本发明为色谱分离用环糊精键合固定相的制备方法。国际分类号为B01D15/08;C08L5/16。 环糊精分子是由葡萄糖单元通过α-1.4键连接起来的大环齐聚糖。由于特殊的环形结构，能够在它的疏水腔中选择性地包复各种客体分子，形成稳定性不同的包复络合物，因而在色谱领域中已得到应用〔L.Hinze，separation and purification Methods，10，159（1981）。〕。特别是把环糊精键合到惰性固体材料上用作色谱固定相，显示了独特的分离能力。当采用胺或酰胺偶联剂把环糊精偶联在固体膜板（硅胶）上时，因化学键易水解、不稳定、使其在水溶液相的应用中受到限制。此外，这些含氮偶联剂的应用会生成氮氧化物，减少了能够键合的环糊精量，并且氮氧化合物和酰胺的存在使这些材料不适合于薄层色谱。美国专利（U·S·P·4539399.1985）报道的制备环糊精键合固定相的方法，其反应分两步进行，即首先使硅烷偶联剂与硅胶反应制得一种改性硅胶，然后再将这种改性硅胶与经NaH处理的环糊精反应制得色谱固定相，反应需要干燥氮气保护，并在干燥箱中操作。
本发明的目的是提供一种新的，操作简便的色谱用环糊精键合固定相的制备方法，提高环糊精在惰性材料上的键合量，使所得固定相的色谱分离能力获得改善，有效地用于高效液相色谱、柱色谱和薄层色谱分离有机化合物和无机化合物，特别是适合于结构异构体、位置异构体、非对映体和对映体的分离。
本发明是关于采用偶联剂把环糊精化学键合在一种含羟基的惰性材料上的方法，特别是采用硅烷偶联剂把环糊精键合在硅胶上。
本发明采用一步法使环糊精、硅烷偶联剂、含羟基的惰性材料在无水有机惰性溶剂中，于70～130℃反应，制取环糊精键合固定相，反应时间一般为10～30小时。
环糊精在参与上述反应前，先用金属钠进行预处理。环糊精与金属钠在无水有机惰性溶剂中于70～130℃下反应1～5小时，环糊精/金属钠地克分子比为1/1～1/2。环糊精也可采用已有技术用NaH进行预处理，但采用金属钠更便宜。
上术反应中，环糊精∶惰性材料∶硅烷偶联剂的投料比为40～70份∶15～30份∶10～30份。
本发明所述的环糊精可以是α-环糊精，β-环糊精，γ-环糊精。惰性材料可以是含羟基的颗粒形有机物或无机物，最好是颗粒形的硅胶。
本发明所述的硅烷偶联剂，可用下式表示：
式中R代表烷氧基或卤素原子，最好为甲氧基;R′代表末端含环氧基、卤素或链烯基的有机官能团;n为1～10，最好为3～5。
本发明所述的无水有机惰性溶剂可以是N，N-二甲基甲酰胺，吡啶。最好为N，N-二甲基甲酰胺。
本发明制备的环糊精键合固定相不含氮原子，是抗水解、稳定的色谱分离材料。
本发明也适用于其它低聚糖类在含羟基的惰性材料上，特别是在硅胶上的化学键合。
本发明的制备方法，不用氮气保护，由于采用一步法，反应操作简单，环糊精在硅胶上的键合量高，固定相的色谱性能获得了明显的改善。据文献（D.W.Armstrong，J.chromatogr.sci.，22，411（1984）），环糊精固定相的色谱性能将随着环糊精在硅胶上的键合量的增加而得以改善，并可用硝基苯胺异构体在此固定相上的容量因子K′作评价，若P-和O-硝基苯胺的容量因子之差（△k′）越大，则键合量就越大，因而分离能力越高。在本发明制备的环糊精固定相上，P-和O-硝基苯胺的容量因子之差（△k′＝5），远大于相同色谱条件下的相关技术（U.S.P.4539399）所提供的数据△K′约为1（见附图1-a和1-b）。
本发明制备的环糊精键合固定相，可有效地用于高效液相色谱、柱色谱和薄层色谱分离有机化合物和无机化合物，特别是适合于结构异构体，位置异构体，非对映体和对映体的分离。
实施例1.
取10克β-环糊精（苏州味精厂）于反应器中，加入120ml无水N，N-二甲基甲酰胺和0.2克金属钠，搅拌，90℃反应3小时后，加入4.3克3-缩水甘油基氧丙基三甲氧基硅烷（Fluka）和5克10μ无定形YWG-80硅胶（天津试剂厂）90℃反应20小时，离心沉降除去上层液体，所得固体物依次用N，N-二甲基甲酰胺、甲苯、甲醇、水和丙酮洗涤，然后于70℃真空干燥20小时，获产物6.0克。元素分析：C，12.13%。
实施例2.
5μYQG-80球形硅胶（天津试剂厂）代替YWG-80硅胶，按实施例1的步骤进行，得产物6.1克，元素分析：C，13.14%。
实施例3.
用实施例1制备的高选择性环糊精固定相，充填于不锈钢色谱柱中，用甲醇-水作流动相，可分离多种异构体。图1（a）示出了硝基苯胺异构体的分离，色谱图中的o，m和p分别代表邻、间和对硝基苯胺。分离条件为色谱柱长100mm，内径5mm，甲醇-水＝40/60（v/v），流速1.0ml/min，柱温为室温，检测波长为254nm。
图1（b）为U.S.P.4539399公布的色谱图，除色谱柱尺寸（4.6×250mm）有区别外，其它色谱条件完全相同。
实施例4.
用实施例1制备的高选择性环糊精固定相，充填于不锈钢色谱柱中，用甲醇/磷酸二氢钠水溶液作流动相，可分离多种丹磺酰化氨基酸对映体。图2示出了丹磺酰化亮氨酸对映体的分离，色谱图中的L为丹磺酰化-L-亮氨酸，D为丹磺酰化-D-亮氨酸。分离条件为色谱柱长300mm，内径3.9mm，甲醇/0.1M磷酸二氢钠＝70/30（v/v），流速0.5ml/min，柱温为室温，检测波长为254nm。
实施例5.
用实施例1制备的高选择性环糊精固定相，充填于不锈钢柱中，用实施例4的分离条件，分离丹磺酰化缬氨酸对映体（图3）。图3中的L为丹磺酰化-L-缬氨酸，D为丹磺酰化-D-缬氨酸。