一种具有抑菌作用的生物发酵麸皮及其制备方法和应用.pdf

本发明公开了一种具有抑菌作用的生物发酵麸皮及其制备方法和应用。其中所述具有抑菌作用的生物发酵麸皮的制备方法包括以下步骤：(1)将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)接种于麸皮培养基中，好氧培养获得发酵物；(2)将步骤(1)所得发酵物烘干即得。本发明所述制备方法采用固态发酵方法，菌种与原料单一，工艺简单，成本低廉，有利于发酵麸皮品质的标准化与工业大规模生产的成本控制。本发明制备所得具有抑菌作用的生物发酵麸皮用于动物饲料产业后可有效缓解甚至可以从根本上改变现有动物养殖行业抗生素滥用的现状。

权利要求书
1.  一种具有抑菌作用的生物发酵麸皮的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)接种于麸皮培养基中，好氧培养获得发酵物；
(2)将步骤(1)所得发酵物烘干即得。

2.  如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述类芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.8333。

3.  如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述麸皮培养基的料液比为1：1～1：1.5，所述的料液比为麸皮与水的质量比。

4.  如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的类芽孢杆菌的接种量为1～5％，所述百分比为体积百分比，所述好氧培养的温度为25℃～37℃，所述好氧培养的时间为72小时～120小时。

5.  如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述的烘干的温度为80℃～100℃。

6.  如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的类芽孢杆菌的接种量为2～4％，所述百分比为体积百分比，所述好氧培养的温度为30℃～35℃，所述好氧培养的时间为96小时～118小时。

7.  如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的类芽孢杆菌的接种量为3％，所述百分比为体积百分比，所述好氧培养的温度为33℃，所述好氧培养的时间为98小时。

8.  如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述的烘干的温度为85℃～95℃。

9.  如权利要求1～8任一项所述的制备方法所得具有抑菌作用的生物发酵麸皮。

10.  如权利要求9所述的具有抑菌作用的生物发酵麸皮在制备功能性动物饲料中的应用。

说明书一种具有抑菌作用的生物发酵麸皮及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种具有抑菌作用的生物发酵麸皮及其制备方法和应用。
背景技术
麸皮是小麦加工主要副产物，具有来源广，成本低，易加工的特点，目前主要被用于饲料行业的初级原料使用。虽然麸皮中含有许多的营养成分(如淀粉，低聚糖，蛋白质，膳食纤维、维生素等)，但依然存在着大量难以被动物直接消化吸收的大分子物质(如粗纤维等)，事实表明，利用微生物对麸皮进行发酵加工，不仅有助于大分子物质的分解吸收，同时凭借微生物代谢产生的有益物质提高了麸皮的应用价值，因此，生物发酵麸皮的将大大推动养殖水平的提高。
细菌素是某些细菌产生的具有抗菌活性的物质，主要成分为多肽、蛋白质或蛋白质复合物，最早由Jacob于1953年提出。近年来，广谱抗生素的普及甚至滥用所带来的负面效应日益突出，新型抗生素替代品的研究迫在眉睫。作为蛋白质类物质的细菌素，由于可被蛋白酶降解，其安全性很高，故受到越来越多的关注。
可以推断，如果能够利用细菌素产生菌对麸皮进行发酵，并将获得具有抑制有害菌活性的发酵麸皮应用于动物饲料中，将可以在很大程度上缓解、甚至解决目前动物养殖行业抗生素滥用的现状。然而，目前尚未发现具有抑菌活性的发酵麸皮的报道，同时，利用类芽孢杆菌对麸皮单独进行发酵方面的研究也属于空白状态。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题就是针对目前具有抑菌活性生物发酵麸 皮和类芽孢杆菌单菌发酵麸皮培养基的相关技术空白的现状，提供了一种具有抑菌作用的生物发酵麸皮及其制备方法和应用。
目前动物养殖行业抗生素滥用的现状，与当前消费者日益增强的食品安全要求构成了极大的矛盾和冲突，为了解决这一矛盾，发明人对具有抑菌性能的生物发酵麸皮的制备方法，特别是菌种的培养方式，麸皮培养基配方的选择和制备，发酵培养的温度、发酵培养的时间等一系列技术参数进行了认真的分析和筛选，最终得到了本发明所述的技术方案以及所得具有抑菌性能的生物发酵麸皮产品。该生物发酵麸皮的来源天然，其制备方法工艺简便，所得生物发酵麸皮的保存稳定性极佳，能够获得稳定性极佳的抑菌技术效果。
本发明人发现类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CGMCC No.8333，发酵麸皮培养基获得的发酵物经烘干制成发酵麸皮后，依然具有强烈抑菌活性，通过反复验证，该生物发酵麸皮的抑菌效果稳定，从而完成了本发明。
为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之一为：一种具有抑菌作用的生物发酵麸皮的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)接种于麸皮培养基中，好氧培养获得发酵物；
(2)将步骤(1)所得发酵物烘干即得。
其中步骤(1)为将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)接种于麸皮培养基中，好氧培养获得发酵物。其中所述类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)为本领域常规的类芽孢杆菌，较佳地为保藏编号为CGMCC No.8333的类芽孢杆菌。所述类芽孢杆菌为现有技术，其制备方法为本领域常规制备方法，或者通过从保藏中心购买获得。其中所述麸皮培养基为本领域常规的麸皮培养基，较佳地为小麦麸皮培养基。所述麸皮培养基的制备方法为本领域常规的制备方法，所述麸皮培养基的料液比较佳地为1：1～1：1.5，更佳地为1：1.2～1：1.4，所述的料液比为培养基中麸皮与水的质量比。
其中所述的类芽孢杆菌的接种量为较佳地1～5％，更佳地为2～4％，优选地为3％，所述百分比为体积百分比，所述好氧培养的温度较佳地为25℃～ 37℃，更佳地为30℃～35℃，优选地为33℃，所述好氧培养的时间较佳地为72小时～120小时，更佳地为96小时～118小时，优选地为98小时。
本发明所述的发酵方法将所述类芽孢杆菌CGMCC No.8333接种于麸皮培养基之前，较佳地还包括该类芽孢杆菌CGMCC No.8333活化获得类芽孢杆菌种子的步骤。所述步骤较佳地包括以下步骤：将本发明所述类芽孢杆菌CGMCC No.8333接种在TYC固体培养基中，25～30℃培养18～28小时即得类芽孢杆菌CGMCC No.8333种子；将所得类芽孢杆菌CGMCC No.8333种子的菌落均匀分散于TYC液体培养基内，再按2％～5％体积百分比的接种量接种于TYC液体培养基中震荡培养，摇床转速为100～200rpm，培养18-28小时，将所得培养物离心弃去上清，所得菌体用无菌蒸馏水洗涤后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，即得发酵用的类芽孢杆菌的种子。
其中步骤(2)为将步骤(1)所得发酵物烘干即得。所述烘干的方法为本领域常规的烘干方法，所述烘干的温度较佳地为80℃～100℃，更佳地为85℃～95℃，最佳地为92℃。
为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之二为：一种如本发明所述的制备方法所得具有抑菌作用的生物发酵麸皮。
本发明所述具有抑菌作用的生物发酵麸皮的制备方法中各步骤所述技术特征的优选范围与上文所述制备方法中相应的技术内容完全一致，具体请参见上文所述技术内容，此处不再赘述。
为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之三为：如本发明所述的具有抑菌作用的生物发酵麸皮在制备功能性动物饲料中的应用。
本发明所述功能性动物饲料为本领域常规的功能性动物饲料，是指具有特定营养成分或者功能的动物饲料。本发明所述功能性动物饲料较佳地为增强动物免疫力的动物饲料或者预防动物产生疾病的动物饲料等。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
1、本发明创造性地将类芽孢杆菌应用于麸皮发酵，并获得具有抑菌效果的生物发酵麸皮产物，相关技术尚未有过报道。
2、现有生物发酵麸皮的制备大多采用菌酶混合发酵，原料也呈多样化，使制备的成本很高，且各批次间产品的品质不均一，本发明方法采用固态发酵方法，菌种与原料单一，工艺简单，成本低廉，有利于发酵麸皮品质的标准化与工业大规模生产的成本控制。
3、与现有生物发酵麸皮相比，本发明制备的生物发酵麸皮具有明确的抑制金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)生长繁殖的作用，因此，应用于动物饲料后可有效缓解，甚至可以从根本上改变现有动物养殖行业抗生素滥用的现状。
4、本发明制备的生物发酵麸皮在加热、酶解及长期保存条件下均表现出良好的抑菌活性，其可作为一种新型的制备方法应用于具有抑菌作用的生物发酵麸皮的工业化生产及相关领域中，应用前景十分广阔。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。本发明中所述的“室温”是指进行试验的操作间的温度，一般为15～25℃。实施例中所使用的试剂若未加说明，均为分析纯试剂，购买自国药集团。
实施例1生物发酵麸皮的制备与抑菌活性的检测
1、材料与方法
种子(发酵菌种)的制备：将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)(所述类芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.8333，该菌株的来源请参见公开号为CN 103740618A的中国专利)的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一 环划线于TYC固体培养基(购买自OXOID Co.，英国)，30℃好氧培养48h取出，用接种环挑取单菌落放入10mL TYC液体培养基(购买自OXOID Co.，英国)，运用涡旋震荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，30℃、180rpm震荡培养24h取出，以2％(体积百分比)接种量接种于TYC液体培养基(购买自OXOID Co.，英国)，30℃、180rpm震荡培养24h后，培养物15,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子。
小麦麸皮购买自山东荷泽(淘宝店名：黄河滩农户人家，http://item.taobao.com/item.htm？spm＝a230r.1.14.34.6aY7qR&id＝23590856555&ns＝1&abbucket＝5#detail)。
指示菌株：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CGMCC 1.879、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)CGMCC 1.1848、单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)CGMCC 1.9136，以上指示菌株都购自CGMCC。
指示菌液的制备：将金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于LB固体培养基(购买自OXOID Co.，英国)，30℃好氧培养48h取出，用接种环挑取单菌落放入10mL LB液体培养基(购买自OXOID Co.，英国)，运用涡旋震荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，30℃、180rpm震荡培养24h取出，以2％(体积百分比)接种量接种于LB液体培养基(购买自OXOID Co.，英国)，30℃、180rpm震荡培养20h后，即得相应的指示菌液。
指示平板的制备：将上述方法制备的指示菌液进行稀释，使其细菌浓度约为107cfu/mL，以体积比1：150的比例吸取稀释的指示菌液注入45℃无菌LB固体培养基中，充分混匀后迅速倒平板，待平板凝固且表面水分蒸发完全后即可。
抑菌活性的检测方法：以点种法在指示平板上滴加20μL待测样品，置于30℃培养20h后测量并记录抑菌圈直径。
发酵培养基的制备：将小麦麸皮与蒸馏水按所需比例混合均匀，118℃灭菌15min，冷却至室温，即得无菌的发酵培养基。
2、生物发酵麸皮的制备
将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CGMCC No.8333菌株以5％(体积百分比)接种量接种于无菌的麸皮培养基中，25℃好氧培养72h获得发酵物，将上述发酵物于100℃烘干，即得生物发酵麸皮A。其中，麸皮培养基的料液比为1：1.5，所述的料液比为麸皮与水的质量比。
3、生物发酵麸皮抑菌活性的检测
向生物发酵麸皮A加入无菌蒸馏水配制成50mg/mL的发酵麸皮溶液，混合均匀后，15,000rpm离心10min取上清，测定其抑菌活性。结果如下表所示：
表1生物发酵麸皮的抑菌效果

由表1可以看出，生物发酵麸皮A作用于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)产生的抑菌圈直径分别为10mm、13mm和9mm，由此可见，本发明所得生物发酵麸皮对上述革兰氏阳性菌具有显著的抑菌效果。
实施例2生物发酵麸皮的制备与抑菌活性的检测
1、材料与方法：同实施例1。
2、生物发酵麸皮的制备
将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CGMCC No.8333菌株以1％(体积百分比)接种量接种于无菌的麸皮培养基中，37℃好氧培养120h获得发酵物，将上述发酵物于80℃烘干，即得生物发酵麸皮B。其中，麸皮培养基的料液比为1：1，所述的料液比为麸皮与水的质量比。
3、生物发酵麸皮抑菌活性的检测
向生物发酵麸皮B加入无菌蒸馏水配制成50mg/mL的发酵麸皮溶液，混合均匀后，15,000rpm离心10min取上清，测定其抑菌活性。结果如下表所示：
表2生物发酵麸皮的抑菌效果

由表2可以看出，生物发酵麸皮B作用于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)产生的抑菌圈直径分别为12mm、15mm和13mm，由此可见，本发明所得生物发酵麸皮B对上述革兰氏阳性菌具有显著的抑菌效果。
实施例3生物发酵麸皮的制备与抑菌活性的检测
1、材料与方法：同实施例1。
2、生物发酵麸皮的制备
将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CGMCC No.8333菌株以2％(体积百分比)接种量接种于无菌的麸皮培养基中，30℃好氧培养96h获得发酵物，将上述发酵物于90℃烘干，即得生物发酵麸皮C。其中，麸皮培养基的料液比为1：1.3，所述的料液比为麸皮与水的质量比。
3、生物发酵麸皮抑菌活性的检测
向生物发酵麸皮C加入无菌蒸馏水配制成50mg/mL的发酵麸皮溶液，混合均匀后，15,000rpm离心10min取上清，测定其抑菌活性。结果如下表所示：
表3生物发酵麸皮的抑菌效果

由表3可以看出，生物发酵麸皮C作用于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus  aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)产生的抑菌圈直径分别为15mm、18mm和15mm，由此可见，本发明所得生物发酵麸皮对上述革兰氏阳性菌具有显著的抑菌效果。
实施例4生物发酵麸皮的制备与抑菌活性的检测
1、材料与方法：同实施例1。
2、生物发酵麸皮的制备
将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CGMCC No.8333菌株以4％(体积百分比)接种量接种于无菌的麸皮培养基中，35℃好氧培养118h获得发酵物，将上述发酵物于85℃烘干，即得生物发酵麸皮。其中，麸皮培养基的料液比为1：1.2，所述的料液比为麸皮与水的质量比。
3、生物发酵麸皮抑菌活性的检测
检测方法如实施例1所述，检测结果为：对金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和单增李斯特氏菌产生的抑菌圈直径分别为13mm、16mm和14mm，由此可见，本发明所得的生物发酵麸皮对上述革兰氏阳性菌具有显著的抑菌效果。
实施例5生物发酵麸皮的制备与抑菌活性的检测
1、材料与方法：同实施例1。
2、生物发酵麸皮的制备
将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CGMCC No.8333菌株以3％(体积百分比)接种量接种于无菌的麸皮培养基中，33℃好氧培养98h获得发酵物，将上述发酵物于92℃烘干，即得生物发酵麸皮。其中，麸皮培养基的料液比为1：1.4，所述的料液比为麸皮与水的质量比。
3、生物发酵麸皮抑菌活性的检测
检测方法如实施例1所述，检测结果为：对金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和单增李斯特氏菌产生的抑菌圈直径分别为14mm、18mm和15mm，由此可见，本发明所得的生物发酵麸皮对上述革兰氏阳性菌具有显著的抑菌效果。
实施例6生物发酵麸皮的制备与抑菌活性的检测
1、材料与方法：同实施例1。
2、生物发酵麸皮的制备
将类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CGMCC No.8333菌株以3％(体积百分比)接种量接种于无菌的麸皮培养基中，33℃好氧培养96h获得发酵物，将上述发酵物于95℃烘干，即得生物发酵麸皮。其中，麸皮培养基的料液比为1：1.1，所述的料液比为麸皮与水的质量比。
3、生物发酵麸皮抑菌活性的检测
检测方法如实施例1所述，检测结果为：对金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和单增李斯特氏菌产生的抑菌圈直径分别为15mm、17mm和13mm，由此可见，本发明所得的生物发酵麸皮对上述革兰氏阳性菌具有显著的抑菌效果。
效果实施例1常温保存条件下的生物发酵麸皮抑菌活性的稳定性
将实施例1-3制备的生物发酵麸皮A、B和C分装入无菌的铝箔袋，常温(25℃)保存6个月和12个月后取出，加入无菌蒸馏水配制成50mg/mL的发酵麸皮溶液，混合均匀后，15,000rpm离心10min取上清，测定其抑菌活性，结果如下表所示。
表4常温保存条件下生物发酵麸皮抑菌活性的稳定性


由表4可知，所有测试的生物发酵麸皮在常温保存12个月后，稳定地保持了对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)抑菌活性。
效果实施例2不同pH条件下生物发酵麸皮抑菌活性的稳定性
将实施例1-3制备的生物发酵麸皮A、B和C分别加入pH＝3、5、7、9的0.2M磷酸盐缓冲溶液配制成50mg/mL的生物发酵麸皮溶液，混合均匀后，15,000rpm离心10min取上清，获得待测样品A-3、A-5、A-7、A-9、B-3、B-5、B-7、B-9、C-3、C-5、C-7和C-9，各组样品的抑菌活性如下表所示：
表5不同pH条件下生物发酵麸皮的抑菌活性


由表5可知，生物发酵麸皮在不同pH条件下的抑菌效果非常稳定，因此，本发明制备的生物发酵麸皮可以在动物体内的酸性消化液中依然保持良好的抑菌活性。
效果实施例3酶处理后的生物发酵麸皮抑菌活性的稳定性
本发明还采用了胰蛋白酶(E.C.3.4.21.4，购买自Sigma)，胃蛋白酶(E.C.3.4.23.1，购买自Sigma)，脂肪酶(E.C.3.1.1.3，购买自Sigma)，蛋白酶K(E.C.3.4.21.64，购买自Sigma)处理生物发酵麸皮的方法来体外模拟动物体内不同的酶对生物发酵麸皮抑菌活性的影响，具体操作如下：
根据不同酶的最适反应pH配制对应pH的0.2M磷酸盐缓冲溶液，向实施例1-3制备的生物发酵麸皮A、B和C分别加入上述不同pH的的0.2M磷酸盐缓冲溶液配制成50mg/mL的发酵麸皮溶液，混合均匀后，15,000rpm离心10min取上清，在不同pH的上清液中溶入对应的酶，使酶的最终浓度为10mg/ml，将混合液在37℃水浴中保温2h，调节pH至中性，测定各样品组的抑菌活性，并与酶处理前的抑菌活性进行比较，结果如下表所示：
表6酶处理后生物发酵麸皮的抑菌活性比较


由表6可知，生物发酵麸皮经不同酶处理后，其抑菌效果依然稳定，因此，本发明制备的生物发酵麸皮可以在动物体内的消化酶中保持良好的抑菌活性。
对比例1
将实施例3中的接种量，培养温度，发酵时间、培养基料液比以及烘干温度逐一进行调整，获得了以下一组不同方法制备的生物发酵麸皮。各组生物发酵麸皮的抑菌效果下表所示。
表7不同方法制备所得生物发酵麸皮的抑菌效果

从表7所示的结果中可以得出，将所述生物发酵麸皮的制备方法中接种量，培养温度，发酵时间、培养基料液比以及烘干温度调整到本发明之外的时候，所得生物发酵麸皮的抑菌效果显著降低。
对比例2
参考实施例3所述方法，比较了由类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CGMCC No.8333、植物乳杆菌(L.plantarum)ATCC 14917(购买自ATCC)和干酪乳杆菌(L.casei)ATCC 393(购买自ATCC)制备的生物发酵麸皮的抑菌效果，具体操作如下：
1、材料与方法
种子(发酵菌种)的制备：
类芽孢杆菌CGMCC No.8333种子的制备同实施例1。
植物乳杆菌和干酪乳杆菌种子的制备：将植物乳杆菌ATCC 14917和干酪乳杆菌ATCC 393的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于MRS固体培养基(购买自Merck Co.德国)上，37℃厌氧培养24h取出，用接种环挑取单菌落放入1mL MRS液体(购买自购买自Merck Co.德国)，运用涡旋震荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，37℃厌氧培养24h取出，以2％(体积百分比)接种量接种于50mL MRS液体，37℃培养24h后，培养物9,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子。
指示菌株、指示菌液、发酵培养基、指示平板的制备以及抑菌活性的检测方法同实施例1。
2、生物发酵麸皮抑菌活性的制备
将各菌株以2％(体积百分比)接种量接种于无菌的麸皮培养基中，分别培养(植物乳杆菌和干酪乳杆菌37℃厌氧培养，类芽孢杆菌30℃好氧培养)96h获得发酵物，将上述发酵物于90℃烘干，即得不同菌株生产的生物发酵麸皮。其中，麸皮培养基的料液比为1：1.3，所述的料液比为麸皮与水的质量比。
3、生物发酵麸皮抑菌活性的检测
向生物发酵麸皮加入无菌蒸馏水配制成50mg/mL的发酵麸皮溶液，混合均匀后，15,000rpm离心10min取上清，测定其抑菌活性。结果如下表所示：
表8不同菌株制备的生物发酵麸皮的抑菌效果

由表8可知，由类芽孢杆菌制备的生物发酵麸皮的抑菌效果显著高于其他菌株，因此，以类芽孢杆菌对麸皮进行发酵是制备具有抑菌作用生物发酵麸皮的优选方法。
对比例3
向实施例3所述方法制备的具有抑菌作用的生物发酵麸皮C中加入pH＝3、5、7、9的0.2M磷酸盐缓冲溶液，配制成50mg/mL的生物发酵麸皮溶液，混合均匀后，15,000rpm离心10min取上清，获得待测样品组S-3、S-5、S-7、S-9。
同时选用目前市场上常规的细菌素产品尼萨普林(Nisaplin，购买自丹尼斯克公司)为对照，将其溶解于pH＝3、5、7、9的0.2M磷酸盐缓冲溶液中，得到浓度为50mg/mL的对照组N-3、N-5、N-7、N-9，各组样品的抑菌效果如下表所示。
表9与常规细菌素产品的抑菌效果比较


表9显示了常规的细菌素制品与本发明制备的生物发酵麸皮在不同pH条件下的抑菌效果，所得数据表明，尼萨普林在中性或中性以上的pH条件下，其抑菌活性开始丧失，而本发明制备的生物发酵麸皮却在相同条件下依然保持着稳定的抑菌能力，由此可见，本发明制备的生物发酵麸皮具有更优秀的抑菌稳定性，该特性推翻了现有细菌素制品只能应用于偏酸环境下的食品加工领域的局限性，因此，本发明制备的生物发酵麸皮在饲料的应用中具有更广阔的应用范围与更高的应用价值。
应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。