WNT通路调节剂技术领域
本发明涉及WNT通路调节剂、用于制备它们的方法以及使用它们的方法。
优先权
本申请要求2013年12月17日提交的UK申请GB 1322333.4的优先权，所述申请的全
部内容以交叉引用的方式并入本文。
背景技术
Wnt蛋白是充当生长因子的分泌糖蛋白，所述生长因子通过激活多个细胞内信号
转导级联来调控各种细胞功能，包括增殖、分化、死亡、迁移和极性，所述级联包括β-连环蛋
白依赖性通路和非β-连环蛋白依赖性通路。已经在人类和小鼠中发现存在19个Wnt成员，并
且它们表现出独特的表达谱和在发育期间不同的功能。在人类和小鼠中，卷曲受体
(Frizzled，Fz)家族的10个成员包含一系列七次跨膜受体，这些受体已经被鉴定为Wnt受
体。除了Fz蛋白之外，单次跨膜蛋白，例如低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)、LRP6、受体
酪氨酸激酶(RTK)样孤儿受体1(Ror1)、Ror2、以及受体样酪氨酸激酶(Ryk)也已经被证实充
当Wnt信号转导的共受体。因此，在传统上已经假定的是，不同的Wnt与它们的特异性受体的
结合经由不同的细胞内通路选择性地触发了不同的结果。
多种多样的Wnt、Wnt受体和下游通路全部都有助于Wnt的作用。这些通路全部都在
发育、干细胞维持、癌症和转移中发挥作用。
在不存在Wnt信号转导的情况下，β-连环蛋白由“破坏复合体”结合并磷酸化，所述
破坏复合体含有腺瘤性结肠息肉病(APC)蛋白和轴素(Axin)蛋白以及糖原合酶激酶3
(GSK3)和酪蛋白激酶I(CKI)。磷酸化的β-连环蛋白由F-box蛋白Slimb/β-TrCP结合并被多
泛素化，从而引起蛋白酶体降解。另外，所述复合体起作用以防止β-连环蛋白的核定位。在
Wnt与卷曲受体(Fz)和低密度脂蛋白相关蛋白5和6(LRP5/6)结合之后，GSK3、轴素以及其它
破坏复合体组分被募集到受体复合体。所述破坏复合体的功能被抑制，并且未磷酸化的β-
连环蛋白在细胞质中积聚并且最终易位到细胞核。在那里，它与TCF蛋白缔合，从而使TCF从
Wnt应答基因转录的阻遏因子转化成激活因子。
癌症和干细胞中的Wnt：
Wnt/β-连环蛋白信号转导的组分的失调牵涉到广泛的疾病谱，包括退行性疾病、
代谢疾病以及许多癌症，例如宫颈癌、结肠癌、乳癌、膀胱癌、头颈癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、前
列腺癌、甲状腺癌、非小细胞肺癌以及慢性淋巴细胞性白血病、间皮瘤、黑色素瘤、胰腺腺
癌、基底细胞癌、骨肉瘤、肝细胞癌、肾母细胞瘤(Wilm’s tumor)以及髓母细胞瘤。
Wnt信号转导在发育期间以及在成人的干细胞龛环境内均发挥作用。这在皮肤、造
血干细胞、乳腺中以及在肠增殖中是公认的。举例来说，DKK1(Wnt信号转导的抑制剂)的高
水平表达会阻止小鼠肠中正常的干细胞增殖，这表明Wnt信号转导在消化道中的干细胞维
持方面起重要作用。对于胚胎干细胞和神经干细胞，Wnt在干细胞的自我更新和扩增中的作
用也已经被证实，这表明Wnt信号转导可能是干细胞维持的普遍要求。抑制Wnt信号转导，例
如通过使轴素或细胞外Wnt结合蛋白sFRP过表达来抑制Wnt信号转导会减少造血干细胞
(HSC)在体外的生长以及在体内重建HSC的能力。值得注意的是，虽然激活的β-连环蛋白的
过表达可以在培养物中在一段较长的时间内扩增HSC群体，但是两个研究小组已经报道β-
连环蛋白并不是为HSC存活和连续移植所必需的，这支持了以下提议，即在干细胞存活方
面，Wnt信号转导不仅仅是β-连环蛋白的稳定化。多种多样的Wnt可调控干细胞增殖：Wnt 1、
Wnt 5a和Wnt 10b能够刺激HSC群体扩增，并且Wnt5a与干细胞因子(SCF)协同起作用以扩增
HSC并促进HSC的自我更新。对Wnt5a在HSC自我更新中的作用以及它与干细胞因子协同作用
的能力的论证特别有意义，这是因为Wnt5a往往以非β-连环蛋白依赖性方式起作用。虽然
Wnt信号转导对于干细胞维持来说是关键的，但是因此它可能是经由与β-连环蛋白通路不
同或并行的信号转导通路。
纤维化：
Wnt/β-连环蛋白信号转导通路一般来说对胚胎发育是必要的并且对器官形态发
生是必要的，因此并不令人惊讶的是，成人中这一通路的失调已经与成纤维细胞生物学和
纤维化相关联。已经证实的是，Wnt/β-连环蛋白信号转导在严重的纤维化疾病中起作用，所
述疾病诸如肺纤维化、肝纤维化、皮肤纤维化和肾纤维化。
其它：
Wnt/β-连环蛋白信号转导的失调还会通过诱发视网膜炎症、血管渗漏和新血管生
成而导致糖尿病性视网膜病变的发生。
Wnt蛋白与间充质细胞上的质膜受体的结合会诱导这些细胞分化成成骨细胞系并
且从而支持骨形成。Wnt还是关节重塑过程中关键的信号转导蛋白。活性Wnt信号转导促使
骨赘形成，并且可能在强直性脊柱炎和骨关节炎中所观察到的合成代谢性关节重塑模式中
具有重要作用。相比之下，阻断Wnt信号转导会促进骨侵蚀并且引起分解代谢性关节重塑，
即在类风湿性关节炎中所观察到的过程。
因此，需要调节和/或抑制WNT通路以治疗与WNT活性有关的疾病的化合物。
定义
抑制剂与酶的结合以及随后从酶的释放的量度是“IC50”值，其反映在给定的底物
浓度下达成50％的酶活性的抑制剂浓度。
如本文所用，术语“受试者”是指已经作为治疗、观察或实验的对象的动物，优选哺
乳动物，最优选人类。在一个实施方案中，受试者不是人类。受试者可以是例如非人类哺乳
动物。
如本文所用，术语“治疗有效量”意指在组织系统、动物或人类中引起研究人员、兽
医、医师或其它临床医师所寻求的生物学或医药反应的活性化合物或药剂的量，所述生物
学或医药反应包括所治疗疾病或病症的症状的减轻。
如本文所用，术语“药学上可接受的”包括人类和兽医用途两者：例如，术语“药学
上可接受的”包括兽医学上可接受的化合物或者在人类医学和保健方面可接受的化合物。
在一个实施方案中，人类医学和保健被排除在外。
在整篇说明书和权利要求中，除非特别限制，否则表述“烷基”表示C1-12烷基，合适
地C1-6烷基，例如C1-4烷基。烷基可以是直链或支链的。合适的烷基包括例如甲基、乙基、丙基
(例如正丙基和异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基)、戊基(例如正戊基)、
己基(例如正己基)、庚基(例如正庚基)和辛基(例如正辛基)。例如在表述“烷氧基”、“卤代
烷基”和“硫代烷基”中的表述“烷(alk)”应按照“烷基”的定义来解释。示例性的烷氧基包括
甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如正丙氧基)、丁氧基(例如正丁氧基)、戊氧基(例如正戊氧基)、
己氧基(例如正己氧基)、庚氧基(例如正庚氧基)和辛氧基(例如正辛氧基)。示例性的硫代
烷基包括甲硫基。示例性的卤代烷基包括氟烷基，例如CF3。
除非特别限制，否则表述“烯基”表示C2-12烯基，合适地C2-6烯基，例如C2-4烯基，其
在任何期望的位置含有至少一个双键并且不含任何三键。烯基可以是直链或支链的。示例
性的包含一个双键的烯基包括丙烯基和丁烯基。示例性的包含两个双键的烯基包括戊二烯
基，例如(1E,3E)-戊二烯基。
除非特别限制，否则表述“炔基”表示C2-12炔基，合适地C2-6炔基，例如C2-4炔基，其
在任何期望的位置含有至少一个三键并且可以含有或者亦可以不含一个或多个双键。炔基
可以是直链或支链的。示例性的炔基包括丙炔基和丁炔基。
除非特别限制，否则表述“亚烷基”表示式-(CH2)n-的链，其中n是整数，例如1-12、
1-6、2-6或2-5。
除非特别限制，否则表述“环烷基”表示C3-10环烷基(即，3至10个环碳原子)，更合
适地C3-8环烷基，例如C3-6环烷基。示例性的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环
庚基和环辛基。环碳原子的最合适的数量为3-6个。
除非特别限制，否则表述“环烯基”表示C3-10环烯基(即，3至10个环碳原子)，合适
地C5-10环烯基(即，5至10个环碳原子)，更合适地C5-8环烯基，例如C5-6环烯基。示例性的环烯
基包括环丙烯基、环己烯基、环庚烯基和环辛烯基。环碳原子的最合适的数量为5-6个。
除非特别限制，否则表述“碳环基”表示其中所有环原子是碳并且含有3至12个环
碳原子，合适地3至10个碳原子，更合适地3至8个碳原子的任何环系统。碳环基可以是饱和
的或部分不饱和的，但不包括芳环。碳环基的实例包括单环、二环和三环环系统，特别是单
环和二环环系统。其它碳环基包括桥环系统(例如二环[2.2.1]庚烯基)。碳环基的具体实例
是环烷基。碳环基的另一实例是环烯基。
除非特别限制，否则表述“杂环基”是指其中一个或多个(例如1个、2个或3个)环原
子被杂原子替代的碳环基。杂原子通常选自N、S和O。杂环基的具体实例是其中一个或多个
(例如1个、2个或3个，特别是1个或2个，尤其是1个)环原子被选自N、S或O的杂原子替代的环
烷基(例如环戊基或者更特别地环己基)。示例性的含有一个杂原子的杂环基包括吡咯烷、
四氢呋喃和哌啶，并且示例性的含有两个杂原子的杂环基包括吗啉和哌嗪。杂环基的另一
具体实例是其中一个或多个(例如1个、2个或3个，特别是1个或2个，尤其是1个)环原子被选
自N、S和O的杂原子替代的环烯基(例如环己烯基)。这种基团的实例是二氢吡喃基(例如，3,
4-二氢-2H-吡喃-2-基-)。杂环基可以通过碳环原子或氮环原子连接到分子的一个或多个
其它部分。
除非特别限制，否则表述“芳基”表示C6-12芳基，合适地C6-10芳基，更合适地C6-8芳
基。芳基含有至少一个芳环(例如，一个、两个或三个环)。具有多个芳环的芳基包括稠合芳
环和通过一个单键彼此连接的芳环。具有一个芳环的典型芳基的实例是苯基。具有两个稠
合芳环的典型芳基的实例是萘基。具有两个直接连接的芳环的芳基的实例是联苯基。
除非特别限制，否则表述“杂芳基”表示其中一个或多个(例如1个、2个、3个或4个，
合适地1个、2个或3个)环原子被杂原子替代的芳基，所述杂原子通常选自N、S和O，或者含有
一个或多个(例如1个、2个、3个或4个，合适地1个、2个或3个)环原子的5元芳环，所述杂原子
通常选自N、S和O。在一些实施方案中，杂芳基不具有除氮以外的环杂原子。示例性的具有一
个杂原子的单环杂芳基包括：五元环(例如吡咯、呋喃、噻吩)；以及六元环(例如吡啶，例如
吡啶-2-基、吡啶-3-基和吡啶-4-基)。示例性的具有两个杂原子的单环杂芳基包括：五元环
(例如吡唑、唑、异唑、噻唑、异噻唑、咪唑，例如咪唑-1-基、咪唑-2-基、咪唑-4-基)；以
及六元环(例如哒嗪、嘧啶、吡嗪)。示例性的具有三个杂原子的单环杂芳基包括：1,2,3-三
唑、1,2,4-三唑、1,2,3-二唑和1,2,4-二唑。示例性的具有四个杂原子的单环杂芳基
包括四唑。示例性的二环杂芳基包括：吲哚(例如吲哚-6-基)、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、异
喹啉、吲唑、苯并咪唑、苯并噻唑、喹唑啉和嘌呤。杂芳基可以通过碳环原子或氮环原子连接
到分子的一个或多个其它部分。
上述芳基和杂芳基在适当情况下可以任选地被一个或多个(例如1个、2个或3个，
合适地1个或2个)基团取代，所述基团各自独立地选自单价或多价(即具有大于1的化合价)
官能团。合适的取代基包括烷基、烯基、炔基、卤代烷基、-烷氧基(例如OMe)、环烷基、烯氧
基-、炔氧基-、烷氧基烷基-、硝基、卤素(例如氟、氯和溴)、氰基、羟基、氧代、-C(O)-烷基(例
如COMe)、C(O)OH、-C(O)O烷基(例如-C(O)OMe)、-OC(O)烷基(例如-OC(O)Me)、-NH2、-NH烷基
(例如-NHMe)、-N(烷基)2(例如二甲基氨基-)、-C(O)NH2、-C(O)NH(烷基)(例如-C(O)NHMe)、-
NHC(O)烷基(例如-NHC(O)Me)、-C(NH)NH2、硫代烷基(例如-硫代甲基)、-SO2烷基(例如
SO2Me)、-SO烷基(例如-SOMe)、-SO2环烷基和-SO环烷基。更典型地，取代基选自烷基(例如
Me)、氟烷基(例如CF3和CHF2)、烷氧基(例如OMe)、卤素和羟基。
除非特别限制，否则表述“-烷基芳基”表示经由亚烷基部分例如C1-4亚烷基部分连
接的芳基。这种基团的实例是苄基：PhCH2-。
术语“卤素”或“卤代”包括氟(F)、氯(Cl)和溴(Br)。
术语“氨基”是指基团-NH2。
术语“氧代”是指氧原子，其与其所取代的碳原子一起形成羰基C＝O。
术语“-芳基杂环基”是指经由芳基部分连接的杂环基。
立体异构体：
本发明包括要求保护的化合物的所有可能的立体异构体。
当本发明的化合物具有至少一个手性中心时，它们可相应地作为对映异构体存
在。当化合物具有两个或更多个手性中心时，它们可另外作为非对映异构体存在。应理解，
所有此类异构体及其混合物均包括在本发明的范围内。
立体异构体的制备和分离：
在用于制备本发明的化合物的方法产生立体异构体的混合物的情况下，这些异构
体可以通过常规技术例如制备性色谱法进行分离。化合物可以外消旋形式制备，或者可以
通过对映特异性合成或者通过拆分来制备单个对映异构体。化合物可以例如通过标准技术
拆分成其组分对映异构体，例如通过与旋光酸，例如(-)-二-对-甲苯酰基-d-酒石酸和/或
(+)-二-对-甲苯酰基-1-酒石酸形成盐而形成非对映异构体对，随后进行分步结晶和游离
碱再生。化合物也可通过形成非对映异构的酯或酰胺，随后色谱分离和移除手性助剂进行
拆分。可选地，化合物可以使用手性HPLC柱来拆分。
药学上可接受的盐：
鉴于游离化合物与呈其盐或溶剂合物的形式的化合物之间的密切关系，在这种情
况下，无论何时提及化合物，也意欲涵盖相应的盐、溶剂合物或多晶型物，只要其在这种情
况下是可能的或者是适当的。
适合用于药物中的式(I)化合物的盐和溶剂合物以及其生理学功能衍生物是其中
抗衡离子或缔合溶剂是药学上可接受的那些。然而，具有非药学上可接受的抗衡离子或缔
合溶剂的盐和溶剂合物在本发明的范围内，例如，在其它化合物以及它们的药学上可接受
的盐和溶剂合物的制备中用作中间体。
根据本发明合适的盐包括与有机和无机酸或碱形成的那些。药学上可接受的酸加
成盐包括从以下酸形成的那些：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、柠檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮
酸、乙酸、三氟乙酸、三苯基乙酸、氨基磺酸、对氨基苯磺酸、琥珀酸、草酸、富马酸、马来酸、
苹果酸、扁桃酸、谷氨酸、天冬氨酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、芳基磺酸(例如对甲苯磺酸、
苯磺酸、萘磺酸或萘二磺酸)、水杨酸、戊二酸、葡糖酸、丙三羧酸、肉桂酸、取代的肉桂酸(例
如，苯基、甲基、甲氧基或卤素取代的肉桂酸，包括4-甲基肉桂酸和4-甲氧基肉桂酸)、抗坏
血酸、油酸、萘甲酸、羟基萘甲酸(例如1-羟基-2-萘甲酸或3-羟基-2-萘甲酸)、萘丙烯酸(例
如萘-2-丙烯酸)、苯甲酸、4-甲氧基苯甲酸、2-羟基苯甲酸或4-羟基苯甲酸、4-氯苯甲酸、4-
苯基苯甲酸、苯丙烯酸(例如1,4-苯二丙烯酸)、羟乙磺酸、高氯酸、丙酸、乙醇酸、羟基乙磺
酸、扑酸、环己烷氨基磺酸、水杨酸、糖精酸和三氟乙酸。药学上可接受的碱盐包括铵盐、碱
金属盐例如钠盐和钾盐、碱土金属盐例如钙盐和镁盐，以及与有机碱例如二环己基胺和N-
甲基-D-葡糖胺的盐。
本发明的化合物的所有药学上可接受的酸加成盐形式都意欲涵盖在本发明的范
围内。
多晶型物晶体形式：
此外，化合物的一些结晶形式可作为多晶型物存在，并且因此意欲包括在本发明
内。另外，一些化合物可与水(即水合物)或常见有机溶剂形成溶剂合物，并且此类溶剂合物
也意欲包括在本发明的范围内。化合物，包括它们的盐也可以它们的水合物的形式获得，或
者包含用于其结晶的其它溶剂。
前药：
本发明在其范围内进一步包括本发明的化合物的前药。在一般情况下，此类前药
是可在体内容易地转化成期望的治疗活性化合物的化合物的功能衍生物。因此，在这些情
况，即本发明的治疗方法中，术语“施用(administering)”应包括用一种或多种要求保护的
化合物的前药形式描述的对各种病症的治疗，但所述前药形式在施用至受试者后在体内转
化成上文指定的化合物。用于选择和制备合适的前药衍生物的常规程序描述于例如
“Designof Prodrugs”，H.Bundgaard编，Elsevier，1985中。
保护基：
在任何用于制备本发明的化合物的方法期间，可能有必要和/或希望保护所涉及
的任何分子上的敏感性或反应性基团。这可通过常规保护基来实现，例如Protective
Groups in Organic Chemistry，J.F.W.McOmie编,Plenum Press,1973；以及T.W.Greene&
P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,1991中描述
的那些保护基，所述文献全部通过引用并入本文。保护基可使用本领域已知的方法在方便
的后续阶段移除。
如本文所用，术语“组合物”意欲包括包含治疗有效量的要求保护的化合物的产
品，以及直接或间接从要求保护的化合物的组合得到的任何产品。
用于盖仑制剂的载体和添加剂：
可添加到混合物中的载体包括必要的和惰性的药物赋形剂，包括但不限于合适的
粘合剂、助悬剂、润滑剂、矫味剂、甜味剂、防腐剂、包衣、崩解剂、染料和着色剂。
因此，对于液体口服制剂，诸如例如混悬剂、酏剂和溶液，合适的载体和添加剂可
以有利地包括水、二醇、油、醇、矫味剂、防腐剂、着色剂等；对于固体口服制剂，诸如，例如散
剂、胶囊剂、软胶囊和片剂，合适的载体和添加剂包括淀粉、糖、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘
合剂、崩解剂等。
作为可靶向的药物载体的可溶性聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚
羟基丙基甲基丙烯酰胺苯酚、聚羟基乙基天冬酰胺苯酚或被棕榈酰基取代的聚氧化乙烯聚
左旋赖氨酸。此外，本发明的化合物可与一类可用于实现药物的控制释放的生物可降解聚
合物偶联，例如聚乳酸、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙
烯酸酯以及水凝胶的交联共聚物或水凝胶的两亲性嵌段共聚物。
合适的粘合剂包括但不限于淀粉、明胶、天然糖例如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味
剂、天然和合成树胶例如阿拉伯胶、黄蓍胶或油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸
钠、氯化钠等。
崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。
发明内容
根据本发明，提供式(I)化合物，
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或多晶型物，包括其所有互变异构体和立体异
构体，其中：
R1表示H；任选地被取代的烷基(其中任选的取代基包括一个或多个各自独立地选
自以下的取代基：C1-6烷氧基、NH2、-NHC1-3烷基和-N(C1-3烷基)2)；-C(O)O烷基；卤代烷基；卤
代烷氧基；或-烷基芳基；
各R2独立地表示H；任选地被取代的烷基(其中任选的取代基包括一个或多个各自
独立地选自以下的取代基：C1-6烷氧基、NH2、-NHC1-3烷基和-N(C1-3烷基)2)；-烷基芳基；任选
地被取代的碳环基(其中任选的取代基包括一个或多个各自独立地选自以下的取代基：C1-6
烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基和卤素)；任选地被取代的杂环基(其中任选
的取代基包括一个或多个各自独立地选自以下的取代基：C1-6烷基、C1-6烷氧基、-C(O)OC1-6
烷基、-C(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷基)；-NH烷基；-N(烷基)2；氨基；羟基；烷氧基或卤素；
n表示0、1或2；
R3表示H或烷基；
R4表示H或烷基；
R5表示H或烷基；
W和X各自独立地表示C＝O；C＝S；或CH2；
Y表示芳基；杂芳基；任选地被取代的碳环基(其中任选的取代基包括一个或多个
各自独立地选自以下的取代基：C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基和卤
素)；或任选地被取代的杂环基(其中任选的取代基包括一个或多个各自独立地选自以下的
取代基：C1-6烷基、C1-6烷氧基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷基)；并且
Z表示任选地被取代的烷基(其中任选的取代基包括一个或多个各自独立地选自
以下的取代基：C1-6烷氧基、NH2、-NHC1-3烷基和-N(C1-3烷基)2)；芳基；杂芳基；-烷基芳基；-烷
基杂芳基；任选地被取代的碳环基(其中任选的取代基包括一个或多个各自独立地选自以
下的取代基：C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基和卤素)；任选地被取代的
杂环基(其中任选的取代基包括一个或多个各自独立地选自以下的取代基：C1-6烷基、C1-6烷
氧基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷基)；-烷基碳环基，其中碳环基任选地
被取代(其中任选的取代基包括一个或多个各自独立地选自以下的取代基：C1-6烷基、C1-6烷
氧基、C1-6卤代烷氧基和卤素)；-烷基杂环基，其中杂环基任选地被取代(其中任选的取代基
包括一个或多个各自独立地选自以下的取代基：C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基
和-C(O)NHC1-6烷基)；-芳基碳环基，其中碳环基任选地被取代(其中任选的取代基包括一个
或多个各自独立地选自以下的取代基：C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基和卤素)；或-芳
基杂环基，其中杂环基任选地被取代(其中任选的取代基包括一个或多个各自独立地选自
以下的取代基：C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷基)。
此外，根据本发明，提供式(I)化合物，
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或多晶型物，包括其所有互变异构体和立体异
构体，其中：
R1表示H；烷基，其任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷
氧基、NH2、-NHC1-3烷基和-N(C1-3烷基)2；-C(O)O烷基；卤代烷基；卤代烷氧基；或-烷基芳基；
各R2独立地表示H；烷基，其任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取
代：C1-6烷氧基、NH2、-NHC1-3烷基和-N(C1-3烷基)2；-烷基芳基；碳环基，其任选地被一个或多
个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基
和卤素；杂环基，其任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、C1-6
烷氧基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷基；-NH烷基；-N(烷基)2；氨基；羟
基；烷氧基或卤素；
n表示0、1或2；
R3表示H或烷基；
R4表示H或烷基；
R5表示H或烷基；
W和X各自独立地表示C＝O；C＝S；或CH2；
Y表示芳基；杂芳基；碳环基，其任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代
基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基和卤素；或杂环基，其任选地被
一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、-C(O)OC1-6烷基、-C
(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷基；并且
Z表示烷基，其任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷氧
基、NH2、-NHC1-3烷基和-N(C1-3烷基)2；芳基；杂芳基；-烷基芳基；-烷基杂芳基；碳环基，其任
选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、
C1-6卤代烷氧基和卤素；杂环基，其任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取
代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷基；-烷基碳环基，
其中碳环基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、
C1-6卤代烷氧基和卤素；-烷基杂环基，其中杂环基任选地被一个或多个各自独立地选自以
下的取代基取代：C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷基；-芳基碳环
基，其中碳环基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧
基、C1-6卤代烷氧基和卤素；或-芳基杂环基，其中杂环基任选地被一个或多个各自独立地选
自以下的取代基取代：C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷基。
附图说明
图1：示出了化合物51和化合物110对哺乳动物porcupine的活性的抑制的条形图。
图2：示出了化合物51对MMTV-Wnt1小鼠模型的功效的图表。
图3：示出了化合物110在MMTV-Wnt1小鼠模型中的功效数据的图表。
图4：示出了化合物51对Wnt3a棕榈酰化的抑制的图像。
图5至图7：示出了软琼脂测定的结果的图像和图表。图5示出了用化合物51处理的
细胞系AsPC-1的结果。图6示出了用化合物51处理的细胞系HPAF-II的结果。图7示出了用化
合物51处理的细胞系CFPAC-1的结果。
具体实施方式
根据本发明，提供式(I)化合物，
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或多晶型物，包括其所有互变异构体和立体异
构体，其中：
R1表示H；烷基，其任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷
氧基、NH2、-NHC1-3烷基和-N(C1-3烷基)2；-C(O)O烷基；卤代烷基；卤代烷氧基；或-烷基芳基；
各R2独立地表示H；烷基，其任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取
代：C1-6烷氧基、NH2、-NHC1-3烷基和-N(C1-3烷基)2；-烷基芳基；碳环基，其任选地被一个或多
个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基
和卤素；杂环基，其任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、C1-6
烷氧基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷基；-NH烷基；-N(烷基)2；氨基；羟
基；烷氧基或卤素；
n表示0、1或2；
R3表示H或烷基；
R4表示H或烷基；
R5表示H或烷基；
W和X各自独立地表示C＝O；C＝S；或CH2；
Y表示芳基；杂芳基；碳环基，其任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代
基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基和卤素；或杂环基，其任选地被
一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、-C(O)OC1-6烷基、-C
(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷基；并且
Z表示烷基，其任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷氧
基、NH2、-NHC1-3烷基和-N(C1-3烷基)2；芳基；杂芳基；-烷基芳基；-烷基杂芳基；碳环基，其任
选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、
C1-6卤代烷氧基和卤素；杂环基，其任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取
代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷基；-烷基碳环基，
其中碳环基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、
C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基和卤素；-烷基杂环基，其中杂环基任选地被一个或多个各自
独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷
基；-芳基碳环基，其中碳环基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6
烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基和卤素；或-芳基杂环基，其中杂环基任选地
被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基
和-C(O)NHC1-6烷基。
在一个实施方案中，下列化合物中的任一种或多种、任选地全部被排除在式(I)的
范围之外：
在变量Y的上下文中，术语“芳基”被理解为意指“亚芳基”(例如，“苯基”被理解为
意指“亚苯基”(即C6H4))，因为Y是连接基团，而不是末端基团。用于其它Y环的术语(例如杂
芳基)同样作此解释。当提及Y未被取代时，应理解为意指除Z和NR5以外没有其它取代基。当
提及Y被单取代时，应理解为意指除Z和NR5以外有一个取代基。
当R1表示烷基时，所述烷基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取
代：C1-6烷氧基、NH2、-NHC1-3烷基和-N(C1-3烷基)2，示例性取代基包括甲氧基、-NH2、-NH甲基
和-NH(甲基)2。实例包括C1-6烷基(例如未被取代的C1-6烷基)，例如甲基、乙基、丙基(例如正
丙基、异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基)、戊基(例如正戊基)和己基(例
如正己基)。示例性C1-6烷基是甲基和乙基，特别是甲基。
当R1表示-C(O)O烷基时，实例包括-C(O)OC1-6烷基，例如-C(O)OMe、-C(O)OEt、-C
(O)OPr和-C(O)OiPr。具体实例是-C(O)OMe。
当R1表示卤代烷基时，实例包括C1-6卤代烷基，例如CH2F、CHF2、CF3、CH2CH2F、
CH2CHF2、CH2CF3、CHFCH3和CF2CH3。具体实例是CF3。
当R1表示卤代烷氧基时，实例包括C1-6卤代烷氧基，例如OCF3。
当R2表示烷基时，所述烷基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取
代：C1-6烷氧基、NH2、-NHC1-3烷基和-N(C1-3烷基)2，示例性取代基包括甲氧基、-NH2、-NH甲基
和-NH(甲基)2。实例包括C1-6烷基(例如未被取代的C1-6烷基)，例如甲基、乙基、丙基(例如正
丙基、异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基)、戊基(例如正戊基)和己基(例
如正己基)。示例性C1-6烷基是甲基。
当R2表示-烷基芳基时，实例包括苄基。
当R2表示碳环基时，所述碳环基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代
基取代：C1-6烷基(例如甲基)、C1-6烷氧基(例如甲氧基)、C1-6卤代烷基(例如氟甲基，例如三
氟甲基)、C1-6卤代烷氧基(例如氟甲氧基，例如三氟甲氧基)和卤素(例如氟，例如氯)，实例
包括C3-C6环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基和环己基。被取代的实例包括被甲基取代的
环己基。
当R2表示杂环基时，所述杂环基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代
基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷基，Y可表示任
选地被C1-6烷基(例如甲基)取代的杂环基。实例包括单环杂环基。杂环基可以是未被取代的
或者可具有例如一个或两个(例如一个)取代基(例如一个甲基)。实例包括哌啶基、吗啉基、
吡咯烷基、4,5-二氢吡唑基和4,5-二氢异唑基。具体实例是吡咯烷基。
当R2表示-NH烷基时，实例包括-NHMe、NHEt、NHPr和NHiPr，特别是NHMe。
当R2表示-N(烷基)2时，实例包括-N(Me)2。
当R2表示烷氧基时，实例包括甲氧基和乙氧基，尤其是甲氧基。
当n表示1时，-(CHR2)n-的实例包括-CH2-和-CH(CH3)-。
当n表示2时，-(CHR2)n-的实例包括-CH2-CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-和-CH
(CH3)-CH(CH3)-。-(CHR2)2-基团的实例是-CH2-CH2-。
当R3表示烷基时，实例包括C1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基(例如正丙基、异丙基)、
丁基(例如正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基)、戊基(例如正戊基)和己基(例如正己基)。示例
性C1-6烷基是甲基。
当R4表示烷基时，实例包括C1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基(例如正丙基、异丙基)、
丁基(例如正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基)、戊基(例如正戊基)和己基(例如正己基)。示例
性C1-6烷基是甲基。
当R5表示烷基时，实例包括C1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基(例如正丙基、异丙基)、
丁基(例如正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基)、戊基(例如正戊基)和己基(例如正己基)。示例
性C1-6烷基是甲基。
当Y表示芳基时，实例包括任选地被取代的苯基。示例性取代基包括一个或多个
(例如一个或两个，尤其是一个)各自独立地选自以下的取代基：C1-6烷基(例如甲基)、C1-6烷
氧基(例如甲氧基)、卤素和C1-6卤代烷基(例如氟甲基，例如三氟甲基)。实例包括未被取代
的苯基、甲基苯基、甲氧基苯基、氟苯基、氯苯基和三氟甲基苯基。具体实例包括未被取代的
苯基。具体实例还包括甲基苯基、甲氧基苯基、氟苯基。Z和NR5可相对于彼此位于苯环上的1
位和4位(即Z和NR5呈对位关系)。
当Y表示杂芳基时，实例包括单环(例如5元和6元)和二环(例如9元和10元)杂芳基
环，尤其是单环杂芳基环，特别是6元单环杂芳基环。单环杂芳基的实例可包含一个、两个或
三个(例如一个或两个，例如一个)环杂原子，包括一个或两个(例如一个或例如两个)氮原
子以及任选的氧或硫原子。示例性5元单环杂芳基包括吡咯基、吡唑基、咪唑基、唑基、异
唑基、噻唑基、异噻唑基、二唑基和噻二唑基。当Y是5元单环杂芳基时，Z和NR5可位于环
上的非相邻环原子上。示例性6元单环杂芳基包括吡啶基。示例性6元单环杂芳基还包括哒
嗪基、嘧啶基和吡嗪基。当Y是6元单环杂芳基时，Z和NR5可相对于彼此位于环上的1位和4位
(即Z和NR5呈对位关系)。上述杂芳基可以是未被取代的或者可被一个或多个(例如一个或
两个，特别是一个)取代基取代。示例性取代基独立地选自C1-6烷基(例如甲基)、C1-6烷氧基
(例如甲氧基)、卤素(例如氟)和C1-6卤代烷基(例如氟甲基，例如三氟甲基)。当Y是未被取代
的杂芳基时，实例包括异唑基(例如异唑-5-基(其中NR5位于5位且Z位于3位)和异
唑-3-基(其中NR5位于3位且Z位于5位)，尤其是异唑-5-基)、二唑基、吡啶基(例如吡
啶-2-基或吡啶-3-基)、哒嗪基(例如哒嗪-3-基)、嘧啶基(例如嘧啶-3-基)、吡嗪基(例如吡
嗪-2-基)。当Y是被取代的杂芳基时，Y可例如被甲基或氟取代。当Y是被取代的杂芳基时，实
例包括甲基吡啶基、氟吡啶基、甲基哒嗪基、甲基吡嗪基、甲基嘧啶基和1-甲基吡唑基。
当Y表示碳环基时，所述碳环基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代
基取代：C1-6烷基(例如甲基)、C1-6烷氧基(例如甲氧基)、C1-6卤代烷基(例如氟甲基，例如三
氟甲基)、C1-6卤代烷氧基(例如氟甲氧基)和卤素(例如氟，例如氯)，Y可表示任选地被C1-6烷
基取代的碳环基。实例包括任选地被C1-6烷基(例如甲基)取代的单环碳环基。碳环基的实例
包括C3-8环烷基(例如环己基)和C5-8环烯基(例如环己烯基)。碳环基环任选地被一个、两个
或三个独立选择的取代基(例如一个或两个，尤其是一个，例如一个甲基)取代。当Y表示碳
环基时，Y可表示C3-8环烷基，例如C5-6环烷基。具体实例是环己基。当Y是6元碳环基时，Z和
NR5可相对于彼此位于碳环基环上的1位和4位。
当Y表示杂环基时，所述杂环基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代
基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷基，Y可表示任
选地被C1-6烷基(例如甲基)取代的杂环基。实例包括单环杂环基。杂环基可以是未被取代的
或者可具有例如一个或两个(例如一个)取代基(例如一个甲基)。实例包括哌啶基、吗啉基、
吡咯烷基、4,5-二氢吡唑基和4,5-二氢异唑基。具体实例包括4,5-二氢异唑基(例如
4,5-二氢异唑-5-基)和哌啶基(例如哌啶-4-基)。当Y是6元杂环基时，Z和NR5可相对于彼
此位于杂环基环上的1位和4位。当Y表示杂环基时，在一个实施方案中，Z不表示-烷基芳基。
当Z表示烷基时，所述烷基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取
代：C1-6烷氧基、NH2、-NHC1-3烷基和-N(C1-3烷基)2，示例性取代基包括甲氧基、-NH2、-NH甲基
和-NH(甲基)2。实例包括C1-6烷基(例如未被取代的C1-6烷基)，例如甲基、乙基、丙基(例如正
丙基、异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基)、戊基(例如正戊基)和己基(例
如正己基)。实例还包括C3-6烷基(例如未被取代的C3-6烷基)，例如丙基(例如正丙基、异丙
基)、丁基(例如正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基)、戊基(例如正戊基)和己基(例如正己基)。
示例性C1-6烷基是甲基和叔丁基。
当Z表示芳基时，实例包括任选地被取代的苯基。示例性取代基包括一个或多个
(例如一个或两个，尤其是一个)各自独立地选自以下的取代基：氟、氯、溴、氨基、甲氧基、甲
基、卤代烷基(例如氟甲基，例如三氟甲基)、-COOH、-C(O)NMe2、二甲基氨基和-NHC(O)Me。实
例包括未被取代的苯基。被取代的实例包括氟苯基(例如2-氟苯基、3-氟苯基和4-氟苯基)、
氯苯基(例如2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基和3,4-二氯苯基)、溴苯基(例如2-溴苯基、3-溴
苯基和4-溴苯基)、氨基苯基(例如2-氨基苯基、3-氨基苯基、4-氨基苯基)、甲氧基苯基(例
如2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基和4-甲氧基苯基)、甲基苯基(例如2-甲基苯基、3-甲基苯基
和4-甲基苯基)、氟甲基苯基(例如3-三氟甲基苯基和4-三氟甲基苯基)、羧基苯基(例如3-
(COOH)-苯基)、3-(C(O)NMe2)-苯基)、3-二甲基氨基苯基和3-(NHC(O)Me)-苯基。
当Z表示杂芳基时，实例包括单环(例如5元和6元)和二环(例如9元和10元)杂芳基
环，尤其是单环环。单环杂芳基的实例包含一个、两个或三个(例如一个或两个，例如一个)
环杂原子，包括一个或两个(例如一个或例如两个)氮原子以及任选的氧或硫原子。示例性5
元单环杂芳基包括吡咯基、吡唑基、咪唑基、唑基、异唑基、噻唑基、异噻唑基、二唑
基和噻二唑基。示例性6元单环杂芳基包括吡啶基。示例性6元单环杂芳基还包括哒嗪基、嘧
啶基和吡嗪基。上述杂芳基可以是未被取代的或者可被一个或多个(例如一个或两个，特别
是一个)取代基取代。示例性取代基独立地选自甲基、氟、氯、氨基、卤代甲基(例如氟甲基，
例如三氟甲基)。未被取代的实例包括吡啶基(例如吡啶-2-基、吡啶-3-基和吡啶-4-基)、吡
嗪基(例如吡嗪-2-基)、哒嗪基(例如哒嗪-3-基)、嘧啶基(例如嘧啶-2-基、嘧啶-4-基和嘧
啶-5-基)、唑基(例如唑-2-基和唑-5-基)、噻唑基(例如噻唑-2-基和噻唑-5-基)和
吡唑基(例如吡唑-1-基)。被取代的实例包括氯吡啶基(例如4-氯吡啶-2-基、5-氯吡啶-2-
基和5-氯吡啶-3-基)、氟吡啶基(例如4-氟吡啶-2-基、5-氟吡啶-2-基和5-氟吡啶-3-基)、
甲基吡啶基(例如2-甲基吡啶-5-基、6-甲基吡啶-2-基和5-甲基吡啶-3-基)、氟甲基吡啶基
(例如5-三氟甲基吡啶-3-基)、氨基吡啶基(例如5-氨基吡啶-3-基)、甲基吡嗪基(例如5-甲
基吡嗪-2-基)、甲基噻唑基(例如2-甲基噻唑-4-基)和甲基吡唑基(例如1-甲基吡唑-5-
基)。
当Z表示-烷基芳基时，实例包括苄基。
当Z表示-烷基杂芳基(例如-CH2-杂芳基)时，实例包括-烷基吡咯基、-烷基吡唑
基、-烷基咪唑基、-烷基唑基、-烷基异唑基、-烷基噻唑基、-烷基异噻唑基、-烷基二
唑基、-烷基噻二唑基、-烷基吡啶基、-烷基哒嗪基、-烷基嘧啶基和-烷基吡嗪基。
当Z表示碳环基时，所述碳环基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代
基取代：C1-6烷基(例如甲基)、C1-6烷氧基(例如甲氧基)、C1-6卤代烷基(例如氟甲基)、C1-6卤
代烷氧基(例如氟甲氧基)和卤素(例如氟，例如氯)，Z可表示任选地被C1-6烷基取代的碳环
基。实例包括任选地被C1-6烷基(例如甲基)取代的单环碳环基。碳环基的实例包括C3-8环烷
基(例如环己基)和C5-8环烯基(例如环己烯基)。碳环基环任选地被一个、两个或三个取代基
(例如一个或两个，尤其是一个，例如一个甲基)取代。当Z表示碳环基时，Z可表示C3-8环烷
基，例如C5-6环烷基。具体实例是环己基。
当Z表示杂环基时，所述杂环基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代
基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)NHC1-6烷基C1-6烷基(例
如甲基)、-C(O)OC1-6烷基(例如-C(O)O甲基)、-C(O)C1-6烷基(例如-C(O)甲基)、-C(O)NHC1-6
烷基(例如-C(O)NH甲基)，实例包括未被取代的杂环基和具有一个或两个(例如一个)取代
基的杂环基。实例包括含有一个氮原子的杂环基(例如吡咯烷基和哌啶基)或含有两个氮原
子的杂环基(例如哌嗪基)。实例还包括含有一个氮原子和一个氧原子的杂环基(例如吗啉
基)或含有一个氮原子和一个硫原子的杂环基(例如硫代吗啉基)。在一个实施方案中，当Z
是被取代的时，环氮原子被取代。被取代的实例包括被取代的哌嗪基，例如4-取代的哌嗪
基，例如4-Boc-哌嗪基、4-(C(O)Me)-哌嗪基、4-(C(O)NHEt)哌嗪基和4-甲基哌嗪基。
当Z表示-烷基碳环基(例如-CH2-碳环基)时，其中碳环基任选地被一个或多个各
自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基(例如甲基)、C1-6卤代烷基(例如氟甲基，例如三
氟甲基)、C1-6烷氧基(例如甲氧基)、C1-6卤代烷氧基(例如氟甲氧基)和卤素(例如氟，例如
氯)，实例包括-CH2-环丙基和-CH2-环丁基。
当Z表示-烷基杂环基时，其中杂环基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的
取代基取代：C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)NHC1-6烷基C1-6烷基(例如甲
基)、-C(O)OC1-6烷基(例如-C(O)O甲基)、-C(O)C1-6烷基(例如-C(O)甲基)、-C(O)NHC1-6烷基
(例如-C(O)NH甲基)，实例包括-CH2-杂环基，例如-CH2-吗啉基、-CH2-哌嗪基、-CH2-哌啶基
和-CH2-吡咯烷基。
当Z表示-芳基碳环基时，其中碳环基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的
取代基取代：C1-6烷基(例如甲基)、C1-6烷氧基(例如甲氧基)、C1-6卤代烷基(例如氟甲基，例
如三氟甲基)、C1-6卤代烷氧基(例如氟甲氧基)和卤素(例如氟，例如氯)，Z可以是苯基碳环
基。碳环基环可以是未被取代的或者可被一个或多个C1-6烷基取代。碳环基环可以是单环
的。示例性碳环基环是环烷基。实例包括环丙基苯基-和环己基苯基-。
当Z表示-芳基杂环基时，其中杂环基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的
取代基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)NHC1-6烷基C1-6烷基
(例如甲基)、-C(O)OC1-6烷基(例如-C(O)O甲基)、-C(O)C1-6烷基(例如-C(O)甲基)、-C(O)
NHC1-6烷基(例如-C(O)NH甲基)，Z可以是-苯基杂环基。杂环基环可以是单环的且可含有一
个或两个(例如一个)氮原子。实例包括吗啉基苯基-、哌嗪基苯基-、哌啶基苯基-、吡咯烷基
苯基-。具体实例是3-(吗啉-4-基)苯基-。
适当地，R1表示H、甲基、乙基、-C(O)OMe、CF3或OMe。在一个实施方案中，R1表示甲
基。
适当地，各R2独立地表示H或烷基。更适当地，R2表示H或甲基。在一个实施方案中，
R2表示H。在一个实施方案中，R2表示甲基。
适当地，n表示0或1，例如n表示1。
适当地，R3表示H或甲基，例如R3表示H。
适当地，R4表示H或甲基，例如R4表示H。
适当地，R5表示H或甲基，例如R5表示H。
适当地，W和X彼此相同。
适当地，W和X各自表示C＝O。
适当地，Y表示芳基(例如苯基)或杂芳基(例如包含一个、两个或三个环杂原子的5
元或6元单环杂芳基，所述环杂原子包括一个或两个氮原子，例如异唑基、吡啶基、哒嗪
基、嘧啶基或吡嗪基)。在一个实施方案中，Y表示苯基。在一个实施方案中，Y表示单环杂芳
基。在一个实施方案中，Y被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、C1-6烷
氧基、卤素和C1-6卤代烷基。在一个实施方案中，Y是未被取代的。在一个实施方案中，Y是被
单取代的。当Y是5元时，适当地，Z和NR5位于环上的非相邻环原子上。当Y是6元时，适当地，Z
和NR5相对于彼此位于环上的1位和4位(即Z和NR5呈对位关系)。
适当地，Z表示芳基(例如苯基)或杂芳基(例如6元杂芳基，例如吡啶基、哒嗪基、嘧
啶基或吡嗪基，尤其是吡啶基；或5元杂芳基，例如唑基、噻唑基、吡唑基)。在一个实施方
案中，Z表示杂芳基。在一个实施方案中，Z表示芳基。在一个实施方案中，Z不表示甲基或乙
基。在一个实施方案中，Z不表示未被取代的烷基。
在一个实施方案中，提供式(I)化合物，其为式(IA)化合物：
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或多晶型物，包括其所有互变异构体和立体异
构体，其中：
R1表示烷基；
各R2独立地表示H；烷基；碳环基，其可任选地被一个或多个各自独立地选自以下
的取代基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基和卤素；-NH烷基；-N(烷基)2；氨基；羟
基；烷氧基或卤素；
n表示0、1或2；
R4表示H或烷基；
R5表示H或烷基；
W和X各自独立地表示C＝O或C＝S(在一些实施方案中，W和X均为C＝O)；
Y表示芳基；杂芳基；碳环基，其任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代
基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基和卤素；或杂环基，其任选地被
一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基
和-C(O)NHC1-6烷基；并且
Z表示烷基；芳基；杂芳基；碳环基，其任选地被一个或多个各自独立地选自以下的
取代基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基(例如氟甲氧基)C1-6卤代烷氧基和卤素；
杂环基，其任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷
基、-C(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷基；-芳基碳环基，其中碳环基任选地被一个或多个各自
独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基和卤素；或-芳基杂环
基，其中杂环基任选地被一个或多个各自独立地选自以下的取代基取代：C1-6烷基、-C(O)
OC1-6烷基、-C(O)C1-6烷基和-C(O)NHC1-6烷基。
在一个实施方案中，提供式(I)化合物，其中R1表示甲基；R2表示H；n表示1；W和X各
自表示C＝O；R3表示H；R4表示H；Y表示异唑基；并且Z表示任选地被氯、氟、溴、甲基或甲氧
基取代的苯基。
在一个实施方案中，提供式(I)化合物，其中R1表示甲基；R2表示H；n表示1；W和X各
自表示C＝O；R3表示H；R4表示H；Y表示苯基；并且Z表示任选地被氟、氯、氨基、甲基或甲氧基
取代的苯基。
在一个实施方案中，提供式(I)化合物，其中R1表示甲基；R2表示H；n表示1；W和X各
自表示C＝O；R3表示H；R4表示H；Y表示吡啶基；并且Z表示任选地被氟、氯、甲基、氨基或三氟
甲基取代的吡啶基。
在一个实施方案中，提供式(I)化合物，其中R1表示甲基；R2表示H；n表示1；W和X各
自表示C＝O；R3表示H；R4表示H；Y表示哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基；并且Z表示任选地被氟、氯、
甲基、氨基或三氟甲基取代的吡啶基。
在一个实施方案中，R2、R4和R5全部为H，n＝1并且W和X均为C＝O。
在一个实施方案中，以下式(I)化合物被排除在外：
在一个实施方案中，Z不是被三氟烷基取代的苯基。
在一个实施方案中，当Y是异唑基时，Z不位于异唑基环的4位上。
在一个实施方案中，式(I)化合物对HEK293-STF3A细胞的IC50小于约10微摩尔
(micromolar)。
方法
本发明进一步提供用于制备其中W和X各自表示C＝O的式(I)化合物的方法，所述
方法包括以下两种化合物的酰胺偶联反应：式(II)化合物
或其受保护的衍生物，其中R1、R2、n、R3、R4、W和X如上文所定义，与式(III)化合物
或其受保护的衍生物，其中R5、Y和Z如上文所定义。
式(II)化合物可通过以下两种化合物的反应来制备：式(IV)化合物
其中R1、R2和n如上文所定义，与式(V)化合物
其中R3和R4如上文所定义。示例性的用于该反应的溶剂是氯仿。
式(IV)化合物可通过以下两种化合物的反应来制备：式(VI)化合物
其中R1如上文所定义；与式(VII)化合物
其中R2和n如上文所定义，并且其中LG表示离去基团，例如Br、I、甲苯磺酸酯基等。
该反应可在三乙胺或其它胺碱(DBU、DBN等)以及溶剂例如1,4-二烷或其它偶极非质子溶
剂存在下进行。
式(III)化合物可通过偶联反应，例如Suzuki偶联反应来合成。当Y是异唑时，式
(III)化合物可选地可从相应的氧代丙腈通过在氢氧化钠存在下与盐酸羟胺反应来合成。
氧代丙腈可从相应的酯获得。
本发明进一步提供用于制备其中W和X各自表示CH2的式(I)化合物或其受保护的
衍生物的方法，所述方法包括将式(I)化合物的W和X基团从C＝O基团转化为CH2基团。该转
化可例如通过使用硼烷二甲硫醚还原来进行。
本发明进一步提供用于制备其中W和X各自表示C＝S的式(I)化合物或其受保护的
衍生物的方法，所述方法包括将式(I)化合物的W和X基团从C＝O基团转化为C＝S基团。该转
化可例如通过使用Lawesson试剂进行。
治疗用途
本发明提供用作药物的式(I)化合物。
本发明的化合物对STF3A的IC50可小于20微摩尔，例如小于10微摩尔。所述IC50可
小于5、2、1、0.5、0.2或0.1微摩尔。其可介于约0.01微摩尔与约10微摩尔之间，或介于约
0.01微摩尔与5微摩尔之间、0.01微摩尔-1微摩尔、0.01微摩尔-0.5微摩尔、0.01微摩尔-
0.1微摩尔、0.01微摩尔-0.05微摩尔、0.1微摩尔-5微摩尔、0.1微摩尔-1微摩尔、0.1微摩
尔-0.5微摩尔、0.1微摩尔-10微摩尔、0.5微摩尔-10微摩尔、1微摩尔-10微摩尔、5微摩尔-
10微摩尔、1微摩尔-5微摩尔或0.1微摩尔-0.5微摩尔，例如约0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、
0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10微摩尔。
本发明提供用于调节WNT通路的式(I)化合物。
本发明还提供调节WNT活性的方法，所述方法包括使WNT蛋白或WNT受体暴露于式
(I)化合物。
另外，本发明提供式(I)化合物用于调节WNT活性的用途。
本发明另外提供用于治疗与WNT通路活性有关的疾病或病症的式(I)化合物。
本发明还提供治疗与WNT通路活性有关的疾病或病症的方法，所述方法包括向有
此需要的受试者施用治疗有效量的式(I)化合物。
本发明进一步提供式(I)化合物用于治疗与WNT通路活性有关的疾病或病症的用
途。
本发明还提供式(I)化合物在制备用于治疗与WNT通路活性有关的疾病或病症的
药物中的用途。
上述疾病或病症适当地选自由癌症、纤维化、干细胞和糖尿病性视网膜病变、类风
湿性关节炎、银屑病和心肌梗塞组成的组。
癌症可以是特征在于高WNT活性的癌症。
所述疾病或病症可以是癌症，例如宫颈癌、结肠癌、乳癌、膀胱癌、头颈癌、胃癌、肺
癌、卵巢癌、前列腺癌、甲状腺癌、非小细胞肺癌以及慢性淋巴细胞性白血病、间皮瘤、黑色
素瘤、胰腺腺癌、基底细胞癌、骨肉瘤、肝细胞癌、肾母细胞瘤或髓母细胞瘤，或者纤维化疾
病，例如肺纤维化、肝纤维化、皮肤纤维化或肾纤维化，或者退行性疾病，或者代谢疾病，例
如糖尿病性视网膜病变。
本发明还提供式(I)化合物在诊断中的用途。
药物组合物
为制备本发明的药物组合物，可使用至少一种式(I)化合物作为活性成分，所述式
(I)化合物任选地与其它上述药剂中的至少一种组合。根据常规的药物配混技术，将活性成
分与药物载体紧密混合，所述载体取决于施用(例如口服施用或诸如肌内施用之类的肠胃
外施用)所需的制剂形式可采取多种形式。在制备口服剂型的组合物时，可采用任何常用的
药物介质。因此，对于液体口服制剂，诸如例如混悬剂、酏剂和溶液剂，合适的载体和添加剂
包括水、二醇、油、醇、矫味剂、防腐剂、着色剂等；对于固体口服制剂，诸如例如散剂、胶囊
剂、软胶囊和片剂，合适的载体和添加剂包括淀粉、糖、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩
解剂等。片剂和胶囊剂由于其施用简易性而代表了最有利的口服剂量单位形式，在该情况
下，显然使用固体药物载体。如果需要，片剂可通过标准技术包糖衣或包肠溶衣。对于肠胃
外，载体将通常包含无菌水，但还可包含其它成分，例如用于诸如帮助溶解或防腐之类的目
的。
还可以制备注射用混悬剂，在该情况下，可以采用合适的液体载体、助悬剂等。本
文的药物组合物每剂量单位(例如，每个片剂、每粒胶囊剂、每份散剂、每支注射剂、每茶匙
等)将含有递送上述有效剂量所需的量的活性成分。本文的药物组合物每剂量单位(例如，
每个片剂、每粒胶囊剂、每份散剂、每支注射剂、每支栓剂、每茶匙等)将含有约0.03mg至
100mg/kg(优选0.1-30mg/kg)，并且可以约0.1-300mg/kg/天(优选1-50mg/kg/天)每种活性
成分或其组合的剂量给药。然而，取决于患者的要求、被治疗的病症的严重程度和所采用的
化合物，剂量可以变化。可采用每日施用或周期后给药(post-periodic dosing)。
优选地，这些组合物为单位剂型，例如片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、肠胃外用
无菌溶液或混悬剂、计量气雾剂或液体喷雾剂、滴剂、安瓿剂、自动注射装置或栓剂；用于口
服肠胃外施用、鼻内施用、舌下施用或直肠施用，或者用于通过吸入或吹入施用。可选地，组
合物可以适用于每周一次或每月一次施用的形式呈现；例如活性化合物的不溶性盐，例如
癸酸盐，可适于提供用于肌内注射的长效制剂(depot preparation)。为制备诸如片剂之类
的固体组合物，将主要的活性成分与药物载体(例如常规的制片成分，例如玉米淀粉、乳糖、
蔗糖、山梨醇、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸二钙或树胶)以及其它药物稀释剂(例如水)
混合，以形成含有本发明的化合物或其药学上可接受的盐的均匀混合物的固体预配制组合
物。当将这些预配制组合物称为均匀的时，意指活性成分在整个组合物中均匀分散，使得组
合物可容易地细分成诸如片剂、丸剂和胶囊剂之类的等效剂型。然后将该固体预配制组合
物细分成含有0.1至约500mg本发明的每种活性成分或其组合的上述类型的单位剂型。
可将本发明的组合物的片剂或丸剂进行包衣或以其它方式进行配混，以得到能提
供长效优点的剂型。例如，片剂或丸剂可包含内部剂量组分和外部剂量组分，后者为覆盖前
者的包层的形式。这两种组分可由肠溶层分开，该肠溶层起到防止在胃中崩解的作用，从而
使内部组分完整地进入十二指肠中或得以延迟释放。有多种材料可用于此类肠溶层或包
衣，此类材料包括与诸如虫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素之类的材料一起的多种聚合酸。
可掺入本发明的组合物中用于口服或注射施用的此类液体形式包括水溶液、适当
调味的糖浆剂、水性或油性混悬剂以及用食用油(例如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油)调
味的乳剂，以及酏剂和类似药物媒介物。适用于水性混悬剂的分散剂或助悬剂包括合成和
天然树胶，例如黄蓍胶、阿拉伯胶、藻酸盐、葡聚糖、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚乙烯吡
咯烷酮或明胶。
药物组合物可含有介于约0.01mg与100mg之间，优选约5mg至50mg的每种化合物，
并且可构成任何适于所选施用方式的形式。载体包括必要的和惰性的药物赋形剂，包括但
不限于粘合剂、助悬剂、润滑剂、矫味剂、甜味剂、防腐剂、染料和包衣。适用于口服施用的组
合物包括固体形式，例如丸剂、片剂、囊片、胶囊剂(各自包括速释制剂、定时释放制剂和缓
释制剂)、颗粒剂和散剂；以及液体形式，例如溶液剂、糖浆剂、酏剂、乳剂和混悬剂。可用于
肠胃外施用的形式包括无菌溶液剂、乳剂和混悬剂。
有利的是，本发明的化合物可以单次日剂量施用，或者总日剂量可以每日两次、三
次或四次的分剂量施用。此外，本发明的化合物可通过局部使用合适的鼻内媒介物以鼻内
形式施用，或者通过本领域普通技术人员所熟知的透皮贴剂施用。为以透皮递送系统的形
式施用，在整个给药方案中，剂量施用将当然是连续的而不是间断的。
例如，对于以片剂或胶囊剂的形式口服施用来说，可以将活性药物组分与口服、无
毒性的药学上可接受的惰性载体(例如乙醇、甘油、水等)组合。此外，在希望或必要时，也可
将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入混合物中。合适的粘合剂包括但不限于淀
粉、明胶、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然和合成树胶(例如阿拉伯胶、黄
蓍胶)或油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀
粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。
液体形式处于经适当调味的助悬剂或分散剂诸如合成和天然树胶，例如黄蓍胶、
阿拉伯胶、甲基纤维素等中。对于肠胃外施用，无菌混悬剂和溶液剂是期望的。当需要静脉
内施用时，采用通常含有合适的防腐剂的等渗制剂。
本发明的化合物或组合也可以脂质体递送系统，例如小单层囊泡、大单层囊泡和
多层囊泡的形式施用。脂质体可由各种磷脂，例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱来形成。
本发明的化合物或组合还可通过使用单克隆抗体作为与化合物分子偶联的单独
载体来递送。本发明的化合物还可与作为可靶向的药物载体的可溶性聚合物偶联。此类聚
合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酰胺苯酚、聚羟基乙基天冬
酰胺苯酚或被棕榈酰基取代的聚氧化乙烯聚左旋赖氨酸。此外，本发明的化合物可与一类
可用于实现药物的控制释放的生物可降解聚合物偶联，例如聚乳酸、聚ε己内酯、聚羟基丁
酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯以及水凝胶的交联共聚物或水凝胶的
两亲性嵌段共聚物。
无论何时需要治疗所论述的病症，本发明的化合物或组合可以任一前述组合物根
据本领域中已确定的剂量方案施用。
产品的日剂量可以在每天每只哺乳动物0.01mg至1.000mg的宽范围内变化。对于
口服施用，组合物优选以含有0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、
100、150、200、250和500毫克每种活性成分或其组合的片剂的形式提供，以根据症状调节给
予待治疗患者的剂量。药物的有效量通常以约0.1mg/kg体重/天至约300mg/kg体重/天的剂
量水平提供。优选地，该范围是从约1至约50mg/kg体重/天。所述化合物或组合可以每天1至
4次的方案施用。
待施用的最佳剂量可以由本领域技术人员容易地确定，并且将随所用的特定化合
物、施用方式、制剂的强度、施用方式以及疾病状况的进展而变化。另外，与所治疗的特定患
者相关的因素，包括患者的年龄、体重、饮食和施用时间将导致需要调节剂量。
在另一方面中，本发明还提供用于制备包含至少一种式(I)化合物和药学上可接
受的载体的药物组合物的方法，所述式(I)化合物任选地与其它上述药剂中的至少一种组
合。
所述组合物优选以适于相关日剂量的量存在于单位剂型中。
本发明的化合物的合适剂量(尤其是包括单位剂量)包括已知的剂量，包括参考文
献中针对这些化合物所描述或提及的单位剂量，所述参考文献诸如英国药典和美国药典、
Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.)、Martindale The Extra
Pharmacopoeia(London,The Pharmaceutical Press)(例如参见第31版第341页和其中引
用的页码)或上述出版物。
实施例
在一个实施方案中，对STF3A细胞的IC50为10微摩尔或更大的选自实施例1至171的
化合物被排除在外。
实施例的合成：
化合物根据以下通用合成方案来合成：
其中W和X各自表示C＝O的式(I)化合物可根据以下方案来合成：
其中W和X各自表示CH2的式(I)化合物可根据以下方案来合成：
其中W和X各自表示C＝S的式(I)化合物可根据以下方案来合成：
例如，其中R1表示甲基，R2表示H，n表示1并且W和X各自表示C＝O的式(I)化合物可
根据以下方案来合成：
胺的合成
通用酯化程序
向相应苯甲酸(1当量)在甲醇(0.65M)中的溶液中加入浓硫酸(32M)，并将所得反
应混合物在70℃下加热10小时。完成后，将反应混合物浓缩，加入水并用乙酸乙酯萃取。将
合并的有机层用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥并在真空下浓缩，得到所需的
酯。
3-苯基-3-氧代丙腈的通用形成程序
将在四氢呋喃(0.9M)和乙腈(1当量)中的上文制备的相应酯(1当量)逐滴加入氢
化钠(1.5当量)在四氢呋喃(0.65M)中的搅拌溶液中。将所得反应混合物在70℃下搅拌16小
时。起始物料耗尽后，将反应混合物用冰冷的水猝灭，并用浓盐酸酸化至pH 5，并用乙酸乙
酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并在真空下浓缩，得到所需产物。
胺的通用形成
在室温下，向相应的3-苯基-3-氧代丙腈(1当量)在水(0.7M)中的搅拌溶液中加入
氢氧化钠水溶液(2当量)和盐酸羟胺(1.1当量)。将所得反应混合物在100℃下搅拌5小时。
起始物料耗尽后，将反应混合物冷却至室温，并且沉淀的固体通过过滤收集并干燥，得到所
需产物。
3-(2-氯苯基)异唑-5-胺的合成。
步骤1：2-氯苯甲酸甲酯的制备。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.84-7.82(dd,J1＝7.6Hz,J2＝1.2Hz,1H),7.47-7.40
(m,2H),7.34-7.26(m,1H),3.94(s,3H)。LC-MS：m/z 170.9[M+H]+。
步骤2：3-(2-氯苯基)-3-氧代丙腈的制备。
LC-MS：178.0[M+H]+。
步骤3：3-(2-氯苯基)异唑-5-胺的制备。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.70-7.67(m,1H),7.49-7.42(m,1H),7.39-7.32(m,
2H),5.60(s,1H),4.52(brs,2H)。LC-MS：194.9[M+H]+。
3-苯基异唑-5-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.73-7.74(d,J＝8.4Hz,2H),7.45-7.43(m,3H),6.78
(brs,2H),5.40(s,1H)。LC-MS：m/z 161.0[M+H]+。
3-(3-氯苯基)异唑-5-胺的合成。
LC-MS：m/z 195[M+H]+。
3-(4-氯苯基)异唑-5-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.76-7.74(d,J＝8.4Hz,2H),7.52-7.50(d,J＝8.4Hz,
2H),6.85(brs,2H),5.42(s,1H)。LC-MS：m/z 194.9[M+H]+。
3-(3,4-二氯苯基)异唑-5-胺(VCW-WNT-168B)的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.97-7.96(m,1H),7.73-7.72(m,2H),6.88(s,2H),5.51
(s,1H)。LC-MS：m/z 230[M+H]+。
3-(3-氟苯基)异唑-5-胺的合成。
步骤1：3-(3-氟苯基)-3-氧代丙腈的制备。
LC-MS：m/z 162.0[M+H]+。
步骤2：3-(3-氟苯基)异唑-5-胺的制备。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.60-7.47(m,3H),7.30-7.26(t,J＝8.4Hz,1H),6.88
(brs,2H),5.42(s,1H)。LC-MS：m/z 177.0[M+H]+。
3-(邻甲苯基)异唑-5-胺的合成。
步骤1：3-氧代-3-(邻甲苯基)丙腈的制备。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.63-7.61(m,1H),7.50-7.46(m,1H),7.34-7.31(m,
2H),4.03(s,2H),2.57(s,3H)。
步骤2：3-(邻甲苯基)异唑-5-胺的制备。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.44-7.42(m,1H),7.35-7.23(m,3H),6.70(s,2H),5.18
(s,1H),2.39(s,3H)。LC-MS：m/z 175[M+H]+。
3-(4-氯吡啶-2-基)异唑-5-胺的合成。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：8.55(d,J＝4.8Hz,1H),7.92(m,1H),7.50(dd,J＝4Hz,
2Hz,1H),5.61(s,1H)。LC-MS：m/z 196[M+H]+。
3-(5-氯吡啶-2-基)异唑-5-胺的合成。
步骤1：3-(5-氯吡啶-2-基)-3-氧代丙腈的制备。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.81(br s,1H),8.17(br s,1H),8.04-8.02(m,1H),
4.70(br s,2H)。LC-MS：m/z 182[M+H]+。
步骤2：3-(5-氯吡啶-2-基)异唑-5-胺的制备。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.70(m,1H),8.03-8.00(m,1H),7.89-7.87(m,1H),6.88
(s,2H),5.44(s,1H)。LC-MS：m/z 196[M+H]+。
3-(5-氯吡啶-3-基)异唑-5-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.90(s,1H),8.69(s,1H),8.24(s,1H),6.96(s,2H),
5.59(s,1H)。LC-MS：m/z 196[M+H]+。
3-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-胺的合成。
步骤1：3-(3-氯苯基)-3-氧代丙腈的制备。
LC-MS：m/z 178.0[M+H]+。
步骤2：3-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-胺的制备。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.81-7.77(m,1H),7.72-7.70(m,1H),7.46-7.42(m,
3H),5.99(s,2H),3.68(s,3H)。LC-MS：208[M+H]+。
5-(3-氯苯基)异唑-3-胺的合成。
将3-(3-氯苯基)-3-氧代丙腈(1当量)和盐酸羟胺(1.2当量)在乙醇(0.02M)和水
(0.02M)的混合物中的搅拌溶液使用氢氧化钠溶液调节至pH 8，并在60℃下加热18小时。然
后，将反应混合物使用盐酸溶液酸化至pH 2，并进一步在80℃下加热1小时。然后，使其冷却
至室温，碱化至pH 10，用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用硫酸镁干燥，并在真
空下浓缩。通过柱色谱法对粗残渣进行纯化，得到纯化的产物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.83(s,1H),7.74-7.71(m,1H),7.52-7.51(m,2H),6.44
(s,1H),5.71(s,2H)。LC-MS：m/z 195[M+H]+。
4-(吡咯烷-1-基)苯胺的合成。
步骤1：1-(4-硝基苯基)吡咯烷的制备。
将三乙胺加入至1-氟-4-硝基苯(1.0当量)和吡咯烷(1.3当量)在2-丙醇(0.1M)中
的搅拌溶液中。使反应物在回流下搅拌6小时。起始物料耗尽后，将溶剂蒸发至干燥；将粗物
质用水稀释；用二氯甲烷萃取；将有机层合并；用盐水洗涤；用硫酸镁干燥并在真空中浓缩。
将粗物质溶解于异丙醇中并过滤，得到作为亮黄色固体的纯净产物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.05(d,J＝9.2Hz,2H),6.61(d,J＝9.2Hz,2H),3.39(m,
4H),2.00-1.97(m,4H)。LC-MS：m/z 193[M+H]+。
步骤2：4-(吡咯烷-1-基)苯胺的制备。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：6.49(d,J＝8.4Hz,2H),6.35(d,J＝8.4Hz,2H),4.24(br
s,2H),3.07(br s,4H),1.90-1.87(m,4H)。LC-MS：m/z 163[M+H]+。
1-苯基哌啶-4-胺的合成
向氯苯(1.0g,8.92mmol)在二甲苯(20mL)中的搅拌溶液中加入4-氨基哌啶
(0.93mL,8.92mmol)、KOtBu(2.0g,17.84mmol)、X-Phos(636mg,1.33mmol)和Pd2(dba)3
(816mg,0.89mmol)，用氩气脱气10min。将反应混合物在130℃下加热16小时。TLC指示存在
一些起始物料并且形成新点。将反应混合物过滤并在减压下浓缩，倾倒至冰冷的水中并用
EtOAc萃取。将合并的有机层用水和盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩
并通过柱色谱法进行纯化，得到所需产物。
LC-MS：m/z 175[M+H]+。
Suzuki偶联
通用Suzuki程序A
溴苯胺衍生物(1.0当量)在1,4-二烷(4mL)中的脱气溶液。向溶液中加入在水
(1mL)中的碳酸钾(3.0当量)以及硼酸/频哪醇酯。脱气10分钟，然后加入四(三苯基膦)钯催
化剂(0.1当量)。再脱气10分钟，并在回流下加热18小时。将溶液通过过滤，并用水
和二氯甲烷萃取。将有机相合并，用硫酸钠干燥，过滤并在真空中蒸发至干燥。将粗物质溶
解于二甲基甲酰胺、乙腈和水中，并用制备型HPLC或通过快速柱色谱法进行纯化，得到所需
产物。
4-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)苯胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.36(s,1H),7.14(d,J＝8.4Hz,2H),6.64(d,J＝8.4Hz,
2H),6,.18(s,1H),5.33(s,2H),3.77(s,3H)。LC-MS：m/z174[M+H]+。
5-苯基吡嗪-2-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.49(m,1H),7.96(m,1H),7.92-7.90(m,2H),7.43-7.40
(m,2H),7.33-7.29(m,1H),6.53(s,2H)。LC-MS：m/z172[M+H]+。
3-甲氧基-[1,1'-联苯]-4-胺的合成。
LC-MS：m/z 200[M+H]+。
4'-硝基-[1,1′-联苯]-4-胺的合成。
1H NMR(400MHz，氯仿-d)：8.24(d,J＝9.2Hz,2H),7.66(d,J＝9.2Hz,2H),7.47(d,
J＝8.4Hz,2H),6.77(d,J＝8.4Hz,2H),3.87(s,2H)。LC-MS：m/z 215[M+H]+。
6-(3-氯苯基)吡啶-3-胺的合成。
步骤1：2-(3-氯苯基)-5-硝基吡啶的制备。
1H NMR(400MHz，氯仿-d)：9.49-9.50(m,1H),8.54-8.56(m,1H),8.11(s,1H),
7.95-7.97(m,1H),7.89-7.91(m,1H),7.48-7.51(m,2H)。LC-MS：m/z 235[M+H]+。
步骤2：6-(3-氯苯基)吡啶-3-胺的制备。
向2-(3-氯苯基)-5-硝基吡啶在2:1乙醇和水中的溶液(0.1M)中加入铁粉(5当量)
和乙酸(5当量)。将反应物在室温下在环境大气下剧烈搅拌30min。起始物料耗尽后，将反应
混合物用1N NaOH碱化(pH 8-10)，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸
钠干燥并在真空下浓缩，得到产物。
1H NMR(400MHz，氯仿-d)：8.17-8.18(m,1H),7.89-7.90(m,1H),7.74-7.77(m,
1H),7.50-7.52(m,1H),7.32-7.36(m,1H),7.27-7.30(m,1H),7.03-7.06(m,1H)。LC-MS：m/z
205[M+H]+。
6-(3-氟苯基)吡啶-3-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.14(s,1H),8.02(s,1H),7.76-7.74(m,1H),7.68-7.66
(m,1H),7.44-7.38(m,2H),7.10-7.07(m,1H),7.05-6.97(m,1H),5.55(s,2H)。LC-MS：m/z
189[M+H]+。
6-(间甲苯基)吡啶-3-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.01-8.00(m,1H),7.74(bs,1H),7.69-7.67(m,1H),
7.60(d,J＝8.4Hz,1H),7.26(t,J＝7.6Hz,1H),7.09-7.07(m,1H),6.99-6.97(m,1H),5.42
(s,2H),2.35(s,3H)。LC-MS：m/z 185[M+H]+。
5-(3-氯苯基)吡啶-2-胺的合成。
LC-MS：m/z 205[M+H]+。
5-(3-氟苯基)吡啶-2-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.29(s,1H),7.73(dd,J＝8.6Hz,J＝2.6Hz,1H),7.43-
7.39(m,3H),7.09-7.05(m,1H),6.52(d,J＝8.8Hz,1H),6.12(s,2H)。LC-MS：m/z 189[M+H
]+。
5-(4-氟苯基)吡啶-2-胺的合成。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：8.20(s,1H),8.09-8.10(m,1H),7.87-7.90(m,1H),
7.54-7.57(m,2H),7.14-7.18(m,2H),6.80-6.82(m,1H)。
3-甲基-5-苯基吡啶-2-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.11(s,1H),7.56-7.54(m,3H),7.39(t,J＝7.2Hz,2H),
7.25(t,J＝7.6Hz,1H),5.80(s,2H),2.11(s,3H)。LC-MS：m/z 185[M+H]+。
5-(间甲苯基)吡啶-2-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.22-8.21(m,1H),7.68-7.66(m,1H),7.37-7.32(m,
2H),7.27(m,1H),7.08-7.06(m,1H),6.51(d,J＝8.8Hz,1H),6.01(s,2H),2.34(s,3H)。LC-
MS：m/z 185[M+H]+。
6-(3-氯苯基)哒嗪-3-胺的合成。
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：7.96(s,1H),7.81-7.88(m,2H),7.41-7.48(m,2H)。LC-
MS：m/z 206[M+H]+。
6-(3-氟苯基)哒嗪-3-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.86-7.76(m,3H),7.53-7.47(m,1H),7.23-7.18(m,
1H),6.85(d,J＝9.6Hz,1H),6.55(s,2H)。LC-MS：m/z 190[M+H]+。
6-(间甲苯基)哒嗪-3-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.79-7.77(m,2H),7.74-7.72(m,1H),7.34(t,J＝
7.6Hz,1H),7.21-7.19(m,1H),6.84(d,J＝9.6Hz,1H),6.44(s,2H),2.38(s,3H)。LC-MS：m/z
186[M+H]+。
6-(5-甲基吡啶-3-基)哒嗪-3-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.92(d,J＝2.0Hz,1H),8.42(d,J＝1.6Hz,1H),8.15(s,
1H),7.86(d,J＝9.2Hz,1H),6.87(d,J＝9.2Hz,1H),6.56(s,2H),2.37(s,3H)。LC-MS：m/z
187[M+H]+。
6-(6-甲基吡啶-3-基)哒嗪-3-胺的合成。
LC-MS：m/z 187[M+H]+。
5′-氟-[2,3′-联吡啶]-5-胺的合成。
LC-MS：m/z 190[M+H]+。
6′-甲基-[2,3′-联吡啶]-5-胺的合成。
LC-MS：m/z 186[M+H]+。
5′-氯-[3,3′-联吡啶]-6-胺的合成。
LC-MS：m/z 206[M+H]+。
5′-氟-[3,3′-联吡啶]-6-胺的合成。
LC-MS：m/z 190[M+H]+。
5-(间甲苯基)吡嗪-2-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.47(d,J＝1.6Hz,1H),7.94(d,J＝1.6Hz,1H),7.73(s,
1H),7.68(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(t,J＝7.6Hz,1H),7.12(d,J＝7.2Hz,1H),6.50(s,2H),
2.35(s,3H)。LC-MS：m/z 186[M+H]+。
通用Suzuki程序B
将芳基卤化物(1当量)、硼酸(1.1当量)和碳酸钠(2当量)在二烷(0.02M)和水
(0.05M)中的搅拌溶液用氮气脱气10min。将双(环戊基二苯基磷烷)二氯甲烷氯化钯铁(0.1
当量)加入反应混合物中，并将其加热至回流，保持16小时。将反应混合物冷却，并用
过滤。将其用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用硫酸镁干燥，并在真
空下浓缩。通过柱色谱法对粗化合物进行纯化，得到所需产物。
4-(哒嗪-3-基)苯胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.01-9.00(m,1H),7.99(d,J＝7.2Hz,1H),7.87(d,J＝
8.8Hz,2H),7.62-7.59(m,1H),6.68(d,J＝8.4Hz,2H),5.58(s,2H)。LC-MS：m/z 172[M+H]+。
4-(嘧啶-2-基)苯胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.72(d,J＝4.8Hz,2H),8.08(d,J＝8.8Hz,2H),7.19(t,
J＝4.8Hz,1H),6.62(d,J＝8.4Hz,2H),5.64(s,2H)。LC-MS：m/z 172[M+H]+。
4-(嘧啶-5-基)苯胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.00(m,3H),7.49(d,J＝8.8Hz,2H),6.68(d,J＝8.4Hz,
2H),5.45(s,2H)。LC-MS：m/z 172[M+H]+。
5-苯基嘧啶-2-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.56(s,2H),7.61(d,J＝7.2Hz,2H),7.43(t,J＝7.6Hz,
2H),7.31(t,J＝7.2Hz,1H),6.75(s,2H)。LC-MS：m/z 172[M+H]+。
[3,3'-联吡啶]-6-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.79(d,J＝1.6Hz,1H),8.47-8.45(m,1H),8.29(d,J＝
2.0Hz,1H),7.97-7.94(m,1H),7.77-7.74(m,1H),7.42-7.38(m,1H),6.55-6.53(m,1H),
6.15(s,2H)。LC-MS：m/z 172[M+H]+。
6-(吡啶-3-基)哒嗪-3-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.14-9.13(m,1H),8.60-8.59(m,1H),8.34-8.31(m,
1H),8.13(s,1H),7.92(d,J＝9.6Hz,1H),7.51-7.48(m,1H),6.92(d,J＝9.2Hz,1H),6.71
(bs,1H)。LC-MS：m/z 173[M+H]+。
2-甲基-[1,1′-联苯]-4-胺的合成。
LC-MS：m/z 184[M+H]+。
3-甲基-[1,1′-联苯]-4-胺的合成。
LC-MS：m/z 184[M+H]+。
2′-氟-[1,1′-联苯]-4-胺的合成。
LC-MS：m/z 188[M+H]+。
3′-氟-[1,1'-联苯]-4-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.41-7.32(m,5H),7.02-6.99(m,1H),6.63(d,J＝
8.4Hz,2H),5.29(s,2H)。LC-MS：m/z 188[M+H]+。
3'-硝基-[1,1'-联苯]-4-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.29(t,J＝2.0Hz,1H),8.05-8.00(m,2H),7.64(t,J＝
8.0Hz,1H),7.48(d,J＝8.8Hz,2H),6.67(d,J＝8.4Hz,2H),5.41(s,2H)。
4-(吡嗪-2-基)苯胺的合成。
MS(ESI)m/z 172[M+H]+。
2-氟联苯-4-胺的合成。
MS(ESI)m/z 188[M+H]+。
4'-氟联苯-4-胺的合成。
MS(ESI)m/z 188[M+H]+。
5-甲基-6-苯基吡啶-3-胺的合成。
MS(ESI)m/z 185[M+H]+。
4-甲基-5-苯基吡啶-2-胺的合成。
MS(ESI)m/z 186[M+H]+。
5-氟-2,3'-联吡啶-6'-胺的合成。
MS(ESI)m/z 190[M+H]+。
6-(4-氯苯基)哒嗪-3-胺的合成。
LC-MS：m/z 206[M+H]+。
6-(5-氯吡啶-3-基)哒嗪-3-胺的合成。
步骤1：3-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶的制备。
将3-溴-5-氯吡啶(1当量)、双(频哪醇合)二硼烷(1.2当量)、乙酸钾(3当量)在1,
4-二烷(0.2M)中的搅拌溶液用氩气脱气20min。在氩气气氛下，向反应混合物中加入Pd
(dppf)Cl2.DCM(0.05当量)。将反应混合物在100℃下加热16小时。完成的物料未经纯化即
用于下一步骤中。
步骤2：6-(5-氯吡啶-3-基)哒嗪-3-胺的制备。
LC-MS：m/z 207[M+H]+。
5-甲基-6-(吡啶-3-基)哒嗪-3-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.71(s,1H),8.60-8.59(d,J＝4.8Hz,1H),7.94-7.92
(d,J＝7.6Hz,1H),7.49-7.46(m,1H),6.68(s,1H),6.36(brs,2H),2.18(s,3H)。LC-MS：
187.0[M+H]+。
5'-甲基-2,3'-联吡啶-5-胺的合成。
LC-MS：m/z 186[M+H]+。
5'-甲基-[3,3'-联吡啶]-6-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.58(s,1H),8.30-8.29(m,1H),8.27-8.26(m,1H),7.78
(bs,1H),7.74(dd,J＝9.2Hz,J＝2.6Hz,1H),6.54(d,J＝8.4Hz,1H),6.12(s,2H),2.33(s,
3H)。LC-MS：m/z 186[M+H]+。
4-甲基-3，3'-联吡啶-6-胺的合成。
LC-MS：m/z 186[M+H]+。
6'-甲基-3,3'-联吡啶-6-胺的合成。
MS(ESI)m/z 186[M+H]+。
5-(6-甲基吡啶-3-基)吡嗪-2-胺的合成。
MS(ESI)m/z 187[M+H]+。
4-(吡嗪-2-基)苯胺的合成。
MS(ESI)m/z 172[M+H]+。
(6'-氨基-[3，3'-联吡啶]-5-基)氨基甲酸二叔丁酯的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.75(s,1H),8.31(d,J＝8.0Hz,2H),7.94(s,1H),7.78
(d,J＝6.8Hz,1H),6.54(d,J＝8.8Hz,1H),6.19(bs,2H),1.39(s,18H)；MS(ESI)m/z 387.30
[M+H]+。
5-(吡啶-3-基)吡嗪-2-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.11(s,1H),8.58(s,1H),8.51(d,J＝4.0Hz,1H),8.25
(d,J＝11.6Hz,1H),7.99(s,1H),7.46-7.40(m,1H),6.67(bs,2H)；MS(ESI)m/z 173.0[M+H
]+。
4,5'-二甲基-3,3'-联吡啶-6-胺的合成。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.35(s,1H),8.31(s,1H),7.73(s,1H),7.55(s,1H),
6.37(s,1H),5.93(bs,2H),8.31(s,1H),2.33(s,1H),2.11(s,1H)；MS(ESI)m/z 200.0[M+H
]+。
5-(5-氟吡啶-3-基)吡嗪-2-胺的合成。
步骤1：3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶的制备。
将3-溴-5-氟吡啶(1当量)、双(频哪醇合)二硼烷(1.1当量)、KOAc(2当量)在1,4-
二烷(0.4M)中的搅拌溶液用氩气脱气20min。在氩气气氛下，向反应混合物中加入Pd
(dppf)Cl2.DCM(0.1当量)。将反应混合物在110℃下加热4小时。完成的物料未经进一步纯
化即用于下一步骤中。
MS(ESI)m/z 224[M+H]+。
步骤2：5-(5-氟吡啶-3-基)吡嗪-2-胺的制备。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.01(t,J＝1.7Hz,1H),8.65(d,J＝1.3Hz,1H),8.49(d,
J＝3.0Hz,1H),8.16-8.12(m,1H),7.99(d,J＝1.3Hz,1H),6.79(s,2H)；MS(ESI)m/z 191.17
[M+H]+。
用于酸中间体的程序：
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酸的合成。
步骤1：2-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶的制备。
在0℃下，向3-甲基-1H-吡唑-5-胺(1当量)在1,4-二烷(0.5M)中的搅拌溶液中
加入TEA(5当量)。15分钟后，在0℃下，向反应混合物中加入1,3-二溴丙烷(1.2当量)。将反
应混合物在100℃下搅拌5小时。反应完成后，将反应混合物过滤并用乙酸乙酯洗涤。将滤液
在减压下浓缩，得到中间体。
步骤2：4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酸的制备
向2-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶(1当量)在氯仿(0.5M)中的搅拌溶液
中加入琥珀酸酐(1.3当量)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将沉淀的固体过
滤，并用正戊烷洗涤并干燥，得到产物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：12.11(s,1H),6.34(bs,1H),4.02-3.99(t,J＝5.2Hz,
2H),3.82(m,2H),2.77-2.75(m,2H),2.41(m,2H),2.08(bs,5H)。MS(ESI)m/z 238[M+H]+。
4-(6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酸的合成
在室温下，向4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶(1当量)在氯仿(0.4M)中的搅拌溶
液中加入琥珀酸酐(1.3当量)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。完成后，将反应混合物
过滤，并将固体用氯仿洗涤并干燥，得到产物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：12.14(s,1H),7.30(s,1H),6.55(s,1H),4.12-4.09(t,J
＝5.6Hz,2H),3.88-3.86(m,2H),2.80-2.77(t,J＝6.4Hz,2H),2.52-2.50(m,2H),2.10-
2.08(m,2H)。LC-MS(ESI)：MS m/z 224.0[M+H]+。
4-氧代-4-(2-(三氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)丁酸的合成
步骤1：2-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶的制备
在0℃下，将3-(三氟甲基)-1H-吡唑-5-胺(1当量)在1,4-二烷(0.2M)中的溶液
用1,3-二溴丙烷(1.2当量)和三乙胺(5当量)处理，并将反应混合物加热至100℃，保持12小
时。完成后，将反应混合物冷却至室温，在减压下过滤并浓缩，得到粗产物。通过快速色谱法
对粗产物进行纯化，得到产物。
1H-NMR(400MHz；DMSO-d6)：12.25(brs,1H),6.40(s,1H),5.52(s,1H),4.03-4.00
(t,2H),3.58(s,1H),3.18-3.15(m,2H),2.05-1.97(m,2H)。LC-MS：MS m/z 192[M+H]+。
步骤2：4-氧代-4-(2-(三氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)丁酸
的制备
在室温下，向化合物2-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶(1当量)在
CHCl3(0.15M)中的溶液中加入琥珀酸酐(2当量)。将所得反应混合物在室温下搅拌60小时。
完成后，将反应混合物浓缩，得到粗产物。通过柱色谱法对粗产物进行纯化，得到产物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：12.20(s,2H),6.88(s,1H),4.20(t,J＝6Hz,2H),3.92
(t,J＝5.2Hz,2H),2.82(t,J＝6Hz,2H),2.53-2.49(m,3H),2.41(s,3H),2.17(brs,2H)。LC-
MS：MS m/z 290[M+H]+。
4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酸的合成
步骤1：二甲磺酸2-甲基丙烷-1,3-二基酯的制备
向2-甲基丙烷-1,3-二醇(1当量)在二氯甲烷(0.45M)中的搅拌溶液中加入甲磺酰
氯(2.8当量)，使用三乙胺(2.8当量)，在0℃至室温下保持16小时。反应完成后，将反应混合
物用水和盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗中间体。
步骤2：2,6-二甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶的制备
向二甲磺酸2-甲基丙烷-1,3-二基酯(1.2当量)在1,4-二烷(0.5M)中的搅拌溶
液中加入3-甲基-1H-吡唑-5-胺(1当量)和三乙胺(5当量)。将反应混合物在100℃下加热48
小时。完成后，将反应混合物过滤，并在减压下浓缩，通过柱色谱法进行纯化，得到中间体。
步骤3：4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酸的
制备
向2,6-二甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶(1当量)在氯仿(0.15M)中的搅
拌溶液中加入琥珀酸酐(1当量)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物在减
压下浓缩，得到产物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：12.08(s,1H),6.35(brs,1H),4.12-4.08(m,1H),3.99
(brs,1H),3.64-3.58(m,1H),3.35(brs,1H),2.85-2.79(m,1H),2.74-2.70(brs,1H),2.49-
2.48(m,2H),2.25(brs,1H),2.08(brs,3H),1.04-1.02(d,J＝6.1Hz,3H)。MS(ESI)m/z
252.07[M+H]+。
2-甲基-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酸乙酯的
合成
步骤1：2-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶的制备
在0℃下，向3-甲基-1H-吡唑-5-胺(1当量)在1,4-二烷(0.1M)中的搅拌溶液中
加入三乙胺(5当量)。15分钟后，在0℃下，向反应混合物中加入1,3-二溴丙烷(1.2当量)。将
反应混合物在100℃下搅拌5小时。将反应混合物过滤并用乙酸乙酯洗涤。将滤液在减压下
浓缩，得到中间体。
步骤2：2-溴-1-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)乙酮的制备
在0℃下，向2-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶(1当量)在二氯甲烷(0.6M)
中的搅拌溶液中逐滴加入2-溴乙酰溴(2当量)。将反应混合物在室温下搅拌12小时。将由此
形成的固体过滤，并用正戊烷洗涤，然后干燥，得到中间体。
步骤3：2-(二乙氧基磷酰基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酸乙酯的制备
在室温下，向NaH(在矿物油中的60％悬浮液)(1.2当量)在DMSO(0.5M)中的搅拌溶
液中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(1.1当量)。30min后，在室温下，向反应混合物中逐
份加入2-溴-1-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)乙酮(1当量)。将反应混
合物在70℃下搅拌4h。将反应混合物用冰冷的水猝灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水
硫酸钠干燥并在减压下浓缩，获得粗产物。通过柱色谱法对粗产物进行纯化，得到中间体。
LC-MS：m/z 402[M+H]+。
步骤4：4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-2-亚甲基-4-氧代丁
酸乙酯的制备
在室温下，向2-(二乙氧基磷酰基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酸乙酯(1当量)在THF(0.4M)中的搅拌溶液中加入K2CO3水溶液(1.5当
量，2M)，随后加入HCHO水溶液(20当量)。将反应混合物在80℃下搅拌45min。将反应混合物
用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩，获得粗产物。
通过柱色谱法对粗产物进行纯化，得到产物。LC-MS：m/z 278[M+H]+。
步骤5：2-甲基-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酸
乙酯的制备
在氮气下，向4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-2-亚甲基-4-
氧代丁酸乙酯(1当量)在乙醇(0.1M)中的溶液中加入10％Pd/C(10％w/w)在甲醇中的浆液，
并将反应混合物在室温下在H2(50psi)下氢化8小时。将反应混合物通过硅藻土床过滤，并
用甲醇洗涤。将滤液在减压下浓缩，得到粗产物。通过柱色谱法对粗产物进行纯化，得到产
物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：6.33(brs,1H),4.08-4.03(m,4H),3.99-3.81(m,2H),2.93-
2.79(m,2H),2.72-2.67(m,1H),2.08(brs,5H),1.19-1.13(m,6H)。MS(ESI)m/z 280[M+H]+。
用于酰胺偶联反应的通用程序：
酰胺偶联方法A：
将各胺(1当量)和酸中间体(1.1当量)在吡啶(0.1M)中的溶液在氮气气氛下冷却
至0℃，并用POCl3(3当量)处理。将反应混合物搅拌45min。起始物料耗尽后，将反应混合物
用饱和碳酸氢钠猝灭，并用DCM萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并在真空
下浓缩。通过反相色谱法对粗化合物进行纯化，得到所需产物。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(3-甲基异唑-5-基)-
4-氧代丁酰胺，化合物1的合成
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：6.15(s,1H),4.55(s,1H),4.10(t,J＝6.0Hz,2H),3.91-
3.94(m,2H),2.96-2.98(m,2H),2.78(t,J＝6.0Hz,2H),2.22(bs,2H),2.17(s,3H)。LC-MS：
m/z 318[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(3-苯基异唑-
5-基)丁酰胺，化合物2的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.80(s,1H),7.84-7.83(d,J＝2.8Hz,2H),7.50-7.48
(m,3H),6.68(s,1H),6.34(s,1H),4.07(m,2H),3.86(m,2H),2.92-2.90(m,2H),2.73-2.71
(t,J＝5.2Hz,2H),2.07-2.05(m,5H)。LC-MS：380.2[M+H]+。
N-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物3的合成
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：7.66(s,1H),7.60-7.58(m,1H),7.33-7.29(m,2H),6.53
(s,1H),6.13(brs,1H),3.81(brs,2H),3.64(s,1H),2.70(brs,2H),2.52-2.51(m,2H),2.29
(s,2H),1.86(brs,5H)。LC-MS：MS m/z 414[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(4-苯基异唑-
5-基)丁酰胺，化合物4的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.99(s,1H),7.58-7.57(d,J＝7.2Hz,1H),7.38-7.34
(t,J＝7.2Hz,2H),7.29-7.25(t,J＝7.2Hz,1H),6.68(brs,1H),6.35(brs,1H),4.00-3.97
(t,J＝6.0Hz,2H),3.83-3.80(t,J＝6.0Hz,2H),2.67-2.64(m,2H),2.07(brs,5H)。LC-MS：
MS m/z 380[M+H]+。
N-(3-(4-氯苯基)异唑-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物5的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.83(s,1H),7.88-7.86(d,J＝8Hz,2H),7.57-7.55(d,
J＝8.8Hz,2H),6.71(s,1H),6.33(s,1H),4.02-4.01(t,J＝5.2Hz,2H),3.87-3.85(m,2H)，
2.92-2.89(m,2H),2.73-2.70(t，J＝6.4Hz，2H)，2.05-2.03(m，5H)。LC-MS：414.2[M+H]+。
N-(3-(2-氯苯基)异唑-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物6的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.89(s,1H)，7.69-7.67(d，J＝7.2Hz，1H)，7.64-7.62
(d，J＝8.4Hz，1H)，7.55-7.53(t，J＝7.6Hz，1H)，7.49-7.45(t，J＝7.2Hz，1H)，6.57(s，1H)，
6.34(s，1H)，4.03-3.99(m，2H)，3.86-3.83(m,2H),2.93-2.90(m,2H),2.72-2.70(t,J＝
6Hz,2H),2.08-2.05(m,5H)。LC-MS：414.15[M+H]+。
N-(3-(3,4-二氯苯基)异唑-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物7的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.84(br s,1H),8.10(d,J＝2Hz,1H),7.86-7.83(m,
1H),7.76(d,J＝8.4Hz,1H),6.78(s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(br s,2H),2.91-
2.89(m,2H),2.71-2.67(m,2H),2.08(br s,5H)。LC-MS：m/z 449[M+H]+。
N-(3-(3-氟苯基)异唑-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物8的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.84(s,1H),7.71-7.67(t,J＝7.2Hz,2H),7.57-7.52
(q,J＝8.4Hz 1H),7.37-7.32(m,1H),6.76(s,1H),6.34(s,1H),4.03-4.01(m,2H),3.88-
2.85(m,2H),2.92-2.90(m,2H),2.73-2.70(t,J＝5.6Hz,2H),2.09-2.05(m,5H)。LC-MS：
398.2[M+H]+。
N-[3-(3-溴苯基)-1,2-唑-5-基]-4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-
4-基}-4-氧代丁酰胺，化合物9的合成
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)7.97(s,1H),7.77(d,J＝7.6Hz,1H),7.62(d,J＝8.0Hz,
1H),7.40(t,J＝8.0Hz,1H),6.68(s,1H),6.44(br s,1H),4.10(t,J＝6.0Hz,2H),3.94(br
s,2H),3.00(br s,2H),2.82(t,J＝6.8Hz,2H),2.22-2.17(m,5H)。LC-MS：m/z 459[M+H]+。
N-[3-(3-甲氧基苯基)-1,2-唑-5-基]-4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧
啶-4-基}-4-氧代丁酰胺，化合物10的合成
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)7.40-7.33(m,3H),7.04-7.01(m,1H),6.65(s,1H),6.45
(br s,1H),4.10(t,J＝6.0Hz,2H),3.95(t,J＝5.6Hz,2H),3.84(s,3H),3.00(br s,2H),
2.82(t,J＝6.8Hz,2H),2.22-2.17(m,5H)。LC-MS：m/z410[M+H]+。
4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基}-N-[3-(3-甲基苯基)-1,2-
唑-5-基]-4-氧代丁酰胺，化合物11的合成
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)7.61-7.56(m,2H),7.36-7.27(m,2H),6.64(s,1H),6.46
(br s,1H),4.10(t,J＝Hz,2H),3.95-3.93(m,2H),3.00(s,2H),2.82(t,J＝6.4Hz,2H),
2.39(s,3H),2.22-2.17(m,5H)。LC-MS：m/z 394[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(3-(邻甲苯基)
异唑-5-基)丁酰胺，化合物12的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)11.79(br s,1H),7.50-7.49(m,1H),7.40-7.28(m,3H),
6.45(s,1H),6.33(br s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.85(s,2H),2.91-2.90(m,2H),2.73-
2.70(m,2H),2.41(s,3H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 394[M+H]+。
4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基}-4-氧代-N-{3-[3-(三氟甲基)
苯基]-1,2-唑-5-基}丁酰胺，化合物13的合成
1H NMR(400MHz，氯仿-d)9.34-9.25(m,1H),8.05(s,1H),7.97(d,J＝7.6Hz,1H),
7.68(d,J＝7.6Hz,1H)),7.56(t,J＝8.0Hz,1H),6.71(s,1H),4.17(t,J＝6.4Hz,2H),3.99-
3.88(m,2H),3.09-2.98(m,2H),2.88-2.86(m,2H),2.24-2.19(m,5H)。LC-MS：m/z 448[M+H
]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(4'-(三氟甲
基)-[1,1'-联苯]-4-基)丁酰胺，化合物14的合成
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)7.78-7.80(m,2H),7.68-7.72(m,4H),7.63-7.65(m,2H),
4.55(s,1H),4.10(t,J＝6.0Hz,2H),3.94-3.96(m,2H),2.98-3.00(m,2H),2.79(t,J＝
6.0Hz,2H),2.22(bs,2H),2.18(s,3H)。LC-MS：m/z 457[M+H]+。
N-[3-(4-氨基苯基)-1,2-唑-5-基]-4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧
啶-4-基}-4-氧代丁酰胺，化合物15的合成
步骤1：4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5-(4-硝基苯基)
异唑-3-基)-4-氧代丁酰胺的制备。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)11.90(s,1H),8.33(d,J＝8.8Hz,2H),8.14(d,J＝8.8Hz,
2H),6.85(s,1H),6.34(br s,1H),4.02(t,J＝5.6Hz,2H),3.86(s,2H),2.92(s,2H),2.73
(t,J＝6.4Hz,2H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 425[M+H]+。
步骤2：N-[3-(4-氨基苯基)-1,2-唑-5-基]-4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-
a]嘧啶-4-基}-4-氧代丁酰胺的制备。
将4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基}-N-[3-(4-硝基苯基)-1,2-
唑-5-基]-4-氧代丁酰胺(1当量)、氯化铵(4当量)和铁(2当量)加入乙醇(0.02M)和水
(0.08M)的溶液中，并在40℃下加热3小时。然后，将反应混合物过滤，用水稀释，并用乙酸乙
酯萃取。将合并的有机层用MgSO4干燥，并在真空下浓缩。通过反相制备型HPLC对粗产物进
行纯化，得到纯化的产物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)11.61(br s,1H),7.46(d,J＝8.8Hz,2H),6.61(d,J＝
8.8Hz,2H),6.46(s,1H),6.34(br s,1H),5.50(s,2H),4.02(t,J＝5.6Hz,2H),3.85(s,2H),
2.90(s,2H),2.69(t,J＝6.4Hz,2H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 395[M+H]+。
N-(3-(4-氯吡啶-2-基)异唑-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-
4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物16的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.90(br s,1H),8.69(d,J＝5.6Hz,1H),8.03(d,J＝
1.6Hz,1H),7.67(dd,J＝4.0Hz,2Hz,1H),6.71(s,1H),6.33(br s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,
2H),3.86(br s,2H),2.93-2.89(m,2H),2.72-2.70(m,2H),2.08(br s,5H)。LC-MS：m/z 415
[M+H]+。
N-(3-(5-氯吡啶-2-基)异唑-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-
4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物17的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.88(br s,1H),8.76(d,J＝2Hz,1H),8.09-8.07(m,
1H),8.01-7.99(m,1H),6.68(s,1H),6.33(br s,1H),4.02(t,J＝5.8Hz,2H),3.86(br s,
2H),2.91(t,J＝6Hz,2H),2.70(t,J＝6.2Hz,2H),2.08(br s,5H)。LC-MS：m/z 415[M+H]+。
N-[3-(5-氯吡啶-3-基)-1,2-唑-5-基]-4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]
嘧啶-4-基}-4-氧代丁酰胺，化合物18的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)11.83(br s,1H),9.01(d,J＝1.6Hz,1H),8.75(d,J＝
2.4Hz,1H),4.05(t,J＝2.0Hz,1H),6.90(s,1H),6.33(br s,1H),4.03(t,J＝6.0Hz,2H),
3.86(s,2H),2.92-2.91(m,2H),2.74-2.71(m,2H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 415[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(3-(吡啶-3-基)
异唑-5-基)丁酰胺，化合物19的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.85(br s,1H),9.03(s,1H),8.69-8.67(m,1H),8.23
(d,J＝8.0Hz,1H),7.55-7.51(m,1H),6.78(s,1H),6.33(br s,1H),4.02(t,J＝5.8Hz,2H),
3.86(br s,2H),2.91-2.90(m,2H),2.71(t,J＝6.0Hz,2H),2.08(br s,5H)。LC-MS：m/z 381
[M+H]+。
4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基}-4-氧代-N-[3-(吡啶-4-基)-1,
2-唑-5-基]丁酰胺，化合物20的合成
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：8.66(d,J＝6.4Hz,2H),8.09(s,1H),7.84(d,J＝6.4Hz,
2H),6.79(s,1H),6.44(br s,1H),4.10(t,J＝7.6Hz,2H),3.95-3.93(m,2H),3.01(s,2H),
2.84-2.81(m,2H),2.21-2.17(m,5H)。LC-MS：m/z 381[M+H]+。
N-(3-(3-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]
嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物21的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.13(s,1H),7.79(s,1H),7.72-7.70(d,J＝8Hz,1H),
7.43-7.39(t,J＝8Hz,1H),7.34-7.32(d,J＝8.8Hz,1H),6.70(s,1H),6.36(s,1H),4.02-
4.00(t,J＝5.6Hz,2H),3.88-3.85(m,2H),3.72(s,3H),2.92-288(m,2H),2.70-2.67(t,J＝
6.4Hz,2H),2.09-2.07(m,5H)。LC-MS：427.1[M+H]+。
N-(3-(3-氯苯基)-1,2,4-二唑-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧
啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物22的合成
1H NMR(400MHz，氯仿-d)：8.05(1H,t),7.93-7.95(1H,m),7.46-7.52(1H,m),7.40
(1H,t),4.17(2H,t),3.66(2H,bs),3.07(4H,m),2.18(5H,m)。LC-MS：m/z 415.1[M+H]+。
N-[5-(3-氯苯基)-1,2-唑-3-基]-4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-
4-基}-4-氧代丁酰胺，化合物23的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.14(s,1H),7.97(s,1H),7.86-7.84(m,1H),7.57-
7.56(m,2H),7.45(s,1H),6.33(br s,1H),4.03(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(s,2H),2.91-2.88
(m,2H),2.72-2.69(m,2H),2.09(s,5H)。LC-MS：m/z 414[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(4-(唑-5-基)苯基)-
4-氧代丁酰胺，化合物24的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.18(s,1H),8.38(s,1H),7.71-7.64(m,5H),7.56(s,
1H),6.34(bs,1H),4.04-4.01(t,J＝6Hz,2H),3.86(bs,2H),2.88-2.87(m,2H),2.67-2.64
(m,2H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 380[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(4-(唑-5-基)苯基)-
4-氧代丁酰胺，化合物25的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.25(s,1H),7.90-7.86(m,3H),7.73-7.70(m,3H),
4.04-4.01(m,2H),3.86(br s,2H),2.90-2.87(m,2H),2.69-2.66(m,2H),2.08(br s,5H)。
LC-MS：m/z 396[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(5-(噻唑-2-基)
吡啶-2-基)丁酰胺，化合物26的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.87(s,1H),8.49(br s,1H),8.28-8.21(m,2H),7.88
(d,J＝3.2Hz,1H),7.34(d,J＝3.2Hz,1H),6.55(br s,0.5H),5.81(br s,0.5H),4.16(t,J
＝6.2Hz,2H),3.93(br s,2H),3.05-2.96(m,2H),2.86-2.84(m,2H),2.23-2.18(m,5H)。LC-
MS：m/z 397[M+H]+。
N-(4-(1H-咪唑-1-基)苯基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物27的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.17(s,1H),8.17(br s,1H),7.72-7.68(m,3H),7.57-
7.55(m,2H),7.09(br s,1H),6.34(br s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(br s,2H),2.88
(t,J＝6.4Hz,2H),2.65(t,J＝6.4Hz,2H),2.08(br s,5H)。LC-MS：m/z 379[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(4-(2-甲基噻唑-4-基)
苯基)-4-氧代丁酰胺，化合物28的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.08(s,1H),7.85(d,J＝8.4Hz,2H),7.78)s,1H),7.64
(d,J＝8.8Hz,2H),6.31(bs,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(bs,2H),2.88(t,J＝6.2Hz,
2H),2.70(s,3H),2.67-2.64(m,2H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 410[M+H]+。
N-(4-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)苯基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物29的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.17(s,1H),7.71(d,J＝8.4Hz,2H),7.46-7.43(m,
3H),6.34(d,J＝2Hz,2H),4.02(t,J＝6Hz,2H),3.87(br s,2H),3.83(s,3H),2.89(t,J＝
6.2Hz,2H),2.67(t,J＝6.4Hz,2H),2.08(br s,5H)。LC-MS：m/z 393[M+H]+。
N-(4-(叔丁基)苯基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧
代丁酰胺，化合物30的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.90(s,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,2H),7.29(d,J＝8.8Hz,
2H),6.34(br s,1H),4.01(t,J＝6.0Hz,2H),3.85(br s,2H),2.87-2.84(m,2H),2.61(t,J
＝6.4Hz,2H),2.07(br s,5H),1.25(s,9H)。LC-MS：m/z 369[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(4-(吡咯烷-1-
基)苯基)丁酰胺，化合物31的合成
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：7.30(d,J＝8.8Hz,2H),6.53(d,J＝8.8Hz,2H),4.10(t,
J＝6.2Hz,2H),3.93(t,J＝5.6Hz,2H),3.26-3.23(m,4H),2.95(bs,2H),2.72(t,J＝6.6Hz,
2H),2.33-2.18(m,6H),2.02-2.00(m,4H)。LC-MS：m/z 382[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(4-(2-甲基噻唑-4-基)
苯基)-4-氧代丁酰胺，化合物32的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)10.65(s,1H),8.87(s,1H),8.26-8.24(m,1H),8.12-8.10
(m,1H),7.96(s,1H),6.33(br s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.85(s,2H),2.89-2.86(m,
2H),2.74-2.72(m,5H),2.07(s,5H)。LC-MS：m/z 411[M+H]+。
N-([1,1'-联苯]-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-
氧代丁酰胺，化合物33的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.09(s,1H),7.70-7.68(m,2H),7.64-7.60(m,4H),
7.43(m,2H),7.33-7.31(m,1H),6.35(bs,1H),4.02(t,J＝6Hz,2H),3.87(bs,2H),2.89(t,J
＝6.4Hz,2H),2.68-2.65(m,2H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 389[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(4-(吡啶-2-基)
苯基)丁酰胺，化合物34的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.15(s,1H),8.62(d,J＝4.4Hz,1H),8.04(d,J＝
8.4Hz,2H),7.91-7.89(m,1H),7.86-7.82(m,1H),7.71(d,J＝8.4Hz,2H),7.31-7.27(m,
1H),6.34(br s,1H),4.03(t,J＝5.8Hz,2H),3.87(br s,2H),2.91-2.88(m,2H),2.69-2.66
(m,2H),2.08(br s,5H)。LC-MS：m/z 390[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(4-(吡啶-3-基)
苯基)丁酰胺，化合物35的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.14(s,1H),8.87(s,1H),8.52(s,1H),8.04(d,J＝
8.0Hz,1H),7.70(q,J＝9.2Hz,4H)7.47-7.44(m,1H),6.35(br s,1H),4.03(t,J＝6.0Hz,
2H),3.87(br s,2H),2.89(t,J＝6.2Hz,2H),2.67(t,J＝6.2Hz,2H),2.08(br s,5H)。LC-
MS：m/z 390[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(4-(吡啶-4-基)
苯基)丁酰胺，化合物36的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.20(s,1H),8.59(d,J＝5.4Hz,2H),7.76(q,J＝
8.8Hz,4H),7.68(d,J＝6Hz,2H),6.34(br s,1H),4.10-4.01(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(br s,
2H),2.91-2.88(t,J＝6.2Hz,2H),2.67(t,J＝6.2Hz,2H),2.08(br s,5H)。LC-MS：m/z 390
[M+H]+。
4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基}-4-氧代-N-[4-(哒嗪-3-基)苯
基]丁酰胺，化合物37的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.24(s,1H),8.18-8.11(m,3H),7.79-7.73(m,3H),
6.35(br s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.87(s,2H),2.90-2.88(m,2H),2.69(t,J＝6.4Hz,
2H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 391[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(4-(嘧啶-4-基)
苯基)丁酰胺，化合物38的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.29(s,1H),9.17(d,J＝1.2Hz,1H),8.79(d,J＝
5.2Hz,1H),8.19-8.17(m,2H),8.03-8.01(m,1H),7.78-7.76(m,2H),6.33(br s,1H),4.02
(t,J＝5.6Hz,2H),3.86(s,2H),2.91-2.88(m,2H),2.70-2.67(m,2H),2.39(s,3H),2.08(s,
5H)。LC-MS：m/z 391[M+H]+。
4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基}-4-氧代-N-[4-(嘧啶-5-基)苯
基]丁酰胺，化合物39的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.20(s,1H),9.13-9.11(m,3H),7.79-7.74(m,4H),
6.34(br s,1H),4.04-4.01(m,2H),3.86(s,2H),2.89(t,J＝6.4Hz,2H),2.67(t,J＝6.8Hz,
2H),2.08(br s,5H)。LC-MS：m/z 391[M+H]+。
4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基}-4-氧代-N-[4-(嘧啶-2-基)苯
基]丁酰胺，化合物40的合成
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：8.82(d,J＝4.8Hz,2H),8.36(d,J＝8.8Hz,2H),7.73(d,
J＝8.8Hz,2H),7.32(t,J＝4.8Hz,1H),4.12(t,J＝6.0Hz,2H),3.98-3.96(m,2H),3.01(br
s,2H),2.82(t,J＝6.8Hz,2H),2.24-2.20(m,5H)。LC-MS：m/z 391[M+H]+。
N-([2,3′-联吡啶]-6'-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物41的合成
1H NMR(400MHz，氯仿-d)：10.72(1H,s),9.02(1H,d,J＝2.0Hz),8.66(1H,d,J＝
4.4Hz),8.43(1H,dd,J＝8.4,2.4Hz),8.17(1H,d,J＝8.8Hz),8.00(1H,d,J＝8.0Hz),7.86-
7.91(1H,m),7.35-7.38(1H,m),6.34(1H,bs),4.02(2H,t),3.86(2H,bs),2.89(2H,t),2.74
(2H,t),2.08(5H,m)。LC-MS：m/z 391.1[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(4-(吡嗪-2-基)
苯基)丁酰胺，化合物42的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.24(s,1H),9.21(d,J＝1.6Hz,1H),8.68-8.65(m,
1H),8.55(d,J＝2.4Hz,1H),8.12-8.08(m,2H),7.80-7.72(m,2H),6.35(bs,1H),4.03(t,J
＝6.0Hz,2H),3.87(bs,2H),2.95-2.85(m,2H),2.72-2.65(m,2H),2.08(bs,5H)。MS(ESI)m/
z 391[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(6-苯基吡啶-3-
基)丁酰胺，化合物43的合成
1H NMR(400MHz，氯仿-d)：8.66(1H,s),8.52(1H,bs),8.23(1H,bs),8.10(1H,s),
7.89(2H,d,J＝7.6Hz),7.65(1H,d,J＝8.8Hz),7.37-7.47(3H,m),4.17(2H,t),3.90(2H,
bs),2.98(2H,m),2.82(2H,t),2.23(5H,m)。LC-MS：m/z 390.1[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(5-苯基吡啶-2-
基)丁酰胺，化合物44的合成
1H NMR(400MHz，氯仿-d)：8.66(1H,s),8.52(1H,bs),8.23(1H,bs),8.10(1H,s),
7.89(2H,d,J＝7.6Hz),7.65(1H,d,J＝8.8Hz),7.37-7.47(3H,m),4.17(2H,t),3.90(2H,
bs),2.98(2H,m),2.82(2H,t),2.23(5H,m)。LC-MS：m/z 390.1[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(6-苯基哒嗪-3-
基)丁酰胺，化合物45的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.25(1H,s),8.36(1H,d,J＝9.6Hz),8.21(1H,d,J＝
9.6Hz),8.09(2H,d,J＝7.2Hz),7.49-7.56(3H,m),6.33(1H,bs),4.02(2H,t),3.86(2H,
bs),2.91(2H,t),2.80(2H,t),2.08(5H,m)。LC-MS：m/z 391.1[M+H]+。
4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基}-4-氧代-N-(5-苯基嘧啶-2-基)
丁酰胺，化合物46的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.71(s,1H),8.98(s,2H),7.77(d,J＝7.2Hz,2H),7.51
(t,J＝7,2Hz,2H),7.43(t,J＝7.2Hz,1H),6.34(br s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(s,
2H),2.90-2.87(s,4H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 391[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(5-苯基吡嗪-2-
基)丁酰胺，化合物47的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.93(s,1H),9.37(s,1H),9.00(s,1H),8.10-8.08(m,
2H),7.53-7.45(m,3H),6.34(bs,1H),4.03(t,J＝6.0Hz,2H),3.87(bs,2H),2.93-2.90(m,
2H),2.79-2.76(m,2H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 391[M+H]+。
N-([2,3′-联吡啶]-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-
4-氧代丁酰胺，化合物48的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.50(s,1H),9.21(s,1H),8.89(d,J＝2.0Hz,1H),8.58
(dd,J＝4Hz,1.2Hz,1H),8.39-8.36(m,1H),8.20-8.17(m,1H),8.01(d,J＝8.8Hz,1H),
7.50-7.47(m,1H),6.35(bs,1H),4.02(t,J＝5.8Hz,2H),2.67(bs,2H),2.93-2.89(m,2H),
2.73-2.69(m,2H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 391[M+H]+。
4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基}-4-氧代-N-[5-(吡啶-3-基)吡
啶-2-基]丁酰胺，化合物49的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)10.68(s,1H),8.94(d,J＝2.0Hz,1H),8.71(s,1H),8.58-
8.57(m,1H),8.16-8.12(m,3H),7.51-7.47(m,1H),6.34(br s,1H),4.02(t,J＝5.6Hz,2H),
3.86(s,2H),2.90-2.87(m,2H),2.76-2.73(m,2H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 391[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(5-(吡嗪-2-基)
吡啶-2-基)丁酰胺，化合物50的合成
1H NMR(400MHz，氯仿-d)：9.01(1H,d,J＝1.2Hz),8.94(1H,s),8.63(1H,t),8.53
(1H,d,J＝2.4Hz),8.45(1H,s),8.33(2H,m),4.16(2H,t),3.94(2H,bs),2.97(2H,m),2.87
(2H,t),2.23(4H,m),1.25(3H,s)。LC-MS：m/z 392.1[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(5-(吡啶-3-基)
吡嗪-2-基)丁酰胺，化合物52的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.00(s,1H),9.40(s,1H),9.27(m,1H),9.08(m,1H),
8.65-8.64(m,1H),8.45-8.43(m,1H),7.55-7.52(m,1H),6.34(bs,1H),4.03(t,J＝5.8Hz,
2H),3.87(bs,2H),2.93-2.90(m,2H),2.80-2.77(m,2H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 392[M+
H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(3-甲基-[1,1'-联苯]-
4-基)-4-氧代丁酰胺，化合物53的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.38(s,1H),7.65-7.63(m,2H),7.52-7.42(m,5H),
7.35-7.31(m,1H),6.36(br s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(s,2H),2.89-2.88(m,2H),
2.71-2.68(m,2H),2.28(s,3H),2.09(s,5H)。LC-MS：m/z 403[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(2-甲基-[1,1'-联苯]-
4-基)-4-氧代丁酰胺，化合物54的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.99(s,1H),7.52-7.40(m,4H),7.35-7.29(m,3H),
7.12-7.10(m,1H),6.35(br s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(s,2H),2.89-2.86(m,2H),
2.66-2.63(m,2H),2.20(s,3H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 403[M+H]+。
N-(3-甲氧基-[1,1'-联苯]-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物55的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.22(s,1H),8.07(d,J＝8.0Hz,1H),7.68(d,J＝7.2Hz,
2H),7.44(t,J＝7.2Hz,2H),7.35-7.33(m,1H),7.28(s,1H),7.21-7.18(m,1H),6.35(br s,
1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.94(s,3H),3.86(s,2H),2.88-2.85(m,2H),2.75-2.72(m,
2H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 419[M+H]+。
N-(2-甲氧基-[1,1'-联苯]-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物56的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.10(s,1H),7.51(bs,1H),7.46-7.44(m,2H),7.37(t,
J＝7.6Hz,2H),7.29-7.26(m,1H),7.21(s,2H),6.35(bs,1H),4.03(t,J＝5.8Hz,2H),3.87
(bs,2H),2.90-2.87(m,2H),2.68-2.64(m,2H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 419[M+H]+。
N-(2-氟联苯-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧
代丁酰胺，化合物57的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.31(s,1H),7.73-7.67(m,1H),7.54-7.42(m,5H),
7.41-7.34(m,2H),6.35(bs,1H),4.03(t,J＝6.4Hz,2H),3.87(bs,2H),2.92-2.83(m,2H),
2.70-2.63(m,2H),2.08(bs,5H)。MS(ESI)m/z 407[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(2'-甲基-[1,1'-联苯]-
4-基)-4-氧代丁酰胺，化合物58的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.08(s,1H),7.66-7.64(m,2H),7.29-7.16(m,6H),
6.35(br s,1H),4.03(t,J＝6.0Hz,2H),3.87(s,2H),2.91-2.88(m,2H),2.68-2.65(m,2H),
2.23(s,3H),2.09(s,5H)。LC-MS：m/z 403[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(3'-甲基-[1,1'-联苯]-
4-基)-4-氧代丁酰胺，化合物59的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.09(s,1H),7.69-7.66(m,2H),7.60-7.58(m,2H),
7.45-7.41(m,2H),7.34-7.30(m,1H),7.14-7.12(m,1H),6.34(br s,1H),4.03(t,J＝
6.0Hz,2H),3.87(s,2H),2.91-2.87(m,2H),2.68-2.65(m,2H),2.36(s,3H),2.08(s,5H)。
LC-MS：m/z 403[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(4'-甲基-[1,1'-联苯]-
4-基)-4-氧代丁酰胺，化合物60的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.07(s,1H),7.67-7.65(m,2H),7.58-7.51(m,4H),
7.24(d,J＝8.0Hz,2H),6.34(bs,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(bs,2H),2.88(t,J＝
6.4Hz,2H),2.67-2.64(m,2H),2.32(s,3H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 403[M+H]+。
N-(2'-甲氧基-[1,1'-联苯]-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物61的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.05(s,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,2H),7.39(d,J＝
8.8Hz,2H),7.33-7.25(m,2H),7.08(d,J＝7.6Hz,1H),7.00(t,J＝4.2Hz,1H),6.30(bs,
1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(bs,2H),3.75(s,3H),2.88(t,J＝6.4Hz,2H),2.67-2.64
(m,2H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 419[M+H]+。
N-(3'-甲氧基-[1,1'-联苯]-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物62的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.10(s,1H),7.69-7.67(m,2H),7.63-7.60(m,6H),
7.37-7.33(m,1H),7.21-7.16(m,2H),6.91-6.88(m,1H),6.35(br s,1H),4.03(t,J＝
5.6Hz,2H),3.87-3.82(m,5H),2.91-2.87(m,2H),2.68-2.65(m,2H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/
z 419[M+H]+。
N-(4'-甲氧基-[1,1'-联苯]-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物63的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.05(s,1H),7.65-7.63(m,2H),7.58-7.53(m,4H),
6.99(d,J＝8.8Hz,2H),6.30(bs,1H),4.02(t,J＝6Hz,2H),3.87(bs,2H),3.78(s,3H),
2.90-2.86(m,2H),2.65(t,J＝6.2Hz,2H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 419[M+H]+。
N-(3'-氟-[1,1'-联苯]-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物65的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.13(s,1H),7.71-7.65(m,4H),7.51-7.46(m,3H),
7.16-7.12(m,1H),6.35(br,1H),4.03(t,J＝5.8Hz,2H),3.87(br,2H),2.91-2.88(m,2H),
2.68-2.65(m,2H),2.08(br,5H)。LC-MS：m/z 407[M+H]+。
N-(4'-氟联苯-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧
代丁酰胺，化合物66的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.10(s,1H),7.70-7.62(m,4H),7.61-7.57(m,2H),
7.30-7.20(m,2H),6.35(bs,1H),4.02(t,J＝6.4Hz,2H),3.87(bs,2H),2.92-2.85(m,2H),
2.70-2.63(m,2H),2.08(bs,5H)；MS(ESI)m/z 407[M+H]+。
4'-(4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺基)-[1,
1'-联苯]-3-甲酸，化合物67的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.12(s,1H),8.15(s,1H),7.98-7.94(m,1H),7.90-
7.87(m,2H),7.73-7.64(m,4H),7.56(t,J＝7.6Hz,1H),6.35(bs,1H),4.03(t,J＝5.8Hz,
2H),3.87(bs,2H),2.91-2.88(m,2H),2.67(t,J＝6.6Hz,2H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 433
[M+H]+。
N-(2'-氨基-[1,1'-联苯]-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物69的合成
步骤1：N-(4-溴苯基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧
代丁酰胺的制备。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.13(s,1H),7.57-7.55(m,2H),7.47-7.45(m,2H),
6.33(br s,1H),4.01(t,J＝6.0Hz,2H),3.85(s,2H),2.88-2.85(m,2H),2.65-2.61(m,2H),
2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 392[M+H]+。
步骤2：N-(2'-氨基-[1,1'-联苯]-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧
啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺的制备。
所需产物使用通用Suzuki程序A获得。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.06(s,1H),7.66-7.64(m,2H),7.33-7.31(m,2H),
7.03-6.94(m,2H),6.74-6.72(m,1H),6.61(t,J＝7.2Hz,1H)6.35(br s,1H),4.70(s,2H),
4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(s,2H),2.90-2.87(m,2H),2.67-2.64(m,2H),2.08(s,5H)。LC-
MS：m/z 404[M+H]+。
N-(3'-氨基-[1,1'-联苯]-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物70的合成
步骤1：4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(2-甲基-[1,1'-
联苯]-4-基)-4-氧代丁酰胺的制备。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.17(s,1H),8.41(s,1H),8.18-8.12(m,2H),7.75-
7.71(m,5H),6.35(br s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.87(s,2H),2.91-2.88(m,2H),2.69-
2.66(m,2H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 434[M+H]+。
步骤2：N-(3'-氨基-[1,1'-联苯]-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧
啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺的制备。
将4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基}-N-[4-(3-硝基苯基)苯基]-
4-氧代丁酰胺(1当量)、氯化铵(4当量)和铁(2当量)加入至乙醇(0.02M)和水(0.08M)的溶
液中，并在40℃下加热4小时。然后，将反应混合物过滤，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将合
并的有机层用硫酸镁干燥，并在真空下浓缩。通过反相制备型HPLC对粗产物进行纯化，得到
纯化的产物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.05(s,1H),7.65-7.63(m,2H),7.49-7.47(m,2H),
7.06(t,J＝7.6Hz,1H),6.80(s,1H),6.75-6.73(m,1H),6.52-6.50(m,1H),6.34(br s,1H),
5.09(s,2H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(s,2H),2.89-2.86(m,2H),2.67-2.63(m,2H),
2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 404[M+H]+。
N-(4'-氨基-[1,1'-联苯]-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物71的合成
步骤1：4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(4'-硝基-[1,1'-
联苯]-4-基)-4-氧代丁酰胺的制备。
MS：m/z 434[M+H]+。
步骤2：N-(4'-氨基-[1,1'-联苯]-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧
啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺的制备。
所需产物以与化合物70类似的方式获得。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.97(s,1H),7.60-7.58(m,2H),7.47-7.45(m,2H),
7.36-7.34(m,2H),6.67(d,J＝8.0Hz,2H),6.34(br s,1H),5.70-5.60(br s,2H),4.02(t,J
＝5.6Hz,2H),3.86(s,2H),2.89-2.86(m,2H),2.65-2.62(m,2H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/z
404[M+H]+。
N-(3'-(二甲基氨基)-[1,1'-联苯]-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]
嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物72的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.03(s,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,2H),7.45(d,J＝
8.4Hz,2H),7.25-7.21(m,1H),7.14-7.12(m,1H),7.04-6.96(m,2H),6.34(bs,1H),4.02(t,
J＝6.0Hz,2H),3.87(bs,2H),2.90-2.87(m,2H),2.67-2.64(m,2H),2.47(s,6H),2.08(bs,
5H)。LC-MS：m/z 432[M+H]+。
N-(3'-乙酰胺基-[1,1'-联苯]-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-
4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物74的合成
在0℃下，将N-[4-(3-氨基苯基)苯基]-4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧
啶-4-基}-4-氧代丁酰胺(1当量)溶解于二氯甲烷(0.02M)中。向溶液中加入三乙胺(1当
量)，随后加入乙酰氯(1.05当量)，并将反应混合物搅拌30min。然后，将其用水稀释并用二
氯甲烷萃取。将合并的有机层用硫酸镁干燥，并在真空下浓缩。通过反相制备型HPLC对粗产
物进行纯化，得到纯化的产物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)10.09(s,1H),9.98(s,1H),7.83(s,1H),7.69-7.67(m,
2H),7.54-7.52(m,3H),7.36-7.27(m,2H),6.34(br s,1H),4.03(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(s,
2H),2.90-2.87(m,2H),2.67-2.64(m,2H),2.08-2.05(m,8H)。LC-MS：m/z 446[M+H]+。
N-(4-环己基苯基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代
丁酰胺，化合物75的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.88(s,1H),7.47(d,J＝8.4Hz,2H),7.11(d,J＝8.4Hz,
2H),6.34(bs,1H),4.02(t,J＝5.6Hz,2H),3.85(bs,2H),2.87-2.84(m,2H),2.61(t,J＝
6.4Hz,2H),2.42(m,1H),2.08(bs,5H),1.76-1.67(m,5H),1.41-1.19(m,5H)。LC-MS：m/z
395[M+H]+。
4-(4-(4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺基)苯
基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯，化合物76的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.77(s,1H),7.44(d,J＝8.8Hz,2H),6.88(d,J＝9.2Hz,
2H),6.30(bs,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.85(bs,2H),3.45-3.43(m,4H),3.02-2.99(m,
4H),2.87-2.83(m,2H),2.60-2.57(m,2H),2.08(bs,5H),1.42(s,9H)。LC-MS：m/z 497[M+H
]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(4-(哌嗪-1-基)
苯基)丁酰胺，化合物77的合成
将在二烷中的4M HCl(15当量)加入至boc保护的胺(1当量)中，并在室温下搅拌
16小时。完成后，将反应物用饱和碳酸氢钠萃取，将有机层合并，用硫酸镁干燥，过滤并在真
空中浓缩至干燥。将粗物质通过用二氯甲烷/己烷重结晶进行纯化，并冻干，得到作为灰白
色固体的纯净产物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.73(s,1H),7.42(d,J＝8.8Hz,2H),6.84(d,J＝8.8Hz,
2H),6.34(bs,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.85(bs,2H),2.98-2.95(m,4H),2.84-2.81(m,
6H),2.58(t,J＝6.6Hz,2H),2.08(bs，5H)。LC-MS：m/z 397[M+H]+。
N-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)苯基)-4-(2-甲基-6，7-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物78的合成
在0℃下，将化合物77(1.0当量)在无水四氢呋喃中的溶液加入至酰基氯(1.0当
量)和三乙胺(1.2当量)在四氢呋喃中的搅拌混合物中。在持续搅拌下使反应混合物升温至
室温，保持3小时。反应完成后，将溶剂在真空中蒸发至干燥，并将粗物质用乙酸乙酯萃取，
并用硫酸镁干燥。通过用DCM/甲醇/己烷粉碎固体对粗物质进行纯化，得到白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.77(s,1H),7.45(d,J＝9.2Hz,2H),6.89(d,J＝9.2Hz,
2H),6.30(bs,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.85(bs,2H),3.57-3.54(m,4H),3.08-3.06(m,
2H),3.01-2.99(m,2H),2.87-2.84(m,2H),2.59(t,J＝6.6Hz,2H),2.08(bs,5H),2.03(s,
3H)。LC-MS：m/z 439[M+H]+。
N-乙基-4-(6-(4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰
胺基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酰胺，化合物79的合成
步骤1：4-(6-(4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰
胺基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的制备
LC-MS：m/z 498[M+H]+。
步骤2：4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(5-(哌
嗪-1-基)吡啶-2-基)丁酰胺的制备
在0℃下，向4-(6-(4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代
丁酰胺基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1当量)在二氯甲烷(0.04M)中的搅拌溶液中逐
滴加入TFA(5当量)，并在室温下搅拌1小时。将反应混合物用水稀释，并用饱和碳酸氢钠溶
液碱化，然后用二氯甲烷萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩，获得中间体。
LC-MS：m/z 398[M+H]+。
步骤3：N-乙基-4-(6-(4-(2-甲基-6，7-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧
代丁酰胺基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
向4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(5-(哌嗪-1-
基)吡啶-2-基)丁酰胺(1当量)在THF(0.015M)中的搅拌溶液中加入异氰酸乙酯(4.5当量)，
并将反应混合物在80℃下在密封管中搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩，得到粗产
物。通过制备型TLC对粗产物进行纯化，得到产物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.25(s,1H),8.01(d,J＝2.7Hz,1H),7.92(d,J＝
8.3Hz,1H),7.41-7.39(dd,J＝2.7Hz,9.3Hz,1H),6.53-6.55(m,1H),6.32(brs,1H),4.01
(t,J＝5.7Hz,2H),3.84(brs,2H),3.39-3.41(m,4H),3.05-3.07(m,6H),2.82-2.84(m,2H),
2.64-2.66(m,2H),2.07(brs,5H),1.01(t,J＝7.5Hz,3H)。MS(ESI)m/z 469.2[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(4-苯基环己基)
丁酰胺，化合物80的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.78(d,J＝7.6Hz,1H),7.30-7.21(m,4H),7.19-7.13
(m,1H),6.35(bs,1H),4.01(t,J＝6.0Hz,2H),3.83(bs,2H),3.65-3.52(m,1H),2.80-2.70
(m,2H),2.50-2.40(m,2H),2.40-2.35(m,2H),2.08(m,5H),1.90-1.82(m,2H),1.82-1.75
(m,2H),1.57-1.45(m,2H),1.38-1.25(m,2H)；MS(ESI)m/z 395[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(4-(1-甲基哌啶-4-基)
苯基)-4-氧代丁酰胺，化合物82的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.90(s,1H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.14(d,J＝8.4Hz,
2H),6.33(bs,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.85(bs,2H),2.88-2.86(m,5H),2.61(t,J＝
6.6Hz,2H),2.20(s,3H),2.08(bs,5H),2.01-1.95(m,2H),1.71-1.60(m,4H)。LC-MS：m/z
410[M+H]+。
N-(6-(3-氯苯基)吡啶-3-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物83的合成
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：8.80-8.81(m,1H),8.18-8.20(m,1H),7.97-7.98(m,
1H),7.82-7.87(m,2H),7.38-7.47(m,2H),4.55(s,1H),4.19(t,J＝6.0Hz,2H),3.94-3.96
(m,2H),2.99-3.01(m,2H),2.82(t,J＝6.0Hz,2H),2.22(bs,2H),2.18(s,3H)。LC-MS：m/z
424[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(6-(间甲苯基)
吡啶-3-基)丁酰胺，化合物85的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.31(s,1H),8.81-8.80(m,1H),8.14-8.11(m,1H),
7.91-7.87(m,2H),7.82-7.80(m,1H),7.34(t,J＝7.6Hz,1H),7.21-7.19(m,1H),6.35(bs,
1H),4.03(t,J＝6.0Hz,2H),3.87(bs,2H),2.92-2.89(m,2H),2.71-2.68(m,2H),2.38(s,
3H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 404[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5-甲基-6-苯基吡啶-3-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物86的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.24(s,1H),8.64(d,J＝2.0Hz,1H),7.97(d,J＝
2.4Hz,1H),7.52-7.48(m,2H),7.48-7.40(m,2H),7.40-7.35(m,1H),6.35(bs,1H),4.03(t,
J＝6.0Hz,2H),3.87(bs,2H),2.95-2.85(m,2H),2.75-2.65(m,2H),2.31(s,3H),2.08(bs,
5H)。MS(ESI)m/z 404[M+H]+。
N-(6-(4-氟苯基)吡啶-3-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物87的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.33(s,1H),8.81-8.80(m,1H),8.13-8.05(m,3H),
7.90(d,J＝8.4Hz,1H),7.28(t,8.8Hz,2H),6.34(bs,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(bs,
2H),2.92-2.88(m,2H),2.70-2.67(m,2H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 408[M+H]+。
N-(6-(3-氟苯基)哒嗪-3-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物88的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.67(s,1H),8.68(s,1H),8.13-8.10(m,2H),7.80(s,
1H),7.70-7.68(m,1H),7.52-7.48(m,1H),7.44-7.42(m,1H),6.33(br s,1H),4.02(t,J＝
6.0Hz,2H),3.86(s,2H),2.90-2.87(m,2H),2.75-2.72(m,2H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 424
[M+H]+。
N-(5-(3-氟苯基)吡啶-2-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物89的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.67(s,1H),8.69(s,1H),8.13(s,2H),7.61-7.48(m,
3H),7.23-7.18(m,1H),6.33(bs,1H),4.02(t,J＝5.8Hz,2H),3.86(bs,2H),2.91-2.87(m,
2H),2.76-2.72(m,2H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 408[M+H]+。
N-(5-(4-氟苯基)吡啶-2-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物90的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.62(s,1H),8.62-8.63(m,1H),8.12-8.14(m,1H),
8.04-8.07(m,1H),7.73-7.77(m,2H),7.28-7.32(m,2H),6.34(bs,1H),4.55(s,1H),4.02
(t,J＝6.0Hz,2H),3.85-3.87(m,2H),2.87-2.90(m,2H),2.73(t,J＝6.0Hz,2H),2.22(bs,
2H),2.08(s,3H)。LC-MS：m/z 408[M+H]+。
N-(3-甲基-5-苯基吡啶-2-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物91的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.07(s,1H),8.53(s,1H),7.94(s,1H),7.72-7.70(m,
2H),7.51-7.47(m,2H),7.42-7.38(m,1H),6.35(br s,1H),4.01(t,J＝6.0Hz,2H),3.85(s,
2H),2.89-2.86(m,2H),2.71-2.68(m,2H),2.21(s,3H),2.09(s,5H)。LC-MS：m/z 404[M+H
]+。
N-(4-甲基-5-苯基吡啶-2-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物92的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.55(s，1H)，8.61(s，2H)，8.16(s，1H)，8.05(s，1H)，
7.85(d，J＝8.0Hz，1H),7.51-7.47(m,1H),6.33(s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(s,
2H),2.88(s,2H),2.73(d,J＝6.4Hz,2H),2.24(s,3H),2.08(bs,5H)。MS(ESI)m/z 404.1[M+
H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(5-(间甲苯基)
吡啶-2-基)丁酰胺，化合物93的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.63(s,1H),8.63-8.622(m,1H),8.14-8.12(m,1H),
8.07-8.04(m,1H),7.53(bs,1H),7.49(d,J＝8.0Hz,1H),7.36(t,J＝7.6Hz,1H),7.19(d,J
＝7.6Hz,1H),6.34(bs,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.87(bs,2H),2.90-2.87(m,2H),2.75-
2.72(m,2H),2.38(s,3H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 404[M+H]+。
N-(5-氟-2,3'-联吡啶-6'-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物94的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.72(s,1H),8.99(d,J＝2.4Hz,1H),8.66(d,J＝
2.8Hz,1H),8.43-8.38(m,1H),8.19-8.14(m,1H),8.12-8.07(m,1H),7.84(td,J＝8.8,
3.2Hz,1H),6.34(bs,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(bs,2H),2.92-2.85(m,2H),2.78-
2.72(m,2H),2.08(bs,5H)。MS(ESI)m/z 409[M+H]+。
N-(4-氟-2,3′-联吡啶-6'-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物95的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.75(s,1H),9.07(d,J＝1.7Hz,1H),8.70-8.67(dd,J
＝5.7Hz,9.2Hz,1H),8.48-8.46(dd,J＝2.2Hz,8.8Hz,1H),8.18(d,J＝8.8Hz,1H),7.99(d,
J＝8.8Hz,1H),7.31-7.28(m,1H),6.33(brs,1H),4.04-4.01(t,J＝5.7Hz,2H),3.86(brs,
2H),2.89(d,J＝6.1Hz,2H),2.76(t,J＝6.2Hz,2H),2.08(brs,5H)。MS(ESI)m/z 409.11[M+
H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(6-甲基-[2,3′-联吡
啶]-6′-基)-4-氧代丁酰胺，化合物96的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.71(s,1H),9.01-9.00(m,1H),8.42-8.40(m,1H),
8.17-8.15(d,J＝8.8Hz,1H),7.80-7.75(m,2H),7.23-7.21(m,1H),6.33(br,1H),4.02(t,J
＝6.2Hz，2H)，3.86(br，2H)，2.89-2.87(m，2H)，2.75-2.72(m，2H)，2.54(s，3H)，2.08(br，
5H)。LC-MS：m/z 405[M+H]+。
N-(6-(3-氯苯基)哒嗪-3-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物97的合成
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：8.50-8.53(m,1H),8.08-8.13(m,2H),7.94-7.95(m,
1H),7.50-7.52(m,1H),4.55(s,1H),4.11(t,J＝6.0Hz,2H),3.95-3.97(m,2H),3.00-3.02
(m,2H),2.91(t,J＝6.0Hz,2H),2.22(bs,2H),2.18(s,3H)。LC-MS：m/z 425[M+H]+。
N-[6-(4-氯苯基)哒嗪-3-基]-4-{2-甲基-5H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基}-
4-氧代丁酰胺，化合物100的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.29(s,1H),8.37(d,J＝9.2Hz,1H),8.24(d,J＝
9.6Hz,1H),8.13(d,J＝8.4Hz,2H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(s,
2H),2.91-2.89(m,2H),2.81-2.78(m,2H),2.07(s,5H)。LC-MS：m/z 426[M+H]+。
N-(6-(4-氟苯基)哒嗪-3-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物101的合成
1H NMR(400MHz，氯仿-d)：9.17(1H,bs),8.50(1H,d,J＝9.2Hz),8.00-8.04(2H,
m),7.82(1H,d,J＝9.2Hz),7.19(2H,t),4.16(2H,t),3.94(2H,bs),2.96-3.06(4H,m),2.23
(5H,m)。LC-MS：m/z 409.2[M+H]+。
N-(6-(5-氯吡啶-3-基)哒嗪-3-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物102的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.36(s,1H),9.24(d,J＝1.7Hz,1H),8.75(d,J＝
2.2Hz,1H),8.59(t,J＝2.2Hz,1H),8.38(q,J＝9.2Hz,17.1Hz,2H),6.35(br s,1H),4.03
(t,J＝6.1Hz,2H),3.86(br s,2H),2.91-2.90(m,2H),2.83-2.80(m,2H),2.08(br s,5H)。
MS(ESI)m/z 426.24[M+H]+。
N-(5′-氯-[2,3′-联吡啶]-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物108的合成
1H NMR(400MHz，氯仿-d)：9.02(1H,bs),8.68(1H,s),8.57(1H,d,J＝2.4Hz),
8.29-8.32(3H,m),7.73(1H,d,J＝8.8Hz),4.16(2H,t),3.94(2H,bs),2.97(2H,m),2.89
(2H,t),2.24(5H,m)。LC-MS：m/z 425.1[M+H]+。
N-(5′-氟-[2,3′-联吡啶]-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物109的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.43(s,1H),9.12(s,1H),8.87(d,J＝2.0Hz,1H),8.59
(d,J＝2.8Hz,1H),8.29-8.25(m,1H),8.21-8.18(m,1H),8.10-8.08(m,1H),6.34(br s,
1H),4.02(t,J＝6.4Hz,2H),3.86(s,2H),2.92-2.89(m,2H),2.72-2.69(m,2H),2.08(s,
5H)。LC-MS：m/z 409[M+H]+。
N-(3-氟-2,3'-联吡啶-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物111的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.68(s,1H),9.05(s,1H),8.68(s,1H),8.70-8.65(m,
1H),8.30-8.15(m,2H),7.55-7.50(s,1H),6.35(bs,1H),4.10-4.00(m,2H),3.87(bs,2H),
3.00-2.85(m,2H),2.80-2.65(m,2H),2.08(bs,5H)。MS(ESI)m/z 409[M+H]+。
N-(5′-氨基-2,3'-联吡啶-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物112的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.38(s,1H),8.83(d,J＝2.0Hz,1H),8.35(d,J＝
1.6Hz,1H),8.12-8.09(m,1H),7.93(d,J＝2.4Hz,1H),7.88-7.82(m,1H),7.58-7.52(m,
1H),6.35(bs,1H),5.40(s,2H),4.03(t,J＝6.0Hz,2H),3.87(bs,2H),2.95-2.85(m,2H),
2.75-2.65(m,2H),2.08(bs,5H)；MS(ESI)m/z 406[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(6′-甲基-[2,3'-联吡
啶]-5-基)-4-氧代丁酰胺，化合物113的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.36(s,1H),9.08-9.07(m,1H),8.83-8.82(m,1H),
8.27-8.25(m,1H),8.16-8.13(m,1H),7.96(d,J＝8.8Hz,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),6.34
(bs,1H),4.02(t,J＝5.6Hz,2H),3.86(bs,2H),2.92-2.89(m,2H),2.69(m,2H),2.08(bs,
5H)。LC-MS：m/z 405[M+H]+。
N-(5′-氯-[3,3′-联吡啶]-6-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物114的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.73(s,1H),8.92(d,J＝1.6Hz,1H),8.78(d,J＝
1.6Hz,1H),8.62(d,J＝2.0Hz,1H),8.34-8.33(m,1H),8.23-8.15(m,2H),6.33(br s,1H),
4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(s,2H),2.90-2.87(m,2H),2.76-2.73(m,2H),2.08(s,5H)。LC-
MS：m/z 425[M+H]+。
N-(5′-氟-[3,3′-联吡啶]-6-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物115的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.73(s,1H),8.86(t,J＝1.6Hz,1H),8.78(d,J＝
2.0Hz,1H),8.58(d,J＝2.4Hz,1H),8.24-8.13(m,3H),6.30(bs,1H),4.03(t,J＝5.8Hz,
2H),3.86(bs,2H),2.91-2.88(m,2H),2.76-2.73(m,2H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 409[M+
H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5'-甲基-[3,3'-联吡
啶]-6-基)-4-氧代丁酰胺，化合物116的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.68(s,1H),8.74-8.70(m,2H),8.42(s,1H),8.18-
8.12(m,2H),7.96(s,1H),6.34(bs,1H),4.03(t,J＝5.8Hz,2H),3.87(bs,2H),2.90-2.87
(m,2H),2.76-2.73(m,2H),2.37(s,3H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 405[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(4-(哌嗪-1-基)
苯基)丁酰胺，化合物117的合成
步骤1：Boc保护的4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-
N-(4-(哌嗪-1-基)苯基)丁酰胺的制备
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.71(s,1H),8.90(m,1H),8.75(bs,1H),8.44-8.43(d,
J＝2.4Hz,1H),8.19-8.15(m,3H),6.36(bs,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(bs,2H),
2.91-2.87(m,2H),2.76-2.73(m,2H),2.08(bs,5H),1.40(s,18H)。LC-MS：m/z 606[M+H]+。
步骤2：4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(4-(哌
嗪-1-基)苯基)丁酰胺的制备
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.64(s,1H),8.56(m,1H),8.14(d,J＝8.4Hz,1H),
8.06-8.05(m,1H),8.01-7.99(m,1H),7.94(d,J＝2.4Hz,1H),7.16(t,J＝2.2Hz,1H),6.33
(bs,1H),5.41(s,2H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(bs,2H),2.90-2.87(m,2H),2.75-2.72
(m,2H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 406[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(5'-(三氟甲
基)-[3,3'-联吡啶]-6-基)丁酰胺，化合物118的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.77(s,1H),9.27-9.26(m,1H),8.97(bs,1H),8.85-
8.84(m,1H),8.56(bs,1H),8.31-8.28(m,1H),8.20-8.18(m,1H),6.34(bs,1H),4.03(t,J＝
6.0Hz,2H),3.86(bs,2H),2.91-2.88(m,2H),2.77-2.74(m,2H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z
459[M+H]+。
N-(4-甲基-3,3'-联吡啶-6-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物119的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.56(s,1H),8.61(s,2H),8.16(s,1H),8.05(s,1H),
7.85(d,J＝8.0Hz,1H),7.51-7.47(m,1H),6.33(s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(s,
2H),2.87(d,J＝5.6Hz,2H),2.73(d,J＝6.0Hz,2H),2.25(s,3H),2.08(s,5H)；MS(ESI)m/z
405.39[M+H]+。
N-(4,5'-二甲基-3,3'-联吡啶-6-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-
4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物120的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.57(s,1H),8.44(d,J＝1.2Hz,1H),8.40(d,J＝
1.2Hz,1H),8.15(s,1H),8.05(s,1H),7.67(s,1H),6.35(bs,1H),4.03(t,J＝6.0Hz,2H),
3.87(bs,2H),2.90-2.80(m,2H),2.80-2.60(m,2H),2.36(s,3H),2.26(s,3H),2.08(bs,
5H)。MS(ESI)m/z 419[M+H]+。
N-(6'-甲基-3,3'-联吡啶-6-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物121的合成
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：8.68(d,J＝2.0Hz,1H),8.58(d,J＝2.0Hz,1H),8.22-
8.18(m,1H),8.08-7.98(m,2H),7.41(d,J＝8.0Hz,1H),4.56(s,1H),4.11(t,J＝6.8Hz,
2H),3.96(bs,2H),3.03-2.95(m,2H),2.90-2.83(m,2H),2.58(s,3H),2.30-2.15(m,5H)；MS
(ESI)m/z 405[M+H]+。
N-(5-(5-氟吡啶-3-基)吡嗪-2-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物122的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.06(s,1H),9.42(d,J＝1.2Hz,1H),9.18(t,J＝
1.6Hz,1H),9.14(d,J＝1.2Hz,1H),8.66(d,J＝2.8Hz,1H),8.40-8.30(m,1H),6.33(bs,
1H),4.03(t,J＝6.0Hz,2H),3.87(bs,2H),2.95-2.85(m,2H),2.85-2.75(m,2H),2.08(bs,
5H)。MS(ESI)m/z 410[M+H]+。
N-(5-(3-氟苯基)吡嗪-2-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物123的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)10.98(s,1H),9.37(s,1H),9.05(d,J＝1.2Hz,1H),7.97-
7.89(m,2H),7.58-7.52(m,1H),7.30-7.28(m,1H),6.33(br s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),
3.86(s,2H),3.27(s,1H),2.93-2.90(m,2H),2.79-2.76(m,2H),2.07(s,3H)。LC-MS：m/z
409[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5-(5-甲基吡啶-3-基)
吡嗪-2-基)-4-氧代丁酰胺，化合物124的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.98(s,1H),9.39(s,2H),9.06(s,2H),8.48(s,1H),
8.27(s,1H),6.33(s,1H),4.02(t,J＝5.6Hz,2H),3.86(s,2H),2.91-2.88(m,2H),2.50-
2.75(m,2H),2.39(bs,3H),2.08(bs,5H)；MS(ESI)m/z 404.10[M+H]+。
N-(6-甲基-5-(吡啶-3-基)吡嗪-2-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧
啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物125的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.95(s,1H),9.24(s,1H),8.83-8.82(m,1H),8.65-
8.63(m,1H),8.07-8.04(m,1H),7.54-7.51(m,1H),6.34(bs,1H),4.02(t,J＝6.0z,2H),
3.86(bs,2H),2.92-2.89(m,2H),2.78-2.75(m,2H),2.54(s,3H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z
406[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(5-(间甲苯基)
吡嗪-2-基)丁酰胺，化合物126的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.91(s,1H),9.35(s,1H),8.97(s,1H),7.92-7.86(m,
2H),7.39(t,J＝7.6Hz,1H),7.26(d,J＝6.8Hz,1H),6.34(br s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,
2H),3.86(s,2H),2.91-2.89(m,2H),2.78-2.75(m,2H),2.39(s,3H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/
z 405[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5-(6-甲基吡啶-3-基)
吡嗪-2-基)-4-氧代丁酰胺，化合物127的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.97(s,1H),9.38(s,1H),9.13(d,J＝2.0Hz,1H),9.04
(d,J＝1.2Hz,1H),8.33(dd,J＝8.0,2.4Hz,1H),7.39(d,J＝8.0Hz,1H),6.35(bs,1H),4.03
(t,J＝6.0Hz,2H),3.87(bs,2H),2.95-2.85(m,2H),2.80-2.70(m,2H),2.53(s,3H),2.08
(bs,5H)。MS(ESI)m/z 406[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5-(6-甲基吡嗪-2-基)
吡啶-2-基)-4-氧代丁酰胺，化合物128的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.79(s,1H),9.08-9.06(m,2H),8.51(bs,1H),8.49-
8.46(m,1H),8.20(d,J＝8.8Hz,1H),6.33(bs,1H),4.02(t,J＝5.8Hz,2H),3.86(bs,2H),
2.91-2.87(m,2H),2.76-2.73(m,2H),2.57(s,3H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 406[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(4-(吡嗪-2-基)
苯基)丁酰胺，化合物129的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.24(s,1H),9.21(d,J＝1.6Hz,1H),8.68-8.65(m,
1H),8.55(d,J＝2.4Hz,1H),8.12-8.08(m,2H),7.80-7.72(m,2H),6.35(bs,1H),4.03(t,J
＝6.0Hz,2H),3.87(bs,2H),2.95-2.85(m,2H),2.72-2.65(m,2H),2.08(bs,5H)。MS(ESI)m/
z 391[M+H]+。
N-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基)-N-甲基-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧
啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物130的合成
步骤1：N-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧
啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺的制备
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)：7.66(s,1H),7.60-7.58(m,1H),7.33-7.29(m,2H),6.53
(s,1H),6.13(brs,1H),3.81(brs,2H),3.64(s,1H),2.70(brs,2H),2.52-2.51(m,2H),2.29
(s,2H),1.86(brs,5H)。LC-MS：MS m/z 414[M+H]+。
步骤2：N-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基)-N-甲基-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,
5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺的制备
在室温下，向N-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-
a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺(1当量)在无水四氢呋喃中的搅拌溶液中加入K2CO3(3当
量)，并持续搅拌15分钟。在0℃下，向反应混合物中逐滴加入CH3I(5当量)，随后在室温下搅
拌16小时。完成后，将反应混合物用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用水和盐
水溶液洗涤。将有机溶剂用无水硫酸钠干燥，过滤，并在真空下浓缩，得到粗产物。通过柱色
谱法对粗产物进行纯化。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.93(s,1H),7.85(d,J＝7.1Hz,1H),7.60-7.53(m,2H),
7.05(s,2H),6.33(bs,1H),4.02(bs,2H),3.86(bs,2H),3.40(s,3H),2.87(bs,4H),2.07
(bs,5H)；MS(ESI)m/z 428.20[M+H]+。
3-(3-氯苯基)-N-(4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)丁基)异
唑-5-胺，化合物131的合成
步骤1：N-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧
啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺的制备。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.88(s,1H),7.91(s,1H),7.82(d,1H),7.58-7.51(m,
2H),6.89(s,1H),6.36(brs,1H),4.02(t,2H),3.86(brs,2H),2.92(t,2H),2.71(q,2H),
2.07(brs,5H)。LC-MS：MS m/z 414[M+H]+。
步骤2：3-(3-氯苯基)-N-(4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)丁
基)异唑-5-胺的制备。
在0℃下，将N-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]
嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺(1当量)在THF(0.03M)中的溶液用硼烷.DMS(5当量)进行处
理，并将反应混合物加热至40℃，保持10小时。完成后，将反应混合物用甲醇猝灭，并在减压
下浓缩，获得粗产物；加入水，并用乙酸乙酯萃取。将合并的乙酸乙酯层用硫酸钠干燥，过
滤，并在减压下浓缩，获得粗产物。通过制备型HPLC对粗产物进行纯化。
1H NMR(400MHz，氯仿-d)：7.72(brs,1H),7.62(d,J＝6.8Hz,1H),7.37-7.33(m,
2H),5.26(s,1H),5.16(s,1H),4.61(brs,1H),4.06(t,J＝6.0Hz,2H),3.29(d,J＝5.6Hz,
2H),3.16(brs,4H),2.20(s,3H),2.16(t,J＝5.6Hz,2H),1.69(brs,4H)。LC-MS：MS m/z 386
[M+H]+。
N-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基)-3-甲基-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧
啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物132的合成
步骤1：4-甲氧基-2-甲基-4-氧代丁酸的制备
在氮气下，向4-甲氧基-2-亚甲基-4-氧代丁酸(1当量)在甲醇(0.3M)中的溶液中
加入10％Pd/C(0.1当量)在甲醇中的浆液。将反应混合物在室温下在H2(气球)下氢化16小
时。将反应混合物通过硅藻土床过滤，并用甲醇洗涤。将滤液在减压下浓缩，得到粗产物。将
粗产物用正戊烷和二乙醚洗涤，以移除固体杂质。将溶剂在减压下蒸发，得到作为淡黄色液
体的中间体。
步骤2：3-甲基-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酸
甲酯的制备
向4-甲氧基-2-甲基-4-氧代丁酸(1当量)、2-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]
嘧啶(1当量)在DMF(0.5M)中的搅拌溶液中加入HATU(1.5当量)、TEA(3当量)，并将反应混合
物在室温下搅拌12小时。反应完成后，将反应混合物加入冰水中，并用乙酸乙酯萃取。将合
并的有机层用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩，得到粗产物。通过柱色
谱法对粗产物进行纯化，得到中间体。LC-MS：MS m/z 266[M+H]+。
步骤3：3-甲基-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酸
的制备
向3-甲基-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酸甲酯
(1当量)在THF-CH3OH-H2O(1:1:1)(0.2M)中的搅拌溶液中加入LiOH.H2O(2当量)，并将反应
混合物在室温下搅拌2小时。完成后，在减压下蒸发溶剂，并将残渣用饱和KHSO4溶液酸化，
并用在氯仿中的10％甲醇萃取。将水层在减压下蒸发，并于在氯仿中的10％甲醇中搅拌，过
滤并在减压下浓缩，得到中间体。LC-MS：MS m/z 266[M+H]+。
步骤4：N-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基)-3-甲基-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,
5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺的制备
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.84(s,1H),7.91(s,1H),7.83(d,J＝7Hz,1H),7.57-
7.49(m,2H),6.77(s,1H),6.35(bs,1H),4.06-4.03(t,J＝5.7Hz,2H),3.96-3.92(m,2H),
2.89-2.86(m,1H),2.60-2.55(dd,J＝4.8Hz,16.7Hz,1H),2.13-2.07(bs,5H),1.13(d,J＝
6.6Hz,3H)。MS(ESI)m/z 428.20[M+H]+。
N-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基)-4-(6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-
氧代丁酰胺，化合物133的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.86(s,1H),7.90(s,1H),7.83-7.82(d,J＝6.8Hz,
1H),7.58-7.53(m,2H),7.29(br s,1H),6.78(s,1H),6.54(br s,1H),4.14-4.11(t,J＝
5.6Hz,2H),3.92-3.90(s,2H),2.95-2.91(m,2H),2.74-2.71(t,J＝6Hz,2H),2.16-2.12(m,
2H)。LC-MS：MS m/z 400.1[M+H]+。
N-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基)-4-氧代-4-(2-(三氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,
5-a]嘧啶-4(5H)-基)丁酰胺，化合物134的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.88(s,1H),7.90(s,1H),7.82(d,J＝7.6Hz,1H),
7.58-7.51(m,2H),6.89(brs,1H),6.77(s,1H),4.22(t,J＝5.6Hz,2H),3.95(brs,2H),2.96
(m,2H),2.74(t,J＝6Hz,2H),2.19(brs,2H)。LC-MS：MS m/z 467[M-H]+。
N-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基)-4-(2-甲氧基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物135的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.87(s,1H),7.79(d,J＝6.8Hz,1H),7.56-7.50(m,2H),
6.70(s,1H),5.96(b s,1H),3.93(t,J＝6.2Hz,2H),3.85(b s,2H),3.71(s,3H),2.90-2.88
(m,2H),2.67(b s,2H),2.11(b s,2H)。LC-MS：m/z 430[M+H]+。
4-(4-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基氨基)-4-氧代丁酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并
[1,5-a]嘧啶-2-甲酸甲酯，化合物136的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.3(brs,1H),7.78(s,1H),7.65(d,J＝7.2Hz,1H),
7.41-7.34(m,2H),6.63(s,1H),4.31(t,J＝6.4Hz,2H),3.96(brs,2H),3.92(s,3H),3.03
(brs,2H)，2.90(brs，2H)，2.28(brs，2H)。
N-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基)-4-(2-乙基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物137的合成
1H NMR(400MHz，氯仿-d)7.77(1H,bs),7.64(1H,d,J＝8.0Hz),7.33-7.40(2H,m),
7.25(1H,s),6.64(1H,s),4.18(2H,t),4.00(2H,m),2.90(2H,m),2.88(2H,m),2.60(2H,t),
2.19(2H,m),0.88(3H,m)。
N-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基)-4-(6-甲基-2,3-二氢-1H-咪唑并[1,2-b]吡唑-
1-基)-4-氧代丁酰胺，化合物138的合成
步骤1：6-甲基-2,3-二氢-1H-咪唑并[1,2-b]吡唑的制备
在室温下，向3-甲基-1H-吡唑-5-胺(1当量)在1,4-二烷(0.5M)中的搅拌溶液中
加入三乙胺(5当量)。15分钟后，在室温下，向反应混合物中加入1，2-二溴乙烷(1.2当量)。
将反应混合物在110℃下搅拌16小时。完成后，将反应混合物过滤并用乙酸乙酯洗涤。将滤
液在减压下浓缩，得到粗产物。通过柱色谱法对粗产物进行纯化，得到作为灰白色固体的产
物。LC-MS：m/z 124[M+H]+。
步骤2：4-(6-甲基-2，3-二氢-1H-咪唑并[1，2-b]吡唑-1-基)-4-氧代丁酸的制备
向6-甲基-2，3-二氢-1H-咪唑并[1，2-b]吡唑(1当量)在氯仿(0.5M)中的搅拌溶液
中加入二氢呋喃-2，5-二酮(1.3当量)。将反应混合物在室温下搅拌12小时。完成后，将由此
沉淀的固体过滤，并用正戊烷洗涤并干燥，得到作为灰白色固体的产物。LC-MS：m/z 224[M+
H]+。
步骤3：N-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基)-4-(6-甲基-2，3-二氢-1H-咪唑并[1，2-b]
吡唑-1-基)-4-氧代丁酰胺的制备
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.81(brs,1H),7.89(s,1H),7.82(d,J＝7.0Hz,1H),
7.57-7.54(m,2H),6.77(s,1H),5.71(s,1H),4.55(t,J＝7.8Hz,1H),4.32-4.24(m,2H),
4.20-4.16(m,1H),2.84(d,J＝6.1Hz,1H),2.75(s,3H),2.15(s,2H),2.11(s,1H)。LC-MS：m/
z 400.22[M+H]+。
4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(6-苯基哒
嗪-3-基)丁酰胺，化合物139的合成
步骤1：二甲磺酸2-甲基丙烷-1,3-二基酯的制备
向2-甲基丙烷-1,3-二醇(1当量)在二氯甲烷(0.45M)中的搅拌溶液中加入甲磺酰
氯(2.7当量)，使用三乙胺(2.7当量)，在0℃至室温下保持16小时。反应完成后，将反应混合
物用水和盐水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到作为褐色固体的产
物。
步骤2：2,6-二甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶的制备
向二甲磺酸2-甲基丙烷-1,3-二基酯(1.2当量)在1,4-二烷(0.5M)中的搅拌溶
液中加入3-甲基-1H-吡唑-5-胺(1当量)和三乙胺(5当量)。将反应混合物在100℃下加热48
小时。反应完成后，将反应混合物过滤，并在减压下浓缩，通过柱色谱法进行纯化，得到作为
褐色固体的产物。LC-MS：m/z 152[M+H]+。
步骤3：4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酸的
制备
向2,6-二甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶(1当量)在氯仿(0.1M)中的搅拌
溶液中加入琥珀酸酐(1当量)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物在减压
下浓缩，得到作为灰白色固体的产物。LC-MS：m/z 252[M+H]+。
步骤4：4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(6-
苯基哒嗪-3-基)丁酰胺的制备
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.37(d,J＝9.2Hz,1H),8.23-8.17(m,1H),8.09(d,J＝
7.2Hz,2H),7.60-7.47(m,5H),4.32-3.97(m,3H),3.65-3.60(m,1H),2.95-2.75(bs,4H),
2.08(s,3H),1.46(s,1H),1.05(s,3H)；LC-MS：m/z 405.0[M+H]+。
N-(2,3′-联吡啶-5-基)-4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物140的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.40(s,1H),9.22(d,J＝2.0Hz,1H),8.86(d,J＝
2.0Hz,1H),8.62-8.57(m,1H),8.40-8.35(m,1H),8.20-8.15(m,1H),8.05-7.99(m,1H),
7.52-7.47(m,1H),6.35(bs,1H),4.15-4.00(m,2H),3.67-3.60(m,1H),3.50-3.35(m,1H),
3.02-2.80(m,2H),2.75-2.65(m,2H),2.35-2.20(m,1H),2.08(bs,3H),1.05(d,J＝4.4Hz,
3H)。MS(ESI)m/z 405[M+H]+。
4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(6-(吡啶-
3-基)哒嗪-3-基)丁酰胺，化合物141的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.33(s,1H),9.27(d,J＝1.6Hz,1H),8.69(dd,J＝4.8,
1.6Hz,1H),8.50-8.43(m,1H),8.43-8.37(m,1H),8.34-8.19(m,1H),7.70-7.55(m,1H),
6.35(bs,1H),4.18-4.00(m,2H),3.67-3.60(m,1H),3.50-3.35(m,1H),3.02-2.85(m,2H),
2.85-2.78(m,2H),2.35-2.20(m,1H),2.08(bs,3H),1.05(d,J＝5.6Hz,3H)。MS(ESI)m/z
406[M+H]+。
4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5'-甲基-[3,3'-联
吡啶]-6-基)-4-氧代丁酰胺，化合物142的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.69(s,1H),8.74-8.70(m,2H),8.42-8.42(m,1H),
8.16-8.14(m,2H),7.97(s,1H),6.34(br,1H),4.14-4.04(m,2H),3.66-3.60(q,1H),2.97-
2.87(m,2H),2.76-2.73(m,2H),2.37(s,3H),2.08(s,3H),1.06-1.04(m,3H)。LC-MS：m/z
419[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(6-甲基-[2,3'-联吡
啶]-6'-基)-4-氧代丁酰胺，化合物143的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.71(s,1H),9.01-9.00(m,1H),8.42-8.40(m,1H),
8.17-8.15(d,J＝8.8Hz,1H),7.80-7.75(m,2H),7.23-7.21(m,1H),6.33(br,1H),4.02(t,J
＝6.2Hz,2H),3.86(br,2H),2.89-2.87(m,2H),2.75-2.72(m,2H),2.54(s,3H),2.08(br,
5H)。LC-MS：m/z 405[M+H]+。
4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5'-甲基-[2，3'-联
吡啶]-5-基)-4-氧代丁酰胺，化合物144的合成
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：10.39(s，1H)，9.01(m，1H)，8.85(br，1H)，8.43-8.42(m，
1H)，8.21(br，1H),8.18-8.15(m,1H),8.00(d,J＝8.8Hz,1H),6.33(br,1H),4.14-4.10(m，
2H),3.66-3.61(m,1H),2.99-2.89(m,2H),2.72-2.67(m,2H),2.38(s,3H),2.08(s,3H),
1.06-1.05(m,3H)。LC-MS：m/z 419[M+H]+。
N-([2,3'-联吡啶]-5-基)-2-甲基-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物145的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.38(s,1H),9.22(d,J＝1.6Hz,1H),8.88(d,J＝
2.4Hz,1H),8.59(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),8.38(dt,J＝8.0,2.0Hz,1H),8.22-8.18(m,1H),
8.03-8.00(m,1H),7.53-7.48(m,1H),6.35(bs,1H),4.05-4.00(m,2H),3.90-3.84(m,2H),
3.10-3.00(m,2H),2.75-2.60(m,1H),2.07(bs,5H),1.21(d,J＝6.4Hz,3H)。MS(ESI)m/z
405[M+H]+。
N-([3,3'-联吡啶]-6-基)-2-甲基-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物147的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.68(s,1H),8.94(s,1H),8.72(s,1H),8.58-8.57(m,
1H),8.19-8.12(m,3H),7.51-7.48(m,1H),6.27(br,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(br,
2H),3.06-2.99(m,1H),2.06(br,5H),1.19(d,J＝7.2Hz,3H)。LC-MS：m/z 405[M+H]+。
N-(4-甲基-2,3'-联吡啶-6'-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物148的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.70(s,1H),9.01(d,J＝2.1Hz,1H),8.51(d,J＝
4.8Hz,1H),8.43-8.40(dd,J＝2.6Hz,8.7Hz,1H),8.15(d,J＝8.8Hz,1H),7.85(s,1H),7.19
(d,J＝4.8Hz,1H),6.33(brs,1H),4.02(t,J＝5.7Hz,2H),3.86(brs,2H),2.89(t,J＝
5.7Hz,2H),2.74(t,J＝6.1Hz,2H),2.39(s,3H),2.08(brs,5H)；MS(ESI)m/z 405.18[M+H
]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5-(5-甲基吡嗪-2-基)
吡啶-2-基)-4-氧代丁酰胺，化合物149的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.75(s,1H),9.14(d,J＝0.8Hz,1H),9.04(d,J＝
2.2Hz,1H),8.60(s,1H),8.46-8.43(dd,J＝2.2Hz,2.2Hz,1H),8.19(d,J＝8.7Hz,1H),6.33
(brs,1H),4.02(t,J＝5.7Hz,2H),3.86(brs,2H),2.89(t,J＝6.1Hz,2H),2.75(t,J＝
6.6Hz,2H),2.53(s,3H),2.07(brs,5H)。MS(ESI)m/z 406.16[M+H]+。
2-甲基-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5'-甲基-[2,
3'-联吡啶]-5-基)-4-氧代丁酰胺，化合物150的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.37(s,1H),9.01(s,1H),8.87(s,1H),8.42(s,1H),
8.21-8.17(m,2H),7.99(d,J＝8.8Hz,1H),6.32(br,1H),4.03-4.00(m,2H),3.86(br,2H),
3.04-3.01(m,2H),2.69-2.66(m,1H),2.38(s,3H),2.07(br,5H),1.21(d,J＝6.0Hz,3H)。
LC-MS：m/z 419[M+H]+。
2-甲基-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5-(6-甲基吡
嗪-2-基)吡啶-2-基)-4-氧代丁酰胺，化合物151的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.78(s,1H),9.08(s,2H),8.56-8.46(m,2H),8.21(d,J
＝8.4Hz,1H),6.29(br,1H),4.02(m,2H),3.86(br,2H),3.18(br,2H),3.05-2.99(m,1H),
2.57(s,3H),2.06(br,5H),1.19(d,J＝6.8Hz,3H)。LC-MS：m/z 420[M+H]+。
2-甲基-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5'-甲基-[3,
3'-联吡啶]-6-基)-4-氧代丁酰胺，化合物152的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.67(s,1H),8.75-8.69(m,2H),8.42(s,1H),8.20-
8.10(m,2H),7.96(s,1H),6.35(bs,1H),4.05-4.00(m,2H),3.90-3.80(m,2H),3.20-3.10
(m,2H),3.10-2.95(m,1H),2.37(s,3H),2.07(bs,5H),1.19(d,J＝6.8Hz,3H)。MS(ESI)m/z
419[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(5-(嘧啶-5-基)
吡啶-2-基)丁酰胺，化合物153的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.73(s,1H),9.19(d,J＝2.2Hz,3H),8.79(d,J＝
2.2Hz,1H),8.25-8.18(m,2H),6.32(brs,1H),4.03(t,J＝5.7Hz,2H),3.86(s,2H),2.89(t,
J＝6.2Hz,2H),2.75(t,J＝6.6Hz,2H),2.08(s,5H)。MS(ESI)m/z 392.15[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(6-(嘧啶-5-基)
吡啶-3-基)丁酰胺，化合物154的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.44(s,1H),9.39(s,2H),9.20(s,1H),8.89(s,1H),
8.22-8.20(dd,J＝2.2Hz,8.8Hz,1H),8.10(d,J＝8.4Hz,1H),6.33(brs,1H),4.02(t,J＝
5.7Hz,2H),3.86(s,2H),2.90(d,J＝6.2Hz,2H),2.71(t,J＝6.2Hz,2H),2.08(s,5H)。MS
(ESI)m/z 392.15[M+H]+。
N-(5-氟-6-苯基吡啶-3-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物156的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.62(s,1H),8.64(s,1H),8.15(dd,J＝13.6,2.0Hz,
1H),7.92-7.85(m,2H),7.55-7.56(m,2H),7.56-7.40(m,1H),6.35(bs,1H),4.03(t,J＝
5.6Hz,2H),3.87(bs,2H),2.95-2.85(m,2H),2.75-2.65(m,2H),2.08(bs,5H)；MS(ESI)m/z
408[M+H]+。
4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5-(6-甲基吡嗪-2-
基)吡啶-2-基)-4-氧代丁酰胺，化合物157的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.80(s,1H),9.08-9.07(m,2H),8.54-8.47(m,2H),
8.21-8.19(m,1H),6.34(br,1H),4.13-4.04(m,3H),3.66-3.61(m,2H),2.95-2.86(m,2H),
2.77-2.75(m,2H),2.57(s,3H),2.08(s,3H),1.06-1.05(m,3H)。LC-MS：m/z 420[M+H]+。
N-(3-氟-5'-甲基-[2,3'-联吡啶]-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧
啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物158的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.69(s,1H),8.85(s,1H),8.67(s,1H),8.47(m,1H),
8.20-8.17(m,1H),8.07(s,1H),6.32(br,1H),4.03(t,J＝5.6Hz,2H),3.87(br,2H),2.93-
2.90(m,2H),2.73-2.70(m,2H),2.38(s,3H),2.08(br,5H)。LC-MS：m/z 423[M+H]+。
N-(3-(3-氯苯基)异唑-5-基)-2-甲基-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧
啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物159的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.86(br,1H),7.84-7.77(m,2H),7.53-7.51(m,2H),
6.66(br,1H),6.34(br,1H),4.03-4.00(m,2H),3.84(br,2H),3.07-2.95(m,2H),2.07(br,
5H),1.74(br,1H),1.18-1.16(d,J＝4.8Hz,3H)。LC-MS：m/z 428[M+H]+。
4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(4-甲基-2,3'-联吡
啶-6'-基)-4-氧代丁酰胺，化合物160和化合物161的合成
对产物进行手性色谱法，得到对映体纯的化合物160和化合物161。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.66(s,1H),8.73(s,1H),8.69(s,1H),8.42(s,1H),
8.17-8.14(m,2H),7.95(s,1H),6.33(brs,1H),4.14-4.07(m,2H),3.65-3.60(dd,J＝
9.2Hz,11.8Hz 1H),3.4(s,1H)2.97-2.86(m,2H),2.74(t,J＝6.1Hz,2H),2.37(s,3H),
2.32-2.28(m,1H),2.08(brs,3H),1.05(d,J＝5.7Hz,3H)。MS(ESI)m/z 419.15[M+H]+。
4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5'-氟-[2,3'-联吡
啶]-5-基)-4-氧代丁酰胺，化合物162的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.46(s,1H),9.13(s,1H),8.88(br,1H),8.60-8.59(m,
1H),8.30-8.26(m,1H),8.21-8.18(m,1H),8.11-8.08(m,1H),6.34(br,1H),4.13-4.04(m,
2H),3.66-3.61(m,1H),3.36(br,1H),3.00-2.80(m,2H),2.73-2.66(m,2H),2.28(br,1H),
2.08(s,3H),1.06-1.05(m,3H)。LC-MS：m/z 423[M+H]+。
4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5'-氟-[3,3'-联吡
啶]-6-基)-4-氧代丁酰胺，化合物163的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.74(s,1H),8.86(s,1H),8.79-8.78(m,1H),8.59-
8.58(m,1H),8.24-8.21(m,1H),8.18-8.14(m,2H),6.34(br,1H),4.13-4.05(m,2H),3.66-
3.60(m,1H),3.40(br,1H),2.95-2.86(m,2H),2.76-2.73(m,2H),2.28(br,1H),2.08(s,
3H),1.06-1.04(m,3H)。LC-MS：m/z 423[M+H]+。
4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5-氟-[2,3'-联吡
啶]-6'-基)-4-氧代丁酰胺，化合物164的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.73(s,1H)，8.99(d，J＝2.0Hz，1H)，8.66(d，J＝
2.8Hz，1H),8.42-8.38(m,1H),8.20-8.12(m,1H),8.12-8.06(m,1H),7.89-7.80(m,1H),
6.33(bs,1H),4.15-4.00(m,2H),3.67-3.60(m,1H),3.55-3.35(m,1H),3.00-2.80(m,2H),
2.80-2.70(m,2H),2.30-2.20(m,1H),2.08(bs,3H),1.05(d,J＝5.6Hz,3H)。MS(ESI)m/z
423[M+H]+。
4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(4-氟-[3,3'-联吡
啶]-6-基)-4-氧代丁酰胺，化合物165的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.99(s,1H),8.80(s,1H),8.65-8.55(m,2H),8.06-
7.98(m,2H),7.56-7.50(m,1H),6.33(bs,1H),4.15-4.00(m,2H),3.67-3.60(m,1H),3.50-
3.35(m,1H),3.00-2.80(m,2H),2.80-2.70(m,2H),2.35-2.20(m,1H),2.08(bs,3H),1.05
(d,J＝4.8Hz,3H)。MS(ESI)m/z 423[M+H]+。
N-(3,5'-二甲基-[2,3'-联吡啶]-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧
啶-4(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物168的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.29(s,1H),8.68(s,1H),8.53(d,J＝2.0Hz,1H),8.43
(d,J＝1.6Hz,1H),8.01(d,J＝2.0Hz,1H)，7.76(s，1H)，6.35(bs，1H)，4.03(t，J＝5.6Hz，
2H)，3.87(bs，2H)，2.95-2.85(m,2H),2.72-2.65(m,2H),2.36(s,3H),2.33(s,3H),2.08
(bs，5H)；MS(ESI)m/z 419[M+H]+。
N-(3,3'-联吡啶-6-基)-4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物169和化合物170的合成
对产物进行手性色谱法，得到对映体纯的化合物169和化合物170。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.67(s,1H),8.94(d,J＝2.0Hz,1H),8.71(s,1H),8.58
(d,J＝4.0Hz,1H),8.16-8.11(m,3H),7.50-7.47(dd,J＝4.4Hz,7.6Hz,1H),6.3(brs,1H),
4.14-4.06(m,2H),3.65-3.60(m,1H),3.4(s,1H),2.97-2.87(m,2H),2.75(t,J＝12.8Hz,
2H),2.30(d,J＝14.8Hz,1H),2.08(s,3H),1.05(d,J＝6.4Hz,3H)；MS(ESI)m/z 405.18[M+
H]+。
N-([2,3'-联吡啶]-6'-基)-4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物171的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.72(s,1H),9.03(m,1H),8.67-8.66(m,1H),8.45-
8.42(m,1H),8.17(d,J＝8.4Hz,1H),8.01-7.99(m,1H),7.91-7.87(m,1H),7.38-7.35(m,
1H),6.34(br,1H),4.14-4.06(m,2H),3.66-3.60(m,1H),2.97-2.86(m,2H),2.76-2.73(m,
2H),2.29(br,1H),2.08(s,3H),1.05(m,3H)。MS(ESI)m/z 405[M+H]+。
酰胺偶联方法B：
在0℃下，将三乙胺(1.3当量)和氯甲酸异丁酯(1.0当量)逐滴加入至酸(1.1当量)
在二氯甲烷(0.05M)中的搅拌溶液中，并搅拌15分钟，然后加入各胺(1.0当量)。将反应物在
0℃至室温下搅拌3小时。完成后，将反应物用二氯甲烷稀释，并用饱和碳酸钠溶液碱化至pH
9.0。将水层用二氯甲烷萃取，将有机相合并，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在真空中
浓缩。用反相HPLC对粗物质进行纯化，得到纯净产物。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(6-(吡啶-3-基)
哒嗪-3-基)丁酰胺，化合物51的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.32(S,1H),9.26(d,J＝2Hz,1H),8.70-8.68(m,1H),
8.48-8.46(m,1H),8.40(d,J＝9.2Hz,1H),8.30(d,J＝9.6Hz,1H),7.59-7.56(m,1H),6.33
(bs,1H),4.02(t,J＝5.8Hz,2H),3.86(bs,2H),2.91-2.90(m,2H),2.83-2.80(m,2H),2.08
(bs,5H)。LC-MS：m/z392[M+H]+。
N-(6-(3-氟苯基)吡啶-3-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物84的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.73(s,1H),8.83(d,J＝2.4Hz,1H),8.16-8.14(m,
1H),7.99-7.97(m,1H),7.90-7.88(m,1H),7.85-7.82(m,1H),7.53-7.47(m,1H),7.24-7.19
(m,1H),6.34(br s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.87(s,2H),2.92-2.89(m,2H),2.71-2.68
(m,2H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 408[M+H]+。
N-(6-(3-氟苯基)哒嗪-3-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物98的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.30(s,1H),8.39-8.37(m,1H),8.28-8.26(m,1H),
7.97-7.91(m,2H),7.61-7.56(m,1H),7.36-7.31(m,1H),6.34(br s,1H),4.02(t,J＝
6.0Hz,2H),3.86(s,2H),2.91-2.90(m,2H),2.82-2.79(m,2H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 409
[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(6-(5-甲基吡啶-3-基)
哒嗪-3-基)-4-氧代丁酰胺，化合物104的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.31(s,1H),9.06(s,1H),8.53(s,1H),8.40-8.38(m,
1H),8.30-8.27(m,2H),6.33(br s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86(s,2H),2.91-2.90(m,
2H),2.82-2.79(m,2H),2.41(s,3H),2.08(s,5H)。LC-MS：m/z 406[M+H]+。
酰胺偶联方法C：
5分钟后，将胺(1.1当量)加入至酸、N,N-二异丙基乙胺(3.0当量)和HATU(1.5当
量)在DMF(0.2M)中的搅拌溶液中。将溶液在室温下搅拌3小时。完成后，将反应物用水稀释，
并用二氯甲烷萃取。将有机相合并，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。将粗
物质通过Shimadzu半制备型进行纯化，并冻干，得到白色固体。
N-(2'-氟-[1,1'-联苯]-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-
基)-4-氧代丁酰胺，化合物64的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.14(s,1H),7.70(d,J＝8.4Hz,2H),7.53-7.48(m,
3H),7.39-7.35(m,1H),7.31-7.26(m,2H),6.35(br,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.87(br,
2H),2.91-2.88(m,2H),2.68-2.65(m,2H),2.08(br,5H)。LC-MS：m/z 407[M+H]+。
N,N-二甲基-4'-(4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代丁
酰胺基)-[1,1'-联苯]-3-甲酰胺，化合物68的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.11(s,1H),7.72-7.62(m,6H),7.49(t,J＝7.6Hz,
1H),7.34-7.32(m,1H),6.33(bs,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.87(bs,2H),2.97(d,J＝
23.6Hz,6H),2.91-2.87(m,2H),2.68-2.65(m,2H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 460[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(3'-吗啉代联苯-4-基)-
4-氧代丁酰胺，化合物73的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.05(s,1H),7.66(d,J＝8.8Hz,2H),7.59(d,J＝
8.8Hz,2H),7.27(t,J＝8.0Hz,1H),7.13(s,1H),7.06(d,J＝7.6Hz,1H),6.90(d,J＝6.4Hz,
1H),6.32(bs,1H),4.02(t,J＝6.4Hz,2H),3.86(bs,2H),3.75(t,J＝4.8Hz,4H),3.17(t,J
＝4.8Hz,4H),2.88(t,J＝6.4Hz,2H),2.65(t,J＝6.4Hz,2H),2.08(bs,5H)。MS(ESI)m/z
474.33[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(1-苯基哌啶-4-
基)丁酰胺，化合物81的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.82(d,J＝7.6Hz,1H),7.18(t,J＝6.8Hz,2H),6.92(d,
J＝8.0Hz,2H),6.73(t,J＝7.6Hz,1H),6.20(s,1H),4.00(t,J＝6.0Hz,2H),3.82(s,2H),
3.80-3.61(m,3H),2.80-2.74(m,4H),2.38(t,J＝6.8Hz,2H),2.08(bs,5H),1.79(d,J＝
9.6Hz,2H),1.55-1.44(m,2H)。MS(ESI)m/z 396.40[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(6-(间甲苯基)
哒嗪-3-基)丁酰胺，化合物99的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.25(s,1H),8.35(d,J＝9.6Hz,1H),8.19(d,J＝
9.6Hz,1H),7.93(bs,1H),7.87(d,J＝7.6Hz,1H),7.42(t,J＝7.6Hz,1H),7.32-7.30(m,
1H),6.30(bs,1H),4.04-4.01(t,J＝5.8Hz,2H),3.87(bs,2H),2.91-2.90(m,2H),2.82-
2.79(m,2H),2.41(s,3H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 405[M+H]+。
N-(6-(5-氟吡啶-3-基)哒嗪-3-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物103的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.38(s,1H),9.18(s,1H),8.71(d,J＝2.8Hz,1H),
7.45-7.33(m,3H),6.34(bs,1H),4.03(t,J＝6.0Hz,2H),3.87(bs,2H),2.95-2.85(m,2H),
2.85-2.75(m,2H),2.08(bs,5H)。MS(ESI)m/z 410[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(6-(5-(三氟甲
基)吡啶-3-基)哒嗪-3-基)丁酰胺，化合物105的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.41(s,1H),9.58(m,1H),9.10(m,1H),8.83(m,1H),
8.46(m,2H),6.33(bs,1H),4.03(t,J＝6.0Hz,2H),3.87(bs,2H),2.93-2.91(m,2H),2.84-
2.81(m,2H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 460[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(5-甲基-6-(吡啶-3-基)
哒嗪-3-基)-4-氧代丁酰胺，化合物106的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.21(s,1H),8.81-8.80(m,1H),8.69-8.68(m,1H),
8.28(s,1H),8.07-8.04(m,1H),7.57-7.54(m,1H),6.33(s,1H),4.03(t,J＝5.8Hz,2H),
3.87(bs,2H),2.93-2.89(m,2H),2.81-2.78(m,2H),2.34(s,3H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z
406[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(6-(6-甲基吡啶-3-基)
哒嗪-3-基)-4-氧代丁酰胺，化合物107的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.29(s,1H),9.14-9.13(m,1H),8.39-8.34(m,2H),
8.28-8.25(m,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),6.33(bs,1H),4.03(t,J＝6.0Hz,2H),3.87(bs,
2H),2.93-2.90(m,2H),2.82-2.79(m,2H),2.55(s,3H),2.08(bs,5H)。LC-MS：m/z 406[M+H
]+。
N-(5'-甲基-2,3'-联吡啶-5-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4
(5H)-基)-4-氧代丁酰胺，化合物110的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.35(s,1H),9.01(s,1H),8.85(d,J＝2.0Hz,1H),8.42
(s,1H),8.21(s,1H),8.16(d,J＝10.8Hz,1H),7.99(d,J＝8.8Hz,1H),6.34(s,1H),4.02(t,
J＝5.6Hz,2H),3.86(bs,2H),2.93-2.88(m,2H),2.73-2.67(m,2H),2.37(s,3H),2.08(bs,
5H)。MS(ESI)m/z 405.33[M+H]+。
2-甲基-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(6-苯基
哒嗪-3-基)丁酰胺，化合物146的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.25(s,1H),8.37(d,J＝9.6Hz,1H),8.21(d,J＝
9.6Hz,1H),8.11-8.09(m,2H),7.55-7.50(m,3H),6.31(s,1H),4.02(t,J＝6.0Hz,2H),3.86
(br,2H),3.25-3.21(m,1H),3.07-3.00(m,1H),2.06(br,5H),1.22(d,J＝7.2Hz,3H)。LC-
MS：m/z 405[M+H]+。
N-(2-氟联苯-4-基)-4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧
代丁酰胺，化合物155的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.32(s,1H),9.27(d,J＝2.0Hz,1H),8.69(dd,J＝4.8,
1.6Hz,1H),8.47(dt,J＝8.4,1.6Hz,1H),8.45-8.38(m,1H),8.32-8.28(m,1H),7.53-7.60
(m,1H),6.35(bs,1H),4.05-4.00(m,1H),3.95-3.80(m,2H),3.25-3.15(m,2H),3.10-2.95
(m,1H),2.75-2.55(m,1H),2.06(bs,5H),1.22(d,J＝7.2Hz,3H)。MS(ESI)m/z 406[M+H]+。
4-(2-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-4-氧代-N-(6-(吡嗪-2-基)
吡啶-3-基)丁酰胺，化合物166的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.46(s,1H),9.47(d,J＝1.6Hz,1H),8.89(s,1H),8.70
(t,J＝2.8Hz,1H),8.65(d,J＝2.4Hz,1H),8.31-8.29(m,1H),8.26-8.23(dd,J＝2.4Hz,
8.8Hz,1H),6.3(brs,1H),4.06-4.01(m,2H),3.87(brs,1H),3.17(d,J＝5.2Hz,1H),2.92
(t,J＝6.4Hz,2H),2.73-2.70(t,J＝6.4Hz,2H),2.08(s,5H)；MS(ESI)m/z 392.2[M+H]+。
4-(2,6-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-4(5H)-基)-N-(6-(5-氟吡啶-3-
基)哒嗪-3-基)-4-氧代丁酰胺，化合物167的合成
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.38(s,1H),9.18(s,1H),8.71(d,J＝2.8Hz,1H),
8.55-8.45(m,3H),6.34(bs,1H),4.15-4.00(m,2H),3.68-3.60(m,1H),3.45-3.30(m,1H),
3.00-2.85(m,2H),2.85-2.80(m,2H),2.35-2.20(m,1H),2.07(bs,3H),1.05(d,J＝4.8Hz,
3H)；MS(ESI)m/z 424[M+H]+。
材料和方法
细胞系和培养条件：
HEK293-STF细胞系由被STF报告基因转染的人胚肾细胞系HEK293改良而成。
HEK293-STF3A细胞系进一步由HEK293-STF细胞系改良以表达Wnt3A。使用这一细胞系来鉴
定调控Wnt通路的早期信号传导组分或晚期信号传导组分的化合物。这两种细胞系从David
Virshup的实验室，Duke-NUS获得。使用L-Wnt3A(ATCC，编号CRL-2647)细胞系提供Wnt3A条
件培养基。使这三种细胞系在含有10％FBS的DMEM中生长，在37℃、5％CO2下孵育。
细胞活力测定：
将于75μl培养基中的5000个细胞接种到黑色96孔板(Greiner#655090)的每一个
孔中，并在37℃下孵育过夜。将25μl连续稀释的化合物添加到细胞中，得到50μM至1.5nM的
最终浓度。在处理1天之后，将100μl CellTiter-Glo发光细胞活力测定试剂(#G7571,
Promega)添加到每一个孔中，并在室温下孵育10分钟。使用Tecan Safire2微孔板读数器测
量发光。
STF3A测定：
将于75μl培养基中的2×104个HEK293-STF3A细胞接种到白色96孔板(Greiner#
655098)的每一个孔中，并在37℃下孵育过夜。将25μl连续稀释的化合物添加到细胞中，得
到50μM至1.5nM的最终浓度。在处理1天之后，将100μl Steady-Glo荧光素酶测定试剂(#
E2520,Promega)添加到每一个孔中，并在室温下孵育10分钟。使用Tecan Safire2平板读数
器测量发光。
STF/WNT3A条件培养基(STF/WNT3A CM)测定：
将L-Wnt3A细胞以3×104个细胞/毫升培养在三个T-175烧瓶中，每个烧瓶有30ml
培养基。在孵育4天之后，收集Wnt3A条件培养基，然后以2000rpm离心10分钟以移除碎片。如
果不立即使用的话，那么将Wnt3A条件培养基储存在-20℃下。
将于25μl培养基中的2×104个HEK293-STF细胞添加到白色96孔板(Greiner#
655098)的每一个孔中。将25μl连续稀释的化合物添加到细胞中。在孵育4小时之后，将100μ
l Wnt-3A条件培养基添加到细胞中。化合物的最终浓度在33μM至1nM的范围内。在37℃下孵
育1天之后，将100μl 荧光素酶测定试剂(#E2520,Promega)添加到每一个孔
中，并在室温下孵育10分钟。使用Tecan Safire2微孔板读数器测量发光。
蛋白质印迹：
将于2.5ml培养基中的8.0×105个细胞接种到T-25烧瓶中。将化合物在1ml培养基
中稀释至600nM，并将0.5ml添加到T-25烧瓶中，得到100nM的最终浓度。在37℃下孵育两天
之后，收集培养基，并以2000rpm离心10分钟。收集上清液，并使用32μl每份样品进行SDS
PAGE凝胶电泳。将分离的蛋白质转移到膜后，将其与一级Wnt3A抗体(1:1000,#09-162,
Millipore)孵育过夜。用含有0.05％Tween 20的Tris缓冲盐水(TBST)洗涤后，将膜与多克
隆山羊抗兔IgG HRP缀合的二级抗体(1:3000,#P0448)在室温下孵育1小时。用TBST洗涤后，
将膜用AmershamTMECLTMSelect蛋白质印迹检测试剂(#RPN2235,GE Healthcare Life
Sciences)显色，并用Bio-Rad分子成像仪VersaDoc MP记载。
MMTV-Wnt1小鼠模型1：
将8-10周龄的雌性BALBc小鼠用150mg/kg氯胺酮+75mg/kg赛拉嗪麻醉。在无菌条
件下，将第四乳腺脂肪垫附近的皮肤切开。用手术钳用力拉乳腺脂肪垫，并植入约2mm3的肿
瘤碎片。使用组织粘合剂封闭切口。将动物随机分组，每组8只小鼠，并且每天用测试化合物
进行治疗，持续14天。使用卡尺在两个维度测量肿瘤，并使用下式计算体积：肿瘤体积(mm3)
＝w2×1/2。最大肿瘤体积限值是2000mm3。
Wnt3A棕榈酰化测定：
用于测定化合物对Wnt棕榈酰化的抑制的测定由Yap等人(Yap MC,Kostiuk MA,
Martin DD,Perinpanayagam MA,Hak PG,Siddam A,Majjigapu JR,Rajaiah G,Keller BO,
Prescher JA,Wu P,Bertozzi CR,Falck JR,Berthiaume LG.2010.Rapid and selective
detection of fatty acylated proteins using omega-alkynyl-fatty acids and
click chemistry.J Lipid Res.51(6):1566-1580)描述，并作了一些改进。将3×106个
HeLa细胞接种到10cm培养皿中，并在37℃下孵育过夜。将细胞用5μg pCDNA3.2/V5-Wnt3a载
体转染(Najdi R,Proffitt K,Sprowl S,Kaur S,Yu J,Covey TM,Virshup DM,Waterman
ML.2012.A uniform human Wnt expression library reveals a shared secretory
pathway and unique signaling activities.Differentiation,84(2),203-213.doi:
10.1016/j.diff.2012.06.004)，以过表达V5标记的Wnt3a。6小时后，将细胞用PBS洗涤，并
用在含有5％BSA的培养基中的100μM炔烃棕榈酸酯(alkyne palmitate)处理。加入100nM化
合物或DMSO，并将细胞在37℃下孵育过夜。将细胞裂解，并收集600μg细胞裂解物，并与抗V5
抗体(Invitrogen)一起孵育，随后利用加入蛋白质A/G琼脂糖珠(Thermo scientific)拉下
V5-Wnt3a。使拉下的含有V5-Wnt3a的裂解物与生物素-叠氮化物(Invitrogen)进行点击反
应。然后，将生物素标记的蛋白裂解物在SDS-PAGE上分离，并转移到硝酸纤维素膜。将膜与
一级抗V5抗体、接着与二级抗小鼠Dylight 680(Thermo scientific)一起孵育，以检测V5-
Wnt3a。然后，将膜与抗生蛋白链菌素-Dylight 800(Thermo scientific)一起孵育，以检测
生物素标记的Wnt3a。在Odyssey CLx红外成像系统(LI-COR Bioscience)上捕获信号。
软琼脂测定：
AsPC-1细胞维持在补充有10％FBS、2mM L-谷氨酰胺和P/S(100单位/ml青霉素和
100μg/ml链霉素)的RPMI164中。HPAF-II细胞维持在补充有10％FBS、2mM L-谷氨酰胺和P/S
(100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素)的MEM(Eagles’)中。CFPAC-1细胞维持在补充有
10％FBS、2mM L-谷氨酰胺和P/S(100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素)的Iscove MEM中。
将600μl 0.6％琼脂添加到24孔板中以形成基底层。然后，将0.36％琼脂(含有
5000个细胞和连续稀释的化合物)的中间层添加到所述基底层上。最后，将500μl新鲜生长
培养基添加到中间层的顶部。将板在37℃下在5％二氧化碳下在增湿孵育箱中孵育两周。使
用光学显微镜观察集落的形成。当集落大小大于500μm时，向每一个孔中添加70μl MTT
(5mg/ml)，并将板在37℃下孵育至少2小时。用仪器计数集落。使用GraphPad
Prism软件将集落计数对化合物浓度作图。该软件也被用来执行非线性曲线拟合以及计算
抑制50％集落形成的化合物浓度。
结果：
本发明的化合物特异性地抑制哺乳动物PORCN。
将缺失PORCN的HT1080细胞用哺乳动物或爪蟾属PORCN表达质粒、以及WNT3A、STF
报告基因和作为转染对照的mCherry转染。在转染后6小时，将细胞用化合物或DMSO如指示
进行处理，并在第二天针对荧光素酶进行测定。爪蟾属PORCN对化合物的抑制效果具有抗
性。两种化合物，即化合物51和化合物110抑制哺乳动物porcupine的活性(图1)。
用化合物51和110治疗降低所有治疗的小鼠中的肿瘤生长(图2和图3)。
化合物51抑制Wnt3a的棕榈酰化(图4)。Wnt3a-V5使用抗V5抗体、随后抗小鼠
Dylight 680显现。用抗生蛋白链菌素-Dylight 800检测V5-Wnt3a中的B.生物素-叠氮化物
点击的棕榈酸酯。在Wnt3a-V5蛋白质上观察到非特异性条带。用抗生蛋白链菌素-Dylight
800检测到生物素-叠氮化物点击的棕榈酸酯(较低的条带)。DMSO用作阴性对照。泳道1：没
有炔烃棕榈酸酯；泳道2：未处理的对照，DMSO+炔烃棕榈酸酯；泳道3：100nM化合物51+炔烃
棕榈酸酯。
软琼脂测定的结果显示于表1以及图5至图7中。
表1：化合物51对胰腺细胞系AsPC-1和HPAF-II的50％集落生长抑制浓度(IC50,μ
M)。下面所示的结果是来自两个独立实验的平均值±标准差(SD)。
表1
MMTV-Wnt1小鼠模型的结果显示于图2和表2中：
表2
在整个本说明书和所附权利要求中，除非上下文另有要求，否则词语“包含
(comprise)和变化形式(例如，“comprises”和“comprising”)应理解为暗指包括所述整数、
步骤、整数组或步骤组，但并不排除任何其它整数、步骤、整数组或步骤组。
在本发明的整个说明书中提及的所有专利和专利申请的全部内容均通过引用并
入本文。
本发明涵盖优选的和更优选的组以及上文所列举组的实施方案的所有组合。