法呢基转移酶抑制剂 发明背景
Ras是在正常细胞生长的信号转导途径中很重要的分子量为21,000的一种蛋白质。这种蛋白质产生于核糖体，释放入细胞溶质中并进行翻译后修饰。在-系列翻译后修饰中，第一步是在法呢基转移酶所催化的反应中由法呢基焦磷酸酯对Cys168进行烷基化(Hancock,JF等，Cell 57:1167-1177(1989))。接着，三个C-末端氨基酸断裂(Gutierrez,L等，EMBO J.8:1093-1098(1989))，然后末端Cys168被甲酯化(Clark,S等，Proc.Nat＇lAcad.Sci.(USA)85:4643-4647(1988))。某些形式的Ras也会可逆地在紧靠N-端的Cys168的半胱氨酸残基上被棕榈酰化(Buss,JE等，Mol.Cell.Biol.6:116-122(1986))。这些修饰提高了Ras C端区的疏水性，导致它定位于细胞膜的表面。Ras在细胞膜上的定位是正常功能所必须的(Willumsen,BM等，Science310:583-586(1984))。
在相当多的癌症中都观察到了致癌形式的Ras，包括50％以上的结肠癌，30％以上的肺癌，以及90％以上的胰腺癌(Bos,JL,Cancer Research49:4682-4689(1989))。这些观察提示，对Ras介导的信号转导功能进行干扰在癌症治疗中可能是有用的。
以前曾发现，Ras的C-末端四肽具有“CAAX”特征(其中C是半胱氨酸，A是脂肪族氨基酸，X是任何氨基酸)。具有这种结构的四肽已表明是法呢基转移酶抑制剂(Reiss等，Cell 62:81-88(1990))。这些早期法呢基转移酶抑制剂由于效果不良导致人们寻找具有更加优良药物动力学性能的新抑制剂(James,GL,et al.,Science 260:1937-1942(1993)；Kohl,NE等，Proc.Nat＇l Acad.Sci.(USA)91:9141-9145(1994)；deSolms,SJ等，J.Med.Chem.38:3967-3971(1995)；Nagasu,T等，Cancer Research 55:5310-5314(1995)；Lemer,EC等，J.Biol.Chem.270:26802-26806(1995))。
最近证实法呢基转移酶抑制剂会阻断裸鼠的Ras-依赖性肿瘤的生长(Kohl,NE等，Proc.Nat＇l Acad.Sci.(USA)91:9141-9145(1994))。此外，已显示大样品量的肿瘤细胞系有70％以上被法呢基转移酶抑制剂所抑制，同时对非转化的上皮细胞有选择性(Sepp-Lorenzino,I,et al.,CancerResearch,55:5302-5309(1995))。
发明概要
一方面，本发明地特征是具有化学式(Ⅰ)或化学式(Ⅱ)的化合物或其药物学可接受的盐：其中：
R1是H、低级烷基、环烷基硫、或低级烷基硫、或与R2一起形成-CH2-,-CO-，或C(CH3)2-；
R2和R3分别是H、低级烷基或环烷基；
R4是H2或O；
R5是H、或取代或未被取代的低级烷基、低级链烯基、低级炔基、环烷基、环烷基低级烷基、环烯基、环烯基低级烷基、芳基、芳基低级烷基、杂环基、或杂环基低级烷基，其中取代基是低级烷基、-O-R10,-S(O)mR10(m是0,1或2)、-N(R10)(R11),-N-C(O)-R10、-NH(SO2)-R10、-CO2-R10、-C(O)-N(R10)(R11)、或-(SO2)-N(R10)(R11)；
R6和R7分别是H、-C(O)-NHCHR13CO2R14，或取代或未取代的低级烷基、环烷基、环烷基低级烷基、环烯基、环烯基低级烷基、芳基、芳基低级烷基、杂环基、或杂环基低级烷基，其中取代基是OH、低级烷基、低级烷氧基、芳氧基、芳基低级烷氧基、-N(R10)R11、-COOH、-C(O)N-(R10)(R11)、或卤素、或R6与R7一起形成芳基或杂环基；
R8和R9分别是H、或取代或未被取代的低级烷基、环烷基、环烷基低级烷基、环烯基、环烯基低级烷基、芳基、芳基低级烷基、杂环基、或杂环基低级烷基、其中取代基是OH、低级烷基、低级烷氧基、-N(R10)(R11)、COOH、-C(O)N-(R10)(R11)、或卤素，或R8与R9一起形成芳基或杂环基；
R10和R11分别是H、低级烷基、芳基、芳基低级烷基、环烷基、环烷基低级烷基、杂环基、或杂环低级烷基；
R12是NR9,S或O；
R13是取代或未取代的低级烷基、其中取代基是低级烷基、-OR10、-S(Om)R10(其中m为0,1或2)或-N(R10)(R11)；以及
R14是H或低级烷基。
本发明包括以下实施例：
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代-丙基)-8-丁基-2-苯基-5,6,7,8-四氢咪唑并-[1,2a]-吡嗪(化合物1)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代-丙基)-8-丁基-2-(4-氟苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物2)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代-丙基)-8-丁基-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物3)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代-丙基)-8-丁基-2-(3-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物4)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代-丙基)-8-丁基-2-(4-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物5)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代-丙基)-8-(2-羟乙基)-2-苯基-5,6,7,8-四氢咪唑并(1,2a]吡嗪(化合物6)；
7-(2-氨基-3-硫代-丙基)-8-丁基-3-苯基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物7)；
2-(1-(N-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-N-甲基)-氨基戊基)-5-苯基咪唑(化合物8)；
2-(((2-氨基-1-氧代-3-巯基丙基)-氨基)-甲基)-5-苯基噻唑-4-羰基-甲硫氨酸(化合物9)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-2-(2-甲氧基苯基)-8-(2-甲基丙基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物11)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-丁基-2-(2-乙氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物13)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-丁基-2-(2-羟苯基) -5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物14)；
2-(1-(N-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-N-甲基)-氨基戊基-5-(2-甲氧基苯基)咪唑(化合物15)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(2-甲基丙基)-2-(1-萘基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物17)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(1-甲基丙基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物18)；
S-(二甲基乙基)-S＇-(2-氨基-3-氧代-3(8-丁基-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪-7-基]丙基]二硫化物(化合物21)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-丁基-2-(2-甲基丙基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物22)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(1,1-二甲基乙基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物24)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(1-甲基丙基)-2-(2-(苯基甲氧基)苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物25)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(环已基甲基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物26)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-2-(2-甲氧基苯基)-8-(1-甲基乙基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物27)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-丁基-2-(2-羟基-6-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢[1,2a]吡嗪(化合物29)；
2-(2-甲氧基苯基)-8-(1-甲基丙基)-5,6,7,8-四氢-7-((噻唑烷-4-基)羰基)-咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物31)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-3-溴代-8-丁基-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物32)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-丁基-2,3-二苯基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物34)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-3-溴代-8-丁基-2-苯基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物36)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-2-环己基-8-(环己基甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物37)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-己基-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物42)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(环己基乙基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑[1,2a]吡嗪(化合物44)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(环己基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物46)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(2-(4-甲氧基环己基)-甲基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物47)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(环己基甲基)-2-苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物49)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(4-甲氧基环己基)-2-(2-甲氧基苯)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物51)；
[S-[2-氨基-3-氧代-3-(8-环己基甲基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]-吡嗪-7-基丙基]-S＇-环己基]二硫化物(化合物52)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(4-甲氧基环己基)甲基-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(顺式异构体)(化合物53)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-2-(2-甲氧基苯基)-8-(4-哌啶基甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物54)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-2-(2-甲氧基苯基)-8-(2-哌啶基甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物55)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-2-(2-甲氧基苯基)-8-(3-哌啶基甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物56)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(环己基甲基)-2-(1-萘基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物57)；
[S-[2-氨基-3-氧代-3(8-环己基甲基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪-7-基)-丙基]-S＇-乙基]二硫化物(化合物58)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-2-(2-甲氧基苯基)-8-(2-甲基硫代)乙基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物59)；
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(3-二氢吲哚甲基)-2-(2-甲氧基苯基)-8-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物60)；以及
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(1-甲基咪唑-3-基)甲基-2-(2-甲氧基苯基)-8-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物61)。
8-(环己基甲基)-2-(2-甲氧基苯基)-7-(2-氧代-噻唑烷基-4-羰基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物62)；以及
7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-2-(2-甲氧基苯基)-8-(2-甲氧基乙基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物63)。
另一方面，本发明的特征是一种由上述的两种相同或不同的化合物(单体)或其药物学可接受的盐所形成的二聚化合物。这两个单体由二硫键连在一起形成二聚体。更具体地说，是第一个单体的R1与第二个单体的R1合在一起形成二硫键。
发明中二聚体的实例包括：
双-1,1＇-[2-氨基-3-(8-丁基-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪-7-基]-3-氧代]丙基二硫化物(化合物10)；
双-1,1＇-[2-氨基-3-(2-(2-甲氧基苯基)-8-(2-甲基丙基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪-7-基]-3-氧代]丙基二硫化物(化合物12)；
双-1,1＇-[2-(1-(N-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-N-甲氨基)戊基]-5-(2-甲氧基苯基)咪唑]二硫化物(化合物16)；
双-1,1＇-7-[2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基-(2-(1-萘基)-8-(2-甲基丙基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪-7-基)二硫化物(化合物19)。
双-1,1＇-[7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-2-(甲氧基苯基)-8-(1-甲基丙基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪]二硫化物(化合物20)；
双-1,1＇-[7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-丁基-2-(2-甲基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪]二硫化物(化合物23)。
双-1,1＇-[7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-2-(2-甲氧基苯基)-8-(1-甲基乙基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪]二硫化物(化合物28)。
双-1,1＇-[7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(1,1-二甲基乙基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪]二硫化物(化合物30)；
双-1,1＇-[2-氨基-3-(8-丁基-2-环己基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪-7-基]-3-氧代丙基]二硫化物(化合物33)；
双-1,1＇-[2-氨基-3-(3-溴代-8-丁基-2-苯基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪-7-基]-3-氧代丙基]二硫化物(化合物35)；
双-1,1＇-[7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-丁基-2,3-二苯基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪]二硫化物(化合物38)；
双-1,1＇-[7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(1-甲基丙基)-2-(2-(苯甲氧基)苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪]二硫化物(化合物39)；
双-1,1＇-[2-氨基-3-(2-环己基-8-(环己基甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪-7-基]-3-氧代-丙基]二硫化物(化合物40)；
双-1,1＇-[7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(环己基甲基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪]二硫化物(化合物41)；
双-1,1＇-[7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-己基-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪]二硫化物(化合物43)；
双-1,1＇-[7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(环已基乙基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪]二硫化物(化合物45)；
双-1,1＇-[7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(环己基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪]二硫化物(化合物48)；以及
双-1,1＇-[7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(2-(4-甲氧基环己基)-甲基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪]二硫化物(化合物50)；
双-1,1＇-[2-氨基-3-(2-(2-甲氧基苯基)-8-(2-苯氧基乙基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪-7-基)-3-氧代丙基]-二硫化物(化合物64)。
这些化合物的结构见下表Ⅰ。 表1
本发明的化合物可有不对称中心，并以外消旋体，外消旋混合物，单独的非对映异构体出现，本发明还可以包括所有可能的异构体，包括旋光异构体。简而言之，在结构式中并没有描述具体的构型，可以理解为这代表所有的对映体形式及其混合物。
此处的“低级烷基”意欲包括具有1-6个碳原子的支链或直链的饱和脂肪烃基团。低级烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基，诸如此类。“低级链烯基”包括那些具有2-6个碳原子及有一个或几个双键的基团。链烯基的实例包括乙烯基、烯丙基、异丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、1-丙烯基、2-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、异戊烯基，诸如此类。“炔基”包括那些具有2-6个碳原子及有1或数个三键的基团。炔基的实例包括乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、S-丁炔基，诸如此类。所有的烷基、链烯基，以及炔基都是非环状的。
此处所用的“环烷基”包括具有3-10个碳原子的非芳香族的环烃基团。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环苯甲基、诸如此类。“环烯基”意欲包括具有3-10个碳原子的有一或数个双键的非芳香族的环状烃基团。环烯基的实例包括环丙烯基，环丁烯基，环戊烯基，以及环己烯基，诸如此类。
此处所用的“芳基”意欲包括任何稳定的单环，双环或三环的每环可高至七元的碳环，其中至少有一个是芳香族的。芳基的实例包括苯基、萘基、蒽基、联苯基、四氢化萘基、2,3-二氢化茚基、菲基，诸如此类。
此处所用的杂环基这个术语，指那些稳定的5到7元的单环或稳定的8到11元的双环或稳定的11-15元的三环的杂环，它可以是饱和或不饱和的，是由碳原子及1到4个来自于氮、氧或硫的杂原子所组成，并包括任何的双环基团，其中所限定的任何杂环是与苯环稠合的。杂环可以在产生稳定结构的任何杂原子或碳原子上相连。这种杂环单元的实例包括(但不局限于)吖庚因基、苯并咪唑基、苯并异噁唑基、苯并呋咱基、苯并吡喃基、苯并硫代吡喃基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并二氢吡喃基、噌啉基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并硫代吡喃基、二氢苯并硫代吡喃基砜、呋喃基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异苯并二氢吡喃基、异二氢吲哚基、异喹啉基、异噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、吗啉基、1,5-二氮杂萘基、噁二唑基、2-氧代吖庚因基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吡啶基、吡啶基氮氧化物、喹喔啉基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢-喹啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜、噻唑基、噻唑啉基、噻吩并呋喃基、噻吩并噻吩基、噻吩基，诸如此类。
术语“卤”所指的包括氟、氯、溴及碘。
术语“取代的”所指包括被1到4个所述的取代基(如卤、OH、低级烷基，等等)所取代的所述化学基团(例如，低级烷基、杂环、芳基、环烷基，等等)。取代基可连接到化学基团的任何一个原子上。
本发明的化合物可以以药物学可接受的盐的形式提供。可接受的盐包括(但不局限于)无机酸的酸加成盐，诸如盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、氢溴酸盐，以及硝酸盐；或者有机酸的酸加成盐，诸如乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、扑酸盐、水杨酸盐、草酸盐，以及硬脂酸盐。适用的也在本发明范围内的还有由诸如氢氧化钠或氢氧化钾之类的碱所形成的盐。有关药物学可接受的盐的更多实例参考“Pharmaceutical Salts”,J.Pharm.Sci.66:1(1977)。
另一方面，本发明是一种方法，其特征是通过把治疗有效量的具有化学式(Ⅰ)或化学式(Ⅱ)的化合物对患者给药来抑制包括人在内的哺乳动物的患者的法呢基转移酶。特别是本发明还包括一种通过把治疗有效量的化合物或其盐对患者给药以治疗再狭窄或组织增生疾病(即肿瘤)的方法。组织增生疾病的实例包括与良性(即非恶性)细胞增殖有关的，如纤维样变性、良性前列腺增生、再狭窄，以及那些与恶性细胞增生有关的，如癌症(如表达法呢基转移酶的肿瘤)。可治疗的肿瘤的实例包括乳癌、结肠癌、胰腺癌、前列腺癌、肺癌、卵巢癌、表皮癌，以及血癌(Sepp-Lorenzino,I,et al.,Cancer Research55:5302(1995))。
用由治疗有效量的本发明的化合物和药物学可接受的载体物质(如碳酸镁、乳糖，或与用于治疗的化合物能形成胶束的磷脂)一起形成的治疗组合物(如丸剂、片剂、胶囊，或液体)对需要药物的受治疗者给药(如口服、静脉内、透皮，或皮下)。可在丸剂，片剂或胶囊上包膜，这种用于包膜的物质可以在一段足以让组合物能到达小肠的时间内在受治疗者的胃内免受胃酸或肠酶的消化。
用于治疗上述疾病或失调的本发明的化合物的剂量依给药方式而有所变化，同时还依赖于受治疗者的年龄、体重，以及受治疗者的状况，最终还要决定于治疗医生或兽医。这种由治疗医生或兽医所决定的化合物量在这里被称为“治疗有效剂量”。
本发明考虑范围之内还包括一种方法，用来制备化学式(Ⅰ)或化学式(Ⅱ)的化合物以及在本文中提到的合成中所用的新化学中间产物。
本发明其它特征和优点将通过对发明的详细说明及权利要求而显现出来。 发明说明书
相信本技术领域的技术熟练者能根据本说明书充分利用本发明。下面的具体实施方案仅应被理解为说明性的，而无论如何不是对所公开的其余部分的限制。
除非另作定义，此处所用的所有的技术和科学术语与本发明所属领域中的普通技术人员所共同理解的意义相同。同样，此处所提到的所有的出版物、专利申请、专利以及其它参考文献在此均作为参考。
合成
下面是化合物1到31的合成的说明，本发明的其它化合物可由普通技术人员以类似的方式制备。在此处所用的术语中，Cbz指的是苄氧羰基，DMF指的是二甲基甲酰胺；EtOAc指乙酸乙酯，NH4OAc指乙酸铵；LAH指氢化铝锂，THF指四氢呋喃；BOC指叔丁氧羰基；Trt指的是三苯甲基；Tfa指三氟乙酸；Et2O指乙醚，NMR指核磁共振；mass spec.指质谱分析；DMSO-d6指二甲亚砜；DCC指二环己基碳二亚胺；NMM指4-甲基吗啉；iPr3SiH指三异丙基硅烷，HPLC指高效液相色谱；DIC指二异丙基碳二亚胺；MeOH指甲醇；KOtBu指叔丁醇钾；HOSU指N-羟基丁二酰亚胺；以及iBuOCOCl指氯甲酸异丁酯。实施例1:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-丁基-2-苯基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物1)化合物1按照以下的合成方案1来合成：
a.2-[1-(S)-((苯甲氧基)羰基)氨基)戊基]-4-苯基咪唑
苄氧羰基-(L)-正亮氨酸(10.0克，37.7毫摩尔)以及碳酸铯(6.14克，18.9毫摩尔)在1∶1/DMF∶H2O(75毫升)中混合，旋动混合物直到得到均匀的混合物。在真空中除去溶剂。剩余物溶于DMF(50毫升)中，在真空中再次除去溶剂以去除残余水分。剩余物溶于DMF(50毫升)中，并把溶于DMF(25毫升)中的2-溴代苯乙酮(7.5克，37.7毫摩尔)加到溶液中。在室温下，搅拌溶液15分钟，然后在真空中浓缩。所得的酮-酯在EtOAc(75毫升)中溶解，把溴化铯过滤掉，然后把溶液在真空中浓缩。把NH4OAc(50.0克，0.65摩尔)以及二甲苯(150毫升)加到溶液中，并把溶液回流加热1.5小时。溶液冷却后在真空中除去溶剂。剩余物溶于EtOAc(75毫升)，并用饱和NaHCO3(50毫升)溶液洗涤两次。EtOAc相用MgSO4干燥、过滤，加正己烷到产生浊度。把所产生的晶体产品进行过滤，干燥后得到10.04克(73％)的产品。熔点范围=136-138℃，质谱(MH+364.3)，核磁共振(300MHz,CD3CO2D)7.7(3H,m),7.4(3H,m),7.3(5H,m),5.1(3H,m),2.1(2H,m(被溶剂遮蔽)),1.4(4H,m),0.9(3H,t)。
b.2-[1-(S)-(((苯甲氧基)羰基)氨基)戊基]-4-苯基1-咪唑乙酸乙酯
把溴代乙酸乙酯(2.64毫升，24毫摩尔)、K2CO3(1.93克，14.0毫摩尔)、及中间产物1a(4.36克，12.0毫摩尔)在DMF(25毫升)混合，然后把混合物在60℃加热4小时。混合物在真空中浓缩，剩余物溶于EtOAc(50毫升)。溶液用饱和的NaHCO3溶液(25毫升)及饱和NaCl溶液(25毫升)洗涤。溶液用MgSO4干燥，过滤，并在真空中除去溶剂。剩余物进一步在硅胶上用80∶20/正己烷∶EtOAc为洗脱液通过闪式色谱法纯化。合并纯产品部分并在真空中浓缩以产生晶体化的油。得到产品3.09克(57％)，熔点范围=85-87℃，质谱450.2(MH+),472.2(MNa+)，核磁共振(300MHz,CD3CO2D)7.7(2H,d),7.5(1H,s),7.2-7.45(8H,m),5.25(2H,dd),5.1(2H,dd),5.1(1H,m),2.15(2H,m),1.4(7H,m),0.9(3H,t)。
c.(S)-8-丁基-6-氧代-2-苯基-5,6,7,8-四氢-咪唑并[1,2a]吡嗪
把中间产物1c(2.89克，6.44毫摩尔)溶于含290毫克的10％的Pa/C的50毫升乙酸中。混合物在室温下以氢处理8小时。催化剂用硅藻土过滤除去。在70℃加热3小时以达成内酰胺化作用。在减压条件下浓缩产物，剩余物在EtOAc和饱和NaHCO3溶液之间进行分配。EtOAc层以MgSO4干燥并过滤。从EtOAc/正己烷中结晶，得到1.37克(79％)的产品。熔点范围=208-211℃，质谱270.2(MH+),292.2(MNa+)。核磁共振(300MHz,CD3CO2D)7.75(2H,d),7.5(1H,s),7.3-7.45(3H,m),5.25(1H,m),4.95(2H,s),2.1(2H,m(被溶剂峰所遮蔽)),1.4(4H,m),0.9(3H,t)。
d.(S)-8-丁基-2-苯基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪
把20毫升中间产物1c(1.25克，4.65毫摩尔)的THF溶液滴加到搅拌的1M LAH的THF(16毫升)溶液中。混合物回流加热1小时，然后在室温下搅拌过夜。混合物中缓慢添加3克硅藻土和2毫升饱和K2CO3的混合物以使其骤冷。搅拌混合物1小时，过滤出的固体用25毫升EtOAc提取三次。在减压条件下除去溶剂，用乙酸乙酯∶乙酸∶吡啶∶水/900∶54∶16∶30为洗脱液通过闪式色谱法纯化剩余物。把产物部分浓缩成油并用乙酸乙酯溶解。溶液用25毫升饱和的NaHCO3洗涤，用MgSO4干燥、过滤，并真空浓缩。产物用真空泵干燥，得到190毫克(16％)的产品。质谱256.2(MH+)，278.2(MNa+)。
e.7-[2-(((1,1-二甲基乙氧基)羰基)氨基)-1-氧代-3-((三苯基甲基)硫代)丙基]-8-丁基-2-苯基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪
把二环己基碳二亚胺(155毫克，0.75毫摩尔)和BOC-Cys(Trt)-OH(Advanced Chemtech)溶于8毫升THF中并搅拌5分钟。过滤去所得的二环己基脲，滤液加到中间产物1d中。所得混合物在室温下搅拌6小时，浓缩成树胶状，并以7∶3/正己烷∶EtOAc为洗脱液在硅胶上通过闪式色谱法纯化。合并产品部分并浓缩成玻璃状，得到500毫克(95％)的产品。质谱701.5(MH+),723.5(MNa+)。核磁共振(300MHz,CD3CO2D),7.7(2H,d),7.5(1H,s),7.2-7.45(18H,m),6.05(1H,d),4.6(1H,t),4.2(2H,t),3.95(1H,t),3.8(1H,m),2.6(2H,m),2.0(2H,m(被溶剂所遮蔽)),1.4(9H,s),1.2-1.4(4H,m),0.9(3H,t)。
f.7-(2-氨基-1-氧代-3硫代丙基)-8-丁基-2-苯基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物1)
在氮氛围下把中间产物1e(322毫克，0.46毫摩尔)和10毫升的试剂B(三氟乙酸∶酚∶CiPr3SiH)∶H2O/8.8∶0.5∶0.2∶0.5)一起搅拌15分钟。减压除去溶剂，剩余物用25毫升水溶解并用25毫升Et2O洗涤两次。水层用反相柱色谱法纯化，得到9毫克(5％)的化合物1冻干粉。质谱：359.1(MH+)。实施例2:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-丁基-2-(4-氟苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物2)
通过类似于实施例1的方法制备了化合物2，但在步骤a中用2-溴-4＇-氟苯乙酮代替2-溴苯乙酮。质谱377.2MH+。核磁共振(300MHz,CD3CO2D)，(大约观察到2比1的构象体的混合物)7.8-8.0(2H,m),7.6-7.8(1H,s),7.1-7.3(12H,m),5.8-6.3(1H,m),3.5-5.3(5H,t),3.0-3.4(2H,m),2.1-2.6(2H,m),1.3-1.7(4H,m),0.8-1.0(3H,m)。实施例3:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-丁基-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物3)
通过类似于实施例1的方法制备了化合物3，但在步骤a中用2-溴-2＇-甲氧基苯乙酮代替2-溴苯乙酮。质谱389.3MH+。核磁共振(300MHz,DMSO-d6),8.2-8.8(3H,s),7.7-8.0(2H,m),7.2-7.4(1H,m),6.8-7.2(2H,m),3.9(3H,s),2.7-3.1(2H,m),1.8-2.1(2H,m),1.3-1.6(4H,m),0.8-1.0(3H,t)。实施例4:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代-丙基)-8-丁基-2-(3-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物4)
以类似于实施例1的方法制备了化合物4，但在步骤a.中用2-溴-3＇-甲氧基苯乙酮代替2-溴苯乙酮。质谱389.3MH+。核磁共振(300MHz,DMSO-d6),)，(观察到大约4到1种构象体的混合物)8.2-8.7(3H,s),7.7-8.0(1H,s),7.2-7.5(3H,m),6.8-7.0(2H,d),5.4-5.8(1H,t),4.5-4.8(1H,t),3.7-4.5(4H,m),3.8(3H,s),2.7-3.1(2H,m),1.8-2.1(2H,m),1.2-1.6(4H,m),0.8-1.0(3H,t)。实施例5:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-丁基-2-(4-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物5)
以类似于实施例1的方法制备了化合物5，但在步骤a.中用2-溴-4＇-甲氧基苯乙酮代替2-溴苯乙酮。质谱389.2 MH+。核磁共振(300MHz,DMSO-d6),)，(观察到大约6到1个构象体的混合物)8.2-8.7(3H,s),7.7-8.0(1H,s),7.5-7.8(2H,d),6.9-7.2(2H,d),5.4-5.8(1H,t),4.5-4.8(1H,t),3.7-4.5(4H,m),3.8(3H,s),2.7-3.1(2H,m),1.8-2.1(2H,m),1.2-1.6(4H,m),0.8-1.0(3H,t)。实施例6:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(2-羟基乙基)-2-苯基-5,6,7,8-四氢咪唑并(1,2a]吡嗪(化合物6)
以类似于实施例1的方法制备了化合物6，但在步骤a.中用2-溴-4＇-甲氧基苯乙酮代替2-溴苯乙酮。质谱：347.1 MH+。实施例7:7-(2-氨基-3-硫代丙基)-8-丁基-3-苯基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物7)
通过如下的合成方案2合成了化合物7:
a.2-((2-(((1,1-二甲基乙氧基)羰基)氨基)乙基)氨基)-己酸乙酯
按A.P.Krapcho和C.S.Kuell,Syn.Comm.20(16):2559-2564(1990)所描述制备Boc-NHCH2CH2NH2。把Boc-NHCH2CH2NH2(5.00克，31.25毫摩尔)，2-溴己酸乙酯(5.71毫升，31.25毫摩尔)，以及K2CO3(4.31克，31.25毫摩尔)在75毫升DMF中混合并在40℃搅拌1.5小时。减压去除溶剂，剩余物在Et2O和H2O之间分配。醚层用MgSO4干燥、过滤，减压除去溶剂，得到7.48克(79％)的油。质谱303.0 MH+，核磁共振(CDCl3),4.9-5.1(1H,S br),4.1-4.4(2H,M),3.0-3.6(2H,M),2.5-3.0(2H,M),1.9-2.2(1H,Sbr),1.3-1.8(2H,M),1.5(9H,S),1.2-1.5(7H,M),0.8-1.0(3Ht)。
b.2-[N-(2-(((1,1-二甲基乙氧基)羰基)氨基)乙基)]-N-[(苯甲氧基)羰基]氨基已酸乙酯
中间产物7a(7.40克，24.5毫摩尔)溶于40毫升THF中，然后加入10毫升水。混合物冷却至5℃，分成四份向混合物中加入Cbz-Cl。在混合物中加入2.5N的NaOH以保持其pH值在8-9之间。反应完成后，真空条件下除去溶剂，剩余物用EtOAc溶解并用5％的柠檬酸溶液洗涤。减压除去溶剂。剩余物溶于正己烷中，并过滤除去晶体不纯物，干燥以得到7.34克(69％)的油状物。质谱337.2(M-Boc)H+,459.3 MNa+。核磁共振(CDCl3),7.2-7.6(5H,M),5.1-5.4(3H,M),3.9-4.4(3H,M),3.5-3.8(1H,M),3.1-3.5(3H,M),1.6-2.2(2H,M),1.4-1.5(9H,S),1.1-1.5(7H,M),0.8-1.0(3Ht)。
c.3-丁基-2-氧代-4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪
把中间产物7b(7.10克，16.3毫摩尔)溶于25毫升的9∶1/三氟乙酸∶水中并在氮氛中搅拌15分钟。减压去除溶剂，剩余物用EtOAc溶解。溶液用饱和NaHCO3溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压除去溶剂。把10毫升乙酸和10毫升吡啶加到剩余物中，氮氛中回流1小时。减压除去溶剂，剩余物溶于EtOAc并用5％柠檬酸洗涤2次，溶液用MgSO4干燥，过滤，减压除去溶剂。产物从EtOAc/正己烷溶液中结晶，得到2.40克(51％)的白色粉末。熔点范围=107-108℃。质谱292.1 MH+,313.2 MNa+。核磁共振(CDCl3),7.3-7.5(5H,S),7.0-7.2(1H,Sbr),5.1-5.3(2H,Q),4.5-4.8(1H,Sbr),4.1-4.4(1H,Sbr),3.4-3.6(1H,T),3.1-3.4(2H,D),1.7-2.1(2H,M),1.2-1.5(4H,M),0.8-1.0(3H,Sbr)。
d.3-丁基-4-((苯甲氧基)羰基)-2-硫代哌嗪
中间产物7c(2.85克，9.83毫摩尔)及Lawsson氏试剂(2.02克，5.00毫摩尔)溶于20毫升THF中，在氮氛中回流加热1.5小时。溶液冷却后，减压除去溶剂。剩余物溶于50毫升Et2O中，并用25毫升1N的NaOH洗涤三次。溶液用MgSO4干燥，过滤，并减压除去溶剂。用65∶35/正己烷∶EtOAc为洗脱液在硅胶上通过闪式色谱法纯化剩余物。浓缩产物部分，得到2.19克(73％)的油状结晶。熔点范围=94-96℃。质谱307.2 MH+,329.2MNa+。核磁共振(CDCl3),8.5-8.8(1H,S),7.3-7.5(5H,Sbr),4.9-5.4(3H,M),4.0-4.5(1H,M),1.1-3.6(3H,M),3.4-3.6(1H,T),2.2-2.4(2H,Sbr),1.7-2.0(2H,M),1.2-1.6(4H,Sbr),0.7-1.0(3H,Sbr)。
e.8-丁基-3-苯基-7-((苯甲氧基)羰基)5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪
中间产物7d(1.07克，3.5毫摩尔)溶于10毫升THF中。在其中加入碘代甲烷(2.18毫升，35.0毫摩尔)并在室温搅拌8小时。减压去除溶剂，剩余物溶于10毫升THF中，把4-甲基吗啉(771ml,7.0毫摩尔)和2-氨基苯乙酮盐酸盐(686毫克，4.00毫摩尔)加入到溶液中。溶液在室温下搅拌过夜，然后回流2小时。加入15毫升的乙酸，蒸馏除去15毫升的溶剂。然后把溶液回流1小时并真空浓缩。用70∶30/正己烷∶EtOAc为洗脱液在硅胶上以闪式色谱法纯化剩余物。浓缩产品部分，得到0.97克(71％)的油。质谱390.3MH+,412.2 MNa+，核磁共掁(CD3CO2D),(大约是1∶1的构象体混合物)7.2-7.6(11H,M),5.6-5.8(1H,M),5.0-5.4(2H,M),4.4-4.8(1H,M),4.1-4.4(1H,M),3.9-4.1(1H,M),3.3-3.6(1H,Sbr),1.8-2.2(被溶剂遮蔽)(2H,M),1.7-2.0(2H,M),1.1-1.6(4H,Sbr),0.7-0.9(3H,Sbr)。
f.8-丁基-3-苯基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪
中间产物7e(1.08克，2.78毫摩尔)溶于4毫升THF中。加入10毫升4N的HCl，在氮氛中把混合物回流加热4小时。减压除去溶剂，得到的固体产物用醚洗涤，并干燥到740毫克。质谱256MH+。
g.8-丁基-7-(2-(1,1-二甲基乙氧基)羰基)氨基-1-氧代-3-(三苯基甲基硫代)-3-苯基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪
Boc-Cys(Trt)-OH(2.32克，5.00毫摩尔；Adanced Chemtech)溶于20毫升的THF中。在溶液中加入DCC(515毫克，2.50毫摩尔)。溶液放置15分钟，然后过滤除去DCC。滤液加入到中间产物7f(700毫克，2.4毫摩尔)和NMM(665微升，4.80毫摩尔)的20毫升THF溶液中。溶液在室温下搅拌两个小时，减压除去溶剂。用70∶30/正己烷∶EtOAc为洗脱液以硅胶色谱法纯化所得产物。合并产物部分并浓缩成泡沫胶，干燥后得到1.47克(87.5％)的产品。质谱701.4MH+，核磁共振(CD3CO2D),7.1-7.7(21H,M),6.0-6.2(1H,M),6.5-6.7(1H,T),3.4-4.4(4H,M),2.4-2.8(2H,M),1.8-2.4(2H,M),(部分被溶剂信号所遮蔽),1.4(9H,S),1.1-1.4(4H,M),0.7-1.0(3H,M)。
h.7-丁基-6-(2-((二甲基乙氧基)羰基)氨基-3-(三苯甲基硫代)丙基)-3-苯基)-4,5,6,7-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪
把中间产物7g(350毫克，0.50毫摩尔)溶于THf(3毫升)中，并加入1M的BH3/THf(7毫升，7.0毫摩尔)。反应在N2气氛中回流加热2小时。溶液冷却到室温，小心加入MeOH(8毫升)和乙酸(2毫升)的溶液以破坏过量试剂。粗产物在减压条件下浓缩并于3∶1乙酸∶H2中再溶解1小时。减压除去溶剂，剩余物用1％HOAc/ETOAc为洗脱液在硅胶上通过闪式色谱法纯化。合并产品部分、浓缩并干燥到100毫克(29％)。MH+687.5。
i.7-(2-氨基-3-硫代丙基)-8-丁基-3-苯基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物7)
在氮气氛下用Tfa∶H2O∶iPr3SiH/93∶5∶2(10毫升)混合物处理中间产物7h(100毫克，0.146毫摩尔)15分钟。减压除去溶剂，所得固体用4毫升的水研制8次，然后滤去。通过制备HPLC纯化滤液，得到45毫克(74％)冻干化合物7，在分析HPLC上是以1∶1的异构体混合物出现的。质谱345.2MH+，核磁共振(CD3CO2D),7.4-7.7(6H,M),6.0-6.4(1H,M),3.8-5.3(5H,M),3.0-3.4(2H,M),2.0-2.4(2H,M),1.2-1.7(4H,M),0.9-1.0(3H,M)。实施例8:2-(1-(N-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-N-甲基)-氨基戊基)-5-苯基咪唑(化合物8)
按照下面的方案3合成了化合物8:
a.5-(1-(甲氨基)戊基)-2-苯基咪唑
在氮气氛下把中间产物1a(1.50克，4.10毫摩尔)和LAH(50％油中，Alfa Products,Danvers,MA)(1.25克，16.4毫摩尔)在甲苯(10毫升)和THF(5毫升)中混合，混合物在55℃下加热4小时。混合物倾入EtOAc(100毫升)中，并把湿硅藻土加到混合物中。滤去固体，滤液用Na2SO4干燥并过滤。粗产品不用进一步纯化即可使用。
b.5-((N-(2-(((1,1二甲基乙氧基)羰基)氨基)-1-氧代-3-(三苯甲基硫代)丙基)-N-甲基)氨基)戊基)-2-苯基咪唑
把Boc-Cys(Trt)-OH(3.8克，8.2毫摩尔)以及DIC(643微升，4]毫摩尔)在二氯甲烷(50毫升)中混合并在室温搅拌0.5小时。加入中间产物8a(1.00克，41毫摩尔)，室温搅拌1小时。滤去固体并用二氯甲烷稀释于100毫升。溶液用饱和NaHCO3(3×50毫升)及饱和NaCl(1×50毫升)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。剩余物首先用二氯甲烷为洗脱液，然后用1％MeOH/CH2Cl2为洗脱液在硅胶(120克)上通过闪式色谱法纯化。合并产物部分并浓缩得到1.36克(46％)的产品。
c.2-(1-(N-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-N-甲基)氨基戊基)-5-苯基咪唑(化合物8)
把中间产物8b在氮气氛下溶于10毫升的试剂B中，溶液搅拌0.5小时。滤去固体，在氮流下除去溶剂。以乙醚研制剩余物，并以反相HPLC纯化，冻干后得到一种白色的固体化合物8(74.1毫克，49％)。质谱：347.2MH+。实施例9:2-((2-氨基-1-氧代-3-巯基丙基)氨基)甲基)-5-苯基噻唑-4-羰基-甲硫氨酸(化合物9)按照下述的方案4合成了化合物9:
a.2-氨基-3-氧代-3-苯基丙酸甲酯
如(O＇Donnel,et al.,J.Org.Chem.47:2663(1982)所述制备了席夫碱(10.0克，39.5毫摩尔)。将席夫碱溶于THF(60毫升)中并滴加到在氮气氛中冷却到-70℃的搅拌的KOtBu(4.43克，39.5毫摩尔)和THF(30毫升)的混合液中。溶液在-70℃下搅拌10分钟，阴离子转移到同样被冷却到-70℃的搅拌的苯甲酰氯(4.59毫升，39.5毫摩尔)的THF(50毫升)溶液中。溶液在-70℃下搅拌45分钟，在其中加入4N HCl(30毫升)抑制反应。减压去除THF，水层用50毫升的乙醚洗涤两次。溶液浓缩成固体，产品溶于MeOH(30毫升)中，滤去KCl。加入醚，到混浊点使产物结晶。滤出产物并干燥得到2.89克(32％)的产品，质谱194.1(MH+)。
b.2-(((1,1-二甲基乙氧基)羰基)甘氨酰)氨基-3-氧代-3-苯基丙酸甲酯
把Boc-Gly-OH(3.15克，18.0毫摩尔)及NMM(1.98ml,18毫摩尔)在THF(50毫升)中混合，溶液冷却到-20℃。把iBuCOCl(2.34毫升，18.0毫摩尔)加入溶液，混合物在-20℃下搅拌5分钟。把中间产物9a(4.13克，18.0毫摩尔)及NMM(1.98毫升，18.0毫摩尔)加到溶液中，溶液回升到室温同时剧烈搅拌。减压浓缩溶液，剩余物溶于EtOAc(50毫升)中并用H2O洗涤一次，用5％的柠檬酸溶液洗涤一次，再用饱和NaCl溶液洗涤一次。溶液用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。以1∶1/正己烷∶EtOAc为洗脱液在硅胶上通过闪式色谱法完成溶液的纯化。合并产物部分并浓缩，得到3.28克(52％)的产品。质谱373.2MNa+。
c.2-(((1,1-二甲基乙氧基))羰基)氨基)甲基-5-苯基噻唑-4-甲酸甲酯。
把中间产物9b(3.10克，8.86毫摩尔)以及Lawesson氏试剂(3.6克，8.9毫摩尔；Aldrich Chem.Co.,St.Louis,MO)在THF(30毫升)中混合并回流加热1小时。在氮流下去除溶剂，以1∶1/正己烷∶EtOAc为洗脱液在硅胶上通过闪式色谱法纯化剩余物。合并产物部分并在减压下浓缩，得到22.1克(72％)的产品。质谱349.0 MH+,371.2MNa+。
d.2-(((1,1-二甲基乙氧基)羰基)氨基)甲基-5-苯基噻唑-4-羰基-甲硫氨酸甲酯
把中间产物9c溶于甲醇(5ml)中，把溶于最少量水的NaOH(344毫克，8.61毫摩尔)的水溶液加到溶液中。溶液在40℃搅拌1小时，减压除去溶剂。剩余物于EtOAc(20毫升)与5％的柠檬酸(20毫升)之间分配。EtOAc层用MgSO4干燥，过滤，并减压浓缩。剩余物溶于THF(10毫升)中，把HOSu(330毫克，2.87毫摩尔)，HCl-Met-OMe(573毫克，2.87毫摩尔)，NMM(316毫克，2.87毫摩尔)及DCC(591毫克，2.87毫摩尔)加到溶液中。溶液在室温下搅拌过夜，过滤，并减压浓缩。剩余物以EtOAc(25毫升中)溶解，用5％柠檬酸洗涤一次，用饱和NaHCO3溶液洗涤两次。溶液用MgSO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到590毫克(43％)的产品。质谱502.2MNa+,480.4MH+。
e.2-(((2-(((1,1-二甲基乙氧基)羰基)氨基)-1-氧代-3-(三苯甲基硫代)丙基)氨基)甲基)-5-苯基噻唑-4-羰基甲硫氨酸甲酯
在氮气氛和室温下用试剂B(10毫升)处理中间产物9d(590毫克，1.23毫摩尔)15分钟。减压去除溶剂。剩余物用25毫升Et2O研制两次并倾析。剩余物溶于THF(10毫升)中，并加到由Boc-Cys(Trt)-OH(570毫克，1.23毫摩尔)。NMM(135微升，1.23毫摩尔)及iBuOCOCl(160微升，1.23毫摩尔)在-20℃下氮气氛下混合5分钟所产生的混合酐中。把NMM(135微升，1.23毫摩尔)加到混合物中，然后升到室温。减压以除去溶剂。剩余物以EtOAc(25毫升)溶解，并用25毫升H2O和25毫升5％的柠檬酸溶液洗涤。溶液用MgSO4干燥，浓缩，得到1.01克(100％)的白色泡沫胶。
f.2-(((2-氨基-1-氧代-3-巯基丙基)氨基)甲基)-5-苯基噻唑-4-羰基甲硫氨酸(化合物9)
把中间产物9e(250毫克，0.30毫摩尔)溶于MeOH(2毫升)中。把溶于最少量水中的NaOH(40毫克)加到溶液中。溶液在室温下搅拌过夜。减压除去溶剂，剩余物溶于试剂B(10毫升)中。在氮气氛和室温下搅拌15分钟，并减压浓缩。剩余物用反相HPLC纯化。合并产物部分并冻干，得到32毫克(20％)的化合物9，为白色固体。质谱469 MH+。实施例10：双-1,1＇-[2-氨基-3-(8-丁基-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪-6-基]-3-氧代]丙基二硫化物(化合物10)
把中间产物3e(300毫克，0.41毫摩尔)溶于甲醇中，加入H2O(0.3毫升)。加入碘(104毫克，0.41毫摩尔)的甲醇(3毫升)溶液，搅拌混合物2小时。减压除去溶剂，并用正己烷(2×5毫升)研制剩余物。剩余物溶于EtOAc(5毫升)中，并用5％Na2S2O3溶液(10毫升)洗涤。有机层用Na2SO4干燥，过滤，并浓缩成玻璃。
在N2气氛下用93∶5∶2/Tfa∶H2O∶iPr3SiH处理玻璃15分钟。减压除去溶剂，剩余物通过RPHPLC纯化并冻干。产出=48毫克(25％)。质谱775.4MH+,388.5M2H++,NMR(DMSO-d6),(大约是5∶1的构象体的混合物)8.5-9.0(3H,S),8.0-8.2(1H,d),7.5-7.7(1H,S),7.1-7.3(1H,t),7.0-7.1(1H,d),6.9-7.1(1H,t),5.2-5.6(1H,t),4.8-5.0(1H,t),3.6-4.7(1H,M),3.8-4.0(3H,S),3.2-3.5(2H,M),1.2-1.7(4H,M),0.8-1.0(3H,t)。实施例11:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-2-(2-甲氧基苯基)-8-(2-甲基丙基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物11)
化合物11以类似于实施例3的方法制备，但在步骤a中用Boc-L-亮氨酸代替Cbz(L)-正亮氨酸，并在步骤c中以9∶1/Tfa∶H2裂解Boc基团代替催化氢化。质谱389.1MH+。核磁共振(300MHz,DMSO-d6)8.6-8.8(3H,s),8.1-8.2(1H,d),7.9-8.1(1H,S),7.3-7.5(1H,t),7.1-7.3(1H,d),7.0-7.1(1H,T),5.9-6.1(1H,d),4.7-4.8(1H,S),4.5-4.7(1H,d),4.3-4.4(1H,d),4.1-4.3(1H,t),3.9-4.0(3H,S),3.8-4.0(1H,T),3.3-3.5(1H,t),2.8-3.1(2H,M),1.9-2.2(2H,M),1.7-1.8(1H,M),1.0-1.2(3H,f),0.8-1.0(3H,t)。实施例12：双-1,1＇-[2-氨基-3-(2-(2-甲氧基苯基)-8-(2-甲基丙基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪-7-基]-3-氧代]丙基二硫化物(化合物12)
化合物12通过类似于实施例10的方法制备，但用中间产物11e代替中间产物3e。质谱388.5M2H++,775.4MH+。核磁共振(300MHz,DMSO-d6)8.7-9.2(3H,S),8.1-8.2(1H,d),7.9-8.1(1H,S),7.3-7.5(1H,t),7.1-7.3(1H,d),7.0-7.2(1H,t),5.9-6.1(1H,d),4.8-5.0(1H,S),4.5-4.7(1H,d),4.3-4.5(1H,d),4.1-4.3(1H,t),3.8-4.1(1H,M),3.8-4.0(3H,S),3.2-3.5(2H,M),1.8-2.2(2H,M),1.7-1.9(1H,M),1.0-1.2(3H,d),0.8-1.0(3H,d)。实施例13:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-丁基-2-(2-乙氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物13)
a.中间产物3c(2.54克，8.50毫摩尔)溶于THF(15毫升)，在室温下滴加入1M甲硼烷的THF(34.0毫升，34.0毫摩尔)溶液，历时10分钟。溶液回流2小时，室温过夜，滴加4N的HCl(25毫升)溶液，所得混合物回流加热1小时。混合物浓缩至水液，仔细加入NaHCO3固体使成碱性，用EtOAc(2×25毫升)提取。EtOAc层用Na2SO4干燥，过滤，并浓缩成油。加入5％HCl溶液(25毫升)，混合物浓缩成固体。固体从甲醇和乙醚中重新结晶出来，得到2.72克(89.5％)的二盐酸盐。质谱286.2。熔点范围=242-247℃。
b.将中间产物13a(850毫克，2.37毫摩尔)于二氯甲烷和饱和NaHCO3溶液之间进行分配，二氯甲烷层用Na2SO4干燥，并过滤。加入1M的三溴化硼的二氯甲烷溶液，所得混合物回流加热1个小时。反应冷却后，倾入饱和NaHCO3溶液(25毫升)中。二氯甲烷层用Na2SO4干燥并过滤。加入二碳酸二叔丁酯(523毫克，2.40毫摩尔)，室温下搅拌混合物过周末。蒸去溶剂，以70∶30/正己烷∶乙酸乙酯为洗脱液用硅胶柱色谱法纯化所得的油。产出=700毫克(80％)，为清油状。质谱372.2(MH+)。
c.受保护的中间产物(13b)(600毫克，1.62毫摩尔)溶于THF(10毫升)中，在N2下室温中滴加NaH(60％在油中，120毫克，3.0毫摩尔)的THF(10毫升)溶液。反应搅拌15分钟，加入乙基碘(400微升，5.00毫摩尔)。把混合物室温搅拌过夜，然后减压浓缩。加入饱和的NaHCO3溶液(10毫升)，产物用乙醚(2×20毫升)提取。蒸发掉乙醚，剩余物以3∶1/正己烷∶乙酸乙酯为洗脱流用硅胶柱色谱法纯化。产出=410毫克(64％)的醚。质谱400.3(MH+)。熔点范围=103-109℃。
d.中间产物(13c)用90％的TFA/H2O(2毫升)处理0.5小时，浓缩以除去BOC基团。以分别类似于1e和1f的方法与Boc-(L)-Cys(Trt)-OH偶合和去保护，这样以得到化合物13。质谱403.2(MH+)。核磁共.振(300MHz,DMSO-d6)8.4-8.7(3H，宽s),7.9-8.0(1H,s),7.75-7.9(1H,d),7.15-7.3(1H,t),7.0-7.1(1H,d),6.85-7.0(1H,t),5.7-5.85(1H,m),4.65-4.8(1H，宽s),4.45-4.6(1H,d),4.3-4.4(1H,d,d),4.1-4.25(1H,m),3.75-3.95(1H,m),3.1-3.3(1H,m),2.8-3.1(2H,m),1.9-2.15(2H,m),1.2-1.5(4H,m),0.8-1.0(3H,t)。实施例14:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-丁基-2-(2-羟苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物14)。
a.将中间产物13a(179毫克，0.50毫摩尔)在二氯甲烷和饱和NaHCO3溶液之间进行分配，二氯甲烷层用Na2SO4干燥并过滤。加入1M的三溴化硼的二氯甲烷溶液，所得的混合物回流加热1小时。反应冷却后倾入饱和NaHCO3溶液(25毫升)中。二氯甲烷层用Na2SO4干燥，过滤，洗涤，得到脱甲基的粗产品，呈树胶状。这种物质不经纯化即可使用。
b.以分别类似于1e和1f的方法完成与Boc-(L)-Cys(Trt)-OH的偶合及去保护，得到化合物14。质谱403.2(MH+)。核磁共振(300MHz,DMSO-d6)8.55-8.8(3H，宽s),8.1-8.2(1H,d),7.85-7.95(1H,s),7.35-7.45(1H,t),7.15-7.25(1H,d),7.0-7.15(1H,t),5.85-6.0(1H,d,d),4.65-4.8(1H，宽s),4.55-4.7(1H,d,d),4.15-4.3(2H,q),4.1-4.2(1H,m),3.8-3.95(1H,m),3.3-3.5(1H,t),2.15-2.3(1H,m),1.95-2.15(1H,m),1.4-1.5(3H,t),1.2-1.5(4H,m),0.8-1.0(3H,t)。实施例15:2-(1-(N-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-N-甲基)-氨基戊基-5-(2-甲氧基苯基)咪唑(化合物15)
化合物15以类似于实施例8的方法制备，但在步骤1a中用2-溴-2＇-甲氧基苯乙酮替代2-溴苯乙酮。质谱377.1MH+,核磁共振(300MHz,CD3CO2D)7.8-7.9(1H,s),7.65-7.75(1H,d,d),7.4-7.55(1H,m),7.14-7.2(1H,d),7.05-7.14(1H,t),5.6-5.8(1H,t),4.8-4.9(1H,t),3.9-4.0(3H,s),3.25-3.35(3H,s),3.05-3.25(2H,m),2.2-2.4(2H,m),1.2-1.6(4H,m),0.8-1.0(3H,t)。实施例16：双-1,1＇- [2-(1-(N-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-N-甲氨基)戊基]-5-(2-甲氧基苯基)咪唑]二硫化物(化合物16)
化合物16以类似于实施例10的方法制备，但用化合物15替代中间产物3e。质谱：751.5MH+。核磁共振(300MHz,CD3CO2D)7.75-7.85(1H,s),7.65-7.75(1H,d,d),7.35-7.5(1H,m),7.1-7.2(1H,d),7.0-7.1(1H,t),5.5-5.6(1H,t),4.8-4.95(1H,t),3.9-4.1(3H,s),3.3-3.5(2H,m),3.2-3.3(1H,s),2.2-2.4(2H,m),2.0-2.2(乙酸酯信号)，1.2-1.6(4H,m),0.8-1.0(3H,t)。实施例17:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(2-甲基丙基)-2-(1-萘基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物17)。
a.1＇-萘乙酮(10.2克，60.0毫摩尔)和0.1毫升浓缩HCl溶于乙酸(100毫升)，搅拌滴加溴(9.6克，60.0毫摩尔)，历时3小时。减压浓缩反应，干燥至恒重。产品不需进一步纯化即可利用。
b.化合物17以类似于实施例1的方法制备，但用Cbz-(L)-亮氨酸替代Cbz-(L)-正亮氨酸，在步骤1a中用中间产物17a代替2-溴苯乙酮，并在步骤d中用1M的BH3/THF还原内酰胺中间产物。质谱409.2MH+。核磁共振(300MHz,DMSO-d6)8.5-8.9(3H,s),8.1-2.25(1H,d),7.9-8.15(3H,m),7.7-7.8(1H,d),7.5-7.7(3H,m),5.8-6.1(1H,d),4.7-4.85(1H,s),4.55-4.75(1H,d),4.2-4.45(2H,m),3.85-4.05(1H,m),3.0-3.4(10H,H2O),2.9-3.1(2H,q),1.9-2.2(1H,t),1.7-1.9(2H,m),1.0-1.2(3H,d),0.8-1.0(3H,d)。实施例18:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(1-甲基丙基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物18)。
化合物18以类似于实施例3的方法制备，但在步骤a中用的是Cbz-(L)-异亮氨酸代替Cbz-(L)-正亮氨酸，质谱389.3MH+。核磁共振(300MHz,DMSO-d6)8.5-8.9(3H,s),8.05-8.2(1H,d),7.9-8.05(1H,s),7.35-7.5(1H,t),7.15-7.25(1H,d),7.0-7.15(1H,t),5.65-5.85(1H,d),4.65-4.8(1H,s),4.5-4.65(1H,d,d),4.3-4.45(1H,d,d),3.9-4.0(3H,s),3.8-4.0(1H,m),3.2-3.7(8H,H2O),2.8-3.0(2H,m),2.2-2.4(1H,m),1.4-1.6(1H,m),1.15-1.35(1H,m),1.0-1.15(3H,d),0.8-0.95(3H,t)。实施例19：双-1,1＇- 7-[2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基-(2-(1-萘基)-8-(2-甲基丙基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪-7-基)二硫化物(化合物19)。
化合物19以类似于实施例10的方式制备，只是用化合物17替代了中间产物3e。质谱：815.5MH+，核磁共振(300MHz,DMSO-d6)8.7-9.2(3H,s),8.15-8.3(1H,s),8.0-8.1(2H,m),7.85-8.0(1H,s),7.7-7.8(1H,d),7.5-7.7(3H,m),5.8-6.0(1H,s),4.8-5.0(1H,s),4.5-4.54(1H,d),4.4-4.5(1H,d),4.2-4.4(1H,t),3.9-4.1(1H,t),3.0-3.9(12H,m H2O遮蔽了信号),2.0-2.2(1H,t),1.7-2.0(2H,m),1.0-1.2(3H,d),0.85-1.0(3H,d)。
实施例20：双-1,1＇- [7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-2-(甲氧基苯基)-8-(1-甲基丙基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪]二硫化物(化合物20)。
化合物20以类似于实施例10的方法制备，但用化合物18代替中间产物3e。质谱775.5MH+。核磁共振(300MHz,DMSO-d6)8.7-9.0(3H,s),8.05-8.15(1H,d),7.9-8.1(1H,s),7.35-7.5(1H,t),7.15-7.25(1H,d),7.0-7.15(1H,t),5.65-5.85(1H,d),4.8-5.0(1H,s),4.45-4.6(1H,d),4.35-4.5(1H,d),4.2-4.35(1H,m),3.8-4.1(1H,m),3.8-3.9(3H,s),3.4-3.8(10H,H2O),3.2-3.4(2H,d),2.2-2.4(1H,m),1.4-1.65(1H,m),1.15-1.35(1H,m),1.0-1.15(3H,d),0.8-0.95(3H,t)。实施例21:S-(二甲基乙基)-S＇-(2-氨基-3-氧代-3(8-丁基-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪-7-基]丙基]二硫化物(化合物21)
化合物21以类似于实施例3的方法制备，但在步骤e中用Fmoc-(L)-Cys(tBus-)OH，以及用三(氨基乙基)胺(1.5毫升/毫摩尔)的二氯甲烷(10毫升/毫摩尔)溶液在室温下处理0.5小时以完成最终去保护。产物用制备反相柱色谱纯化以提供纯化合物21。质谱477.3MH+，核磁共振(300MHz,DMSO-d6,90℃)8.0-8.1(1H,d),7.4-7.5(1H,s),7.1-7.3(1H,t),7.0-7.1(1H,d),6.9-7.0(1H,t),5.4-5.55(1H,s),4.3-4.7(1H,m),4.1-4.3(1H,d),3.8-4.1(7H,m),3.0-3.2(2H,m+H2O),2.8-2.9(1H,d,d),2.1-2.3(2H,m),1.7-2.1(2H,m),1.2-1.7(13H,m),0.8-1.0(3H,t)。实施例22:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-丁基-2-(2-甲基丙基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物22)
a.把2＇-甲基苯乙酮(25.0克，186毫摩尔)溶于冰乙酸(250毫升)中，并加入浓盐酸(250μL)，随后滴加溴(9.6毫升，186毫摩尔)，历时15分钟。混合物搅拌3小时，减压浓缩。剩余物用乙醚吸收，用饱和NaHCO3溶液洗涤。醚层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到38.0克(96％)粗产物2-溴-2＇-甲基苯乙酮，不需进一步纯化即可使用。
b.化合物22以类似于实施例3的方法制备，但在步骤a中用2-溴-2L甲基苯乙酮替代了2-溴-2＇-甲氧基苯乙酮。质谱373.2MH+，核磁共振(300MHz,DMSO-d6)8.6-8.8(3H,s),7.9-8.0(1H,s),7.6-7.75(1H,d),7.3-7.5(3H,m),5.8-6.0(1H,d,d),4.7-4.8(1H,s),4.55-4.7(1H,d),4.3-4.44(1H,d,d),4.1-4.3(1H,m),3.8-4.0(1H,m),3.4-3.55(1H,t),2.85-3.1(2H,m),2.4-2.5(3H,s),2.0-2.3(2H,m),1.2-1.6(4H,m),0.8-1.0(3H,t)。实施例23：双-1,1＇-[7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-丁基-2-(2-甲基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]哌嗪]二硫化物(化合物23)
化合物23以类似于实施例10的方法制备，但用化合物23代替中间产物3e。质谱743.4MH+，核磁共振(300MHz,DMSO-d6,90℃)7.6-7.8(1H,d),7.2-7.3(1H,s),7.0-7.2(3H,m),5.3-5.6(1H，宽s),4.3-4.8(1H,宽s),3.5-4.2(4H,m),3.0-3.3(2H，宽s),2.8-3.0(1H,m),2.4-2.5(3H,s),2.1-2.4(2H，宽s),1.7-2.1(2H,m),1.2-1.7(4H,m),0.8-1.0(3H,t)。实施例24:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(1,1-二甲基乙基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物24)
化合物24以类似于实施例3的方法制备，但在步骤a中用Boc-(L)-亮氨酸代替Cbz-(L)-正亮氨酸，以及在步骤c中用三氟乙酸处理0.5小时以达成去保护。质谱389.3MH+。核磁共振(300MHz,DMSO-d6),8.5-8.8(3H，宽s),7.95-8.1(1H,d),7.9-8.0(1H,s),7.3-7.5(1H,t),7.1-7.25(1H,d),7.0-7.15(1H,t),5.55-5.7(1H,s),4.65-4.8(1H，宽s),4.5-4.6(1H,m),4.35-4.5(1H,m),4.1-4.3(1H,m),3.9-4.1(1H,m),3.85-3.95(3H,s),3.3-3.4(1H,t),2.7-34.1(2H,m),1.0-1.2(9H,s)。实施例25:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(1-甲基丙基)-2-(2-(苯基甲氧基)苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物25)
a．中间产物18d(3.36克，11.8毫摩尔)溶于10毫升二氯甲烷中，并滴加1M的三溴化硼的二氯甲烷(47毫升)溶液。混合物回流加热2小时，冷却后倾入饱和NaHCO3溶液(25毫升)中。水层用二氯甲烷(60毫升)提取3次，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩至30毫升。加入二碳酸二叔丁酯(2.57克，11.8毫摩尔)，反应在室温下搅拌过夜。粗产品用1∶1/乙酸乙酯∶正己烷为洗脱液用硅胶柱色谱法纯化。得到3.31克(75％)的白色固体产品。
b．中间产物25a(850毫克，2.29毫摩尔)溶于含有氢化钠(9.61毫克，2.4毫摩尔)的THF(20毫升)中，混合物在室温及N2下用苄基溴(292微升，2.4毫摩尔)处理。反应在室温下搅拌过夜并浓缩。剩余物于二氯甲烷(30毫升)与H2O(15毫升)之间进行分配。二氯甲烷层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。从乙醚和正己烷中结晶，得到887毫克(83.7％)的产品。
c．N2下室温用90％Tfa/H2O(50毫升)对中间产物25b(887毫克，1.92毫摩尔)处理15分钟。减压除去溶剂，剩余物二氯甲烷与饱和NaHCO3溶液之间进行分配。二氯甲烷层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗中间产物以类似于实施例1的步骤1e的方式进行乙酰化，以类似于实施例1步骤f的方式去保护。质谱465.3MH+。核磁共振(300MHz,DMSO-d6)8.3-8.8(3H，宽s),8.0-8.1(1H,d,d),7.8-8.0(1H,s),7.45-7.55(2H,m),7.3-7.45(4H,m),7.15-7.3(1H,d),7.0-7.15(1H,t),5.6-5.8(1H,d),5.3-5.4(2H,s),4.65-4.8(1H，宽s),4.45-4.6(1H,m),4.25-4.4(1H,m),4.1-4.25(1H,m),3.75-3.95(1H,m),3.25-3.4(1H,t),2.8-3.0(2H,m),2.15-2.4(1H,m),1.4-1.6(1H,m),1.1-1.35(1H,m),0.95-1.1(3H,d),0.8-1.0(3H,t)。实施例26:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(环己基乙基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物26)。
a.H-(L)-Phe-OH(10.0克，60.6毫摩尔)在乙酸(60毫升)和5％HCl水溶液(60毫升)中形成的水溶液用PtO2(430毫克)氢化直到不再消耗氢为止。减压除去溶剂，剩余物溶于甲醇(50毫升)和水(20毫升)中。在剧烈搅拌下加入10％的NaOH溶液使pH=4.4。冷却溶液，产物滤出，用水洗涤。
b.粗中间产物26a(60.6毫摩尔)悬浮于100毫升含有K2CO3(8.36克，60.6毫摩尔)的100毫升水中，加入Cbz-Osu(15.1克，60.6毫摩尔)的CH3CN(150毫升)溶液并在室温下剧烈搅拌45分钟。减压蒸馏掉CH3CN，用乙醚洗涤水层。用浓缩HCl使水层酸化到pH=1，用乙酸乙酯(2×50毫升)提取。乙酸乙酯层用Na2SO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到17.27克(93％)的Cbz-(L)-环己基丙氨酸(26b)。
c.化合物26以类似于实施例3的方法制备，但在步骤a中用Cbz-(L)-环己基丙氨酸(26b)替代Cbz-(L)-正亮氨酸。质谱429.3(MH+)。核磁共振(300MHz,DMSO-d6)8.6-8.9(3H,s),8.1-8.3(1H,d,d),7.8-8.1(1H,s),7.35-7.5(1H,m),7.15-7.25(1H,d),7.05-7.15(1H,t),6.0-6.1(1H,t),4.7-4.8(1H,m),4.55-4.7(1H,m),4.3-4.45(1H,m),4.1-4.3(1H,m),3.9-4.0(3H,s),3.8-3.95(1H,m),3.35-3.5(1H,t),2.8-3.1(2H,m),2.05-2.2(1H,d),1.9-2.1(2H,t),0.8-1.7(10H,m)。实施例27:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-2-(2-甲氧基苯基)-8-(1-甲基乙基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物27)。
化合物27以类似于实施例3的方式制备，但在步骤a中用Cbz-(L)-缬氨酸代替Cbz-(L)-正亮氨酸。质谱375.1MH+。核磁共振(300MHz,DMSO-d6)8.6-8.8(3H，宽s),8.1-8.3(1H,d),8.0-8.1(1H,s),7.35-7.5(1H,t),7.15-7.25(1H,d),7.05-7.15(1H,t),5.6-5.8(1H,d),4.65-4.8(1H，宽s),4.5-4.7(1H,m),4.3-4.45(1H,m),4.1-4.3(1H,m),3.9-4.0(3H,s),3.8-3.95(1H,m),3.35-3.5(1H,t),2.8-3.05(2H,m),2.5-2.7(1H,m),1.1-1.2(3H,d),0.9-1.05(3H,d)。实施例28：双-1,1＇-[7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-2-(2-甲氧基苯基)-8-(1-甲基乙基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪]二硫化物(化合物28)
化合物28以类似于实施例10的方法制备，但用化合物27代替中间产物3e。质谱747.4MH+。核磁共振(300MHz,DMSO-d6)8.8-9.0(3H,宽s),8.05-8.2(1H,d),7.9-8.1(1H,s),7.35-7.5(1H,t),7.15-7.25(1H,d),7.0-7.15(1H,t),5.55-5.75(1H，宽s),4.8-5.0(1H，宽s),4.45-4.65(1H,m),4.35-4.5(1H,m),4.2-4.35(1H,m),3.85-3.95(3H,s),3.9-4.05(1H,m),3.2-3.4(2H,d),2.45-2.65(1H,m部分被溶剂遮蔽),1.05-1.2(3H,d),0.9-1.05(3H,d)。实施例29:7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-丁基-2-(2-羟基-6-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢[1,2a]吡嗪(化合物29)。
a．把溴(3.19毫升，61.9毫摩尔)滴加到2＇,6＇-二甲氧基苯乙酮(11.15克，61.9毫摩尔)和浓HCl(100微升)于乙酸(50毫升)的混合物中历时20分钟。反应在室温下搅拌2小时，减压蒸去溶剂。剩余物溶于乙酸乙酯(100毫升)中，并用饱和的NaHCO3溶液(100ml)和饱和NaCl溶液(100毫升)洗涤。乙酸乙酯层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩或油状(14.9克)。产品从乙酸乙酯和正己烷中结晶，得到4.87克(30％)的2-溴-2＇,6＇-二甲氧基苯乙酮(29a)。
b．化合物29以类似于实施例3的方法制备，但在步骤a中用2-溴-2＇,6＇-二甲氧基苯乙酮(29a)代替2-溴代苯乙酮。在三氟化硼还原内酰胺29d时一个甲醚基团被有效地裂解下来。质谱405.3。实施例30：双-1,1＇-[7-(2-氨基-1-氧代-3-硫代丙基)-8-(1,1-二甲基乙基)-2-(2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2a]吡嗪]二硫化物(化合物30)
化合物30以类似于实施例10的方法制备，但用化合物24代替中间产物3e。质谱775.5(MH+)。核磁共振(300MHz,DMSO-d6)8.7-9.1(3H,宽s),8.0-8.1(1H,d),8.0-8.1(1H,d),7.8-8.0(1H,s),7.3-7.5(1H,t),7.1-7.2(1H,d),7.0-7.1(1H,t),5.55-5.65(1H,s),4.8-5.0(1H,s),4.4-4.6(2H,m),4.2-4.4(1H,m),3.9-4.1(1H,m),3.8-4.0(3H,s),3.2-3.4(2H,d),1.0-1.2(9H,s)。实施例31:2-(2-甲氧基苯基)-8-(1-甲基丙基)-5,6,7,8-四氢-7-((噻唑烷-4-基)羰基)咪唑并[1,2a]吡嗪(化合物31)
化合物31以类似于实施例18的方法制备，但在步骤e中用Boc-(L)-硫代脯氨酸进行偶合。质谱401.3(MH+)。核磁共振(300MHz,DMSO-d6,90℃)8.0-8.2(1H,d),7.85-8.0(1H,s),7.3-7.5(1H,t),7.15-7.25(1H,d),7.05-7.15(1H,t),5.7-5.85(1H,d),4.75-5.0(1H,s),4.45-4.7(1H,m),4.3-4.45(2H,m),4.15-4.3(2H,m),3.9-4.0(3H,s),3.8-3.95(1H,m),3.4-3.6(1H,t),3.1-3.25(1H,m),2.25-2.45(1H,m),1.4-1.6(1H,m),1.15-1.4(1H,m),1.0-1.23(3H,t),0.8-1.0(3H,t)。
法呢基转移酶抑制剂对人类肿瘤细胞的抗增殖活性
用A-427肺癌(表达变异的Ki-ras基因)，HT-29直肠腺癌(表达野生型的ras基因)，Calu-1肺癌(表达变异的Ki-ras基因)，及MTA-PaCa前列腺癌的细胞(表达变异的Ki-ras基因)作了试验。这些肿瘤细胞在第0天接种到96孔的板上，在5％的CO2气氛中保温37℃。在第1天，用范围在0到100微摩尔/升的浓度增加的测试化合物处理细胞96小时。最后，根据在导致甲形成的存活细胞中用线粒体脱氢酶对四唑盐WST-1的裂解(细胞增殖试剂WST-1试剂盒，Boehringer Mannheim,Germany)通过比色试验来评价细胞增殖量。这些试验一式八份，重复二次。结果示于表Ⅰ，表明了与不加测试化合物的对照细胞相比抑制增殖所需的测试化合物的浓度范围(微摩尔/升)。
表Ⅰ化合物 细胞类型 A-427 HT-29 Calu-1 MIA PaCa-2 3 6.25-12.5 12.5 10-30 12.5-25 4 12.5-25 50-100 10-30 5 6.25-25 50-100 12.5-25 6 50-100 8 12.5-25 25.50 25-50 10 3.12-125 25-50 3-10 11 6.25-12.25 50-100 30-100 12 3.12-6.25 50 10-30 13 6.25-12.5 25-50 12.5-50 14 3.12-12.5 50-100 10-30 15 6.25-12.5 25-50 12.5-25 16 3.12-12.5 25-50 12.5-25 17 6.25-12.5 6-12.5 12.5-25 18 6.25 50-100 12.5-25 19 0.78-1.56 6.25-12.5 20 0.78 50-100 6.25-12.5 12.5 21 12.5-25 25-50 25-50 22 6.25-12.5 12.5-25 23 3.12-6.25 12.5-25 6.25-12.5 24 6.25-12.5 50-100 25-50 25 0.78-1.56 12.5-25 12.5-25 6.25-12.5 26 0.39-1.56 12.5 12.5-25 6.25-12.5 27 6.25 50-100 12.5-25 28 12.5-25 50-100 29 3.12-6.25 25-50 6.25-12.5 30 3.12-6.25 25-50 12.5-25 31 25-50 其它具体表现
众所周知所说明的发明及前面的详细说明都是为了描述而不是限制发明的范围，发明由所附的权利要求的范围来限定。其它特性、优点及修饰都在权利要求范围之内。