用于处理食物垃圾的混合菌株及利用其处理食物垃圾的方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102834504 A(43)申请公布日 2012.12.19CN102834504A*CN102834504A*(21)申请号 201080059327.6(22)申请日 2010.12.23KCTC11585BP 2009.11.1010-2009-0131129 2009.12.24 KRC12N 1/20(2006.01)B09B 3/00(2006.01)(71)申请人安国药品株式会社地址韩国首尔申请人江原大学校产学协力团(72)发明人郑有婷 安泰爽 郑多运 赵安娜李恩莹 李明善(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司 11002代理人王朋飞 瞿卫军。

2、(54) 发明名称用于处理食物垃圾的混合菌株及利用其处理食物垃圾的方法(57) 摘要本发明涉及用于处理食物垃圾的混合菌株，具体地，涉及一种用于处理食物垃圾的混合菌株以及利用这种菌株处理食物垃圾的方法。所述混合菌株在大范围的温度、pH值及盐度范围内对纤维素、淀粉、蛋白质及脂肪具有高的降解活性，并且还可以降解含水率高的食物垃圾，从而能够有效降解食物垃圾。(30)优先权数据(85)PCT申请进入国家阶段日2012.06.25(86)PCT申请的申请数据PCT/KR2010/009274 2010.12.23(87)PCT申请的公布数据WO2011/078601 KO 2011.06.30(83)生物。

3、保藏信息(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书9页 附图9页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 9 页 附图 9 页1/1页21.以保藏号KCTC11585BP保藏的用于处理食物垃圾的波茨坦短芽孢杆菌（Brevibacillus borstelensis）、地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）及特鲁利斯酿酒酵母菌（Kazachstania telluris ）的混合菌株。2.使用以保藏号KCTC11585BP保藏的波茨坦短芽孢杆菌（Brevibacillus borstelensis）、地衣芽孢杆菌（Bacillus。

4、 licheniformis）及特鲁利斯酿酒酵母菌（Kazachstania telluris ）混合菌株处理食物垃圾的方法。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在3060下处理食物垃圾。权 利 要 求 书CN 102834504 A1/9页3用于处理食物垃圾的混合菌株及利用其处理食物垃圾的方法技术领域0001 本发明涉及用于处理食物垃圾的混合菌株，具体地，涉及一种用于处理食物垃圾的混合菌株以及利用这种菌株处理食物垃圾的方法。所述混合菌株在大范围的温度、pH值及盐度范围内对纤维素、淀粉、蛋白质及脂肪具有高的降解活性，可以降解含水率高的食物垃圾，从而能够有效降解食物垃圾。背景技术0002 。

5、韩国每日产生的生活废弃物达50,346吨（以2007年为基准），在过去20多年来随着人口的增长、城市产业化以及城市集中化，废弃物的产量在急剧增加。从废弃物的处理现状来看，1991年生活废弃物中的89.2%是经过填埋处理的，只有7.9%进行再利用，而2000年得益于垃圾排放收费制度的实施及再利用政策，使得填埋处理率下降为47.0%的同时，再利用率增长为41.3%。0003 其中食物垃圾的处理大部分依赖于填埋，食物垃圾因其含水量较高而经过填埋后其本身将会成为渗滤污水的源头，在收集和运输过程中也容易腐败而引发恶臭等诸多问题，因此直接填埋的方式从2005年开始已被禁止。虽然随着食物垃圾直接填埋的禁止，。

6、实施了食物垃圾分类收集，然而因人口的增长、收入的提高及生活方式的变化使食物垃圾的产量由1999年的日平均11，577吨增长为2007年的日平均14,452吨。0004 焚烧是另一种垃圾处理方式，然而水分含量的过高降低了焚烧效率进而导致处理费用过高，而且还会释放出二恶英等对环境有害的物质。为了解决上述问题，用堆肥化、饲料化、能源化等方式再利用食物垃圾的方案正在紧锣密鼓地实施着。0005 厌氧性降解可以将潮湿的生物降解废弃物作为对象来回收能源，在这一点上优于堆肥化，然而与堆肥化相比尚有设施规模过大、维修保养费用过高等缺点。堆肥化方式的情况下，常用来设置、运营的代表性的方法有消灭式、发酵式和干燥式等。

7、，其中消灭式是将水分调节剂（锯末、谷壳、椰纤土等）和微生物加入到食物垃圾（有机物）中使其分解的一种方式，存在水分调节剂的供需不平衡及价格上涨等问题。干燥式是利用热风、加热器或间接蒸汽加热装置将食物垃圾加热至70-120，使水分蒸发，并通过搅拌作用使粉碎干燥的内容物的重量减少，然而从加热装置的经济性方面考虑，其在实用性方面效果差。相反，无需外界的热供给而依靠微生物反应所产生的热能的高温好氧型方式作为有机废水的一种净化处理方式被研究，但由于缺乏各种控制技术而无法应用于现场。对嗜热微生物的活化是这种处理方法中至关重要的环节，但因找不到保持恒定温度的方法而尚未达到像现有各种废水处理方法一样的商业化阶段。

8、。0006 使用反应热的这种方法的优点是由于反应是在高温下进行，因此有机物的去除速度快，并且对有机物负荷显示出稳定的处理效率，由于是在高温下，因此不会发生硝化反应，从而可以有效地利用被供应的氧气并得到稳定的处理物。0007 其中，在堆肥化和消灭化方式中需要锯末等膨胀剂（bulking agent），相应地导致说 明 书CN 102834504 A2/9页4装置的体积变大，从而增加垃圾处理费用。此外，在堆肥化过程中，大部分有机物会转化为二氧化碳、氨、在好氧和厌氧状态下产生的硫醇、水、微生物细胞、热能及腐殖质（humus），其中，氨和硫醇会产生刺鼻的气味，欲去除这种恶臭就要使用除臭剂和铂催化剂，因。

9、而会产生额外的费用。近年来为了减少这种额外费用而引进了废气再循环方式，但去除恶臭的铂催化剂仍然被普遍使用，因此还是无法从根本上节省费用。0008 目前，在食物垃圾堆肥化及消灭化方式中所使用的具代表性的微生物是那些已知能够分解纤维素的棒型（coryneform）、诺卡氏型（nocardioform）、真性丝状菌（true filamentous bacteria）及放线菌类（actinomycetes）等微生物种。这种细菌在碳氢化合物，残存植物和土壤堆肥的分解中发挥了主要作用。属于这种群体的一些微生物还可以分解杀虫剂。主要属于对链霉菌的丝状放线菌类会产生一种具有独特泥土味道的土臭素味化合物（派克。

10、（Parker），2001）。在有机物的处理方面，土壤微生物可根据如下两点进行分类，（1）对于容易或难以使用的基质的偏好度，（2）所需基质的浓度。在高营养水平，假单孢菌等微生物在糖或氨基酸等容易获得的基质中迅速发生反应。本源微生物倾向于尽可能使用天然有机物。这种微生物包括节杆菌以及许多土壤放线菌类。放线菌在水分含量为70以下时生长较快，因此建议在已被开发的堆肥化和消灭化方法中将水分含量均调整为40至60之间。这些水分含量的调节在一些大型的垃圾处理设施中是可行的，但在家庭、餐饮行业和大型流通市场等场所基本上是不可行的，可以说这就是有效处理垃圾过程当中最大的失败原因。此外，减少含水率需要加热，就会。

11、导致大量的能源消耗，为了维持较低的含水率，存在不能正常使用去除降解产物所需的洒水系统的缺点。0009 韩国专利号0580857公开了一种使用史密斯杆菌（Bacillus smithii）及嗜热酵母菌的混合菌株ATS-1（KCTC10637BP），在含水率高的状态下也能维持高的降解活性，有效处理食物垃圾的方法。0010 然而食物垃圾显示出多种多样的pH值及盐度，为了更有效地处理食物垃圾，在大范围的温度、pH值及盐度范围内能够有效降解食物垃圾的微生物菌株的开发已迫在眉睫。0011 参考文献0012 派克M.M.,微生物的块生物学（第9版），2001，新泽西州：普伦蒂斯（Parker M.M.,Bl。

12、ock Biology of Microorganisms(Ninth Edition),2001,New Jersey:Prentice Hall）发明内容0013 本发明要解决的技术问题0014 本发明以提供用于处理食物垃圾的微生物菌株为技术课题，这种菌株在大范围的温度、pH值及盐度范围内对纤维素、淀粉、蛋白质及脂肪具有高的降解活性，因此可以有效降解食物垃圾。0015 解决技术问题的技术手段0016 为了实现上述目的，本发明提供包括波茨坦短芽孢杆菌（Brevibacillus borstelensis）、地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）及特鲁利斯酿酒酵母菌（Ka。

13、zachstania telluris）的用于处理食物垃圾的混合菌株（KCTC 11585BP）。0017 此外，本发明还提供使用上述混合菌株处理食物垃圾的方法。说 明 书CN 102834504 A3/9页50018 下面对本发明进行详细说明。0019 本发明的用于处理食物垃圾的混合菌株包括波茨坦短芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌及特鲁利斯酿酒酵母菌，并于2009年11月10日以保藏号KCTC 11585BP保藏在韩国典型培养物保藏中心。0020 本发明中用于处理食物垃圾的混合菌株由作为细菌的波茨坦短芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌及作为酵母菌的特鲁利斯酿酒酵母菌组成。0021 波茨坦短芽孢杆菌及地衣芽孢杆菌具。

14、有降解纤维素、淀粉、脂肪及蛋白质的能力，并且在盐度高达4%的状态下也可以生存。波茨坦短芽孢杆菌是革兰氏阳性菌，主要从土壤中分离得到，它被称为生产D-立体选择性氨基酸酰胺酶（D-stereospecific amino acid amidase）的嗜热微生物，这种酶可以水解含D-氨基酸的酰胺中氨基末端氨基酸。0022 地衣芽孢杆菌也是革兰氏阳性菌，主要从土壤中分离得到。它是一种能够在50以上高温下生长的嗜热菌，具有在不利条件下以孢子的形式存在，在有利条件下生长的特性。0023 适合特鲁利斯酿酒酵母菌生长的温度在37至45之间，具有降解并发酵纤维素、淀粉及葡萄糖的能力。特鲁利斯酿酒酵母菌生长速度很。

15、快，已知其可利用硝酸盐发酵各种碳水化合物。0024 目前尚无关于波茨坦短芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌及特鲁利斯酿酒酵母菌可能对健康及环境有害的文献报道。而且这些菌被国际生物资源中心（ATCC）分类为生物安全等级（biosafety level）1级，被分类为非病原性细菌及酵母菌。因此本发明的用于处理食物垃圾的混合菌株所包含的菌株都是安全的，不会对人体及环境带来问题。0025 本发明的另一方面，提供使用本发明的混合菌株（KCTC11585BP）处理食物垃圾的方法。0026 本发明的食物垃圾处理方法可以在30至60实施，优选在40至50实施。本发明的用于处理食物垃圾的混合菌株由嗜热型细菌及嗜热型酵母菌组。

16、成，因此在上述高温范围内能够有效处理食物垃圾。在高温下也能维持其降解活性是食物垃圾降解时的放热反应能够使处理设备内部温度上升的重要因素之一。此外，在高温下的处理不仅使食物垃圾的降解更加活跃而且还能防止被其他微生物污染，起到继续维持菌群（flora）的作用。0027 为了便于运输或储存，本发明中的混合菌株（KCTC 11585BP）可以制剂化为多种形态。例如，可与冷冻保护剂一起冷冻干燥以粉末的形态使用，也可同保存载体混合吸附后使其干燥成固体状态使用。只要是本领域通常使用的冷冻保护剂和及保存载体均可使用，没有特殊的限制，例如甘油、脱脂乳、蜂蜜等可作为冷冻保护剂来使用，硅藻土、活性炭、脱脂米糠等可作。

17、为保存载体来使用。0028 发明的效果0029 本发明的用于处理食物垃圾的混合菌株（KCTC 11585BP）在大范围的温度、pH值及盐度范围内对纤维素，直链淀粉，蛋白质及脂肪具有高的降解活性，可降解含水率高的食物垃圾，因此可以通过有效降解多种多样的食物垃圾以较低的费用处理食物垃圾。混合菌株（KCTC 11585BP）中包含的酵母菌可以稀释食物被降解过程中释放出的特有的恶臭，通过酒精发酵来帮助食物降解，从而提高降解率。因此，本发明可以解决填埋或焚烧等传统的食物垃圾处理方法所造成的环境污染问题，以环保的方式处理食物垃圾。说 明 书CN 102834504 A4/9页6附图说明0030 图1为将波。

18、茨坦短芽孢杆菌用显微镜放大1000倍拍摄的照片。0031 图2为将地衣芽孢杆菌用显微镜放大1000倍拍摄的照片。0032 图3为将特鲁利斯酿酒酵母菌用显微镜放大1000倍拍摄的照片。0033 图4为表示被酵母菌降解的葡萄糖（5mg/100mL)降解率的图表。0034 图5为表示被酵母菌降解的葡萄糖（10mg/100mL）降解率的图表。0035 图6为表示被酵母菌降解的葡萄糖（20mg/100mL）降解率的图表。0036 图7为示出nATS-AG根据温度的生长曲线的图。0037 图8为示出对照菌株根据温度的生长曲线的图。0038 图9为示出nATS-AG根据初始pH值的生长曲线的图。0039 图。

19、10为示出对照菌株根据初始pH值的生长曲线的图。0040 图11为nATS-AG根据盐度的生长曲线的图。0041 图12为示出对照菌株根据盐度的生长曲线的图。0042 图13为经过菌株处理24小时后，将胡萝卜用显微镜放大1000倍拍摄的照片，图14为48小时后拍摄的照片（左侧：对照菌株，右侧：nATS-AG）。0043 图15为经过菌株处理24小时后将海带用显微镜放大1000倍拍摄的照片，图16为48小时后拍摄的照片（左侧：对照菌株，右侧：nATS-AG）。0044 图17为经过菌株处理24小时后将韭菜用显微镜放大1000倍拍摄的照片，图18为48小时后拍摄的照片（左侧：对照菌株，右侧：nAT。

20、S-AG）。具体实施方式0045 下面通过实施例来具体说明本发明。但是，实施例仅用于帮助理解本发明，本发明的范围并不仅限于以下实施例。0046 微生物的分离及选择0047 为了分离出对蛋白质、纤维素、淀粉和脂肪具有良好降解能力的在高温下存活的菌株，在有机物降解非常活跃的落叶堆肥化现场进行了样品采集。将采集回来的1克土壤和腐殖质样品分别加入到含有1羧甲基纤维素（carboxymethyl cellulose）、1淀粉（starch），1蛋白胨（peptone）及1的橄榄油的液体培养基内，然后在45、60及70下进行24小时的富集培养（enrichment culture）。将培养上清液转移到固体。

21、培养基上利用平板表涂布法进行3次涂布后，选出不同大小和形态的菌落（colony），并接种到营养培养基中培养48小时，然后以OD600确认其生长。0048 为了测定分离到的菌株的物质降解能力，研究了淀粉酶、纤维素酶、蛋白酶及脂肪酶的活性。在纤维素酶检测培养基（1%CMC、1%胰蛋白胨、0.5%酵母提取物、1%NaCl及1.5%琼脂），淀粉酶检测培养基（0.3%牛肉膏、2%可溶性淀粉、0.5%蛋白胨、0.5%NaCl、1.5%琼脂），蛋白酶检测培养基（0.5%胰酶消化酪蛋白（pancreatic digest ofcasein）、0.25%酵母提取物、0.1%葡萄糖、1%脱脂乳及1.5%琼脂）及脂。

22、肪酶检测培养基（1%吐温80、1%蛋白胨、0.5%NaCl、0.01%CaCl2H2O及1.5%琼脂）上形成的菌落中，以透明环的大小来判断其活性。筛选出活性优异的菌株后，从其中选出显示为最佳组合的2个菌株，对它们进行碱基序列分说 明 书CN 102834504 A5/9页7析并进行鉴定。酵母菌样本是在江原道春川市附近的污秽处理场采集的，然后在加入4g/mL抗生素（氨苄青霉素（ampicillin）的YM培养基（由0.3%酵母提取物、0.3%麦芽提取物、0.5%蛋白胨及1%葡萄糖组成）中进行富集培养。培养之后用显微镜确认酵母菌的存在，并在同一培养基中进行纯分离。0049 各菌株的降解活性是按照下。

23、列方法评价的。对培养出的菌落周围环的大小进行了测定并进行了分裂，环的大小在6mm以上为+，3-5mm为+，3mm以下为+。0050 酵母菌的降解活性是根据还原糖的消耗率来评价的。还原糖浓度是用苏木杰（Somogyi）法测定的。0051 微生物的鉴定0052 对筛选出的细菌进行16S rRNA碱基序列分析，将分析结果与NCBI的BLAST进行比对，结果分别被确认为波茨坦短芽孢杆菌（同源性为98%）、地衣芽孢杆菌（同源性为99%）。将酵母菌的18S rRNA碱基序列分析结果与NCBI的BLAST进行比对，结果被确认为特鲁利斯酿酒酵母菌（同源性为100）。0053 物质降解能力的评价0054 被选细。

24、菌菌株在每种基质中的活性度测量结果如表1所示。0055 表10056 菌株 纤维素酶 淀粉酶 蛋白酶 脂肪酶波茨坦短芽孢杆菌 + + + +地衣芽孢杆菌 + + + +0057 酵母菌起到降解和吸收作为有机物的降解产物的低分子物质的作用，因此以还原糖的消耗率来测定酵母菌的活性。还原糖的浓度是用苏木杰（Somogyi）法测定的。测定并比较特鲁利斯酿酒酵母菌、韩国专利号第0580857号中使用的嗜热酵母菌（热带假丝酵母（Candida tropicals）及从KCTC（韩国典型培养物保藏中心）购买的嗜热酵母菌（安格斯毕赤酵母（Pichia angusta）：菌株号17664）这三种酵母菌的葡萄糖吸。

25、收降解率（图4-6）。0058 从图4-6可以确定在所有浓度中特鲁利斯酿酒酵母菌和韩国专利号第0580857中被使用的嗜热酵母菌的还原糖消耗率是相似的，而从KCTC购买的菌株（安格斯毕赤酵母）的还原糖消耗率则低于上述两种。0059 混合菌株的制备0060 将波茨坦短芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的原液（stock）以1%的浓度加入到筛选培养基（营养肉汤）中，在45培养箱中边搅拌边培养24小时，将特鲁利斯酿酒酵母菌的原液以1%的浓度加入到筛选培养基（YM肉汤）中，在37培养箱中边搅拌边培养24小时。将各400mL细菌培养液与200mL酵母菌培养液进行混合，从而制备得到1000mL的混合菌株。0061 将。

26、获得的混合菌株于2009年11月10日以保藏号KTCT 11585BP保藏在韩国典型培养物保藏中心。（以下将上述混合菌株命名为“nATS-AG”。）0062 实验例1：根据温度、初始pH值和盐度测定生长率0063 实验方法说 明 书CN 102834504 A6/9页80064 根据不同的温度、初始pH值和盐度测定出nATS-AG的生长曲线。培养基是由5g/L的蛋白胨、10g/L的凝胶、2.5g/L的酵母提取物、5g/L的可溶性淀粉、3g/L的麦芽提取物、3g/L的纤维素、2g/L的牛肉膏、5g/L的NaCl组成。个体数的增加是在分光光度计的600nm波长下以吸光度的变化来表示的。0065 利。

27、用与上述方法同样的方法测定韩国专利号第0580857中公开的史密斯杆菌（Bacillus smithii）和嗜热酵母菌的混合菌株ATS-1（以下称“对照菌株”）的生长率，并与nATS-AG进行比较。0066 实验例1-1：根据温度的生长率0067 利用上述实验方法分别测定37，45，60及70下的nATS-AG及对照菌株的生长率，然后将其结果分别显示在图7和图8中。0068 和对照菌株不同的是nATS-AG在开始培养24小时后仍可充分生长，甚至在45状态下也可生长。特鲁利斯酿酒酵母菌（Kazachstania telluris）在37时生长很旺盛，与其它温度相比，显示出相当高的OD值。0069。

28、 由上述结果可以看出nATS-AG在高温状态下的生长率远远超过对照菌株。0070 实验例1-2：根据初始pH值的生长率0071 利用上述实验方法分别测定初始pH值为3、4、5、6及7时的nATS-AG与对照菌株的生长率，然后将其结果分别显示在图9与图10中。0072 对照菌株仅在初始pH值4的情况下表现出高的生长率，相反，nATS-AG在初始pH值为4、5、6时表现出的生长率均远远超过对照菌株。细菌在降解食物时随着产生有机酸，会使pH值下降，但pH值一般不会降至4以下。nATS-AG在大范围的初始pH值状态下表现出高生长率，由此可知在处理具有多种pH值的食物的过程中以及在食物的降解过程中即使p。

29、H值下降nATS-AG也可有效被利用。0073 实验例1-3：根据盐度的生长率0074 利用上述实验方法分别测定0%、1%、2%、3%及4%的盐度下的nATS-AG与对照菌株的生长率，然后将其结果分别显示在图11和图12中。0075 nATS-AG在4%的盐度下也能维持生长。我国食物中盐的浓度一般在3%以下，因此认为在食物垃圾的处理过程中通过与水的接触可以去除其中的盐分，也就不会存在盐分所引发的问题。此外，24小时后对照菌株的OD值增加而nATS-AG则显示出正常的生长曲线。由此可见nATS-AG从食物处理初期开始就可以比对照菌株更为有效地降解食物。0076 实验例2：降解活性的测定0077 。

30、实验例2-1：小规模处理0078 测定nATS-AG及对照菌株的食物降解活性。将米饭、生菜、猪肉以1:1:1的重量比混合后作为样本进行实验。用微生物处理食物垃圾的过程通常是接种菌株后以一定的时间间隔持续投入食物垃圾，因此微生物菌落能够稳定地保持其降解活性尤为重要。所以在实验开始前先将菌落稳定24小时。初始菌落的制作条件如下列表2所示。0079 表20080 说 明 书CN 102834504 A7/9页9材料 量食物(米饭，生菜，猪肉) 1,200g菌株(nATS-AG或对照菌株) 50mL0081 然后，以6小时为间隔持续加入500克的食物并按下列公式计算每个时间段的降解率：累计总投入量（干。

31、重）-最终残余食物量（干重）/累计总投入量（干重）100（）并求其平均值。结果如下列表3所示。0082 表30083 0084 从表3中的结果可以看出，nATS-AG的降解活性高于已知的对食物具有高降解活性的对照菌株，从而可以更有效地处理食物垃圾。0085 实验例2-2：大规模处理0086 为了了解nATS-AG能否长时间有效地降解大量的食物垃圾而进行了实验。将从江源大学学生食堂收集的1,000g食物垃圾投入到食物垃圾处理设备中，然后分别接种10mL的nATS-AG与对照菌株。12小时后又追加投入1,000g食物垃圾，之后以8小时及16小时为时间周期将1,000g食物垃圾追加投入至84小时。第。

32、20，44，68和96小时，在投入食物垃圾之前先测定降解后剩余的食物垃圾重量，并按下列公式计算减重率。0087 （1-食物垃圾残留量/食物垃圾投入量）100（%）0088 结果如下列表4。0089 表40090 说 明 书CN 102834504 A8/9页100091 从表4可知，nATS-AG比对照菌株更为有效地降解食物，且还能长时间保持其降解活性。0092 实验例3：难降解性食物的降解活性0093 对被公认为不易降解的食物进行降解活性测定。降解活性的高低取决于菌株能否很好地吸附于食物中并渗透到其组织内部，为了探其究竟从难降解食物中选出胡萝卜、海带、韭菜将它们经nATS-AG与对照菌株处理。

33、24小时及48小时后，用DAPI对食物进行染色后，用荧光显微镜（BX-60，奥林巴斯）进行拍摄并比较其结果（图13-18）。0094 从图13-18可以看出，nATS-AG远远比对照菌株容易吸附于食物上，且更容易渗透到组织内。0095 实验例4：菌株的冷冻干燥及存活率试验0096 将nATS-AG接种到5L的培养基（0.5酵母提取物、1蛋白胨、2葡萄糖、0.8营养肉汤及0.5麦芽提取物）内培养后将10（W/V）脱脂乳作为冷冻保护剂加入其中并经过冷冻干燥回收得到311.26g的粉末。将0.1g回收的冻干菌株悬浮在1PBS中，向营养琼脂和马铃薯葡萄糖琼脂培养基上进行平板涂布后在37培养箱中培养24小时，然后对生成的菌落进行计数来测定存活率。其结果如下列表4所示。0097 表50098 0099 从上述表5的结果可以看出本发明的nATS-AG在冷冻干燥之后也能维持较高的存活率。0100 0101 保藏的微生物或其它生物学物质的标志事项0102 (专利协作条约规则第13条第2款)说 明 书CN 102834504 A10。