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1、10申请公布号CN104161758A43申请公布日20141126CN104161758A21申请号201410312868522申请日20140702A61K31/472200601A61P25/16200601A61P25/18200601A61P25/00200601A61K31/19820060171申请人苏州大学地址215123江苏省苏州市工业园区仁爱路199号72发明人刘江云谭蓓蓓窦冕郑龙太杨世林74专利代理机构北京市科名专利代理事务所特殊普通合伙11468代理人程美琼54发明名称3羧酸四氢异喹啉衍生物在制备治疗多巴胺能神经疾病药物中的应用57摘要本发明公开了3羧酸四氢异喹啉衍生。
2、物在制备治疗多巴胺能神经疾病药物中的应用。3羧酸四氢异喹啉衍生物可以从猫豆植物中分离得到，也可以通过氨基酸前体苯丙氨酸、酪氨酸，或左旋多巴与对应的醛或酮类通过PICTETSPENGLER缩合化学合成。通过大鼠动物实验，表明该类衍生物成分与左旋多巴成分组合给药时，能够显著提高左旋多巴在血、脑组织中药物浓度，因此提高了左旋多巴生物利用度。此外，该类衍生物成分显著抑制了吗啡诱导的大鼠高自发运动，并可透过血脑屏障，提示该类成份可以调节多巴胺能神经功能。本发明中3羧酸四氢异喹啉衍生物可用于治疗帕金森病、精神病等多巴胺能神经疾病。51INTCL权利要求书1页说明书6页附图1页19中华人民共和国国家知识产权。
3、局12发明专利申请权利要求书1页说明书6页附图1页10申请公布号CN104161758ACN104161758A1/1页213羧酸四氢异喹啉衍生物在制备治疗多巴胺能神经疾病药物中的应用。2根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述3羧酸四氢异喹啉衍生物结构如式I所示其中，R1选自14个氢或羟基，包括选自氢，6羟基，7羟基，6,7二羟基，或7,8二羟基；R2、R3、R4和R5各自独立地选自氢、烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、芳基、取代的芳基、芳基烷基、取代的芳基烷基、杂芳基、取代的杂芳基、杂芳基烷基、取代的杂芳基烷基。3根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述3羧酸四氢异喹啉衍生物为3。
4、S3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉，3S1甲基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉，3S1,1二甲基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉，3S1,1二甲基3羧基7,8二羟基1,2,3,4四氢异喹啉，1苄基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉，1甲基1苯基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉，3S3羧基6羟基1,2,3,4四氢异喹啉，或3S3羧基1,2,3,4四氢异喹啉。4根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述3羧酸四氢异喹啉衍生物为其立体异构体，或对映异构体，或药学上可接受的盐，或水合物，或药物前体，或其中任一种的溶剂合物。5根据权利要求1所述的应用，。
5、其特征在于，所述药物为一种或一种以上3羧酸四氢异喹啉衍生物与生理学上可接受的载体组成的药物组合物。6根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述多巴胺能神经疾病为帕金森病。7根据权利要求6所述的应用，其特征在于，治疗帕金森病的药物为3羧酸四氢异喹啉衍生物与多巴胺能药物的组合物。8根据权利要求6所述的应用，其特征在于，治疗帕金森病的药物为3羧酸四氢异喹啉衍生物组成的药物与多巴胺能药物间隔2小时以内服用。9根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述多巴胺能药物为左旋多巴，或含有左旋多巴的复方制剂。权利要求书CN104161758A1/6页33羧酸四氢异喹啉衍生物在制备治疗多巴胺能神经疾病药物中的。
6、应用技术领域0001本发明涉及一种3羧酸四氢异喹啉衍生物的应用，更具体的说，涉及3羧酸四氢异喹啉衍生物在制备治疗多巴胺能神经疾病药物中的应用，属生物医药领域。背景技术0002帕金森病是老年人中最常见的神经变性疾病之一，在65岁以上老年人中发病率约为17，而80岁以上的发病率为2。目前全世界约有1800万人患这种病，我国约有170万患者。帕金森病主要病理变化表现为中脑黑质多巴胺能神经元进行性变性、死亡，从而导致该部位神经系统丧失其运动调节功能，出现静止性震颤、肌肉僵硬、运动迟缓和姿势反射受损等临床症状，部分病人还伴有抑郁、认知缺损等精神症状。其病因并未完全清楚，至今还没有有效的手段可及早诊断帕金。
7、森病，其治疗就更加困难，甚至还没有方法可以延缓这一疾病的进程。目前临床治疗药物主要是左旋多巴LD及其复方制剂，如美多巴、息宁，其疗效较为肯定。但由于LD单独口服给药时到达人脑中的有效剂量仅约1，长期服用LD45年后会引起副作用，如呕吐，不自主运动等异动症，以及远期的不良反应如运动波动，剂末现象、开关现象，冻结现象。这主要与多巴胺能神经的进行性病变、LD的耐受和体内含量起伏波动等有关，使病情难以控制、最终甚至无药可用。因此有效提高LD生物利用度、降低其副作用是治疗帕金森病药物开发的重要途径之一。0003与多巴胺能神经相关的疾病还包括多巴胺能神经疾病为认知损伤、泛化性焦虑症、急性紧张病、社会恐怖症。
8、、简单恐怖症、月经前烦躁症、社交焦虑症、成年人抑郁症、饮食疾病、肥胖病、神经性厌食症、神经性贪食症、暴食症、物质滥用病、化学品依赖症、尼古丁成瘾、可卡因成瘾、酒瘾、安非他明成瘾、莱希尼亨综合症、神经变性疾病、晚期黄体期综合症、嗜眠病、精神病状发怒、排斥敏感、运动障碍、锥体外综合症、痉挛病、多动腿综合症、迟发性运动障碍、睡眠相关的饮食疾病、夜间进食综合症、糖尿病性神经病变、纤维肉瘤综合症、慢性疲劳综合症、性功能障碍、早泄和雄性阳萎等，这些疾病涉及的年龄层次较大，持续时间从几周到几年长短不等，严重影响着患者的生理和心理健康。因此研究治疗此类多巴胺能神经疾病的药物具有重要意义。0004豆科藜豆属MU。
9、CUNA植物广泛分布于全球热带、亚热带地区，藜豆属植物是提取左旋多巴的主要原料。在中国、印度等传统医学应用中，人们发现直接服用藜豆提取物会减低异动症发生率。BALAVMANYAMAPARKINSONISMANDRELATEDDISORDERS,2010,458465和MICAELAMORELLINEUROTOXRES,2009,111122课题组研究证明，大鼠长期给药藜豆提取物时异动症副作用显著降低。LAXMINARAINMISRAPHYTOCHEMISTRY，2004，25652567报道，从藜豆中分离鉴定了四种3羧酸四氢异喹啉类成份。彭师奇取代四氢异喹啉3羧酸化合物、其制备方法及应用，专利。
10、申请号2007101000297，2011101184564，CN101200493等通过在3S1,2,3,4四氢异喹啉3羧酸的2位N上引入氨基酸残基，制备得到一类具有抗血栓活性的化合物。3羧酸四氢异喹啉类成份是一说明书CN104161758A2/6页4种简单的氨基酸类，但对该类成份的药理活性、尤其是神经药理学活性方面的研究目前报道少见。发明人在对藜豆属植物研究工作中，首次发现其中的3羧酸四氢异喹啉成份可以增强左旋多巴生物利用度，显著抑制吗啡诱导的大鼠高自发运动，并可透过血脑屏障，提示该类成份可以调节多巴胺能神经功能，因而可用于治疗帕金森病、精神病等多巴胺能神经疾病。发明内容0005本发明目的。
11、是提供了3羧酸四氢异喹啉衍生物的新用途，即在制备治疗多巴胺能神经疾病药物中的应用。0006本发明的技术方案是3羧酸四氢异喹啉衍生物在制备治疗多巴胺能神经疾病药物中的应用。优选的，所述3羧酸四氢异喹啉衍生物具有如下化学结构00070008其中，R1选自14个氢或羟基，包括选自氢，6羟基，7羟基，6,7二羟基，或7,8二羟基；R2、R3、R4和R5各自独立地选自氢、烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、芳基、取代的芳基、芳基烷基、取代的芳基烷基、杂芳基、取代的杂芳基、杂芳基烷基、取代的杂芳基烷基。0009进一步，优选的，所述3羧酸四氢异喹啉衍生物为3S3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉，。
12、3S1甲基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉，3S1,1二甲基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉，3S1,1二甲基3羧基7,8二羟基1,2,3,4四氢异喹啉，1苄基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉，1甲基1苯基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉，3S3羧基6羟基1,2,3,4四氢异喹啉，或3S3羧基1,2,3,4四氢异喹啉。0010更进一步，优选的，所述3羧酸四氢异喹啉衍生物包括其立体异构体，或对映异构体，或药学上可接受的盐，或水合物，或药物前体，或其中任一种的溶剂合物。0011更进一步，优选的，所述药物为一种或一种以上3羧酸四氢异喹啉衍生物与生理学上可接受的。
13、载体组成的药物组合物。0012更进一步，优选的，所述多巴胺能神经疾病为帕金森病。0013更进一步，优选的，治疗帕金森病的药物为3羧酸四氢异喹啉衍生物与巴胺能药物的组合物，或者3羧酸四氢异喹啉衍生物组成的药物与多巴胺能药物间隔2小时以内服用。0014更进一步，优选的，上述多巴胺能药物为左旋多巴，或含有左旋多巴的复方制剂。0015本发明的优点是本发明中3羧酸四氢异喹啉衍生物与治疗帕金森症的左旋多巴配合给药时减少LD降解速率，显著增强LD血浆和脑生物利用度。说明书CN104161758A3/6页5附图说明0016下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述0017图1为实施例9中MD01LD组和MDE组。
14、LD的血浆药时曲线；0018图2为实施例9中MD01LD组和MDE组MD01的血浆药时曲线。具体实施方式0019本发明中所述的3羧酸四氢异喹啉类成份是一种简单的氨基酸类，在藜豆属及其它多种植物中均有分布。其制备方法包括直接从植物中分离和化学合成。从植物中分离主要采用离子交换柱层析、硅胶柱层析、反相硅胶柱层析中的一种或多种技术分离获得，化学合成主要是采用相应的氨基酸前体苯丙氨酸、酪氨酸，或左旋多巴和对应的醛或酮类通过PICTETSPENGLER缩合进行制备。下面结合具体实施例说明其制备方法以及本发明应用。0020实施例10021猫豆中3羧酸四氢异喹啉衍生物的制备0022猫豆MD20091101药。
15、材采于广西百色，经鉴定为豆科油麻藤属植物龙爪藜豆MUCUNAPRURIENSVARUTILISACHEVAL的种子。取干燥的猫豆30KG，粉碎成粗粉，经丙酮室温提取24H除去油脂，药渣继续用甲醇回流提取2次，每次2H，回收甲醇获得猫豆提取物MDE214G。取MDE104G，经反复中压硅胶柱层析，以氯仿甲醇05乙酸7305体积比洗脱，获得MD0230MG；继续以653505洗脱，依次获得MD01200MG、MD0312MG；继续以5505洗脱，依次获得MD0415MG、LD35MG；。MD01MD04的化学结构经1HNMR、IR、MS等波谱分析，和文献LAXMINARAINMISRA，PHYTO。
16、CHEMISTRY，2004，25652567对照，依次鉴定为3S1,1二甲基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉MD01，3S1甲基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉MD02，3S3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉MD03和3S1,1二甲基3羧基7,8二羟基1,2,3,4四氢异喹啉MD04。0023实施例200243S3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉MD03的化学合成0025取100MG左旋多巴，加入适量01N盐酸溶解，氢氧化钠溶液中和，加入035ML40的甲醛溶液，振摇混匀，在30下搅拌反应72H。将反应液进行离心4000R/MIN，10MIN，取沉淀物，减。
17、压干燥，得到目标产物20MG。0026实施例300271甲基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉的化学合成0028取100MG左旋多巴，加入适量01N盐酸溶解，氢氧化钠溶液中和，加入035ML的乙醛溶液，振摇混匀，在30下搅拌反应72H。将反应液进行离心4000R/MIN，10MIN，取沉淀物，减压干燥，得到产物50MG。该产物经进一步HPLC分离，其色谱条件为ODS色谱柱，20250MM，10甲醇01乙酸为流动相，分别获得1甲基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉15MG，1甲基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉8MG。0029实施例4说明书CN104161758A4/6。
18、页600301,1二甲基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉的化学合成0031取100MG左旋多巴，加入适量01N盐酸溶解，氢氧化钠溶液中和，加入1ML丙酮溶液，振摇混匀，在30下搅拌反应72H。将反应液进行离心4000R/MIN,10MIN，取沉淀物，减压干燥，得到目标产物60MG。0032实施例500331苄基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉的化学合成0034取100MG左旋多巴，加入适量01N盐酸溶解，氢氧化钠溶液中和，加入2ML苯乙醛溶液，振摇混匀，在30下搅拌反应72H。将反应液进行离心4000R/MIN,10MIN，取沉淀物，减压干燥，得到目标产物24MG。0035。
19、实施例600361甲基1苯基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉的化学合成0037取100MG左旋多巴，加入适量01N盐酸溶解，氢氧化钠溶液中和，加入3ML苯乙酮溶液，振摇混匀，在30下搅拌反应72H。将反应液进行离心4000R/MIN,10MIN，取沉淀物，减压干燥，得到产物35MG。该产物经进一步HPLC分离ODS色谱柱，20250MM，10甲醇01乙酸，分别获得1甲基1苯基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉12MG，1甲基1苯基3羧基6,7二羟基1,2,3,4四氢异喹啉6MG。0038实施例700391甲基3S3羧基6羟基1,2,3,4四氢异喹啉的化学合成0040取100M。
20、G酪氨酸，加入适量01N盐酸溶解，氢氧化钠溶液中和，加入035ML的乙醛溶液，振摇混匀，在30下搅拌反应72H。将反应液进行离心4000R/MIN,10MIN，取沉淀物，减压干燥，得到目标产物18MG。0041实施例800421甲基3S3羧基1,2,3,4四氢异喹啉的化学合成0043取100MG苯丙氨酸，加入适量01N盐酸溶解，氢氧化钠溶液中和，加入035ML的乙醛溶液，振摇混匀，在30下搅拌反应72H。将反应液进行离心4000R/MIN,10MIN，取沉淀物，减压干燥，得到目标产物25MG。0044实施例90045血浆药代动力学测试0046采用正常雄性大鼠模型，取正常雄性大鼠24只体重200。
21、230G，购自昭衍苏州新药研究中心有限公司，动物合格证号SLXK苏20130003，分为测试化合物组MD01组、左旋多巴组LD组、测试化合物加左旋多巴组MD01LD组以及猫豆提取物参照组MDE组四个实验组，每组6只。其中测试化合物组给予MD01，剂量10MG/KG；左旋多巴组对每只大鼠给予左旋多巴LD，剂量20MG/KG；测试化合物加左旋多巴组对每只大鼠给予MD01和LD，剂量分别为10MG/KG和20MG/KG；猫豆提取物组对大鼠给予猫豆提取物MDE，剂量100MG/KG其中左旋多巴含量计为20MG/KG。给药方式为腹腔注射给药。分别于给药后0、5、10、20、40、60、90、120、15。
22、0、180MIN经眼眶取血03ML，于10000RMIN1离心15MIN，精密吸取血浆100L，加入02MOL/L高氯酸05抗坏血酸溶液20L，涡旋混匀1MIN，然后10000RMIN1离心15MIN，取上清液10L待测。采用HPLCFD检测该上清液中MD01和LD药物含量。检测条件为荧光激发波长280NM，检测波长310NM，5C18AR色说明书CN104161758A5/6页7谱柱46250MM，甲醇01MOL/L醋酸595，V/V为流动相，流速1ML/MIN。根据各时间测得的血浆中药物浓度得到LD和MD01血浆药时曲线，如图1和2所示。0047本实施例中血浆药代动力学测试结果图1和2可以。
23、看出MD01和LD药物血浆半衰期T1/2分别约为25MIN和40MIN；MD01配伍LD给药时血浆药代动力学参数不受影响，但可使LD血药浓度显著增高；MD0104在MDE中也有少量存在，给药MDE时LD血药浓度在180MIN内基本不降低。结果表明MDE及其中的MD0104具有升高LD血药浓度、增强LD生物利用度的作用。0048实施例100049脑组织药物浓度分析0050采用正常雄性大鼠模型，取大鼠18只，分为测试化合物组MD01组、左旋多巴组LD组、测试化合物加左旋多巴组MD01LD组三个实验组，每组6只大鼠。其中测试化合物组大鼠给予MD01，剂量10MG/KG；左旋多巴组给予大鼠左旋多巴LD。
24、，剂量20MG/KG；测试化合物加左旋多巴组给予MD01和LD，剂量分别为10MG/KG和20MG/KG；给药方式为腹腔注射给药。分别于给药后30、60、90、120MIN取血03ML，同时取出大鼠脑组织，称湿重后冻存备测。取血和脑组织称重，分别加入1ML生理盐水，匀浆，离心10000RMIN1，15MIN，取上清液100L，同实施例9中血样药物浓度测定方法测定各组织中药物浓度。表1所示为MD01LD组大鼠注射MD01和LD后不同时间血浆和脑组织中MD01、LD含量结果。0051实验结果表明MD01可通过血脑屏障，单独给药时脑中浓度约为血浆中的10；MD01和LD联合给药时使血浆和大脑中的药物。
25、浓度均明显升高参见表1，在给药60MIN内均可显著增加左旋多巴血浆浓度50以上，并且在120MIN内基本不降低，结果表明MD01具有脑通透性，并可显著增强脑中LD生物利用度。0052表1MD01LD组不同时间的血/脑组织中LD和MD01含量测定结果00530054将上述MD01分别换成化合物MD02、MD03、MD04、3S3羧基6羟基1,2,3,4四氢异喹啉、3S3羧基1,2,3,4四氢异喹啉，重复上述实验步骤，结果可以在脑中测定到其原形分子。表明这些物质均可以血脑屏障，提高脑中LD生物利用度。0055实施例110056大鼠高自发运动行为学试验0057大鼠随机分成空白对照组、溶剂对照组和测试。
26、化合物三组，每组6只，分组后，每只大鼠实验前均在自发活动箱中适应510分钟。测试药物组和剂量对照组的大鼠皮下注射10MG/KG吗啡激发过度自发运动，空白对照组大鼠注射相同体积生理盐水。30MIN后，测说明书CN104161758A6/6页8试化合物组大鼠腹腔注射测试化合物MD01，剂量10MG/KG。然后，空白对照组、测试化合物组、溶剂对照组同时放入多功能自发活动箱中，红外监控三组动物在15HR过程中的运动，用相应软件上海吉量提供分析所记录的视频文件，得到大鼠15小时内活动总路程和各个时段的运动路程。0058测试结果表明测试化合物MD010410MG/KG均显著抑制吗啡诱导的大鼠高自发运动，可以调节巴胺能神经功能。0059通过上述实施例可以得出，3羧酸四氢异喹啉衍生物成份在与左旋多巴结合给药时，可以明显提高左旋多巴血浆以及脑组织中药物浓度，因此提高了左旋多巴生物利用度。此外，显著抑制了在吗啡诱导的大鼠高自发运动。其药物成分可透过血脑屏障，表明该衍生物成份可以调节多巴胺能神经功能，因而可配合左旋多巴治疗帕金森病或精神病等多巴胺能神经疾病。说明书CN104161758A1/1页9图1图2说明书附图CN104161758A。