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1、10申请公布号CN104083426A43申请公布日20141008CN104083426A21申请号201410357160122申请日20140725A61K36/41200601A23L2/52200601A61K31/703220060171申请人西华大学地址610039四川省成都市金牛区土桥金周路999号西华大学72发明人李玉锋纪明江汪静心张良赖朋陈凌谢士娟74专利代理机构北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司11385代理人董芙蓉54发明名称一种采用环糊精包埋技术去除红景天苷提取液中鞣质的方法57摘要本发明公开了一种采用环糊精包埋技术去除红景天苷提取液中鞣质的方法。该方法是取红景天于干燥。
2、箱中干燥处理4H，粉碎过40目筛，取20G红景天粉末，加入400ML蒸馏水，浸泡24H，用300W微波功率处理20S，于80水浴锅中加热提取15H，抽滤，取滤液定容至1000ML，制得红景天提取液；取红景天提取液100ML，加入05G07G环糊精与30G38G环糊精，在电磁加热搅拌器中以500R/MIN速率搅拌，加热温度4060，加热2535H后，过滤，定容至100ML。本发明的方法利用环糊精包埋红景天中涩味物质鞣质，取得了良好的除涩效果，为红景天的开发及产业化奠定了基础，同时为除去中药材中鞣质提供了新的方法与理论支撑。51INTCL权利要求书1页说明书6页附图2页19中华人民共和国国家知识产。
3、权局12发明专利申请权利要求书1页说明书6页附图2页10申请公布号CN104083426ACN104083426A1/1页21一种采用环糊精包埋技术去除红景天苷提取液中鞣质的方法，其特征在于，取红景天于干燥箱中干燥处理4H，粉碎过40目筛，取20G红景天粉末，加入400ML蒸馏水，浸泡24H，用300W微波功率处理20S，于80水浴锅中加热提取15H，抽滤，取滤液定容至1000ML，制得红景天提取液；取红景天提取液100ML，加入05G07G环糊精与30G38G环糊精，在电磁加热搅拌器中以500R/MIN速率搅拌，加热温度4060，加热2535H后，过滤，定容至100ML。2根据权利要求1所述。
4、的方法，其特征是，所述环糊精06G，环糊精34G，加热温度50，加热时间30H。权利要求书CN104083426A1/6页3一种采用环糊精包埋技术去除红景天苷提取液中鞣质的方法技术领域0001本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及的是一种采用环糊精包埋技术去除红景天苷提取液中鞣质的方法。背景技术0002红景天RHODIOLAL为景天科红景天属植物，气芳香，味微苦涩、后甜，具有抗氧化、抗衰老、提高免疫力、抗肿瘤、抗辐射等作用。红景天中含有多种化学成分，包括黄酮类、有机酸类、多糖类、香豆素类、挥发性成分以及其他，其中红景天苷含量的高低为评判红景天属植物的药用价值。由于红景天中含有大量的鞣质，使红景天。
5、饮料带有明显的涩味，并且影响了其澄清度。因此，去除红景天中的鞣质具有极其重要的理论价值与现实意义。0003目前，除鞣质的方法有很多种，包括石灰H2SO4沉淀法、明胶沉淀法、聚酰胺吸附法、酸性醇沉法、碱性醇沉法等方法。但这些方法在去除鞣质的同时会去除很多的药用部分，同时引入相应的杂质。环糊精CYCLODEXTRIN，CD是直链淀粉在酶的作用下生成的一系列环状低聚糖的总称。近年来环糊精被广泛的应用于食品、医药以及化工等领域。由于环糊精其锥状环状结构可以将目标分子紧紧的包裹住，形成包埋复合物。因此可以选择环糊精作为鞣质的包埋剂来掩蔽红景天中的涩味并增加其稳定性，最大限度的保留其有效成分。发明内容00。
6、04本发明所要解决的技术问题是针对现有技术存在的不足，提供了一种采用环糊精包埋技术去除红景天苷提取液中鞣质的方法。0005本发明的技术方案如下0006一种采用环糊精包埋技术去除红景天苷提取液中鞣质的方法，是取红景天于干燥箱中干燥处理4H，粉碎过40目筛，取20G红景天粉末，加入400ML蒸馏水，浸泡24H，用300W微波功率处理20S，于80水浴锅中加热提取15H，抽滤，取滤液定容至1000ML，制得红景天提取液；取红景天提取液100ML，加入05G07G环糊精与30G38G环糊精，在电磁加热搅拌器中以500R/MIN速率搅拌，加热温度4060，加热2535H后，过滤，定容至100ML。000。
7、7优选地，环糊精为06G，环糊精为34G，加热温度为50，加热时间为30H。0008本发明的方法利用环糊精包埋红景天中涩味物质鞣质，取得了良好的除涩效果，为红景天的开发及产业化奠定了基础，同时为除去中药材中鞣质提供了新的方法与理论支撑。附图说明说明书CN104083426A2/6页40009图1为红景天苷标准品色谱图。0010图2为红景天样品色谱图。0011图3为不同用量的环糊精对鞣质的包埋影响。0012图4为不同质量的环糊精对鞣质的包埋影响。0013图5为时间对鞣质包埋的效果影响。0014图6为温度对鞣质包埋的效果影响。具体实施方式0015以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。0016实。
8、施例00171、材料与仪器00181实验原料0019红景天大花红景天，成都市中药材批发市场购得00202实验试剂及仪器0021没食子酸中国药品生物制品检定所，红景天苷中国药品生物制品检定所，NA2CO3、干酪素、明胶均由成都市科龙化学试剂厂提供，UV2600型紫外可见分光光度计天尼柯上海光谱仪器有限公司，磁力加热搅拌器852，苏州学森仪器设备有限公司，高效液相色谱仪LC20AB，日本岛津。0022磷钼钨酸试剂的制备取钨酸钠10G与磷钼酸24G，加水70ML与磷酸5ML，回流煮沸2小时，放冷，加水稀释至100ML，摇匀，置棕色试剂瓶内，在暗处保存。00232、测定方法00241鞣质含量的测定方法。
9、0025按中华人民共和国药典2010年版一部附录XB项下操作，测定红景天提取液中鞣质含量。其具体步骤如下0026对照品溶液的制备0027精密称取没食子酸对照品50MG，置100ML棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取5ML，置50ML棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得每1ML中含没食子酸005MG对照品溶液。0028标准曲线的制备0029精密量取对照品溶液05ML、10ML、20ML、30ML、40ML、50ML，分别置25ML棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试剂1ML，分别加水115ML、11ML、10ML、9ML、8ML、7ML，用质量百分数为29的碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30。
10、分钟，以蒸馏水为空白，用紫外可见分光光度法，在760NM的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。0030供试品溶液的制备0031取红景天粉末适量按品种项目下的规定，精密称定，置250ML棕色量瓶中，加水150ML，放置过夜，超声处理10分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，静置使固体物沉淀，滤过，弃去初滤液50ML，精密量取续滤液20ML，置100ML棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。0032测定法总酚说明书CN104083426A3/6页50033精密量取供试品溶液2ML，置25ML棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试剂1ML”起，加水10M。
11、L，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量MG，计算，即得。0034不被吸附的多酚0035精密量取供试品溶液25ML，加至已盛有干酪素06G的100ML具塞锥形瓶中，密塞，置30水浴中保温1小时，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2ML，置25ML棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试剂1ML”，加水10ML，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量MG，计算，即得。0036按下式计算鞣质的含量0037鞣质含量总酚量不被吸附的多酚量00382红景天苷含量的测定方法0039按中华人民共和国药典2010年版一部红景天“。
12、【含量测定】”测定红景天提取液中红景天苷的含量。其具体步骤如下0040色谱条件与系统适用性试验0041以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇一水体积比为1585为流动相；检测波长为275NM。理论板数按红景天苷峰计算应不低于2000。0042对照品溶液的制备0043取红景天苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ML含05MG的溶液，即得对照品溶液。0044供试品溶液的制备0045取红景天粉末过三号筛约05G，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ML，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。0046测定法0047分别精。
13、密吸取对照品溶液与供试品溶液各10L，注入液相色谱仪，测定，即得。00483、实验方法00491红景天提取液的制备0050取红景天于干燥箱中干燥处理4H，粉碎过40目筛，取20G红景天粉末，加入400ML蒸馏水，浸泡24H，用300W微波功率处理20S，于80水浴锅中加热提取15H，抽滤，取滤液定容至1000ML。00512明胶沉淀法去除鞣质0052取20ML红景天提取液，加入质量分数为5的明胶溶液10ML慢加快摇，静置10MIN后过滤除去沉淀，定容至50ML容量瓶中，测定红景天苷与鞣质含量。00533环糊精包埋法去除鞣质0054不同环糊精用量对鞣质的包埋影响0055取100ML红景天提取液2。
14、1组，分别加入环糊精0、02、04、0636、38、40G，环糊精4、38、36、3404、02、0G，在电磁加热搅拌器中70加热，500R/MIN搅拌包埋处理2H，过滤定容至100ML，测定鞣质的含量。每组实验重复三次测定其平均值。说明书CN104083426A4/6页60056不同环糊精用量对鞣质的包埋影响0057取100ML红景天提取液11组，分别加入环糊精0、01、02、0309、10G，环糊精0、04、08、1236、40G，在电磁加热搅拌器中70加热，500R/MIN搅拌包埋处理2H，过滤定容至100ML，测定鞣质的含量。每组实验重复三次测定其平均值。0058不同包埋时间对鞣质的包。
15、埋影响0059取100ML红景天提取液6组，分别加入环糊精06G，环糊精34G，在电磁加热搅拌器中70加热，以500R/MIN搅拌速率分别包埋处理1、2、3、4、5、6H，过滤定容至100ML，测定鞣质的含量。每组实验重复三次测定其平均值。0060不同加热温度对鞣质的包埋影响0061取100ML红景天提取液7组，分别加入环糊精06G，环糊精34G，在电磁加热搅拌器中分别以20、30、4080、90加热，500R/MIN搅拌速率包埋处理2H，过滤定容至100ML，测定鞣质的含量。每组实验重复三次测定其平均值。0062环糊精对鞣质包埋条件的优化0063在单因素试验的基础上，选择度对包埋效果进行优化。
16、，选出最佳包埋方案。分别选择环糊精用量、总环糊精用量、时间、温度为四个因素，进行四因素三水平的正交试验，以鞣质含量为指标进行测量，经试验选出环糊精包埋鞣质的最优工艺条件。00644、实验结果及分析00651红景天提取液中鞣质和红景天苷含量的测定0066红景天苷标准品和红景天样品色谱图见图1、图2。0067经试验测得，以吸光度Y为纵坐标，浓度X为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为Y0982X00615，R09994，鞣质含量为0880MG/ML。0068经试验测得，以峰面积Y为纵坐标，浓度X为横坐标绘制标准曲线，得线性回归方程为Y3056X3056，R09999。红景天提取液中红景天苷含量为。
17、0151MG/ML。00692明胶沉淀法去除鞣质结果与分析0070试验测得经明胶沉淀处理后的红景天提取液中鞣质的含量为0417MG/ML，下降了526；红景天苷的含量为0103MG/ML，下降了318。00713环糊精包埋法除鞣质结果与分析0072不同环糊精用量对鞣质的包埋影响0073用不同用量环糊精对红景天提取液中鞣质的包埋影响如图3。0074由图3可看出，随着环糊精用量的增加，鞣质的含量先减小后增大，当环糊精的用量达到08G时，鞣质的含量达到最小值0148MG/ML，比没有经过环糊精包埋处理的0880MG/ML降低了832，表明经环糊精与环糊精包埋处理后可降低红景天提取液中鞣质的含量，环糊。
18、精的最佳用量为08G，环糊精的用量为32G。0075不同环糊精用量对鞣质的包埋影响0076不同环糊精用量对鞣质的包埋影响如图4。0077由图4可以看出，鞣质含量随着环糊精用量的增加而增加，随后减少。鞣质的含量从环糊精用量为05G的0824MG/ML降低到环糊精用量为35G的0129MG/ML，降低了843。较原料中所含鞣质0880MG/ML减少了0751MG/ML。0078不同包埋时间对鞣质的包埋影响说明书CN104083426A5/6页70079不同包埋时间对鞣质的包埋影响如图5。0080由图5可以看出，时间对鞣质的包埋效果影响较大，当经过包埋时间为1H时，鞣质的含量为0561MG/ML，含。
19、量较高，当包埋时间达到2H时，鞣质的含量降低至0145MG/ML，鞣质的含量达到最低值，随着包埋时间的增加鞣质含量保持在这一水平。0081不同加热温度对鞣质的包埋影响0082不同加热温度下环糊精对鞣质的包埋影响如图6。0083由图6可知，温度对环糊精包埋鞣质的效果影响较大，包埋温度在3060时，鞣质的含量随温度的增加而减小，随后呈上升趋势。鞣质的含量从0446MG/ML减小至0127MG/ML，减小了715，随着反应温度的增加，鞣质的含量又有所增加，表明在60时，环糊精对鞣质的包埋效果最佳。0084环糊精对鞣质包埋条件的优化0085包埋条件优化正交试验0086在单因素试验基础上，选择环糊精用量。
20、、环糊精用量、时间、温度对鞣质的包埋效果进行正交试验优化，选出影响环糊精包埋红景天提取液中鞣质的主要因素。环糊精包埋正交试验因素水平见表1，正交试验结果见表2。0087表1环糊精包埋鞣质正交试验表008800890090表2正交试验结果0091说明书CN104083426A6/6页80092由表2可知，根据方差分析得到影响包埋效果的主次因素为DBCA，即温度环糊精质量时间环糊精用量，其中环糊精用量影响最小。综合以上数据分析知，要获得较好的除涩效果的最佳组合为A1B3C3D1，而A1B3C3D1并未出现在实验中，做了补充试验，经试验测得经最优组合环糊精包埋处理后红景天提取液中鞣质的含量为0103MG/ML。0093包埋工艺对红景天提取液中红景天苷的影响0094按22中方法测定红景天提取液中红景天苷的含量，测得经环糊精包埋处理后的红景天提取液中红景天苷的含量为0146MG/ML。0095应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。说明书CN104083426A1/2页9图1图2图3说明书附图CN104083426A2/2页10图4图5图6说明书附图CN104083426A10。