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1、10申请公布号CN104082353A43申请公布日20141008CN104082353A21申请号201410316077X22申请日20140704A01N65/34200901A01P1/00200601A01P3/0020060171申请人李钟地址511436广东省广州市番禺新造镇谷围新村瑞丰园3街66号72发明人李钟韩彬谭文影何庭华张建湘74专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102代理人陈卫54发明名称一种纯中药消毒剂及其制备方法57摘要本发明公开了一种纯中药消毒剂及其制备方法。所述消毒剂以五倍子、山楂、柳叶为最基本原料药,另外还可以添加苍术、连翘、白芷、贯众、金银花、牡。
2、丹皮、丹皮酚、芒硝、野菊花或桂枝中的一种或多种作为原料药。在制备方法上,根据每味中药的不同特性,分别以煎煮提取、乙醇提取、冷浸提取得到各提取液,提取液浓缩后,再混合得到液体制剂或固体制剂。本发明所述消毒剂具有清热解毒、化湿祛浊的功效,可用于抗菌、抗病毒,经现代药理学实验证明,该消毒剂安全、无毒,可用于空气消毒,尤其在抑菌以及清洁湿润空气方面具有独到的功效,且使用时人、畜均无需离开消毒空间。51INTCL权利要求书1页说明书14页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书14页附图1页10申请公布号CN104082353ACN104082353A1/1页21一种。
3、纯中药消毒剂,其特征在于,由以下重量份数的原料药制成的药剂,10100份五倍子、10150份山楂、15100份柳叶。2根据权利要求1所述纯中药消毒剂,其特征在于,所述原料药还含有苍术、连翘、白芷、贯众、金银花、牡丹皮、丹皮酚、芒硝、野菊花或桂枝中的一种或多种。3根据权利要求1或2所述纯中药消毒剂,其特征在于,由以下重量份数的原料药制成的药剂,10100份五倍子、10150份山楂、15100份柳叶、1050份牡丹皮。4根据权利要求1或2所述纯中药消毒剂,其特征在于,由以下重量份数的原料药制成的药剂,10100份五倍子、10150份山楂、15100份柳叶、1050份牡丹皮、120份桂枝。5根据权利。
4、要求1或2所述纯中药消毒剂,其特征在于,由以下重量份数的原料药制成的药剂,10100份五倍子、10150份山楂、15100份柳叶、1050份牡丹皮、120份桂枝、1050份贯众。6根据权利要求1或2所述纯中药消毒剂,其特征在于,由以下重量份数的原料药制成的药剂,10100份五倍子、30100份苍术、30120份连翘、10150份山楂、10150份白芷、15100份柳叶、1050份贯众、1050份金银花、1050份牡丹皮、0120份丹皮酚、130份芒硝、1050份野菊花、120份桂枝。7根据权利要求1至6任一项所述纯中药消毒剂,其特征在于,所述的药剂为液体制剂或固体制剂。8权利要求7所述纯中药消。
5、毒剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤S1取柳叶、贯众、金银花、牡丹皮、桂枝、野菊花采用合煎进行提取,收集水提液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S2取五倍子、连翘采用乙醇提取,过滤,收集滤液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S3取山楂、白芷、苍术采用乙醇冷浸,过滤,收集滤液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S4取S1、S2、S3所述的浓缩液体与丹皮酚、芒硝混合,过滤,加入辅料,制备成液体制剂或固体制剂。9权利要求7所述纯中药消毒剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤S1取柳叶、贯众、金银花、牡丹皮、野菊花以及桂枝粉碎成超微粉;S2取五倍子、连翘采用。
6、乙醇提取,过滤,收集滤液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S3取山楂、白芷、苍术采用乙醇冷浸,过滤,收集滤液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S4取S1中的超微粉和丹皮酚、芒硝一起加入S2以及S3中的液体混合,加入辅料,过筛、干燥制成颗粒制剂。10权利要求1至6任一项所述纯中药消毒剂在空气消毒中的应用。权利要求书CN104082353A1/14页3一种纯中药消毒剂及其制备方法技术领域0001本发明涉及中药技术领域,具体公开了一种纯中药消毒剂及其制备方法。背景技术0002空气中的病原体,如金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、流感病毒等,是呼吸道、皮肤等感染的重要源头,也是引。
7、起医院内交叉感染的常见原因,而且病原菌耐药性问题的出现更对临床治疗微生物感染等疾病带来了很大的挑战。0003表皮葡萄球菌属于条件致病菌,它是医院引起交叉感染的最重要病原菌之一,占革兰氏阳性菌感染的第一位,特别是由耐甲氧西林表皮葡萄球菌引起的术后感染趋势更为明显。该病菌进入人体后,在感染部位形成生物被膜,尤其容易在生物材料上粘附,如置导管、植入材料。感染该致病菌后,机体会出现一系列恶性反应,如免疫力下降、反复的慢性感染甚至引起败血症,最终不得不将植入材料通过手术移除,对患者造成极大的精神痛苦和对社会造成巨大的经济损失。0004流感病毒是引起急性呼吸道感染的重要原发病原之一,常常与其他病原体混合造。
8、成更严重的感染。在临床上流感引起的并发症有咳嗽、发热、流涕、咽喉肿痛,严重还会引起腹泻、呕吐等类似胃肠道疾病。每年季节性的流感疾病的爆发严重影响了人们的日常生活和社会的安定。0005目前多采用化学试剂以及紫外线照射进行空气消毒。化学消毒剂与抗生素均属于特殊抑杀病原菌的物质,它们抑杀微生物的机理大致相同。因此,在微生物对抗生素产生耐药性的同时,它们也有可能对化学消毒剂产生抗性,在同等条件下就需要使用更大浓度更大剂量的消毒剂。众所周知,化学消毒剂具有高刺激性、腐蚀性、漂白性和毒性等缺点,会引起粘膜、器官的损伤,严重的情况下还会致癌。紫外线照射在一定程度上可以破坏病原体的DNA结构使其失去生存以及繁。
9、殖的机会,但是在照射的同时需要病人离开病室,否则会引起机体皮肤出现红疹、眼视力下降以及粘膜损伤。另一方面,紫外线的强弱还受紫外灯的强弱、室内温度、湿度等诸多因素的影响,产生的臭氧对人体也有一定的危害,对于不便离开病床的病人造成一定的困扰。0006现在国内消毒产品琳琅满目,消毒剂市场竞争激烈。众多消毒产品中以化学产品为主导,含氯产品以及含碘产品居销量的前两位。随着化学消毒剂弊端的不断涌现,国民对健康的高层次追求催生了许多纯天然植物空气消毒剂,但现阶段的植物消毒剂多以醇或其它低毒有机溶剂为溶媒,对人体呼吸道还有一定的影响。另一方面这类消毒剂多以喷雾方式进行消毒,消毒过程中带色的中药消毒剂或植物消毒。
10、剂会对室内家具、墙壁进行沉淀染色。发明内容0007为了克服现有技术中消毒剂存在的上述不足,本发明提供一种纯中药消毒剂。所述纯中药消毒剂考虑了中药之间的协同性,在中医药理论指导下,科学组方,既可杀菌抑说明书CN104082353A2/14页4菌、抗病毒、防流感,还能起到增强人体免疫力的功效。0008本发明的另一目的在于提供所述纯中药消毒剂的制备方法。0009本发明的上述目的通过以下技术方案予以实现一种纯中药消毒剂,由以下重量份数的原料药制成的药剂,10100份五倍子、10150份山楂、15100份柳叶。0010优选地,所述原料药还含有苍术、连翘、白芷、贯众、金银花、牡丹皮、丹皮酚、芒硝、野菊花或。
11、桂枝中的一种或多种。0011作为优选实施方式,所述消毒剂是由以下重量份数的原料药制成的药剂,10100份五倍子、10150份山楂、15100份柳叶、1050份牡丹皮。0012作为优选实施方式,所述消毒剂是由以下重量份数的原料药制成的药剂,10100份五倍子、10150份山楂、15100份柳叶、1050份牡丹皮、120份桂枝。0013作为优选实施方式,所述消毒剂是由以下重量份数的原料药制成的药剂,10100份五倍子、10150份山楂、15100份柳叶、1050份牡丹皮、120份桂枝、1050份贯众。0014作为优选实施方式,所述消毒剂是由以下重量份数的原料药制成的药剂,10100份五倍子、301。
12、00份苍术、30120份连翘、10150份山楂、10150份白芷、15100份柳叶、1050份贯众、1050份金银花、1050份牡丹皮、0120份丹皮酚、130份芒硝、1050份野菊花、120份桂枝。0015更优选地,所述消毒剂是由以下重量份数的原料药制成的药剂,五倍子60份、苍术70份、连翘80份、山楂60份、白芷60份、柳叶40份、贯众30份、金银花40份、牡丹皮20份、丹皮酚3份、野菊花40份、芒硝3份、桂枝20份。0016所述纯中药消毒剂是以五倍子、苍术、连翘、山楂、白芷、柳叶、贯众、金银花、牡丹皮、丹皮酚、芒硝、野菊花、桂枝的提取物为活性成分,加入药学上可接受的辅料制成的药学常用的制。
13、剂。优选地,如上所述空气消毒剂的药剂为液体制剂或固体制剂。0017本发明所述的纯中药消毒剂可以用于各种消毒领域,优选用于空气消毒方面。本发明所述消毒剂由纯中药构成,其内蕴藏着丰富的抑菌杀菌成分,它对细菌耐药具有一定的逆转作用并可以减轻细菌的选择压力,不易产生耐药性。同时,本发明所述消毒剂安全无毒、在消毒时产生的气味还可以提神醒脑,人、畜均无需离开消毒空间,极其适合医院的空气消毒以及密闭的公共场所、家庭及其养殖场的空气消毒。0018优选地,所述纯中药消毒剂的制备方法,包括如下步骤S1取柳叶、贯众、金银花、牡丹皮、桂枝、野菊花采用合煎进行提取,收集水提液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备。
14、用;S2取五倍子、连翘采用乙醇提取,过滤,收集滤液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S3取山楂、白芷、苍术采用乙醇冷浸,过滤,收集滤液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S4取S1、S2、S3所述的浓缩液体与丹皮酚、芒硝混合,过滤,加入辅料,制备成液体制剂或固体制剂。0019作为一种优选方案,步骤S1中,所述合煎方法可选为将柳叶切段,贯众、金银花、说明书CN104082353A3/14页5牡丹皮、野菊花以及桂枝粉碎成粗粉,加入812倍量水,浸泡052H,提取2次,每次提取时间153H。0020作为一种优选方案,步骤S2中,所述采用乙醇提取可选为将五倍子、连翘粉碎成粗粉。
15、,加入812倍量5095乙醇水溶液,提取两次,每次提取时间为153H。0021作为一种优选方案,步骤S3中,所述冷浸法可选为将山楂、白芷以及苍术粉碎成粗粉,置于密闭容器,加入812倍量5095乙醇水溶液,浸提7天,期间更换新鲜溶剂23次。0022作为一种优选方案,步骤S4中,可选为将水提浓缩液、醇提浓缩液、浸提浓缩液混合,过滤,最终液体制剂加入少量柠檬香精调节香型。0023优选地,所述纯中药消毒剂的制备方法,包括如下步骤S1取柳叶、贯众、金银花、牡丹皮、野菊花以及桂枝粉碎成超微粉;S2取五倍子、连翘采用乙醇提取,过滤,收集滤液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S3取山楂、白芷、苍。
16、术采用乙醇冷浸,过滤,收集滤液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S4取S1中的超微粉和丹皮酚、芒硝一起加入S2以及S3中的液体混合,加入辅料,过筛、干燥制成颗粒制剂。0024其实无论采用什么样的提取方法,只要是获取本发明所述各原料药提取物的常规提取方法,按道理都落入本发明的保护范围。0025本发明所述纯中药消毒剂是采用熏蒸方法消毒,微量的水蒸气会带出大量中药有效成分,它们在空气中与细菌交互,从而起到抑菌杀菌的作用,带出的水蒸气也会湿润空气、沉淀尘埃。0026与现有技术相比,本发明具有以下有益效果本发明所述纯中药消毒剂通过优选方药,具有抗菌、抗病毒的功效,经过现代药理学研究证明,可。
17、应用于空气消毒,对杀灭表皮葡萄球菌等致病菌有着优良的效用。本发明所述纯中药消毒剂的成分以清热解毒、化湿祛浊功效为主,其杀菌机制多为破坏细菌正常形态,抑制其细胞内大分子物质的活动,引起细菌细胞生理代谢困难,从而影响细菌的生存和繁殖。0027本发明利用上述各味中药经过现代工艺研究,开发成一种新的纯中药消毒剂,有利于中药的商业化以及国际化,该制剂纯天然,无毒,安全有效,不易产生耐药性,还克服了现代空气消毒时人群必须离开消毒环境的弊端。该制剂可以长期使用,有利于预防流感病毒,而且运输储藏方便,为现代空气消毒提供一种新的制剂。附图说明0028图1急性眼刺激试验结果。具体实施方式0029下面结合说明书附图。
18、和具体实施例对本发明作进一步的解释说明,但具体实施例并不对本发明作任何限定。除非特别说明,实施例中所涉及的试剂、方法均为本领域常用的试剂和方法。说明书CN104082353A4/14页60030实施例1本实施例采用的原料药为五倍子60克、山楂100克、柳叶80克。0031制备方法为S1取柳叶采用合煎进行提取,加入10倍量的蒸馏水提取2小时,过滤,压榨药渣,收集水提液。药渣再加入8倍量的蒸馏水提取15个小时。减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用。0032S2取五倍子采用乙醇合提,加入10倍量的75乙醇提取2小时,过滤,压榨药渣,分别收集醇提液。药渣再加入8倍量的75乙醇提取15个小时。,。
19、减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用。0033S3取山楂采用乙醇冷浸,加入10倍量的75乙醇,冷浸至第三天,过滤,收集滤液,再加入8倍量的75乙醇,冷浸至第7天,过滤,合并滤液。减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用。0034S4取S1、S2、S3所述的各单味药的浓缩液体进行混合,过滤,加入辅料,制备成液体制剂。0035实施例2本实施例采用的原料药为五倍子30克、山楂150克、柳叶40克。0036制备方法同实施例1。0037实施例3本实施例采用的原料药为五倍子100克、山楂50克、柳叶90克。0038制备方法同实施例1。0039实施例4本实施例采用的原料药为五倍子70克、山楂50。
20、克、柳叶60克、牡丹皮20克。0040制备方法为S1取柳叶、牡丹皮采用合煎进行提取,收集水提液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S2取五倍子采用乙醇提取,过滤,收集滤液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S3取山楂采用乙醇冷浸,过滤,收集滤液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S4取S1、S2、S3所述的浓缩液体混合,过滤,加入辅料,制备成液体制剂或固体制剂。0041实施例5本实施例采用的原料药为五倍子40克、山楂100克、柳叶40克、牡丹皮40克。0042制备方法同实施例4。0043实施例6本实施例采用的原料药为五倍子100克、山楂30克、柳叶100克、。
21、牡丹皮10克。0044制备方法同实施例4。0045实施例7本实施例采用的原料药为五倍子90克、山楂30克、柳叶50克、牡丹皮15克、桂枝5克。说明书CN104082353A5/14页70046制备方法为S1取柳叶、牡丹皮、桂枝采用合煎进行提取,收集水提液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S2取五倍子采用乙醇提取,过滤,收集滤液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S3取山楂采用乙醇冷浸,过滤,收集滤液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S4取S1、S2、S3所述的浓缩液体混合,过滤,加入辅料,制备成液体制剂或固体制剂。0047实施例8本实施例采用的原料药为五。
22、倍子40克、山楂120克、柳叶70克、牡丹皮45克、桂枝20克,制备方法同实施例7。0048实施例9本实施例采用的原料药为五倍子40克、山楂60克、柳叶90克、牡丹皮20克、桂枝20克、贯众50克。0049制备方法为S1取柳叶、贯众、牡丹皮、桂枝采用合煎进行提取,收集水提液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S2取五倍子采用乙醇提取,过滤,收集滤液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S3取山楂采用乙醇冷浸,过滤,收集滤液,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S4取S1、S2、S3所述的浓缩液体混合,过滤,加入辅料,制备成液体制剂或固体制剂。0050实施例10本。
23、实施例采用的原料药为五倍子90克、山楂100克、柳叶40克、牡丹皮10克、桂枝2克、贯众20克。0051制备方法同实施例9。0052实施例11本实施例采用的原料药为五倍子30克、山楂30克、柳叶50克、桂枝20克、连翘70克。0053制备方法为S1取柳叶、桂枝进行提取,加入10倍量的蒸馏水提取2小时,过滤,压榨药渣,收集水提液。药渣再加入8倍量的蒸馏水提取15个小时。减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用。0054S2取五倍子、连翘采用乙醇合提,加入10倍量的75乙醇提取2小时,过滤,压榨药渣,分别收集醇提液。药渣再加入8倍量的75乙醇提取15个小时。,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G。
24、/ML备用。0055S3取山楂采用乙醇冷浸,加入10倍量的75乙醇,冷浸至第三天,过滤,收集滤液,再加入8倍量的75乙醇,冷浸至第7天,过滤,合并滤液。减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用。0056S4取S1、S2、S3所述的各单味药的浓缩液体进行混合,过滤,加入辅料,制备成液说明书CN104082353A6/14页8体制剂。0057实施例12本实施例采用的原料药为五倍子80克、山楂100克、柳叶30克、桂枝10克、连翘30克。0058制备方法为S1取柳叶、桂枝分别进行提取,分别加入10倍量的蒸馏水提取2H,过滤,压榨药渣,收集水提液。药渣再分别加入8倍量的蒸馏水提取15H。减压浓缩至。
25、生药浓度在室温下为13G/ML备用。0059S2取五倍子、连翘采用乙醇合提,分别加入10倍量的75乙醇提取2H,过滤,压榨药渣,分别收集醇提液。药渣再分别加入8倍量的75乙醇提取15H。,减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用。0060S3取山楂采用乙醇冷浸,加入10倍量的75乙醇,冷浸至第三天,过滤,收集滤液,再加入8倍量的75乙醇,冷浸至第7天,过滤,合并滤液。减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用。0061S4取S1、S2、S3所述的各单味药的浓缩液体进行混合,过滤,加入辅料,制备成液体制剂。0062实施例13本实施例采用的原料药为五倍子30克、苍术70克、连翘70克、山楂3。
26、0克、白芷30克、柳叶30克、贯众10克、金银花20克、牡丹皮10克、丹皮酚1克、芒硝5克、野菊花10克、桂枝10克。0063制备方法为S1取柳叶、贯众、金银花、牡丹皮、桂枝、野菊花采用合煎进行提取,第一次加入10倍量的蒸馏水提取2H,过滤,压榨药渣,收集水提液。药渣再加入8倍量的蒸馏水提取15H。减压浓缩药液至生药浓度在室温下为13G/ML备用。0064S2取五倍子、连翘采用乙醇合提,第一次加入10倍量的75乙醇提取2H,过滤,压榨药渣,收集醇提液。药渣再加入8倍量的75乙醇提取15H。减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用。0065S3取山楂、白芷、苍术采用乙醇冷浸,第一次加入10倍。
27、量的75乙醇,冷浸至第三天,过滤,收集滤液,再加入8倍量的75乙醇,冷浸至第7天,过滤,合并滤液。减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用。0066S4取S1、S2、S3所述的浓缩液体与芒硝混合,过滤,加入辅料,制备成液体制剂。0067实施例14本实施例采用的原料药为五倍子60克、苍术70克、连翘80克、山楂60克、白芷60克、柳叶40克、贯众30克、金银花40克、牡丹皮20克、丹皮酚3克、芒硝3克、野菊花40克、桂枝20克。0068制备方法为S1取柳叶、贯众、金银花、牡丹皮、桂枝、野菊花分别进行提取,加入10倍量的蒸馏水提取2H,过滤,压榨药渣,收集水提液。药渣再加入8倍量的蒸馏水提取1。
28、5H。分别减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用。说明书CN104082353A7/14页90069S2取五倍子、连翘采用乙醇分别进行提取,分别加入10倍量的75乙醇提取2H,过滤,压榨药渣,分别收集醇提液。药渣再分别加入8倍量的75乙醇提取15H。减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用。0070S3取山楂、白芷、苍术分别采用乙醇冷浸,分别加入10倍量的75乙醇,冷浸至第三天,过滤,收集滤液,再分别加入8倍量的75乙醇,冷浸至第7天,过滤,合并滤液。减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用。0071S4取S1、S2、S3所述的各单味药的浓缩液体与芒硝进行混合,过滤,加入辅料,制。
29、备成液体制剂。0072实施例15本实施例采用的原料药为五倍子10克、苍术70克、连翘70克、山楂10克、白芷10克、柳叶15克、贯众40克、金银花20克、牡丹皮20克、丹皮酚01克、野菊花20克、桂枝10克。0073制备方法S1取柳叶、贯众、金银花、牡丹皮、野菊花以及桂枝粉碎成超微粉;S2取五倍子、连翘采用乙醇合提,第一次加入10倍量的75乙醇提取2H,过滤,压榨药渣,收集醇提液。药渣再加入8倍量的75乙醇提取15H。减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S3取山楂、白芷、苍术采用乙醇冷浸,第一次加入10倍量的75乙醇,冷浸至第三天,过滤,收集滤液,再加入8倍量的75乙醇,冷浸至第7天。
30、,过滤,合并滤液。减压浓缩至生药浓度在室温下为13G/ML备用;S4取上述S1中的超微粉和丹皮酚加入S2以及S3中的液体混合,再加入适量的淀粉和崩解剂制成软材,过筛制颗粒,50下干燥制成颗粒制剂。0074实施例16药效实验取实施例115所述消毒剂进行抗菌实验结果如下一、体外抑菌实验1平板抑菌实验细菌培养基的准备称取蛋白胨10G、牛肉膏粉3G、氯化钠5G、琼脂15G并置于一铁容器内,加入去离子水1000ML,加热至牛肉膏跟琼脂完全溶解,补足蒸发的水分,并调节PH为7302;将上述培养基分装至3个300ML的锥形瓶中,套上胶塞,并用报纸包好,121湿热灭菌20MIN。0075菌悬液的制备取适量菌种。
31、悬液接种于510ML的营养肉汤培养基中,表皮葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌在37摇床振动培养68H,链球菌在7摇床振动培养1618H、白色念珠菌在30培养箱静止培养4872H;用接种环取上述第一代菌悬液划线接种于营养琼脂培养基平板上,在上述条件下培养,再挑取典型菌落接种于营养琼脂斜面上培养。用接种环挑取上述斜面培养物于无菌PBS液中,梯度稀释至适宜浓度备用(11075108CFU/ML)。真菌菌悬液的制备方法同理。将制备好的菌悬液贴好相应的标签放入冰箱4下保存,当天使用。0076最小抑菌浓度的测定用二倍稀释法将上述各样品分别稀释成含250MG/ML、125MG/ML、625MG/ML、3125M。
32、G/ML、1562MG/ML、781MG/ML、390MG/ML、195MG/ML、098MG/ML、049MG/ML原生药浓度共10种浓度溶液。将直径6MM的圆滤纸片放入不说明书CN104082353A8/14页10同浓度的溶液中浸泡20MIN后取出,在无菌条件下晾干。将培养基倒入各平板中,每个平板约15ML,水平放置冷却后待用。将已制备好的各菌悬液用移液枪吸取01ML,分别注入相应的培养皿中,用已灭菌的涂布棒将菌液均匀涂布于培养基表面。用无菌镊子夹取上述晾干的含药滤纸片对号贴在含菌培养基表面,呈正三角分布,每菌每液做3个平衡样,并做相应的空白对照。把做好的平皿放入培养箱中,细菌37下培养2。
33、4H,真菌27下培养48H,按时取出,测定抑菌圈直径,以产生抑菌圈的最小的浓度为最低抑菌浓度MINIMALINHIBITORYCONCENTRATION,MIC。0077实施例115所述消毒剂对表皮葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌、痢疾杆菌以及白色念珠菌均有良好的抑制作用,抑菌数据见表1。0078表1各实例组合物对不同菌种的最低抑菌浓度(MG/ML)结果说明书CN104082353A109/14页112对空气消毒技术规范中选定的特定菌种进行杀灭取白色葡萄球菌(即表皮葡萄球菌)菌悬液,用无菌脱脂棉过滤后,再用营养肉汤培养基稀释成所需浓度。同时调节两个气雾柜或室的温度、相对湿度至试验要求的温度和相对湿度。
34、。按设定的压力、气体流量及喷雾时间喷雾染菌。边喷雾染菌,边用风扇搅拌。喷雾染菌完毕,继续搅拌5MIN,而后静置5MIN。同时对对照组(蒸馏水)和试验组(实施例115所述消毒剂)气雾柜进行消毒前采样。气雾柜或室内空气中各阳性对照菌数达到51045106CFU/M3。染菌完毕后,用液体撞击式采样器进行采样,然后在试验组气雾柜或室内进行熏蒸消毒。作用至规定时间,对试验组和对照气雾柜或室按前述方法同时进行采样。在将用液体撞击式采样器采集的样本,进行活菌培养计数,在37培养箱内培养48H,观察最后结果。0079结果显示,经两个小时的熏蒸消毒,消除细菌的自然死亡,实施例115所述消毒剂对白色葡萄球菌的杀灭。
35、率见表2。0080表2各实例组合物对表皮葡萄球菌的杀灭率3对空气中自然菌的杀灭情况选取空间体积为10M的小房间,消毒剂采用已配置好的实施例115所述消毒剂。消毒条件熏蒸仪T20、熏蒸120MIN。由专人进行消毒,消毒前、后各进入房间进行空气取说明书CN104082353A1110/14页12样。实验前半小时将直径为9CM的普通琼脂平板放在房内、外对角线两点上,内外布点距离墙壁1M,布点的选择要避开障碍物和送风口。采样高度在距离地面80CM的平面上,暴露15MIN,盖好,并在37下培养72H,计算平均细菌菌落数,数值保持小数点后一位。整个操作过程应符合无菌操作。判断指标参考卫生部消毒技术规范中各。
36、类环境空气卫生标准,类环境包括普通病房、治疗室、换药室、诊室、普通病房等,空气细菌数500CFU/M为及格。实施例115所述消毒剂对自然菌的杀灭率见表3表3各实例组合物对空气中自然菌的杀灭率二、抗病毒实验1取ND疫苗MUKTESWAR系,双抗处理后尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚5枚,02ML/胚,石蜡封孔后,37温箱培养。每6H照蛋1次,弃去24H内死亡鸡胚,收集4872H内死亡鸡胚尿囊液,测定其血凝效价。实施例115所述消毒剂稀释至生药浓度为1G/ML,与增殖后的鸡胚病毒一起注入鸡胚内,37培养。结果显示在高浓度药液下表4鸡胚均存活,并且鸡胚内尿囊液凝血效价均明显降低,说明该中药消毒剂有抑制病。
37、毒增殖的作用。0081取实施例115提取液原液稀释为1000/、0500/、0250/、0125/,选取10日龄非免疫鸡胚40枚,每一稀释度接种10枚鸡胚,02/胚,同时设生理盐水对照。37温箱孵化,每间隔6照蛋1次,以72内鸡胚全说明书CN104082353A1211/14页13部存活的最大药物浓度作为该药对鸡胚最大无毒浓度,结果显示在高浓度药液下表4鸡胚均存活。0082将4个稀释度的实施例115组合物分别与增殖后的鸡胚病毒一起注入鸡胚内混合,将混合液注入10日龄非免疫鸡胚,每个稀释度10枚,02/胚,37温箱孵育48,弃去24内死亡胚,收集其它鸡胚尿囊液,分别测定其血凝效价。鸡胚内尿囊液凝。
38、血效价均明显降低,说明该中药消毒剂有抑制病毒增殖的作用。(见表5)表4各实例组合物对鸡胚最大无毒浓度即鸡胚最大存活率表5各实例组合物于NDV接种后注入鸡胚内抗NDV效果说明书CN104082353A1312/14页14注表示存活三、急性毒性1经口毒性实验用昆明鼠320只,雌雄各半,体重1822克,实验前禁食不禁水12H,按剂量02ML/10G(生药浓度为305G/ML)灌胃给与实施例115所述消毒剂,一日内灌胃2次,两次相隔8H。给药后常规饲养,观察2周。结果显示给药后小鼠活动正常,自主进食,个别眼睛微闭,呼吸频率加快。第二天上述不良症状消失,体重变化正常,14天内无小鼠死亡,结果见表6。00。
39、83表6各实例组合物小鼠急性经口毒性观察结果说明书CN104082353A1413/14页152吸入毒性实验用昆明鼠160只,雌雄各半,体重1822克,实验前先置于染毒柜自主活动2小时/天,到第四天,采用静式染毒法染毒。实施例115所述消毒剂低毒无毒,故采用一次限量法。在染毒期间小鼠躁动不安,眼睛半闭,呼吸频率稍快,无小鼠死亡。观察期间小鼠状态活跃,体重增加正常,无异常生理现象。结果见表7。第14天处死全部动物,进行大体解剖,脑、心、肺、肝、胃、肾、大肠等主要脏器表面光滑,无出血、淤血、水肿等肉眼可见的异常病理现象。该小鼠4H最大药物吸入浓度为191106MG/ML,LC504H值大于5000。
40、MG/M,属实际无毒。该实验空白对照为蒸馏水。0084表7各实验组合物吸入毒性试验结果观察说明书CN104082353A1514/14页163急性眼刺激试验取家兔4只,实验前检查双眼无异常。吸取实施例14组合物50UL,滴入家兔一侧眼结膜囊内,另一侧用生理盐水作为正常对照。滴入药物后,将兔眼被动闭合57S,确保药液流过整个眼部。30S后用生理盐水冲洗,于滴眼后1H、24H、48H、72H、7D、,肉眼观察家兔眼结膜、虹膜、和角膜的损伤和恢复情况(见图1)。结果显示实验后1H内家兔眼睛粘膜泛红,稍有眼泪溢出,情绪躁狂,不断抓挠眼周皮肤,稍后相对安静能自主进食,3天后兔子眼睛消肿。说明书CN104082353A161/1页17图1说明书附图CN104082353A17。