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1、10申请公布号CN104189031A43申请公布日20141210CN104189031A21申请号201410445682722申请日20140904A61K36/185200601A61K127/0020060171申请人南京标科生物科技有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边东108号1幢701室72发明人张金芳杨存54发明名称一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法57摘要本发明涉及一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法，具体涉及一种酶发酵协同连续逆流超声提取沙棘总黄酮的方法。其处理步骤包括A沙棘叶于60烘干、粉碎，过40目筛；B生物酶发酵；C连续逆流超声波辅助提取；D过聚酰胺。
2、树脂柱，乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得沙棘总黄酮。本发明以沙棘叶为原料，充分利用生物酶发酵和超声波的叠加效果，提高沙棘总黄酮的溶出率。本发明具有工艺简单、提取时间短、反应条件温和等优点，对环境友好，同时也保证了沙棘总黄酮的生物活性不被破坏，易于实现工业化生产。51INTCL权利要求书1页说明书2页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书2页10申请公布号CN104189031ACN104189031A1/1页21一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法，其特征在于，包括以下步骤A沙棘叶于60烘干、粉碎，过40目筛；B向上述原料中加入原料重量12的生物酶，搅拌均匀，。
3、再喷洒PH4050的柠檬酸/柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于4050发酵57天；C将发酵好的原料置于频率为40KHZ的连续逆流超声波提取器中，加入57倍的6080的乙醇溶液，控温在4560，提取90120MIN，过滤，得滤液；D将步骤C中的滤液浓缩至无醇味，转入径高比为148、粒径为80100目的聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用48BV的6080的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得沙棘总黄酮。2根据权利要求1所述的一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法，其特征在于，步骤B中所述的生物酶为重量比0703的纤维素酶和果胶酶的混合物，酶的活力单位为5000U/G。权。
4、利要求书CN104189031A1/2页3一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法技术领域0001本发明涉及一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法，尤其涉及一种酶发酵协同连续逆流超声波提取沙棘总黄酮的方法。背景技术0002沙棘是胡颓子科沙棘属的一种野生浆果植物，又名醋柳、沙枣、黑刺，是世界上公认的珍贵食用和药用植物。研究表明，高海拔地区的沙棘中黄酮类化合物含量较高，叶中黄酮类化合物主要以苷的形式存在，主要有异鼠李素、槲皮素、山奈酚和杨梅素等4种苷元及其苷类化合物，具有抗心肌缺血缺氧、抗心律失常、降低血清胆固醇和增强免疫等广泛的药理作用。0003黄酮作为沙棘的最主要活性成分，常见的提取方法如下水蒸气蒸馏法。
5、、有机溶剂萃取法、超临界二氧化碳萃取法、分子烙印技术等。这些方法均存在诸多不足；水蒸气蒸馏法虽然设备简单、成本低且对环境和人类无毒害而适宜工业化生产，但是提取率低、杂质含量较高，因此现在很少被人们利用；有机溶剂萃取法成本较高，存在溶剂残留效应，对人类和环境有一定影响；超临界二氧化碳萃取技术是一项新的分离、提取技术，具有低温提取、无有毒残溶和可以选择性分离等特点，但是其用于沙棘黄酮的提取，原料要经过脱脂和脱色素等前期处理，检测过程也比较繁杂；分子烙印技术是最近才发展起来的一种新技术，可制备槲皮素为模板的MIP，进行从沙棘初提物中提取黄酮实验，实验结果表明以槲皮素为模板的MIP可有效地从沙棘初提物。
6、中提取槲皮素和异鼠李素，但是这种方法成本太高，过程繁琐，现在还处于实验室摸索阶段。0004经文献检索，未见采用酶发酵与连续逆流超声相结合提取沙棘总黄酮的文献报道。发明内容0005本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法，该方法具有工艺简单、易操作、提取时间短、提取率高、对环境友好等优点。0006本发明包括以下步骤A沙棘叶于60烘干、粉碎，过40目筛；B向上述原料中加入原料重量12的生物酶，搅拌均匀，再喷洒PH4050的柠檬酸/柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于4050发酵57天；C将发酵好的原料置于频率为40KHZ的连续逆流超声波提取器中，加入57倍。
7、的6080的乙醇溶液，控温在4560，提取90120MIN，过滤，得滤液；D将步骤C中的滤液浓缩至无醇味，转入径高比为148、粒径为80100目的聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用48BV的6080的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得沙棘总黄酮。0007步骤B中所述的生物酶为重量比0703的纤维素酶和果胶酶的混合物，酶的活说明书CN104189031A2/2页4力单位为5000U/G。0008本发明与现有技术相比，具有以下优点（1）总黄酮含量和收率较高本发明采用生物酶发酵，破坏细胞壁的致密结构，在结合超声波的空化作用，使有效成分最大限度的溶出，提高了总黄酮的提取率，通过连。
8、续逆流可实现连续作业；（2）本发明采用聚酰胺树脂进行分离纯化，该树脂重复利用率高，价格便宜，适用于工业生产。0009下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。0010具体实施方式实施例1沙棘叶于60烘干、粉碎，过40目筛，取100G粉末，加入原料重量1的纤维素酶和果胶酶（重量比为0703，酶的活力单位为5000U/G）的混合酶，搅拌均匀，再喷洒PH40的柠檬酸/柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于40发酵5天；将发酵好的原料置于频率为40KHZ的连续逆流超声波提取器中，加入5倍的60的乙醇溶液，控温在45，提取90MIN，过滤，得滤液；将滤。
9、液浓缩至无醇味，转入径高比为14、粒径为80目的聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用4BV的60的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得沙棘总黄酮提取物185G，经UV检测，总黄酮含量为512。0011实施例2沙棘叶于60烘干、粉碎，过40目筛，取100G粉末，加入原料重量15的纤维素酶和果胶酶（重量比为0703，酶的活力单位为5000U/G，）的混合酶，搅拌均匀，再喷洒PH45的柠檬酸/柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于45发酵7天；将发酵好的原料置于频率为40KHZ的连续逆流超声波提取器中，加入6倍的70的乙醇溶液，控温在50，提取100MIN，过滤，得滤液；将。
10、滤液浓缩至无醇味，转入径高比为16、粒径为100目的聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用6BV的70的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得沙棘总黄酮提取物178G，经UV检测，总黄酮含量为556。0012实施例3沙棘叶于60烘干、粉碎，过40目筛，取100G粉末，加入原料重量2的纤维素酶和果胶酶（重量比为0703，酶的活力单位为5000U/G，）的混合酶，搅拌均匀，再喷洒PH50的柠檬酸/柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于50发酵6天；将发酵好的原料置于频率为40KHZ的连续逆流超声波提取器中，加入7倍的80的乙醇溶液，控温在60，提取100MIN，过滤，得滤液；将滤液浓缩至无醇味，转入径高比为18、粒径为90目的聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用8BV的80的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得沙棘总黄酮提取物196G，经UV检测，总黄酮含量为481。说明书CN104189031A。