1-氧代-2-(苯磺酰氨基)戊基哌啶 衍生物，其制备方法及其药用 本发明涉及1-氧代-2-(苯磺酰氨基)戊基哌啶衍生物，其制备方法及其药用。
本发明化合物如下式(I)所示：其中：
R1是氢或(C1-C4)烷基，
R2是氢或直链或支链(C1-C4)烷基，
R3是直链或支链(C1-C7)烷基，-(CH2)nOCH3基团(其中n是1，2或3)或-CH2O(C2H4O)mCH3(其中m是1，2或3)，
R4是氢或卤原子，
R5是直链或支链(C1-C4)烷基，以及
A是任选由一或多个选自卤原子和直链或支链(C1-C4)烷基，直链或支链(C1-C4)烷氧基以及三氟甲基的取代基取代的苯基，或是选自任选按上述取代的吡啶基，噻吩基和呋喃基的杂环，或是(C5-C8)环烷基。
本发明优选化合物中：
R3是直链或支链(C1-C7)烷基，以及
A是选自任选由一或多个选自卤原子和直链或支链(C1-C4)烷基，直链或支链(C1-C4)烷氧基以及三氟甲基的取代基取代的吡啶基，噻吩基和呋喃基的杂环。
本发明化合物具有3个非对称中心。
哌啶基的优选构型为[2R，4R]。
中间氨基酸部分的构型是[S]：
这些化合物可以游离碱或药用酸加成盐的形式存在。
所有这些形式均构成本发明的一部分。
在下列各式中-CPh3是三苯基甲基。
本发明式(I)化合物可按反应式1合成：
反应式1：
在非质子溶剂如二氯甲烷(DCM)中于碱如吡啶存在下将式(II)中A和R4如上述的磺酸与式(III)中R3如上述的酰氯反应后加入过量三乙胺而得到三乙胺盐形式的式(IV)化合物；之后将式(IV)化合物与三氟乙酸酐反应而得到式(V)化合物并在溶剂如DCM中通过五氯化磷作用而用其得到式(VI)化合物；最后在非质子溶剂如DCM中于碱如三乙胺存在下将式(VI)化合物与式(VII)氨的盐酸盐(其中R1是氢或(C1-C4)烷基，R2是直链或支链(C1-C4)烷基以及R5是直链或支链(C1-C4)烷基)反应后使咪唑环脱保护基并在乙酸：乙醇或乙酸：四氟呋(THF)：水混合物中回流除去(enlever)三氟乙酰残基而得到式(I)化合物(其中R2是直链或支链(C1-C4)烷基)。
在希望得到式(I)中R2是氢的化合物的情况下，可在本技术领域已知的常规条件下将相应的式(I)化合物(其中R2是直链或支链(C1-C4)烷基)皂化。
反应式2示出了获得式(Ia)化合物(其中R’3是直链或支链(C1-C7)烷基)的另一方法：
反应式2：该方法中可将式(II)化合物与三乙胺反应而形成三乙胺的盐并将其与式(IIIa)的酰氯或与式(IIIb)的酸酐反应而得到式(Va)的三乙胺盐形式的对称酰亚胺，用五氯化磷处理该盐而得到式(VIa)化合物后在非质子溶剂如DCM中于碱如三乙胺存在下将其与式(VII)胺盐酸盐反应后使咪唑环脱保护基并在乙酸：乙醇，乙酸：水或乙酸：四氢呋喃：水混合物中回流除去-COR’3残基之一而得到式(Ia)化合物(其中R2是直链或支链(C1-C4)烷基)。
在希望得到式(Ia)中R2是氢的化合物地情况下，可在本技术领域已知的常规条件下将相应的式(Ia)化合物(其中R2是直链或支链(C1-C4)烷基)皂化。
也可采用反应式3所示方法：
反应式3：该方法中用三乙胺处理式(IIb)中R4是卤原子的化合物后将所得盐与式(IIIa)中R’3如上述的酰氯反应而得到式(IVb)化合物并在溶剂如DCM中通过五氯化磷的作用而用其得到式(VIb)化合物后在非质子溶剂如DCM中将式(VIb)化合物与式(VII)胺盐酸盐(其中R1是氢或(C1-C4)烷基，R2是直链或支链(C1-C4)烷基以及R5是氢或直链或支链(C1-C4)烷基)反应，之后在非质子溶剂中用氨进行处理而除去-COR’3残基而得到式(VIII)化合物并在溶剂如二甲基甲酰胺(DMF)中于催化剂如四(三苯基膦)(0)存在下将其与式(IX)化合物(其中A如上述以及R是(C1-C4)烷基)反应而形成式(X)化合物后在酸性介质如在乙酸：水混合物中将其加热到回流温度而得到式(Ia)中R4是卤原子的化合物。
如果希望得到式(Ia)中R4是氢的化合物，可将相应的式(Ia)化合物(其中R4是卤原子)进行氢解。
在希望得到式(Ia)中R2是氢的化合物的情况下，可在本技术领域已知的常规条件下将相应的式(Ia)化合物(其中R2是直链或支链(C1-C4)烷基)皂化。
对于式(I)中R3是-(CH2)nOCH3基团(其中n是1，2或3)或-CH2O(C2H4O)mCH3基团(其中m是1，2或3)的化合物，也可按照类似于针对反应式1中式(V)化合物所述方法的方法用式(IIb)化合物而得到混合酰亚胺后继续按反应式3将该混合酰亚胺与式(VII)胺反应。
式(XI)的中间体化合物是新的并且也构成本发明的一部分：
其中：
R8是氢或三氟乙酰基，
R9是-COR3基团(其中R3如上述)，和
R7是羟基，或
R8是三氟乙酰基，
R9是-COR3基团，和
R7是氯原子，或
R8和R9分别是-COR’3基团(其中R’3如上述)，和
R7是氯原子或羟基，
Z是碘原子或任选由一或多个选自卤原子和直链或支链(C1-C4)烷基，直链或支链(C1-C4)烷氧基或三氟甲基的取代基取代的苯基，或是选自任选按上述取代的吡啶基，噻吩基，呋喃基的杂环，或是(C5-C8)环烷基，以及
R4如上述。
起始化合物可从市场上得到或已在文献中作了说明或可按其中所述的方法或本技术领域众所周知的方法得到。
式(II)化合物及其制备方法已在法国专利申请No.FR9414129中作了说明。
式(VII)化合物已在欧洲专利申请No.EP0643047中作了说明。
以下实施例说明一些本发明化合物的制备方法。
微量分析及IR和RMN谱证实了所得化合物的结构。
所举例的化合物的数字与后续表中的数字对应，表中列举了本发明某些化合物的化学结构和物理性质。
实施例1(化合物No.8)
[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-乙基-1-[5-(1H-咪唑-4-基)-2-[[[2-[(3-甲氧基-1-氧代丙基)氨基][1，1’-二苯基]-3-基]磺酰基]氨基]-1-氧代戊基]哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐
1.1.2-[(3-甲氧基-1-氧代丙基)氨基][1，1’-二苯基]-3-磺酸的N，N-二乙基乙胺盐
氮气中0℃下向1.74g(7mmol)2-氨基[1，1’-二苯基]-3-磺酸和1.6ml(19.5mmol)吡啶在7ml二氯甲烷(DCM)中的溶液中滴加入1.3g(10.5mmol)3-甲氧基丙酰氯在3ml DCM中的溶液。反应介质在0℃下搅拌放置2小时后加入三乙胺和过量甲醇，之后减压浓缩。剩余物经硅胶柱色层分离法提纯(用甲醇∶二氯甲烷∶三乙胺(2∶98∶0.001)混合物洗脱)而得到2.3g粘性油状产物(收率＝100％)，可直接将其用于下一步骤。
1.2.2-[(3-甲氧基-1-氧代丙基)(三氟乙酰基)氨基][1，1’-二苯基]-3-磺酸的N，N’-二乙基乙胺盐
回流温度下将2.3g(7mmo1)2-[(3-甲氧基-1-氧代丙基)氨基)[1，1’-二苯基]-3-磺酸的N，N-二乙基乙胺盐和9.8ml(70mmol)三氟乙酸酐的混合物加热3小时后减压浓缩反应介质而得到3.8g粘性油状产物(收率＝100％)，可直接将其用于下一步骤。
1.3.2-[(3-甲氧基-1-氧代丙基)(三氟乙酰基)氨基][1，1’-二苯基]-3-磺酰氯
向3.8g(7mmol)2-[(3-甲氧基-1-氧代丙基)(三氟乙酰基)氨基)[1，1’-二苯基]-3-磺酸的N，N-二乙基乙胺盐在14mlDCM中的溶液中加入1.75g(8.4mmol)五氯化磷后混合物于回流温度下加热3小时，之后减压浓缩。剩余物用硅胶柱色层分离法提纯(用DCM洗脱)而得到1.3g粘性油状产物(收率＝40％)，可直接将其用于下一步骤。
RMN(CDCl3)，200Mhz，δ，(ppm)：8.4-8.2(m，1H)；7.8-7.6(m，2H)；7.5-5.3(m，3H)；7.3-7.2(m，2H)；3.8-3.5(m，2H)；3.3(s，3H)；3.0-2.7(m，2H)
1.4.[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-乙基-1-[5-(1H-咪唑-4-基-2-[[[2-[(3-甲氧基-1-氧代丙基)氨基][1，1’-二苯基]-3-基]磺酰基]氨基]-1-氧代戊基]哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐
氮气中0℃下向1.5g(2.4mmol)[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-氨基-1-氧代-5-[1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐和0.8ml(5.8mmol)三乙胺在15mlDCM中的混合物中滴加入1.3g(2.89mmol)2-[(3-甲氧基-2-丙酰基)(三氟乙酰基)]氨基[1，1’-二苯基]-3-磺酰氯在3mlDCM中的溶液。反应介质在该温度下搅拌6小时后减压浓缩。剩余物用50ml乙酸乙酯提取后依次用50ml 0.5N盐酸水溶液，50ml 5％碳酸氢钠溶液和50ml饱和氯化钠溶液洗涤，并且用硫酸镁干燥。所得剩余物在含有50ml乙酸和50ml乙醇的混合物中90℃下加热2小时后减压浓缩。剩余物经硅胶柱色层分离法提纯(用乙醇∶二氯甲烷(5∶95)混合物洗脱)而得到1.2g碱形式的产物(收率＝75％)。再将1.2g(1.8mmol)该碱溶于36ml在0.1N盐酸中的异丙醇溶液后减压蒸发而得到其盐酸盐。
Pf(熔点)＝74℃
[α]＝+60°(c＝0.2；甲醇)
实施例2(化合物No.15)
[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-乙基-1-[5-(5-甲基-1H-咪唑-4-基-2-[[[3’-甲基-2-[(1-氧代丙基)氨基][1，1’-二苯基]-3-基]磺酰基]氨基]-1-氧代戊基]哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐
2.1.2-[双(1-氧代丙基)氨基]-3’-甲基[1，1’-二苯基]-3-磺酸的N，N’-二乙基乙胺盐
将2.1g(8mmol)2-氨基-3’-甲基[1，1’-二苯基]-3-磺酸溶于10ml二氯甲烷中，加入1.34ml(9.6mmol)三乙胺后蒸发至干。再将所得盐溶于15.5ml丙酸酐中，混合物于100℃下加热8小时后蒸发至干。剩余物经硅胶柱色层分离法提纯(用DCM/乙醇/三乙胺(98∶2∶0.001)混合物洗脱)而得到3.6g粘性油状产物(收率＝95％)，可直接将其用于下一步骤。
2.2.2-[双(1-氧代丙基)氨基]-3’甲基[1，1’-二苯基]-3-磺酰氯
0℃下向3.6g(7.6mmol)2-[双(1-氧代丙基)氨基]-3’-甲基[1，1’-二苯基]-3-磺酸的N，N-二-乙基乙胺盐在8ml DCM中的溶液中加入1.6g(7.6mmol)五氯化磷后让混合物温度回到室温。然后于回流温度下将混合物加热4小时后让温度回到室温。加入乙醚后过滤并将滤液浓缩，剩余物经florisilTM柱提纯(用乙醚/戊烷(1∶1)混合物洗脱)后用乙醚/戊烷混合物重结晶而得到1.7g近白色产物晶体(收率＝58％)。
Pf＝91℃
2.3.[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-[[[2-[双(1-氧代丙基)氨基]-3’甲基[1，1’-二苯基]-3-基]磺酰基]氨基]-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯
在8ml DCM中溶入787mg(2mmol)2-[双(1-氧代丙基)氨基]-3’甲基[1，1’-二苯基]-3-磺酰氯后0℃下加入1.3g(2mmol)[2R-(1(S)，2α，4β]]-1-[2-氨基-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐和0.9ml三乙胺。让混合物温度回到室温，蒸发后剩余物用100ml乙酸乙酯提取。依次用50ml 1N盐酸溶液，50ml饱和碳酸氢钠溶液和50ml饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥后蒸发至干而得到1.6g产物，可直接将其用于下一步骤(收率＝84％)。
2.4.[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-乙基-1-[5-(5-甲基-1H-咪唑-4-基)-2-[[[3’-甲基-2-[(1-氧代丙基)氨基][1，1’-二苯基]-3-基]磺酰基]氨基]-1-氧代戊基]哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐
将1.6g(1.7mmol)[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-[[[2-[双(一氧代丙基)氨基]-3’甲基[1，1’-二苯基]-3-基]磺酰基]氨基]-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯溶于85ml乙酸和17ml水中并于回流温度下加热6小时。蒸发至干后用100ml乙酸乙酯提取并依次用20ml饱和碳酸氢钠溶液和10ml饱和氯化钠溶液洗涤后蒸发至干。剩余物经硅胶柱色层分离法提纯(用DCM/乙醇(95∶5)混合物洗脱)而得到1g碱形式的产物。用0.1N盐酸中的异丙醇溶液得到盐酸盐后再减压浓缩。剩余物再经RP18柱提纯(用乙腈∶水(1∶1)混合物洗脱)。冻干而得到893mg产物(收率＝67％)。
Pf＝140℃
[α]＝+115°(c＝0.2；甲醇)
实施例3(化合物No.3)
[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-乙基-1-[5-(5-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-氧代-2-[[[2-[(1-氧代丙基)氨基][1，1’-二苯基]-3-基]磺酰基]氨基]戊基]哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐
3.1.2-[双(1-氧代丙基)氨基][1，1’-二苯基]-3-磺酰氯
按实施例2所述方法用2-氨基-[1，1’-二苯基]-3-磺酸和丙酸酐得到产物。
Pf＝113.8℃
3.2.[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-[[[2-[双(1-氧代丙基)氨基][1，1’-二苯基]-3-基]磺酰基]氨基]-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯
将1.88g(4.85mmol)2-[双(1-氧代丙基)氨基][1，1’-二苯基]-3-磺酰氯溶于20mlDCM中并将混合物置于0℃下。加入2.99g(4.5mmol)[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-氨基-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐并滴加入1.6ml三乙胺。在该温度下搅拌过夜后减压浓缩，剩余物用100ml乙酸乙酯提取后依次用50ml 1N盐酸溶液，50ml饱和碳酸氢钠溶液和50ml饱和氯化钠溶液洗涤。用硫酸镁干燥后减压浓缩。剩余物经硅胶柱色层分离法提纯(用DCM/甲醇(98∶2)混合物洗脱)而得到2.9g产物(收率＝62％)。
3.3[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-乙基-1-[5-(5-甲基-1H-咪唑-4-基-1-氧代-2-[[[2-[(1-氧代丙基)氨基][1，1’-二苯基]-3-基]磺酰基]氨基]戊基]哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐
向2.9g(3mmol)[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-[[[2-[双(1-氧代丙基)氨基][1，1’-二苯基]-3-基]磺酰基]氨基]-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯中加入150ml乙酸和50ml水并于回流温度下将混合物加热6.5小时。蒸发至干后剩余物经硅胶柱色层分离法提纯(用DCM/甲醇(95∶5)混合物洗脱)而得到1.7g碱形式的产物。用10ml在0.1N盐酸的异丙醇溶液得到盐酸盐后再减压浓缩。剩余物经RP18柱提纯(用乙腈∶水(1∶1)混合物洗脱)而得到1.3g盐酸盐形式的产物(收率＝63％)。
Pf＝104-105℃
[α]＝+105°(c＝0.2；甲醇)
实施例4(化合物No.29)
[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-乙基-1-[5-(5-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-氧代-2-[[[2-[(1-氧代丙基)氨基]-3-吡啶-2-基苯基]磺酰基]氨基]戊基]哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐
4.1.2-[双(1-氧代丙基)氨基]-5-溴-3-碘苯磺酸的N，N’-二乙基乙胺盐
回流温度下将31.7g(66mmol)2-氨基-5-溴-3-碘苯磺酸的N，N-二乙基乙胺盐在114ml(1.32mol)丙酰氯中的溶液加热16小时后将反应介质减压浓缩并用100ml乙酸乙酯将产物结晶出来而得到32.5g白色产物晶体(收率＝84％)。
Pf＝124-128℃
4.2.2-[双(1-氧代丙基)氨基]-5-溴-3-碘苯磺酰氯
氮气中0℃下向32.5g(55mmol)2-[双(1-氧代丙基)氨基]-5-溴-3-碘苯磺酸的N，N-二乙基乙胺盐在DCM中的溶液中分批加入16.8g(82.4mmo1)五氯化磷。让温度回到室温后回流温度下将混合物加热4小时。再倒入200ml乙醚，过滤后将滤液浓缩。剩余物经florisilTM柱色层分离法提纯(用乙醚/己烷(2∶8)混合物洗脱)后再用乙醚/戊烷混合物重结晶而得到12g白色产物晶体(收率＝43％)。
Pf＝127-132℃
4.3.[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-[[[5-溴-3-碘-2-[(1-氧代丙基)氨基]苯基]磺酰基]氨基]-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯
氮气中0℃下向1.28g(2mmol)[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-氨基-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐在DCM中的溶液中依次加入1.02g(2mmol)-[双(1-氧代丙基)氨基]-5-溴-3-碘苯磺酰氯后滴加0.69μl(5mmol)三乙胺。0℃下使反应介质保持搅拌6小时后用100ml乙酸乙酯提取。然后依次2次用50ml 0.5N盐酸，50ml饱和碳酸氢钠溶液和50ml饱和氯化钠溶液洗涤。最后用硫酸镁干燥并减压浓缩。得到2.1g粘性油状产物，用100ml四氢呋喃(THF)提取后0℃下用氨气处理。该温度下使反应介质保持搅拌2小时后减压浓缩。剩余物经硅胶柱色层分离法提纯(用DCM/甲醇(98∶2)混合物洗脱)而得到1.4g粘性油状产物(收率＝70％)，可直接将其用于下一步骤。
4.4.[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-[[[5-溴-2-[(1-氧代丙基)氨基]-3-吡啶-2-基苯基]磺酰基]氨基]-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯
氩气中95℃下将2.4ml二甲基甲酰胺(DMF)中含1.2g(1.2mmol)[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-[[[5-溴-3-碘-2-[(1-氧代丙基)氨基]苯基]磺酰基]氧基]-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯，0.53g(1.44mmol)2-(三丁基甲锡烷基)吡啶，14mg(0.07mmol)碘化铜和83mg(0.07mmol)四(三苯基膦)钯(0)的混合物加热4小时。然后用100ml乙酸乙酯提取反应介质，2次用100ml5％碳酸氢钠溶液洗涤之后用50ml饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥后减压浓缩。剩余物经硅胶柱色层分离法提纯(用DCM/甲醇(98∶2)混合物洗脱)而得到0.72g产物(收率＝63％)，可直接将其用于下一步骤。
Pf＝90-94℃
4.5.[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-[[[5-溴-2-[(1-氧代丙基)氨基]-3-吡啶-2-基苯基]磺酰基]氨基]-5-[5-甲基-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯
在含有35ml乙酸和10ml水的混合物中100℃下将0.71g(0.75mmol)[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-[[[5-溴-2-[(1-氧代丙基)氨基]-3-吡啶-2-基苯基]磺酰基]氨基]-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯加热1小时。反应介质减压浓缩后剩余物经硅胶柱色层分离法提纯(用甲醇/DCM(5∶95)混合物洗脱)而分离出0.452g粘性油状产物(收率＝83％)，可直接将其用于下一步骤。
4.6.[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-乙基-1-[5-(5-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-氧代-2-[[[2-[(1-氧代丙基)氨基]-3-吡啶-2-基苯基]磺酰基]氨基]戊基]哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐
回流温度下将0.45g(0.6lmmol)[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-[[[5-溴-2-[(1-氧代丙基)氨基]-3-吡啶-2-基苯基]磺酰基]氨基]-5-[5-甲基-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯，0.39g(6mmol)甲酸铵和50mg 10％钯/炭在8ml甲醇和0.2ml乙酸中的混合物加热4小时。然后将反应介质减压浓缩，剩余物经硅胶柱色层分离法提纯(用DCM/甲醇(95∶5)混合物洗脱)而得到0.36g粘性油状产物(收率＝81％)，并按实施例3所述方法得到盐酸盐。
Pf＝78-84℃
[α]＝+91°(c＝0.2；甲醇)
实施例5(化合物No.25)
[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-乙基-1-[5-(5-甲基-1H-咪唑-4-基)-2-[[[3’，5’-二甲基-2-((1-氧代丁基)氨基][1，1’，-二苯基]-3-基]磺酰基]氨基]-1-氧代戊基]哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐
5.1.2-[(3’，5’-二甲基)-2-(1-氧代丁基)氨基][1，1’-二苯基]-3-磺酸的N，N-二乙基乙胺盐
在9.3ml(50mmol)丁酸酐中80℃下将2g(7.2mmol)2-氨基-3’，5’-二甲基[1，1’-二苯基]-3-磺酸加热2小时。让介质温度回到室温并减压浓缩。剩余物经RP18柱色层分离法提纯(用乙腈/水(2∶8)混合物洗脱)而得到1.5g白色产物固体(收率＝60％)，再按实施例2所述方法得到三乙胺盐，可直接将其用于下一步骤。
5.2.2-[(3’，5’-二甲基)-2-[(1-氧代丁基)(三氟乙酰基)氨基][1，1’-二苯基]-3-磺酸的N，N-二乙基乙胺盐
回流温度下将1.48g(3.3mmol)2-[(3’，5’-二甲基)-2-(1-氧代丁基)氨基][1，1’-二苯基]-3-磺酸的N，N-二乙基乙胺盐和4.7ml(33mmol)三氟乙酸酐的混合物加热1小时后将反应介质减压浓缩而得到1.8g粘性油状产物(收率＝100％)，可直接将其用于下一步骤。
5.3.2-[(3’，5’-二甲基)-2-[(1-氧代丁基)(三氟乙酰基)氨基][1，1’-二苯基]-3-磺酰氯
氮气中室温下向1.8g(3.3mmol)2-[(3’，5’-二甲基)-2-[(1-氧代丁基)(三氟乙酰基)氨基][1，1’-二苯基]-3-磺酸的N，N-二乙基乙胺盐在10mlDCM中的溶液中加入1.37g(6.6mmol)五氯化磷，混合物于回流温度下加热4小时后让反应介质温度回到室温，再倒入100ml乙醚，过滤后减压浓缩。这样得到的剩余物经florisilTM柱色层分离法提纯(用DCM洗脱)而得到0.78g粘性油状产物(收率＝51％)，可直接将其用于下一步骤。
RMN(CDCl3)，200Mhz，δ(ppm)：8.3(dd，1H，J＝6.5Hz，J＝0.7Hz)；7.85-7.7(m，2H)；7.15-7.00(m，1H)；6.8(s，2H)；2.5-2.3(m，7H)；1.75-1.5(m，3H)；0.9(t，3H，6Hz)
5.4.[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-乙基-1-[5-(5-甲基-1H-咪唑-4-基)-2-[[[3’，5’-二甲基-2-[(1-氧代丁基)氨基][1，1’-二苯基]-3-基]磺酰基]磺基]-1-氧代戊基]哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐
氮气中0℃下向0.554g(1.2mmol)2-[(3’，5’-二甲基)-2-[(1-氧代丁基)(三氟乙酰基)氨基][1，1’-二苯基]-3-磺酰氯在5mlDCM中的溶液中加入0.815g(1.2mmol)[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-氨基-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐并滴加入0.56ml(4mmol)三乙胺。让反应介质在该温度下搅拌保持6小时后减压浓缩。剩余物用100ml乙酸乙酯提取后依次用50ml 0.5N盐酸水溶液，50ml 5％碳酸氢钠水溶液和50ml饱和氯化钠溶液洗涤后用硫酸镁干燥。有机相再进行减压浓缩而得到1g产物，可直接将其用于下一步骤。
在回流温度下剩余物在含有12ml乙酸，6ml四氢呋喃(THF)和6ml水的混合物中加热2小时后反应介质减压浓缩。剩余物经硅胶柱色层分离法提纯(用甲醇/水(5∶95)混合物洗脱)而得到0.475g粘性油状碱产物(收率＝56％)，再将0.475g该碱溶于14ml在0.1N盐酸中的异丙醇溶液而得到盐酸盐。
Pf＝135℃
[α]＝+118°(c＝0.2；甲醇)
实施例6(化合物No.34)
[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-乙基-1-[5-(5-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-氧代-2-[[[2-[(1-氧代丙基)氨基]-3-噻吩-2-基苯基]磺酰基]氨基]戊基]哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐
6.1.2-[双(1-氧代丙基)氨基]-噻吩-2-基苯磺酸的N，N-二乙基乙胺盐
将1.9g(7.8mmol)2-氨基-3-噻吩-2-基苯磺酸溶于10mlDCM中，再加入1.3ml(9.4mmol)三乙胺并蒸发至干。所得盐再溶于15ml丙酸酐中，混合物于150℃下加热8小时后蒸发至干。剩余物经硅胶柱色层分离法提纯(用DCM/乙醇/三乙胺(98∶2∶0.001)混合物洗脱)后经乙酸乙酯重结晶而得到2.76g产物(收率＝79％)。
6.2.2-[双(1-氧代丙基)氨基]-3-噻吩-2-基苯磺酰氯
0℃下向2.8g(6.1mmol)2-[双(1-氧代丙基)氨基]-3-噻吩-2-基苯磺酸的N，N-二乙基乙胺盐在6mlDCM中的溶液中加入1.3g(6.1mmol)五氯化磷，然后让混合物温度回到室温。混合物于回流温度下加热5小时后让温度再回到室温。加入乙醚，过滤后用乙醚/戊烷(1∶1)混合物使剩余物沉淀出来。过滤后将滤液减压浓缩后剩余物经florisiTM柱色层分离法提纯而得到2.2g产物，该产物再用乙醚/戊烷混合物结晶而得到1.5g白色产物晶体(收率＝55％)。
Pf＝113.6℃
6.3.[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-[[[2-[(1-氧代丙基)氨基]-3-噻吩-2-基苯基]磺酰基]氨基]-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯
将0.9g(2mmol)2-[双(1-氧代丙基)氨基]-3-噻吩-2-基苯磺酰氯溶于8ml DCM中并将混合物置于0℃下。再加入1.3g(2mmol)[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-氨基-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐并滴加入0.9ml三乙胺。在该温度下搅拌过夜后减压浓缩，剩余物用100ml乙酸乙酯提取后依次用50ml 1N盐酸溶液，50ml饱和碳酸氢钠溶液和50ml饱和氯化钠溶液洗涤。用硫酸镁干燥后减压浓缩。剩余物经硅胶柱色层分离法提纯(用DCM/甲醇(98∶2)混合物洗脱)而得到2g产物，可直接将其用于下一步骤。
6.4.[2R-[1(S)，2α，4β]]-4-乙基-1-[5-[5-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-氧代-2-[[[2-[(1-氧代丙基)氨基]-3-噻吩-2-基苯基]磺酰基]氨基]戊基]哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐
向1.9g(2mmol)[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-[[[2-[双(1-氧代丙基)氨基]-3-噻吩-2-基苯基]磺酰基]氨基]-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯中加入100ml乙酸和20ml水后在回流温度下将混合物加热6小时。蒸发至干后剩余物用100ml乙酸乙酯提取，用10ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤后用10ml饱和氯化钠溶液洗涤，再用硫酸镁干燥后蒸发至干。剩余物经硅胶柱色层分离法提纯(用DCM/甲醇梯度洗脱)而得到1.1g碱产物。用10ml在0.1N盐酸中的异丙醇溶液得到盐酸盐后再减压浓缩。剩余物经RP18柱提纯(用乙腈/水(1∶1)混合物洗脱)后冻干而得到0.939g盐酸盐产物(收率＝67％)。
Pf＝151℃
[α]＝+107°(c＝0.2；甲醇)
实施例7(化合物No.42)
[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-[[[2-(乙酰氨基)-3-环戊基苯基]磺酰基]氨基]-5-(5-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐
7.1.2-(二乙酰基氨基)-3-环戊基苯磺酸的N，N--二乙基乙胺盐
回流温度下将3.42g(10mmol)2-氨基-3-环戊基苯磺酸的N，N-二乙基乙胺盐在100ml乙酰氯中的溶液加热48小时后将反应介质减压浓缩而得到4.3g油状产物(收率＝100％)，可直接将其用于下一步骤。
7.2.2-(二乙酰基氨基)-3-环戊基苯磺酰氯
回流温度下将1.55g(3.6mmol)2-(二乙酰基氨基)-3-环戊基苯磺酸和1.12g(5.4mmol)五氯化磷在10ml DCM中的溶液加热2.5小时，然后将反应介质减压浓缩。所得剩余物经florisilTM柱色层分离法提纯(用DCM洗脱)而得到0.62g粘性油状产物(收率＝50％)，可直接将其用于下一步骤。
7.3.[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-[[[2-(二乙酰基氨基)-3-环戊基苯基]磺酰基]氨基]-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯
氮气氛中0℃下向0.77g(1.2mmol)[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-氨基-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐和0.37ml(2.64mmol)三乙胺在5mlDCM中的混合物中滴加入0.35g(1mmol)2-(二乙酰基氨基)-3-环戊基苯磺酰氯在1mlDCM中的溶液。反应介质在该温度下搅拌6小时后减压浓缩。剩余物用50ml乙酸乙酯提取后依次用50ml 0.55N盐酸水溶液，50ml饱和碳酸氢钠溶液和50ml饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥后有机相减压浓缩。可直接将剩余物用于下一步骤。
7.4.[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-[[[2-(乙酰氨基)-3-环戊基苯基]磺酰基]氨基]-5-(5-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯的盐酸盐
回流温度下将[2R-[1(S)，2α，4β]]-1-[2-[[[2-(二乙酰基氨基)-3-环戊基苯基]磺酰基]氨基]-5-[5-甲基-1-(三苯基甲基)-1H-咪唑-4-基]-1-氧代戊基]-4-乙基哌啶-2-羧酸乙酯在含有8ml乙酸，4ml THF和4ml水的混合物中加热48小时后将反应介质减压浓缩。剩余物用18ml在0.1N盐酸中的异丙醇溶液提取后再减压浓缩。剩余物经RP18柱色层分离法提纯(用乙腈/水(6∶4)混合物洗脱)而得到0.31g盐酸盐产物(收率＝50％)。
Pf＝140℃
[α]＝+74.5°(c＝0.2；甲醇)
下表中的术语：
“Sel”表示“盐”，
“chlor.”表示“盐酸盐”，
“Sel”栏中未标明表示产物呈碱形式，
“[α]”栏中如无相反说明则c＝0.2；溶剂＝甲醇，
“F”表示熔点。
表
已用本发明化合物进行药物研究，结果表明这类化合物具有抗血栓或抗凝血性并且可用作为具有活疗活性的药物。
1确定对凝血酶的抑制常数(Ki)
在96孔或井(puit)微孔板的每一孔中放入25μl试验化合物溶液(研究7种浓度)，50μl将产生颜色的物质(研究2种浓度；S2238ChromogénixTM)溶于pH7.5的Tris缓冲液(50mM Tris，100mM NaCl和0.1％BSA)的溶液以及最后的25μl浓度为300U/ml的凝血酶溶液。用孔板读数仪监测405nm下4-硝基苯胺的释放过程。
Ki值按Dixon方法测定。
本发明化合物为凝血酶抑制剂，其Ki值为0.001至100μM之间。
2.用人凝血酶体使鼠血浆凝固
经i.v.，口服或皮下途经用试验化合物或载体处理重150-200g的雄性CD鼠。然后用NembutalTM(60mg/kg；0.1ml/kg)麻醉这些动物，再用3.8％柠檬酸三钠(1vol/9vol血液)从后眶窦取血样并在室温下经3600g离心作用15分钟而制成血浆。然后在37℃将200μl血浆与200μl人凝血酶溶液一起培育，其中最终人凝血酶浓度达到0.75NIH单位/ml，且注意凝血时间。抗凝血效果表示为使凝血时间延长100％的剂量。本发明化合物在0.01-5mg/kg i.v.剂量下可抑制鼠血浆凝结或凝固。这些化合物经口服和皮下途经应用时亦显示出活性。
3.人凝血酶诱发的兔血小板聚集或凝集
通过心脏穿刺术用3.8％柠檬酸三钠(1vol/9vol血液)抽取血样，并将其经250g离心作用10分钟。再抽取这样得到的富含血小板(P3P)的血浆并且将血小板计数。
将溶于冰冷的pH9.0 Tris缓冲液的2ng/ml的前列环素加入P3P之中。混合物经110g离心作用10分钟后倾析。再次加入溶于pH12的50mM氢氧化钠中的前列环素，以达到200ng/ml的最终浓度。之后再让P3P经800g离心作用10分钟。取出贫血小板的血浆并将沉淀物悬浮在含有200ng/ml的前列环素并且其体积等于最初P3P体积的tyrode之中。该悬浮液经800g离心作用10分钟。在相同的条件下重复进行沉淀物的悬浮和离心作用。将最终的沉淀物悬浮在不含前列环素的tyrode溶液之中并将其放置2小时以使前列环素完全去除。用最终浓度为0.3NIH单位/ml的人凝血酶诱发这些血小板聚集。再应用4通道集料称量计记录光密度的变化。将试验化合物或其载体加入血小板悬浮液中(所加最大体积为3μl)，2分钟后加入凝血酶。最后测定50％抑制聚集的浓度(IC50)。
本发明化合物可用于所有与血栓形成有关的临床病症或可能涉及到凝血或血栓形成并发症的病症。
在这方面，本发明化合物可与适当赋形剂一起制成所有适宜于口服，胃肠外或静脲内给药的剂型如片，糖衣丸，明胶胶囊，胶囊剂，可饮用或可注射的悬浮液或溶液等。所有这些剂型均配制成1-1000mg/天/病人的给药量，该剂量可一次或分多次服用。