用作支架涂覆剂的HYPOESTOXIDES、其衍生物和激动剂.pdf

本发明提供治疗再狭窄患者的方法。所述方法包括向血管中传送涂覆有hypoestoxide，hypoestoxide衍生物或hypoestoxide激动剂化合物的支架。所述方法进一步包括给服化学治疗剂与向血管传送涂覆有hypoestoxide，hypoestoxide或hypoestoxide激动剂化合物的支架的结合。所述化学治疗剂可以涂覆在支架上或系统地给服。

1.  一种防止和/或治疗再狭窄的方法，包括：
向患者的血管腔传送血管内支架，其中所述支架结合有有效量的下式化合物：


2.  如权利要求1的方法，其中R选自：
a)H或乙酰基，
b)P(O)(OH)₂，
c)P(O)(OH)(OM)，其中M选自碱金属盐和碱土金属盐，
d)P(O)OM₂其中M各自独立地选自碱金属盐和碱土金属盐，
e)具有0～6个双键的1～12个碳原子的烷基，所述烷基选自取代的，未取代的，直链和支链的烷基，
f)(CH₂)_n吗啉，其中n＝1-4，g)吗啉甲基苯基，邻氨苯基或邻羟苯基，
h)(CH₂)_nCOOR₂其中n＝1-4，R₂各自选自H，碱金属盐，碱土金属盐，NH4⁺和N+(R₃)₄其中R₃各自独立地选自H和1～4个碳原子的烷基，和
i)COR₁其中R₁选自H，(CH₂)_nCH₃，其中n＝0-6，(CH₂)_nCOOR₂其中n＝1-4和R₂各自选自H，碱金属盐，碱土金属盐，NH4⁺和N+(R₃)₄，和(CH₂)_nN+(R₃)₄，其中n＝1-4和R₃各自独立地选自H、1～4个碳原子烷基。

3.  如权利要求1的方法，其中R选自H和乙酰基。

4.  如权利要求1的方法，其中R是乙酰基。

5.  如权利要求3的方法，其中所述支架涂覆有0.1微克～1000微克的化合物。

6.  如权利要求3的方法，其中所述支架涂覆有100～200微克的化合物。

7.  如权利要求6的方法，其中所述化合物被引入水凝胶制剂。

8.  一种防止和/或治疗再狭窄的方法，包括：
向患者的血管腔传送血管内支架，其中所述支架结合有有效量的下式化合物：

和；
给服至少一种化学治疗剂。

9.  如权利要求8的方法，其中R选自：
a)H或乙酰基，
b)P(O)(OH)₂，
c)P(O)(OH)(OM)，其中M选自碱金属盐和碱土金属盐，
d)P(O)OM₂其中M各自独立地选自碱金属盐和碱土金属盐，
e)具有0～6个双键的1～12个碳原子的烷基，所述烷基选自取代的，未取代的，直链和支链的烷基，
f)(CH₂)_n吗啉，其中n＝1-4，
g)吗啉甲基苯基，邻氨苯基或邻羟苯基，
h)(CH₂)_nCOOR₂其中n＝1-4，R₂各自选自H，碱金属盐，碱土金属盐，NH4⁺和N+(R₃)₄其中R₃各自独立地选自H和1～4个碳原子的烷基，或
i)COR₁其中R₁选自H，(CH₂)_nCH₃，其中n＝0-6，(CH₂)_nCOOR₂其中n＝1-4和R₂各自选自H、碱金属盐、碱土金属盐，NH4⁺和N+(R₃)₄，和(CH₂)_nN+(R₃)₄，其中n＝1-4和R₃各自独立地选自H和1～4个碳原子烷基。

10.  如权利要求8的方法，其中R选自H和乙酰基。

11.  如权利要求8的方法，其中R是乙酰基。

12.  如权利要求10的方法，其中所述支架涂覆有0.1微克～1000微克的化合物。

13.  如权利要求10的方法，其中所述支架涂覆有100～200微克的化合物。

14.  如权利要求13的方法，其中所述化合物被引入水凝胶制剂。

15.  如权利要求8的方法，其中所述至少一种化学治疗剂选自雷帕霉素、紫杉酚、长春新碱、紫杉醇、秋水仙碱、地塞米松和酪氨酸磷酸化抑制剂。

16.  如权利要求15的方法，其中所述至砂一种化学治疗剂被涂覆在所述在架上。

17.  如权利要求16的方法，其中所述涂覆通过汽相沉积实现。

18.  如权利要求15的方法，其中所述至少一种化学治疗剂是系统地给服的。

19.  如权利要求13的方法，其中所述至少一种化学治疗剂选自雷帕霉素、紫杉酚、长春新碱、紫杉醇、秋水仙碱、地塞米松和酪氨酸磷酸化抑制剂。

20.  如权利要求19的方法，其中所述至少一种化学治疗剂被涂覆在所述支架上。

21.  如权利要求19的方法，其中所述至少一种化学治疗剂是系统地给服的。

用作支架涂覆剂的HYPOESTOXIDES、其衍生物和激动剂
该申请根据35U.S.C§119要求2003年6月23日提交的美国临时申请60/480,316的优先权，其内容全部引入本发明作为参考，如全部记载一样。
发明领域
本发明涉及从血管内支架传送双萜化合物。尤其是，本发明中公开的是hypoestoxides、其衍生物和激动剂，其从支架体的微孔直接地释放或混合或结合到应用于支架的聚合物涂层，以抑制新内膜(neointimal)组织增生，并从而防止再狭窄。
相关申请的交叉引用
明确地引入本发明作为参考的是：美国专利5,801,193，5,994,328和6,242,484，和共同未决的申请，美国申请09/006,946；09/007,308；09/298,653；和PCT WO98/46222。
背景技术
冠状动脉病(CAD)是影响供给心肌养分的血管的疾病。CAD源于动脉粥样硬化，冠状动脉内壁上脂肪物质的累积。冠状动脉被这些蜡状的″脂肪″堵住或变窄的时候，血流受限，心肌不能得到足够的氧，这可导致心脏病发作和甚至死亡。多数情况下，心脏不能得到足够氧的时候可能发生心绞痛(胸痛)。CAD风险随着血液中总胆固醇和低密度脂蛋白(LDL)水平的升高而增加，但是当高密度脂蛋白(HDL)增加的时候风险降低。在美国，心血管疾病均是两性死亡的主要原因，占每年死亡数的约三分之一；American Heart Association估计超过1200万人具有某种形式的CAD病史。(American Heart Association，FightingHeart Disease and Stroke，2000，Heart and Stroke Statistical Update，p.5)。
动脉粥样硬化的问题可能不限于心脏。具有CAD的病人也可具有动脉床的动脉粥样硬化，包括外周动脉阻塞性疾病(PAOD)，肾动脉狭窄(RAS)和脑血管疾病(CBVD)。这些并存疾病(comorbidity)导致中风、心肌梗死(MI)，心血管死亡和肾衰竭风险的增加。
由于动脉粥样硬化变窄的血管据称已经经历狭窄症。术语″再狭窄″指在采取措施减少之前的变窄之后的血管再变窄。
经皮冠状动脉成形术(PTCA)是用于打开堵塞动脉的一般方法。在PTCA期间放置气球膨胀支架或自膨胀支架是主导的最小侵入治疗选择方案。支架用于治疗新的损害或堵塞，和其中已经发生再狭窄的区域。
PTCA主要的限制是PTCA后血管的闭塞问题，在PTCA之后立即(急性的闭塞)和长期(再狭窄)都会发生。血管成形术之后的再狭窄是更平缓的过程，并包括伴随着从粘附血小板释放细胞衍生生长因子的亚临界血栓的初始形成，和随后的内膜平滑肌细胞的增生和有助于血管增生的炎性细胞的局部渗透。重要的是，注意到所述的多个过程，包括血栓，细胞增殖，细胞迁移并发炎，每个看起来都促进再狭窄过程，和许多这些相同的过程促进狭窄症的初始过程。因此，涂覆在支架上的抗炎和抗增生药，看起来是治疗狭窄症和再狭窄各方面的最有前景的方法(Hong，MK，et al.，Paclitaxel-coatedGianturco-RoubinII(GRII)stents reduce neointimal hyperplasia in aporcine coronary in-stent restenosis model，Coronary Artery Disease，2001，Vol.12，No.6，pp.513-515)。
已经检验了在再狭窄中假定具有抗增生作用的很多药剂，并在实验动物模式中显示出一定的活性。在动物模型中，一些已经显示出能成功地降低内膜增生程度的试剂包括：肝素和和肝素片段(Clowes，A.和Kamovsky，M，Nature，1977，Vol.265，pp.25-26)，秋水仙素(Currier，J.，et al.，Circulation，1989，Vol.80，pp.11-66)，紫杉醇(Sollott，S.，et al.，J.Clin.Invest.，1995，Vol.95，pp.1869-1876)，环胞霉素A(Jonasson，L，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.，1988，Vol.85，p.2303)和雷帕霉素(Marx，S.，et al.，Circ.Res.，1995，Vol.76，pp.412-417)。血管成形术后再狭窄是包括很多的交互作用机理的多因素过程。这意味着具有单一作用机理的试剂对于有效地防止再狭窄可能是不可行的。因此，需要多方面的方法以治疗和防止PTCA之后的再狭窄。
发明内容
因为hypoestoxides已经显示出分别具有抗炎的和抗增生两种活性(Ojo-Amaize，E.，et al.，Cellular Immunology，2001，Vol.209，No.2，pp.149-157；Ojo-Amaize，E.，et al.，Cancer Research，2002，Vol.62，pp.4007-4014)，预期洗脱hypoestoxide的支架在狭窄和再狭窄的治疗和预防中会非常有效。本发明提供用与hypoestoxides、其衍生物和激动剂结合的支架，治疗血管狭窄患者比如人类的方法，使得从而改善血管狭窄，并以这样的方法有效地预防再狭窄。支架药物组合可得到比单独使用任一方法可得到的效果更好的治疗效果。药物可以以治疗剂量系统地给服，或可选择地，可以通过结合在生物可降解的或生物稳定的聚合物涂层之内，而结合到支架的表面。因此，所述方法包括传送支架到易于狭窄或再狭窄的冠状动脉，引入并从所述支架的表面处释放有效量的式I化合物：

其中R为：
a)H或乙酰基，
b)P(O)(OH)₂，
c)P(O)(OH)(OM)，其中M选自碱金属盐和碱土金属盐，
d)P(O)OM₂其中M各自独立地选自碱金属盐和碱土金属盐，
e)具有0～6个双键的1～12个碳原子的烷基，所述烷基选自取代的，未取代的，直链和支链的烷基，
f)(CH₂)_n吗啉，其中n＝1-4，
g)吗啉甲基苯基，邻氨苯基或邻羟苯基，
h)(CH₂)_n COOR₂其中n＝1-4，R₂各自选自H，碱金属盐，碱土金属盐，NH4⁺和N+(R₃)₄其中R₃各自独立地选自H和1～4个碳原子的烷基，或
i)COR₁其中R₁选自H，(CH₂)_nCH₃，其中n＝0-6，(CH₂)_nCOOR₂其中n＝1-4和R₂各自选自H，碱金属盐，碱土金属盐，NH4⁺和N+(R₃)₄，和(CH₂)_nN+(R₃)₄，其中n＝1-4和R₃各自独立地选自H、1～4个碳原子烷基，其中有效量是足以改善再狭窄的至少一个方面的量，和其中所述化合物可以单独使用或与化学治疗剂结合使用。
发明的详细说明
用于本发明中时，术语″患者″或″受治疗者″用于表示人类，和其他的动物。术语″改善″表示改善，减少严重的程度或减轻。
本发明提供治疗再狭窄患者的方法。一个方法中，有效量的hypoestoxide，hypoestoxide衍生物或其激动剂涂覆在支架上，其具有适当的释放动力学，其量足以改善如上定义的再狭窄的至少一个方面。所述方法包括传送涂覆有hypoestoxide，hypoestoxide衍生物或其激动剂的支架到血管，比如可能易于狭窄或再狭窄的冠状动脉。根据现有技术已知的方法通过PTCA完成支架的传送。因此，所述支架涂覆有有效量的式I的化合物：

其中R为：
a)H或乙酰基，
b)P(O)(OH)₂，
c)P(O)(OH)(OM)，其中M选自碱金属盐和碱土金属盐，
d)P(O)OM₂其中M各自独立地选自碱金属盐和碱土金属盐，
e)具有0～6个双键的1～12个碳原子的烷基，所述烷基选自取代的，未取代的，直链和支链的烷基，
f)(CH₂)_n吗啉，其中n＝1-4，
g)吗啉甲基苯基，邻氨苯基或邻羟苯基，
h)(CH₂)nCOOR₂其中n＝1-4，R₂各自选自H，碱金属盐，碱土金属盐，NH4⁺和N+(R₃)₄其中R₃各自独立地选自H和1～4个碳原子的烷基，或
i)COR₁其中R₁选自H，(CH₂)_nCH₃，其中n＝0-6，(CH₂)_nCOOR₂其中n＝1-4和R₂各自选自H，碱金属盐，碱土金属盐，NH4⁺和N+(R₃)₄，和(CH₂)_nN+(R₃)₄，其中n＝1-4和R₃每各自独立地选自H、1～4个碳原子烷基，
其中有效量是足以改善再狭窄的至少一个方面的量。
在治疗再狭窄患者的另一个方法中，将有效量的hypoestoxide，hypoestoxide衍生物，或其激动剂涂覆在支架上，其具有适当的释放动力学，其量足以改善如上定义的再狭窄的至少另一个方面。所述方法也包括用一种或多种标准的化学治疗剂治疗，包括但不以任何方式限于，雷帕霉素，紫杉酚，长春新碱，紫杉醇，秋水仙碱，地塞米松和酪氨酸磷酸化抑制剂(tyrphostin)。所述方法包括将涂覆有hypoestoxide，hypoestoxide衍生物或其激动剂的支架传送到血管，比如可能易于狭窄或再狭窄的冠状动脉。根据现有技术中已知的方法通过PTCA完成支架的传送。可以通过将化学治疗剂涂覆在支架上而共同给药，或通过以治疗剂量系统地给服他们，而共同给服。用化学治疗剂对支架的涂覆可以通过根据现有技术中已知的汽相沉积方法实现。系统地给服的化学治疗剂的治疗剂量可以基于选择的化学治疗剂为0.1微克～1000毫克。因此，所述支架涂覆有有效量的式I的化合物：

其中R为：
a)H或乙酰基，
b)P(O)(OH)₂，
c)P(O)(OH)(OM)，其中M选自碱金属盐和碱土金属盐，
d)P(O)OM₂其中M各自独立地选白碱金属盐和碱土金属盐，
e)具有0～6个双键的1～12个碳原子的烷基，所述烷基选自取代的，未取代的，直链和支链的烷基，
f)(CH₂)_n吗啉，其中n＝1-4，
g)吗啉甲基苯基，邻氨苯基或邻羟苯基，
h)(CH₂)nCOOR₂其中n＝1-4，R₂各自选自H，碱金属盐，碱土金属盐，NH4⁺和N+(R₃)₄其中R₃各自独立地选自H和1～4个碳原子的烷基，或
i)COR₁其中R₁选自H，(CH₂)_nCH₃，其中n＝0-6，(CH₂)_nCOOR₂其中n＝1-4和R₂各自选白H，碱金属盐，碱土金属盐，NH4⁺和N+(R₃)₄，和(CH₂)_nN+(R₃)₄，其中n＝1-4和R₃各自独立地选自H和1～4个碳原子烷基，
其中有效量是足以改善再狭窄的至少一个方面的量。
本发明优选的化合物是式I的化合物，其中R＝H和R＝乙酰基(hypoestoxide)。
可以通过在动物模型中比较它们的活体内活性确定式I的化合物的有用剂量。将猪及其他动物中的有效剂量外推到人类的方法是现有技术已知的；例如，见美国专利4,938,949。
如下制备涂覆有根据本发明的hypoestoxide化合物的支架。根据本发明可以使用现有技术已知的任何气球膨胀支架，包括但不以任何方式限于，塑料或不锈钢支架(其具体的商标名包括但不以任何方式限于，CYPHER^TM和Gianturco-ToubinII)。六个血管内支架的三个涂覆有浸渗Hypoestoxide(HE)的水凝胶制剂，其HE释放动力学是预定的，以应在至少为十四天的周期内是适当的。见下表1，％交联，组成，和HE释放动力学结果。
表1：对于HE/水凝胶制剂的HE释放动力学
*样品ID           ％交联剂  组成HE的HPLC结果(ng/ml)
080703C.............12.4    0.46869gHEMA    1
天.......浸透
                            0.0212gPABA     3
天......浸透
                            0.0033gCQ       7
天......浸透
                            0.00015gHE      14
天........7,970
                            0.0702gTDGMA
选择的制剂基于水凝胶，其随着时间的流逝给出最大的HE释放，但是足够坚固以经得起支架的重复膨胀和收缩。其他的制剂是可能的，包括具有0％-50％交联的那些。所述制剂包括2-甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)，其在使用之前通过分馏蒸馏纯化并在4℃存储。使用之前通过分馏蒸馏纯化三亚乙基二甲基丙烯酸酯(TGDMA)并在4℃存储。使用的缩写为PABA的4-(二甲基氨)-2-乙基己基苯甲酸(aka2-乙基己基二甲基PABA)和樟脑醌(CQ)可商业得到。蓝光源(非紫外线牙科类型)用来引发聚合反应(Omega#750光固化单元)。
所有的工作在100级片状防护罩中进行。通过浸涂将制剂080703C施加到每个支架。除去过量的制剂以防止成网。在应用HE制剂以前应该除去支架的气球。然后用蓝光将HE制剂光聚合到样品上几分钟以确保完成单体转化。将150微克(0.00015g)的靶量HE施加到每个支架，尽管根据本发明可施加0.1微克～1000微克。然后将涂覆的支架再次应用于气球上并检查。重新放置之后，所述支架是双袋包装的并用100％环氧乙烷杀菌。消毒之后样品置于25℃的真空干燥炉中过夜，以除去任何残余的环氧乙烷。
本发明中记载的HE/水凝胶制剂的范围仅举一个制剂实施例，其可以为应用在支架上而改变，以引入本发明的hypoestoxides、hypoestoxide衍生物和hypoestoxide激动剂。本领域技术人员会认识到，为应用在支架上，根据本发明的hypoestoxides、hypoestoxide衍生物和hypoestoxide激动剂可以引入任何适当的聚合物。
研究根据本发明的hypoestoxides对血小板凝聚的抑制效果。新西兰兔的富集血小板的血浆用作血小板源。花生四烯酸(100μM)用来诱导活体外血小板的最大量凝聚。通过光密度测定法测量聚集体的光密度。花生四烯酸诱导的响应的抑制百分比如下表2所示。PAF(血小板聚集因子)，其作为正对比，诱导96.5％的抑制，而Hypoestoxide诱导完全的(100％)抑制。
表2显示hypoestoxides对血小板凝聚的完全的抑制效果。应回忆上文所述的，血管成形术之后的再狭窄是更平缓的过程，其包括伴随着从粘附血小板释放细胞衍生生长因子的亚临界血栓的初始形成，所述生长因子导致内膜平滑肌细胞的增生和炎性细胞的局部渗透，其促进血管的增生。因此，具有适当释放动力学的洗脱hypoestoxide的支架应能随着时间的流逝防止亚临界血栓的初始形成。
表2：花生四烯酸诱导的血小板凝聚的hypoestoxides抑制