植物质水产动物体外寄生虫防治剂及制备方法 【技术领域】
本发明涉及生物制药，特别适合水产养殖业使用的一种植物质水产动物体外寄生虫防治剂的原料及其制剂的制备方法。
背景技术
水产动物寄生虫防治，是水产养殖业经济效益的重要保障措施。水产动物寄生虫病发生率高、流行广泛，其中危害性最大的体外寄生虫有原虫类如车轮虫、小瓜虫；蠕虫类如拟指环虫、指环虫、三代虫；甲壳动物如猫头鲺等。当前，敌敌畏、乙酰甲胺磷、孔雀石绿、硝酸亚汞等杀虫剂由于安全性差、污染环境和对人类潜在性的危害在水产上已被禁止使用。目前国内外防治水产动物寄生虫蠕虫类病多采用化学药剂如甲苯咪唑、吡喹酮、别丁、阿维菌素、福尔马林、敌百虫、拟除虫菊酯、亚甲基蓝、高锰酸钾和重金属盐等物质。这些药物一般均有强烈的刺激性或腐蚀性，使用后对水产动物的进食、生长有很大的影响，直接影响生产性能。上述药品在环境中不易降解，容易造成水源污染，其中一些物质还会造成生物富集，直接危及人类的食品安全和身体健康。随着水产养殖业的发展，养殖集约化程度越来越高，水产养殖中的病害发生呈严重趋势，寄生虫对常用的杀虫药物已产生了很高的抗药性。
【发明内容】
本发明的发明目的是提供一种不影响水产品质量、无残留、无污染、对寄生虫不易产生抗药性、不影响水产动物的进食和生长、对水产动物安全，使用剂量低、成本小、使用方便、完全可以替代化学杀虫剂的植物质水产动物体外寄生虫防治剂。
本发明的另一发明目的是提供一种水产动物体外寄生虫防治剂的制备方法。
实现发明目的的技术方案是这样解决地：植物质水产动物体外寄生虫防治剂，其突出进步在于所述的制剂按质量份数基本组成为：银杏外种皮(俗称白果皮(Ginkgo exocarp))提取物20～75份、溶剂10～75份、表面活性剂5.0～10份，所述溶剂主要指乙醇，所述表面活性剂主要是指二甲基亚砜和吐温-80混合物，所述二甲基亚砜和吐温-80混合物的比例为5∶1
植物质水产动物体外寄生虫防治剂的制备方法，依次按下述步骤进行：
a、将粉碎的银杏外种皮在60～70℃温度下，用甲醇回流提取，浓缩提取液并蒸干甲醇呈流浸膏，用无水工业酒精萃取，浓缩萃取液至银杏外种皮干重的10～30％，得银杏外种皮提取物；
b、将表面活性剂、银杏外种皮提取物、乙醇等溶剂按所述处方规定的质量份数加入匀质机中混合，在50～60℃下搅拌30分钟，冷却至常温，即得植物质水产动物体外寄生虫防治剂。
本发明制剂的使用法与用量：直接泼洒于池塘中，使用剂量为：2ml/m3
本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：
利用植物质进行水产动物病害防治与化学药剂相比，有不影响水产品质量、无残留、无污染、对其不易产生抗药性、不影响水产动物的进食和生长、对水产动物安全等优点。本发明研制出纯植物源的水产动物体外寄生虫防治剂，试验表明，该药物对寄生在水产动物体外寄生虫特别是指环虫、拟指环虫、三代虫等蠕虫具有显著的杀灭作用，对水产动物及环境都非常安全，并且还有使用剂量低、成本小、使用方便等特点，在生产上完全可以替代化学杀虫剂，对环境无污染的无公害植物质水产动物寄生虫防治剂，广泛适用于对鳜鱼、鲈鱼、鲤、草鱼、鳗鱼、鲷、鲆等多种淡水、海水鱼类的体外寄生虫(原虫、蠕虫)的防治剂。具有较好的社会和经济效益。
【具体实施方式】
实施例1
所述的制剂按质量份数基本组成为：银杏外种皮提取物20～75份、溶剂10～75份、表面活性剂5.0～10份，所述溶剂主要指乙醇，所述表面活性剂主要是指二甲基亚砜和吐温-80混合物，所述二甲基亚砜和吐温-80混合物的比例为5∶1。
实施例2
植物质水产动物体外寄生虫防治剂按质量份数为：银杏外种皮提取物30～65份、溶剂20～55份、表面活性剂6～9份。
实施例3
植物质水产动物体外寄生虫防治剂按质量份数为：银杏外种皮提取物40～55份、溶剂30～45份、表面活性剂7～8份。
实施例4
植物质水产动物体外寄生虫防治剂按质量份数为：银杏外种皮提取物45～50份、溶剂35～40份、表面活性剂7～8份。
实施例5
植物质水产动物体外寄生虫防治剂按：质量份数为：银杏外种皮提取物65份、乙醇等溶剂25份、表面活性剂10份。
实施例6
植物质水产动物体外寄生虫防治剂按：质量份数为：银杏外种皮提取物60份、乙醇等溶剂32份、表面活性剂8份。
实施例7
植物质水产动物体外寄生虫防治剂按：质量份数为：银杏外种皮提取物55份、溶剂37份、表面活性剂8份。
实施例8
植物质水产动物体外寄生虫防治剂按：质量份数为：银杏外种皮提取物45份、溶剂47份、表面活性剂8份。
实施例9
称取粉碎的银杏外种皮100份，在60～70℃温度下，用甲醇回流提取，浓缩提取液并蒸干甲醇，提取物呈流浸膏状，用无水工业酒精萃取，浓缩萃取液，获银杏外种皮浓缩液25份，加入匀质机中，再加入乙醇等70份，表面活性剂5份，其中二甲基亚砜4.2吐温-80 1.8份，在50～60℃下搅拌30分钟，冷却至常温，即得寄生虫防治剂。
实施例10
称取粉碎的银杏外种皮100份，在60～70℃温度下，用甲醇回流提取，浓缩提取液并蒸干甲醇，提取物呈流浸膏状，用无水工业酒精萃取，浓缩萃取液，获银杏外种皮浓缩液50份，加入匀质机中，再加入乙醇等40份，表面活性剂10份，其中二甲基亚砜8.4份，吐温-80 1.6份，在55～58℃下搅拌30分钟，冷却至常温，即得寄生虫防治剂。
综上所述的制剂按质量份数基本上由银杏外种皮提取物、乙醇等溶剂、表面活性剂组成。
试验实施例：
1.1材料
预试验用健康金鱼苗购于咸阳某渔场，体重在0.8～2g/尾；鳗鱼由福建省福清市某鳗场提供。试验用药为实施例1中寄生虫防治剂。
1.2方法
1.2.1指环虫的感染
由渔场运回后的金鱼苗，首先用2mg/L盐酸环丙沙星进行细菌性疾病预防，通过3～5d养殖正常后，在水族箱中，采用一定的方法将保存有指环虫的鱼鳃上的指环虫感染到健康鱼鳃上，并控制水温25℃左右，每天加一定量的新水，大约经过4～6d培养，对感染鱼随机抽样捞取镜检，如果感染率为100％、在10×4倍下每个视野内有6条以上指环虫时便进行药效试验。
鳗鱼由福建省福清市某鳗场空运到试验室，平均体重4.5g/尾，经检查感染率为100％、在10×4倍下每个视野内有10条以上拟指环虫。
1.2.2药效试验
试验条件：预试验在实验室进行，采用直径36cm、高11cm的白色搪瓷盆，试验用水为充分暴气的自来水5000ml、pH值为7.0-7.5，试验期水温变化为25±2℃。用多个相同的水族箱加充分暴气的自来水1L，控制水温25±2℃，pH值为7.0～7.5，放养鱼后，含氧需在5mg/L以上。
试验药物浓度的确定和试验分组：首先通过梯度递增法进行预试验，再在最小有效浓度、完全杀灭寄生虫有效浓度和最高有效剂量浓度范围附近按梯度递增的原则设立试验组，并设对照组。每个水族箱内，放养随机捞取感染的鱼20尾，在加药后24、48、72、96h时抽样解剖，取鳃制片，镜下观察寄生虫消失情况，并记录。各试验组重复3次。
1.3试验结果
1.3.1依照1.2.2的方法，进行药效试验，结果见表1。药液浓度以制剂的浓度计。
表1 48h时杀虫制剂防治水产动物寄生虫药效结果 药浓度 检测项目药剂浓度(ml/m3)0.2 0.6 0.8 1.2 1.6 1.8 2.0 2.2 2.4 寄生虫消失情况(％) 拟指环虫 指环虫 三代虫 鱼中毒死亡率(％) 金鱼 鳗鱼1％ 20％ 45％ 87％ 95％ 98％ 100％ 100％ 100％12％ 30％ 75％ 98％ 100％ 100％ 100％ 100％ 100％12％ 30％ 75％ 98％ 100％ 100％ 100％ 100％ 100％0 0 0 0 0 0 0 0 00 0 0 0 0 0 0 0 2
无公害植物性杀灭鱼类体外寄生虫防洽剂对鳗鱼拟指环虫病的治疗：
危害水产动物的体外寄生虫主要有车轮虫、小瓜虫、指环虫、三代虫、猫头鲺等。当前，国内外防治水产动物寄生虫病多采用敌百虫、重金属盐等化学物质。不但效果不理想，而且污染环境、残留而危及人类身体健康。使用了“无公害植物性杀灭鱼类体外寄生虫防治剂”，对3个养殖场发生的鳗鱼拟指环虫病进行了治疗试验，效果显著。现将有关内容报告如下。
试验场状况
3个养鳗场，为流水养殖方式和大池塘精养方式(见表1)。
表1.三个养鳗场鳗拟指环虫病治疗试验场状况
场名 试验面积 规格及数 发病种类 养殖方式
(亩) 量
A 30 黑仔鳗共1 主要拟指环 流水养殖
B 18 00万尾，幼 虫病；三代 流水养殖
C 256 鳗90万尾， 虫、车轮虫 大池塘精养
成鳗70万兼有。
尾。
发病临床症状
发生拟指环虫病严重的鱼，出现摄食迟钝，摄食量减少，鳃丝粘液增多，呼吸困难，在池塘中出现狂游等症状。随即抽样检查，在4×10倍低倍镜检查，拟指环虫存活10～15个，为该病发病严重时期，时为用药治疗标准。
材料与方法
1.供试鱼：黑仔鳗共100万尾，幼鳗90万尾，成鳗70万尾。
2.试验药物：无公害植物性杀灭鱼类寄生虫水乳剂，规格1000ml/瓶，有效含量30％。
3.方法：按每立方米水用药量，量取药物后，用水进行稀释，泼洒于水面即可。在用药后48h，流水养殖池采用初步换水的方式换完池水，而大池塘精养采取直接加注新水的方式。发病时用药1次即可。
4.安全性评定：按使用说明，在用药后48h，观察鳗鱼精神状态、摄食等有无异常。
5.药效评定：在投药后24h、48h，随机捞取治疗鱼进行显微镜镜检，观察鳗拟指环虫有无或存活情况。
效果
1.安全性评定：在用药后48h，鳗鱼精神状态正常，摄食量略有减少，无其它异常发生。说明该药物对鳗鱼是安全的。
2.药效评定：在投药后24h、48h，每个养殖池随机捞取治疗过的各种规格的鳗鱼5尾，取鱼鳃制片用显微镜镜检观察，观察的鳗拟指环虫存活结果见表2所示。
表2.投药后24h、48h，三个养鳗场鳗拟指环虫病治疗试验结果场 试验面积 每次镜检数 年用药次 24h杀灭率名 (亩) 量 数 ％48h杀灭率 ％A 30 黑仔鳗5× 2次 89.2 3尾 4次 86.5 幼鳗 5× 7次 92.7 4尾 成鳗 5× 6尾 98.9 99.9 98.5B 18 黑仔鳗5× 2次 91.0 2尾 4次 94.6 幼鳗 5× 7次 92.5 2尾 100 98.7 95.6
成鳗 5× 4尾C 256 黑仔鳗5× 2次 85.2 4尾 3次 83.2 幼鳗 5× 7次 90.0 6尾 成鳗 5× 6尾 95.8 96.9 95.2
结论
“无公害植物性杀灭鱼类寄生虫防治剂”是一种对鳗鱼拟指环虫病非常安全有效的药物，具有很高的推广价值。在试验过程中，每次用药，基本上能够完全杀灭鳗鱼拟指环虫，因药物使用过程中，由于水体量计算有差异，用药量时有不足，出现极少数鱼体有极个别寄生虫存活，但不影响总治疗效果。由于水源为河流，养殖水体必定受到外来拟指环虫的感染，所以，一般每间隔40～50天，用药1次，以确保养殖成功。