点是：
1.      组成培养基较传统培养基硝态氮含量增加；
2.      采用该培养基进行增殖，增殖周期短，增殖倍数高；
3.      增殖苗健壮。
具体实施方式：
以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。
实施例1：
一种喜来越橘组织培养的增殖培养基，包括如下组分：改良WPM培养基+ NAA 0.5 mg/L+GA 0.2 mg/L+ZT 2mg·L^-1+蔗糖30 g·L^-1+琼脂7 g·L^-1，其余为蒸馏水，pH为5.2；
其中改良WPM培养基包括以下组分：
大量元素：893mg·L^-1硝酸钾、119 mg·L^-1硫酸铵、370 mg·L^-1硫酸镁、278 mg·L^-1硝酸钙、 170mg·L^-1磷酸二氢钾；
微量元素：22.3 mg·L^-1硫酸锰、8.6 mg·L^-1硫酸锌、0.025 mg·L^-1硫酸铜、0.25mg·L^-1钼酸钠、6.2 mg·L^-1硼酸；0.415 mg·L^-1碘化钾；
铁盐：74.6mg·L^-1乙二胺四乙酸二钠、55.6 mg·L^-1硫酸亚铁；
有机物：0.5 mg·L^-1烟酸、0.5 mg·L^-1盐酸硫胺素、0.5 mg·L^-1盐酸毗哆醇、l00 mg·L^-1肌醇、2 mg·L^-1甘氨酸。
上述增殖培养基制备方法如下：
（1）配制改良WPM培养基：
(11)50倍大量元素母液的配制：分别称取44.65g硝酸钾、5.95g硫酸铵、18.5g硫酸镁、然后用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅰ；
称取13.9g四水合硝酸钙，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅱ；
称取8.5g磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅲ；
使用时配制每升增殖培养基取母液Ⅰ，母液Ⅱ，母液Ⅲ各20ml；
(12)250倍的微量元素母液的配制：称取5.575g硫酸锰，2.15g硫酸锌，0.00625g硫酸铜，0.0625g钼酸钠，1.55g硼酸，0.10375 g碘化钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅳ，使用时配制每升增殖培养基取4ml母液Ⅳ；
(13)100倍的EDTA-铁盐母液的配制：称取乙二胺四乙酸二钠，7.46g；硫酸亚铁5.56g，分别溶解，混合定容至1000mL，配成母液Ⅴ，使用时配制每升增殖培养基取10ml母液Ⅴ；
(14)100倍的有机成分母液的配制：称取0.2g甘氨酸，0.005g盐酸硫胺素，0.005g盐酸吡哆醇，0.005g烟酸，10g肌醇，用蒸馏水溶解后混合定容至1000ml，配成母液Ⅵ，使用时配制每升增殖培养基取10ml母液Ⅵ；
(2)激素母液的配制：称取50mg NAA，先用5ml体积浓度95%酒精溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL^-1的NAA母液，使用时配制每升增殖培养基取1mlNAA母液；称取5mg GA，先用5ml体积浓度95%酒精溶解，然后加水定容至100ml，配成0.05mg·mL^-1的GA母液，使用时配制每升增殖培养基取4mlGA母液；称取50mg玉米素，先用少量0.1mol·L^-1NaOH溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL^-1的玉米素母液，使用时配制每升增殖培养基取4ml玉米素母液；
(3)按上述步骤（11）至步骤（14）中配制每升增殖培养基的用量加入后，再加入琼脂7g，蔗糖30g，NAA母液1ml，GA母液 4ml，加热溶解后定容至1L，用0.lmol·L^-1盐酸调pH至5.2，灭菌；待培养基温度降至60-70℃时，在接种台上采用过滤灭菌法添加步骤（2）中配制的玉米素母液，每升增殖培养基加4ml玉米素母液，然后在接种台上分装培养基。
本发明增殖培养基的使用方法为：将无菌苗在超净台上接种至配制好的灭菌的增殖培养基上，在光照强度2000Lux的条件下培养，培养条件为：温度25-27℃，光照时间为14小时。
30天后统计发现植株生长健壮，叶片呈绿色，植株增殖倍数达12.8。

实施例2：
一种喜来越橘组织培养的增殖培养基，包括如下组分：改良WPM培养基+ NAA 0.5 mg/L+GA 0.2 mg/L+ZT 3mg·L^-1+蔗糖30 g·L^-1+琼脂7 g·L^-1，其余为蒸馏水，pH为5.2；
其中改良WPM培养基包括以下组分：
大量元素：893mg·L^-1硝酸钾、119 mg·L^-1硫酸铵、370 mg·L^-1硫酸镁、278 mg·L^-1硝酸钙、 170mg·L^-1磷酸二氢钾；
微量元素：22.3 mg·L^-1硫酸锰、8.6 mg·L^-1硫酸锌、0.025 mg·L^-1硫酸铜、0.25mg·L^-1钼酸钠、6.2 mg·L^-1硼酸；0.415 mg·L^-1碘化钾；
铁盐：74.6mg·L^-1乙二胺四乙酸二钠、55.6 mg·L^-1硫酸亚铁；
有机物：0.5 mg·L^-1烟酸、0.5 mg·L^-1盐酸硫胺素、0.5 mg·L^-1盐酸毗哆醇、l00 mg·L^-1肌醇、2 mg·L^-1甘氨酸。
增殖培养基制备方法如下：
（1）配制改良WPM培养基：
(11)50倍大量元素母液的配制：分别称取44.65g硝酸钾、5.95g硫酸铵、18.5g硫酸镁、然后用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅰ；
称取13.9g四水合硝酸钙，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅱ；
称取8.5g磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅲ；
使用时配制每升增殖培养基取母液Ⅰ，母液Ⅱ，母液Ⅲ各20ml；
(12)250倍的微量元素母液的配制：称取5.575g硫酸锰，2.15g硫酸锌，0.00625g硫酸铜，0.0625g钼酸钠，1.55g硼酸，0.10375 g碘化钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅳ，使用时配制每升增殖培养基取4ml母液Ⅳ；
(13)100倍的EDTA-铁盐母液的配制：称取乙二胺四乙酸二钠，7.46g；硫酸亚铁5.56g，分别溶解，混合定容至1000mL，配成母液Ⅴ，使用时配制每升增殖培养基取10ml母液Ⅴ；
(14)100倍的有机成分母液的配制：称取0.2g甘氨酸，0.005g盐酸硫胺素，0.005g盐酸吡哆醇，0.005g烟酸，10g肌醇，用蒸馏水溶解后混合定容至1000ml，配成母液Ⅵ，使用时配制每升增殖培养基取10ml母液Ⅵ；
(2)激素母液的配制：称取50mg NAA，先用5ml体积浓度95%酒精溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL^-1的NAA母液，使用时配制每升增殖培养基取1mlNAA母液；称取5mg GA，先用5ml体积浓度95%酒精溶解，然后加水定容至100ml，配成0.05mg·mL^-1的GA母液，使用时配制每升增殖培养基取4mlGA母液；称取50mg玉米素，先用少量0.1mol·L^-1NaOH溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL^-1的玉米素母液，使用时配制每升增殖培养基取4ml玉米素母液；
(3)按上述步骤（11）至步骤（14）中配制每升增殖培养基的用量加入后，再加入琼脂7g，蔗糖30g，NAA母液1ml，GA母液 4ml，加热溶解后定容至1L，用0.lmol·L^-1盐酸调pH至5.2，灭菌；待培养基温度降至60-70℃时，在接种台上采用过滤灭菌法添加步骤（2）中配制的玉米素母液，每升增殖培养基加6ml玉米素母液，然后在接种台上分装培养基。
将无菌苗在超净台上接种至配制好的灭菌的增殖培养基上，在光照强度2000Lux的条件下培养，培养条件为：温度25-27℃，光照时间为14小时。
30天后统计发现植株生长健壮，叶片呈绿色，植株增殖倍数达13.2。
对照例1：
将喜来越橘接种于传统的WPM的增殖培养基中，其培养基成分和含量包括：
大量元素：400mg·L^-1硝酸钾、 900mg·L^-1硫酸钾、370mg·L^-1硫酸镁、96 mg·L^-1二水合氯化钙、 556 mg·L^-1硝酸钙、170 mg·L^-1磷酸二氢钾；
微量元素：22.3 mg·L^-1硫酸锰、8.6 mg·L^-1硫酸锌、0.025 mg·L^-1硫酸铜、0.25 mg·L^-1钼酸钠、6.2mg·L^-1硼酸；
铁盐：37.3 mg·L^-1乙二胺四乙酸二钠、27.8 mg·L^-1硫酸亚铁；
有机物：0.5 mg·L^-1烟酸、0.5 mg·L^-1盐酸硫胺素、0.5 mg·L^-1盐酸毗哆醇、l00 mg·L^-1肌醇、2 mg·L^-1甘氨酸；
蔗糖30 g·L^-1，琼脂7 g·L^-1
玉米素2mg·L^-1 ；
其余为蒸馏水，pH为5.2；
制备方法如下：
（1）配制改良WPM培养基：
(11)50倍大量元素母液的配制：分别称取20g硝酸钾、45g硫酸钾、18.5g硫酸镁、然后用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅰ；
称取4.8g二水合氯化钙、27.8g四水合硝酸钙，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅱ；
称取8.5g磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅲ；
使用时配制每升增殖培养基取母液Ⅰ，母液Ⅱ，母液Ⅲ各20ml；
(12)250倍的微量元素母液的配制：称取5.575g硫酸锰，2.15g硫酸锌，0.00625g硫酸铜，0.0625g钼酸钠，1.55g硼酸，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，配成母液Ⅳ，使用时配制每升增殖培养基取4ml；
(13)100倍的EDTA-铁盐母液的配制：称取3.73g乙二胺四乙酸二钠，2.78g硫酸亚铁，分别溶解，混合定容至1000mL，配成母液Ⅴ，使用时配制每升增殖培养基取10ml；
(14)100倍的有机成分母液的配制：称取0.2g甘氨酸，0.005g盐酸硫胺素，0.005g盐酸吡哆醇，0.005g烟酸，10g肌醇溶解后混合定容至1000ml，配成母液Ⅵ，使用时配制每升增殖培养基取10ml；
(15)激素母液的配制：称取50mg玉米素，先用5ml0.1mol·L^-1NaOH溶解，然后加水定容至100ml，配成0.5mg·mL^-1的母液，使用时配制每升增殖培养基取4ml；
(2)按上述步骤（11）至步骤（15）中配制每升增殖培养基的用量加入后，再加入琼脂7g，蔗糖30g，加热溶解后定容至1L，用0.lmol·L^-1盐酸调pH至5.2，灭菌；待培养基温度降至60-70℃时，在接种台上采用过滤灭菌法添加玉米素母液，玉米素母液浓度为0.5 mg·mL^-1,每升培养基加4ml玉米素母液，然后在接种台上分装培养基。
使用方法：将无菌苗在超净台上接种至配制好的灭菌的增殖培养基上，在光照强度2000Lux的条件下培养，培养条件为：温度25-27℃，每日光照时间为14小时。
30天后统计发现植株生长缓慢，叶片偏黄，植株增殖倍数为4.4，明显低于本发明的增殖倍数。
本发明按照上述实施例进行了说明应当理解，上述实施例不以任何形式限定本发明，凡采用等同替换或等效变换方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

资源描述

《一种喜来越橘组织培养增殖培养基及其制备方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种喜来越橘组织培养增殖培养基及其制备方法.pdf（8页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。

1、10申请公布号CN104082142A43申请公布日20141008CN104082142A21申请号201410309154922申请日20140702A01H4/0020060171申请人江苏农林职业技术学院地址212400江苏省镇江市句容市文昌东路19号江苏农林职业技术学院72发明人王姗王永平颜志明鲍华鹏许建民74专利代理机构南京苏高专利商标事务所普通合伙32204代理人王云54发明名称一种喜来越橘组织培养增殖培养基及其制备方法57摘要本发明公开了一种喜来越橘组织培养的增殖培养基改良WPM培养基NAA05MG/LGA02MG/LZT23MG/L蔗糖30G/L琼脂7G/L，PH为52；每升。

2、改良WPM培养基中含大量元素893MG硝酸钾、119MG硫酸铵、370MG硫酸镁、278MG四水合硝酸钙、170MG磷酸二氢钾；铁盐746MG乙二胺四乙酸二钠、556MG硫酸亚铁；微量元素223MG硫酸锰、86MG硫酸锌、0025MG硫酸铜、025MG钼酸钠、62MG硼酸；0415MG碘化钾；有机物05MG烟酸、05MG盐酸硫胺素、05MG盐酸毗哆醇、L00MG肌醇、2MG甘氨酸，采用该培养基30D增殖倍数达到12倍以上。51INTCL权利要求书2页说明书5页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书5页10申请公布号CN104082142ACN104082142A1。

3、/2页21一种喜来越橘组织培养的增殖培养基，其特征在于，包括如下组分改良WPM培养基NAA05MG/LGA02MG/LZT23MGL1蔗糖30GL1琼脂7GL1，PH为52。2根据权利要求1所述的喜来越橘组织培养的增殖培养基，其特征在于所述的改良WPM培养基包括如下组分大量元素893MGL1硝酸钾、119MGL1硫酸铵、370MGL1硫酸镁、278MGL1硝酸钙、170MGL1磷酸二氢钾；微量元素223MGL1硫酸锰、86MGL1硫酸锌、0025MGL1硫酸铜、025MGL1钼酸钠、62MGL1硼酸；0415MGL1碘化钾；铁盐746MGL1乙二胺四乙酸二钠、556MGL1硫酸亚铁；有机物05。

4、MGL1烟酸、05MGL1盐酸硫胺素、05MGL1盐酸毗哆醇、L00MGL1肌醇、2MGL1甘氨酸。3权利要求1所述的喜来越橘组织培养的增殖培养基的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤（1）配制改良WPM培养基1150倍大量元素母液的配制分别称取4465G硝酸钾、595G硫酸铵、185G硫酸镁、然后用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液；称取139G四水合硝酸钙，用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液；称取85G磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液；使用时配制每升增殖培养基取母液，母液，母液各20ML；12250倍的微量元素母液的配制称取5575G硫酸锰，215G硫。

5、酸锌，000625G硫酸铜，00625G钼酸钠，155G硼酸，010375G碘化钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液，使用时配制每升增殖培养基取4ML母液；13100倍的EDTA铁盐母液的配制称取乙二胺四乙酸二钠，746G；硫酸亚铁556G，分别溶解，混合定容至1000ML，配成母液，使用时配制每升增殖培养基取10ML母液；14100倍的有机成分母液的配制称取02G甘氨酸，0005G盐酸硫胺素，0005G盐酸吡哆醇，0005G烟酸，10G肌醇，用蒸馏水溶解后混合定容至1000ML，配成母液，使用时配制每升增殖培养基取10ML母液；2激素母液的配制称取50MGNAA，先用5ML体积浓度。

6、95酒精溶解，然后加水定容至100ML，配成05MGML1的NAA母液，使用时配制每升增殖培养基取1MLNAA母液；称取5MGGA，先用5ML体积浓度95酒精溶解，然后加水定容至100ML，配成005MGML1的GA母液，使用时配制每升增殖培养基取4MLGA母液；称取50MG玉米素，先用少量01MOLL1NAOH溶解，然后加水定容至100ML，配成05MGML1的玉米素母液，使用时配制每升增殖培养基取46ML玉米素母液；3按上述步骤（11）至步骤（14）中配制每升增殖培养基的用量加入后，再加入琼脂7G，蔗糖30G，NAA母液1ML，GA母液4ML，加热溶解后定容至1L，用0LMOLL1盐酸调P。

7、H至52，灭菌；待培养基温度降至6070时，在接种台上采用过滤灭菌法添加步骤（2）中配制的玉米素母液，每升增殖培养基加4ML6ML玉米素母液，然后在接种台上分装培养基。4权利要求1所述喜来越橘组织培养的增殖培养基的使用方法，其特征在于，将无菌权利要求书CN104082142A2/2页3苗在超净台上接种至配制好的灭菌的增殖培养基上，在光照强度2000LUX的条件下培养，培养条件为温度2527，每日光照时间为14小时。权利要求书CN104082142A1/5页4一种喜来越橘组织培养增殖培养基及其制备方法技术领域0001本发明涉及植物组培快繁技术领域，主要是一种适宜喜来越橘组培苗增殖的培养基。背景技。

8、术0002越橘是杜鹃花科ERICACEAE越橘属VACCINIUM灌木类小浆果果树。其果实为蓝色或红色，酸甜适中，果实低能量且含有多种抗氧化成份，具有极高的营养价值和医疗保健作用。越橘果实内的生物活性物质具有明目、消除眼睛疲劳、增强视力的功能。目前，全国各地的科研单位及企业开展了大量蓝毒组培快繁方面的研究，能够迅速的推广新优品种成为蓝莓苗的主要育苗手段。由于蓝莓品种较多，所适用的增殖培养基也不尽相同，目前很多工厂化生产所采用的都是统一的培养基配方，针对性不强，导致不同品种快繁速度不同，大大影响了蓝莓的工厂化生产，从而增加了生产成本。喜来是越橘的一个品种，适应性广，是北方地区的主栽品种，通常采用。

9、组织培养的方法进行快速繁殖。但由于采用现有的常规组培快繁技术，喜来增殖倍数低，生长速度慢，影响了喜来越橘的快速发展，优化喜来越橘培养基配方显得极其重要。发明内容0003为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种既能提高喜来越橘的增殖倍数，又能缩短增殖周期，且增殖苗生长健壮的喜来越橘增殖的培养基配方。0004为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为一种喜来越橘组织培养的增殖培养基，包括如下组分改良WPM培养基NAA萘乙酸05MG/LGA（赤霉素）02MG/L玉米素（ZT）23MGL1蔗糖30GL1琼脂7GL1，PH为52。0005上述改良WPM基本培养基包括如下组分大量元素893MG。

10、L1硝酸钾、119MGL1硫酸铵、370MGL1硫酸镁、96MGL1四水合硝酸钙、170MG磷酸二氢钾；微量元素223MGL1硫酸锰、86MGL1硫酸锌、0025MGL1硫酸铜、025MGL1钼酸钠、62MGL1硼酸；铁盐746MGL1乙二胺四乙酸二钠、556MGL1硫酸亚铁；有机物05MGL1烟酸、05MGL1盐酸硫胺素、05MGL1盐酸毗哆醇、L00MGL1肌醇、2MGL1甘氨酸。0006上述喜来越橘组织培养的增殖培养基的制备方法，该方法包括如下步骤（1）配制改良WPM培养基1150倍大量元素母液的配制分别称取4465G硝酸钾、595G硫酸铵、185G硫酸镁、然后用蒸馏水溶解后定容至100。

11、0ML，配成母液；称取139G四水合硝酸钙，用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液；称取85G磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液；说明书CN104082142A2/5页5使用时配制每升增殖培养基取母液，母液，母液各20ML；12250倍的微量元素母液的配制称取5575G硫酸锰，215G硫酸锌，000625G硫酸铜，00625G钼酸钠，155G硼酸，010375G碘化钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液，使用时配制每升增殖培养基取4ML母液；13100倍的EDTA铁盐母液的配制称取乙二胺四乙酸二钠，746G；硫酸亚铁556G，分别溶解，混合定容至1000ML，配。

12、成母液，使用时配制每升增殖培养基取10ML母液；14100倍的有机成分母液的配制称取02G甘氨酸，0005G盐酸硫胺素，0005G盐酸吡哆醇，0005G烟酸，10G肌醇，用蒸馏水溶解后混合定容至1000ML，配成母液，使用时配制每升增殖培养基取10ML母液；2激素母液的配制称取50MGNAA，先用5ML体积浓度95酒精溶解，然后加水定容至100ML，配成05MGML1的NAA母液，使用时配制每升增殖培养基取1MLNAA母液；称取5MGGA，先用5ML体积浓度95酒精溶解，然后加水定容至100ML，配成005MGML1的GA母液，使用时配制每升增殖培养基取4MLGA母液；称取50MG玉米素，先用。

13、少量01MOLL1NAOH溶解，然后加水定容至100ML，配成05MGML1的玉米素母液，使用时配制每升增殖培养基取46ML玉米素母液；3按上述步骤（11）至步骤（14）中配制每升增殖培养基的用量加入后，再加入琼脂7G，蔗糖30G，NAA母液1ML，GA母液4ML，加热溶解后定容至1L，用0LMOLL1盐酸调PH至52，灭菌；待培养基温度降至6070时，在接种台上采用过滤灭菌法添加步骤（2）中配制的玉米素母液，每升增殖培养基加4ML6ML玉米素母液，然后在接种台上分装培养基。0007本发明的增殖培养基的使用方法为将无菌苗在超净台上接种至配制好的灭菌的增殖培养基上，在光照强度2000LUX的条件。

14、下培养，培养条件为温度2527，光照时间为14小时。0008有益效果与现有技术相比，本发明的优点是1组成培养基较传统培养基硝态氮含量增加；2采用该培养基进行增殖，增殖周期短，增殖倍数高；3增殖苗健壮。0009具体实施方式以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。0010实施例1一种喜来越橘组织培养的增殖培养基，包括如下组分改良WPM培养基NAA05MG/LGA02MG/LZT2MGL1蔗糖30GL1琼脂7GL1，其余为蒸馏水，PH为52；其中改良WPM培养基包括以下组分大量元素893MGL1硝酸钾、119MGL1硫酸铵、370MGL1硫酸镁、278MGL1硝酸钙、170MGL1磷酸二氢钾；微量元。

15、素223MGL1硫酸锰、86MGL1硫酸锌、0025MGL1硫酸铜、025MGL1钼酸钠、62MGL1硼酸；0415MGL1碘化钾；铁盐746MGL1乙二胺四乙酸二钠、556MGL1硫酸亚铁；有机物05MGL1烟酸、05MGL1盐酸硫胺素、05MGL1盐酸毗哆醇、L00MGL1说明书CN104082142A3/5页6肌醇、2MGL1甘氨酸。0011上述增殖培养基制备方法如下（1）配制改良WPM培养基1150倍大量元素母液的配制分别称取4465G硝酸钾、595G硫酸铵、185G硫酸镁、然后用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液；称取139G四水合硝酸钙，用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成。

16、母液；称取85G磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液；使用时配制每升增殖培养基取母液，母液，母液各20ML；12250倍的微量元素母液的配制称取5575G硫酸锰，215G硫酸锌，000625G硫酸铜，00625G钼酸钠，155G硼酸，010375G碘化钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液，使用时配制每升增殖培养基取4ML母液；13100倍的EDTA铁盐母液的配制称取乙二胺四乙酸二钠，746G；硫酸亚铁556G，分别溶解，混合定容至1000ML，配成母液，使用时配制每升增殖培养基取10ML母液；14100倍的有机成分母液的配制称取02G甘氨酸，0005G盐酸硫胺素，0。

17、005G盐酸吡哆醇，0005G烟酸，10G肌醇，用蒸馏水溶解后混合定容至1000ML，配成母液，使用时配制每升增殖培养基取10ML母液；2激素母液的配制称取50MGNAA，先用5ML体积浓度95酒精溶解，然后加水定容至100ML，配成05MGML1的NAA母液，使用时配制每升增殖培养基取1MLNAA母液；称取5MGGA，先用5ML体积浓度95酒精溶解，然后加水定容至100ML，配成005MGML1的GA母液，使用时配制每升增殖培养基取4MLGA母液；称取50MG玉米素，先用少量01MOLL1NAOH溶解，然后加水定容至100ML，配成05MGML1的玉米素母液，使用时配制每升增殖培养基取4ML。

18、玉米素母液；3按上述步骤（11）至步骤（14）中配制每升增殖培养基的用量加入后，再加入琼脂7G，蔗糖30G，NAA母液1ML，GA母液4ML，加热溶解后定容至1L，用0LMOLL1盐酸调PH至52，灭菌；待培养基温度降至6070时，在接种台上采用过滤灭菌法添加步骤（2）中配制的玉米素母液，每升增殖培养基加4ML玉米素母液，然后在接种台上分装培养基。0012本发明增殖培养基的使用方法为将无菌苗在超净台上接种至配制好的灭菌的增殖培养基上，在光照强度2000LUX的条件下培养，培养条件为温度2527，光照时间为14小时。001330天后统计发现植株生长健壮，叶片呈绿色，植株增殖倍数达128。0014。

19、实施例2一种喜来越橘组织培养的增殖培养基，包括如下组分改良WPM培养基NAA05MG/LGA02MG/LZT3MGL1蔗糖30GL1琼脂7GL1，其余为蒸馏水，PH为52；其中改良WPM培养基包括以下组分大量元素893MGL1硝酸钾、119MGL1硫酸铵、370MGL1硫酸镁、278MGL1硝酸钙、170MGL1磷酸二氢钾；微量元素223MGL1硫酸锰、86MGL1硫酸锌、0025MGL1硫酸铜、025MGL1钼酸钠、62MGL1硼酸；0415MGL1碘化钾；说明书CN104082142A4/5页7铁盐746MGL1乙二胺四乙酸二钠、556MGL1硫酸亚铁；有机物05MGL1烟酸、05MGL1。

20、盐酸硫胺素、05MGL1盐酸毗哆醇、L00MGL1肌醇、2MGL1甘氨酸。0015增殖培养基制备方法如下（1）配制改良WPM培养基1150倍大量元素母液的配制分别称取4465G硝酸钾、595G硫酸铵、185G硫酸镁、然后用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液；称取139G四水合硝酸钙，用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液；称取85G磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液；使用时配制每升增殖培养基取母液，母液，母液各20ML；12250倍的微量元素母液的配制称取5575G硫酸锰，215G硫酸锌，000625G硫酸铜，00625G钼酸钠，155G硼酸，010375G碘化钾。

21、，用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液，使用时配制每升增殖培养基取4ML母液；13100倍的EDTA铁盐母液的配制称取乙二胺四乙酸二钠，746G；硫酸亚铁556G，分别溶解，混合定容至1000ML，配成母液，使用时配制每升增殖培养基取10ML母液；14100倍的有机成分母液的配制称取02G甘氨酸，0005G盐酸硫胺素，0005G盐酸吡哆醇，0005G烟酸，10G肌醇，用蒸馏水溶解后混合定容至1000ML，配成母液，使用时配制每升增殖培养基取10ML母液；2激素母液的配制称取50MGNAA，先用5ML体积浓度95酒精溶解，然后加水定容至100ML，配成05MGML1的NAA母液，使用时配制。

22、每升增殖培养基取1MLNAA母液；称取5MGGA，先用5ML体积浓度95酒精溶解，然后加水定容至100ML，配成005MGML1的GA母液，使用时配制每升增殖培养基取4MLGA母液；称取50MG玉米素，先用少量01MOLL1NAOH溶解，然后加水定容至100ML，配成05MGML1的玉米素母液，使用时配制每升增殖培养基取4ML玉米素母液；3按上述步骤（11）至步骤（14）中配制每升增殖培养基的用量加入后，再加入琼脂7G，蔗糖30G，NAA母液1ML，GA母液4ML，加热溶解后定容至1L，用0LMOLL1盐酸调PH至52，灭菌；待培养基温度降至6070时，在接种台上采用过滤灭菌法添加步骤（2）中。

23、配制的玉米素母液，每升增殖培养基加6ML玉米素母液，然后在接种台上分装培养基。0016将无菌苗在超净台上接种至配制好的灭菌的增殖培养基上，在光照强度2000LUX的条件下培养，培养条件为温度2527，光照时间为14小时。001730天后统计发现植株生长健壮，叶片呈绿色，植株增殖倍数达132。0018对照例1将喜来越橘接种于传统的WPM的增殖培养基中，其培养基成分和含量包括大量元素400MGL1硝酸钾、900MGL1硫酸钾、370MGL1硫酸镁、96MGL1二水合氯化钙、556MGL1硝酸钙、170MGL1磷酸二氢钾；微量元素223MGL1硫酸锰、86MGL1硫酸锌、0025MGL1硫酸铜、02。

24、5MGL1钼酸钠、62MGL1硼酸；铁盐373MGL1乙二胺四乙酸二钠、278MGL1硫酸亚铁；说明书CN104082142A5/5页8有机物05MGL1烟酸、05MGL1盐酸硫胺素、05MGL1盐酸毗哆醇、L00MGL1肌醇、2MGL1甘氨酸；蔗糖30GL1，琼脂7GL1玉米素2MGL1；其余为蒸馏水，PH为52；制备方法如下（1）配制改良WPM培养基1150倍大量元素母液的配制分别称取20G硝酸钾、45G硫酸钾、185G硫酸镁、然后用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液；称取48G二水合氯化钙、278G四水合硝酸钙，用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液；称取85G磷酸二氢钾，用蒸。

25、馏水溶解后定容至1000ML，配成母液；使用时配制每升增殖培养基取母液，母液，母液各20ML；12250倍的微量元素母液的配制称取5575G硫酸锰，215G硫酸锌，000625G硫酸铜，00625G钼酸钠，155G硼酸，用蒸馏水溶解后定容至1000ML，配成母液，使用时配制每升增殖培养基取4ML；13100倍的EDTA铁盐母液的配制称取373G乙二胺四乙酸二钠，278G硫酸亚铁，分别溶解，混合定容至1000ML，配成母液，使用时配制每升增殖培养基取10ML；14100倍的有机成分母液的配制称取02G甘氨酸，0005G盐酸硫胺素，0005G盐酸吡哆醇，0005G烟酸，10G肌醇溶解后混合定容至1。

26、000ML，配成母液，使用时配制每升增殖培养基取10ML；15激素母液的配制称取50MG玉米素，先用5ML01MOLL1NAOH溶解，然后加水定容至100ML，配成05MGML1的母液，使用时配制每升增殖培养基取4ML；2按上述步骤（11）至步骤（15）中配制每升增殖培养基的用量加入后，再加入琼脂7G，蔗糖30G，加热溶解后定容至1L，用0LMOLL1盐酸调PH至52，灭菌；待培养基温度降至6070时，在接种台上采用过滤灭菌法添加玉米素母液，玉米素母液浓度为05MGML1,每升培养基加4ML玉米素母液，然后在接种台上分装培养基。0019使用方法将无菌苗在超净台上接种至配制好的灭菌的增殖培养基上，在光照强度2000LUX的条件下培养，培养条件为温度2527，每日光照时间为14小时。002030天后统计发现植株生长缓慢，叶片偏黄，植株增殖倍数为44，明显低于本发明的增殖倍数。0021本发明按照上述实施例进行了说明应当理解，上述实施例不以任何形式限定本发明，凡采用等同替换或等效变换方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。说明书CN104082142A。

展开阅读全文