一种快速繁育绵毛鹿茸草幼苗的方法.pdf

本发明公开了一种快速繁育绵毛鹿茸草幼苗的方法。该方法通过合理调配培养基中两种激素的比例和剂量，同时加入活性炭等辅料，使得绵毛鹿茸草种子发育成苗，将幼苗移栽到土壤种植之后，成活率达95%以上。该方法能在较短时间内大量培育绵毛鹿茸草幼苗，满足生产需求，经济适用，大大提高培养效率，效果良好，可作为绵毛鹿茸草幼苗工厂化生产的重要方法。

权利要求书1.  一种快速繁育绵毛鹿茸草幼苗的方法，其特征在于，该方法为：将绵毛鹿茸草蒴果的种子弄破种皮后，置于培养基中培养，培养条件为：温度25℃，先在黑暗条件下培养10-20天，然后在光照条件下培养50-60天，光照条件为：每天光照12小时，光照强度1500-2000lx，得到苗高3-4 cm、有5条以上根系的绵毛鹿茸草幼苗；所述培养基为：以B5为基础培养基，每升B5培养基中含有0.1mg的6-苄氨基嘌呤、0.1mg的α-萘乙酸、2.0g的活性炭、3.3g的琼脂和30g的蔗糖，pH为6.0。

说明书一种快速繁育绵毛鹿茸草幼苗的方法
技术领域
本发明涉及绵毛鹿茸草工厂化生产技术领域，尤其涉及一种快速繁育绵毛鹿茸草幼苗的方法。
背景技术
绵毛鹿茸草是玄参科鹿茸草属多年生草本植物，生于低山多沙山地及草丛中，具清热解毒、凉血止血等功效。由于人工栽培绵毛鹿茸草尚未成功，野生资源采挖严重，日趋减少，亟待开展人工繁育，保护野生资源。
发明内容
本发明的目的是针对不断增加的绵毛鹿茸草需求和野生资源不足的矛盾，提供一种快速繁育绵毛鹿茸草幼苗的方法。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种绵毛鹿茸草幼苗快速繁育的方法的方法，该方法为：将绵毛鹿茸草蒴果的种子弄破种皮后，置于培养基中培养，培养条件为：温度25℃，先在黑暗条件下培养10-20天，然后在光照条件下培养50-60天，光照条件为：每天光照12小时，光照强度1500-2000lx，得到苗高3-4 cm、有5条以上根系的绵毛鹿茸草幼苗；所述培养基为：以B5为基础培养基，每升B5培养基中含有0.1mg的6-苄氨基嘌呤、0.1mg的α-萘乙酸、2.0g的活性炭、3.3g的琼脂和30g的蔗糖，pH为6.0。
本发明的有益效果是：本发明通过弄破绵毛鹿茸草种子种皮来进行组织培养，并合理掌控两种激素用量及相互间的配比，以及其他辅料的添加，促进绵毛鹿茸草种子经过愈伤组织阶段后，继续生长成幼苗, 在绵毛鹿茸草种子来源非常稀少情况下，大大提高繁殖效率。结果表明，该方法符合生产所需，可作为绵毛鹿茸草生产种苗的重要来源。
具体实施方式
本发明一种快速繁育绵毛鹿茸草幼苗的方法，包括以下步骤：
（1）制备12个培养基：以 B5为基础培养基，每升B5培养基中加入6-苄氨基嘌呤、α-萘乙酸、活性炭、琼脂和蔗糖（各个成分的量如表1所示），加热至沸腾，加热过程中搅拌，待琼脂完全溶解后，调节pH值至6.0，得培养基；均匀地将成苗培养基分装于培养容器中，边分装边搅拌，避免活性炭沉底，分装完毕后加盖；培养容器加盖后，放入高压灭菌锅内灭菌，灭菌条件为：121℃下灭菌20分钟，灭菌后取出培养容器，冷却后备用；
  6-苄氨基嘌呤(mg/L) α-萘乙酸(mg/L) 活性炭(g/L) 琼脂(g/L) 蔗糖(g/L) B5培养基 培养基1 0 0 2 3.3 30 1L 培养基2 0 0.1 2 3.3 30 1L 培养基3 0 0.2 2 3.3 30 1L 培养基4 0.1 0 2 3.3 30 1L 培养基5 0.1 0.1 2 3.3 30 1L 培养基6 0.1 0.2 2 3.3 30 1L 培养基7 0.2 0 2 3.3 30 1L 培养基8 0.2 0.1 2 3.3 30 1L 培养基9 0.2 0.2 2 3.3 30 1L 培养基10 0.1 0 1 3.3 30 1L 培养基11 0.1 0.1 1 3.3 30 1L 培养基12 0.1 0.2 1 3.3 30 1L
（2）绵毛鹿茸草蒴果灭菌：将绵毛鹿茸草蒴果在清水中清洗干净；然后在无菌条件下，将蒴果在体积百分比浓度为75％的乙醇溶液中浸泡1分钟，取出后用无菌水清洗若干遍，再放入体积百分比浓度为2%的次氯酸钠溶液灭菌10分钟，用无菌水清洗若干遍，吸干水分后放入无菌培养皿中备用；
（3）接种：打开绵毛鹿茸草蒴果表皮，用镊子把蒴果内的种子接入培养基表面，并弄破种皮，盖紧盖子；
（4）培养：将完成接种的培养容器移入培养室，培养温度为25℃。黑暗培养10-20天，由种子诱导产生愈伤组织后，将光照条件设定成每天光照12小时，光照强度1500-2000lx，再培养50-60天。
上述12个培养基中培育得到的绵毛鹿茸草幼苗分别标记为A~L，12个幼苗的生长状况（平均值）如下表所示。

  苗高（cm） 根系数量 根系长度（cm） 成活率(%) A(培养基1) 0.2 1.5 0.2 10.5 B(培养基2) 2.2 3.3 0.6 60.0 C(培养基3) 1.8 3.0 0.4 50.7 D(培养基4) 2.1 3.5 0.6 58.0 E(培养基5) 3.8 5.8 1.1 96.0 F(培养基6) 3.2 5.0 1.0 93.2 G(培养基7) 1.9 3.1 0.5 59.4 H(培养基8) 3.4 4.6 0.9 86.0 I(培养基9) 3.0 4.2 0.7 80.2 J(培养基10) 2.0 3.2 0.5 51.3 K(培养基11) 3.6 5.6 1.0 95.5 L(培养基12) 3.1 4.7 0.9 93.0
根据以上试验结果可知，在5号培养基上培育得到的绵毛鹿茸草幼苗E成活率高达96.0%，平均苗高3.8cm，根系数量平均5.8条，根系长度平均1.1cm，其效果是12种培养基中最好的。而绵毛鹿茸草在不添加植物生长调节剂的1号培养基上几乎不能生长，植物生长调节剂浓度更高的6号、9号、12号培养基的培养效果也不如5号培养基，这也能印证“少量植物生长调节剂能够促进植物生长，浓度过高反而会抑制生长。”这个广泛的共识。