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1、10申请公布号CN104186323A43申请公布日20141210CN104186323A21申请号201410445987822申请日20140904A01H4/0020060171申请人南京标科生物科技有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边东108号1幢701室72发明人张金芳杨存54发明名称一种柃木的快速繁殖方法57摘要本发明涉及一种柃木的快速繁殖方法，包括外植体的消毒、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、生根培养和炼苗移栽。本发明的柃木组培方法操作简便，生长周期短，成活率高，可以短期内获得大量的柃木幼苗。51INTCL权利要求书1页说明书2页19中华人民共和国国家知识产权局1。
2、2发明专利申请权利要求书1页说明书2页10申请公布号CN104186323ACN104186323A1/1页21一种柃木的快速繁殖方法，包括外植体的消毒、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、生根培养和炼苗移栽，其主要步骤如下（1）取柃木带芽的茎段，按照常规的消毒方法对其进行灭菌处理；（2）将步骤（1）消毒处理过的柃木带芽茎段接入培养基配方为WPMNAA02MG/L6BA05MG/L诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，光照2000LX；（3）取步骤（2）诱导出来的芽放入增殖培养基WPM0102MG/L2，4DKT0204MG/L1G/L活性炭，附加蔗糖30G/L，琼脂。
3、65G/L，PH58，光照2000LX；（4）取步骤（3）增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基1/43/4MSNAA01MG/L；（5）取步骤（4）生根后的柃木试管苗先移栽到温室，然后移栽到大田进行炼苗培养。2按照权利要求1所述的一种柃木的快速繁殖方法，其特征在于步骤（1）中所述柃木无菌芽的获得为，上午910点取柃木的侧芽，先在漂白粉中浸泡3MIN，毛刷去除表面污渍，流水冲洗1H，超净工作台上75酒精处理30S，次氯酸钠处理9MIN，无菌水冲洗5遍。3按照权利要求1所述的一种柃木的快速繁殖方法，其特征在于步骤（3）增殖培养基中附加了1G/L活性炭，能克服苗在增殖培养过程中褐化现象的出现。4按照权。
4、利要求1所述的一种柃木的快速繁殖方法，其特征在于步骤（4）中的生根培养条件为蔗糖20G/L，琼脂65G/L，PH59，光照5000LX，湿度6070。5按照权利要求1所述的一种柃木的快速繁殖方法，其特征在于步骤（5）中柃木的炼苗培养方法为将生根试管苗先进行7D的闭瓶炼苗，再打开瓶口炼苗5D，将清洗干净的幼苗放入KMNO4溶液中浸泡4D，栽植于椰子壳泥炭土珍珠岩211的基质中进行培养。权利要求书CN104186323A1/2页3一种柃木的快速繁殖方法技术领域0001本发明涉及柃木组织培养的快繁方法，属于植物技术领域。背景技术0002柃木，EURYAJAPONICATHUNB，别名，细叶菜、海岸柃。
5、野桂花，柃木被日本人尊称为“神木”，是山茶科植物，常绿灌木与小乔木，是日本人的传统供神祭祖的吉祥物，市场需求量大且稳定。目前，日本每年需求柃木插叶5亿6亿束，中国出口约15亿束，出口金额约60亿日元。分布于分布华东、华南、西南各地。以茎、叶、果入药。夏秋采集，晒干或鲜用。性味苦、涩，平。祛风除湿，消肿，止血。用于风湿关节痛，腹水，外伤出血。目前，柃木的繁殖还普遍采用自然繁殖，其组培快繁的方法尚无报道，使用组培快繁的方法对柃木进行快速繁殖，可以提高柃木的使用率。发明内容0003本发明所要解决的技术问题是提供一种柃木的快速繁殖方法，由该方法所制备得到的柃木增殖系数高，成活率高，可以提高柃木的利用率。
6、。0004本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的取柃木的侧芽，先在漂白粉中浸泡3MIN，毛刷去除表面污渍，流水冲洗1H，超净工作台上75酒精处理30S，次氯酸钠处理9MIN，无菌水冲洗5遍，将消毒处理过的柃木带芽茎段接入培养基配方为WPMNAA02MG/L6BA05MG/L诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，光照2000LX，诱导出来的芽放入增殖培养基WPM015MG/L2，4DKT03MG/L1G/L活性炭，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，光照2000LX，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基1/2MSNAA01MG/L，生根诱导后，。
7、试管苗长约5CM左右，将生根试管苗先进行7D的闭瓶炼苗，再打开瓶口炼苗5D，将清洗干净的幼苗放入KMNO4溶液中浸泡4D，栽植于椰子壳泥炭土珍珠岩211的基质中进行培养。0005采用本发明制备的柃木成活率为95，周期短，产量大，能耗少，利于大规模种植。0006下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。0007实施例1取柃木的侧芽，先在漂白粉中浸泡3MIN，毛刷去除表面污渍，流水冲洗1H，超净工作台上75酒精处理30S，次氯酸钠处理9MIN，无菌水冲洗5遍，将消毒处理过的柃木带芽茎段接入培养基配方为WPMNAA02MG/L6BA05MG/L诱导培养。
8、基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，光照2000LX，诱导出来的芽放入增殖培养基WPM01MG/L2，4DKT02MG/L1G/L活性炭，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，光照2000LX，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基1/4MSNAA01MG/L，生根诱导后，试管苗长约5CM左右，进行炼苗移栽，柃木成活率为90。0008实施例2说明书CN104186323A2/2页4取柃木的侧芽，先在漂白粉中浸泡3MIN，毛刷去除表面污渍，流水冲洗1H，超净工作台上75酒精处理30S，次氯酸钠处理9MIN，无菌水冲洗5遍，将消毒处理过的柃木带芽茎段接入培养基配方。
9、为WPMNAA02MG/L6BA05MG/L诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，光照2000LX，诱导出来的芽放入增殖培养基WPM02MG/L2，4DKT04MG/L1G/L活性炭，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，光照2000LX，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基3/4MSNAA01MG/L，生根诱导后，试管苗长约5CM左右，进行炼苗移栽，柃木成活率为92。0009实施例3取柃木的侧芽，先在漂白粉中浸泡3MIN，毛刷去除表面污渍，流水冲洗1H，超净工作台上75酒精处理30S，次氯酸钠处理9MIN，无菌水冲洗5遍，将消毒处理过的柃木带芽茎段接。
10、入培养基配方为WPMNAA02MG/L6BA05MG/L诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，光照2000LX，诱导出来的芽放入增殖培养基WPM015MG/L2，4DKT04MG/L1G/L活性炭，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，光照2000LX，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基3/4MSNAA01MG/L，生根诱导后，试管苗长约5CM左右，进行炼苗移栽，柃木成活率为94。0010实施例4取柃木的侧芽，先在漂白粉中浸泡3MIN，毛刷去除表面污渍，流水冲洗1H，超净工作台上75酒精处理30S，次氯酸钠处理9MIN，无菌水冲洗5遍，将消毒处理过的柃木带芽茎段接入培养基配方为WPMNAA02MG/L6BA05MG/L诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，光照2000LX，诱导出来的芽放入增殖培养基WPM015MG/L2，4DKT02MG/L1G/L活性炭，附加蔗糖30G/L，琼脂65G/L，PH58，光照2000LX，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基1/4MSNAA01MG/L，生根诱导后，试管苗长约5CM左右，进行炼苗移栽，柃木成活率为93。说明书CN104186323A。