从雪松松针中提取、分离、纯化莽草酸的生产工艺.pdf

本发明涉及一种从雪松松针中提取、分离、纯化莽草酸的生产工艺，该工艺以晾干的新鲜雪松松针为原料，以工业乙醇为提取溶媒回流提取，并经溶剂萃取、硅胶柱分离、重结晶生产莽草酸。本方法具有原料价格低廉，生产过程中有机溶剂循环使用，生产成本低，所得产品纯度高，步骤简单、易于推广等特点。

权利要求书
1.  一种从雪松松针中提取、分离、纯化莽草酸的生产工艺，包括以下步骤：
(1)将新鲜雪松松针置阴凉处晾干，得到干燥的雪松松针；
(2)将干燥的雪松松针用工业乙醇按8∶1～16∶1的液料体积比进行回流提取，经过滤得到提取液及料渣；
(3)将所述步骤(2)所得的提取液减压回收乙醇至无醇味，得流浸膏；
(4)将所述步骤(3)所得的流浸膏分散于水中，用石油醚萃取至醚层无色，得石油醚萃取液和水液A；所述石油醚萃取液经浓缩制成浸膏A；所述水液A用乙酸乙酯萃取至有机相无色，得乙酸乙酯萃取液和水液B；
(5)将所述步骤(4)所得的乙酸乙酯萃取液经减压浓缩，得浸膏B和乙酸乙酯；
(6)将所述步骤(5)所得的浸膏B与硅胶按1∶1～1∶2的重量比混合后淋洗，得到洗脱液；所述洗脱液经合并、浓缩、析晶、过滤后得到莽草酸粗晶，该莽草酸粗晶用甲醇溶解后，加入4～6倍甲醇重量的二氯甲烷，析出莽草酸结晶。

2.  如权利要求1所述的从雪松松针中提取、分离、纯化莽草酸的生产工艺，其特征在于：所述步骤(2)中工业乙醇的质量浓度为95％。

说明书从雪松松针中提取、分离、纯化莽草酸的生产工艺
技术领域
本发明涉及一种从松柏科植物中提取、分离、纯化原料药莽草酸的生产工艺，尤其涉及从雪松松针中提取、分离、纯化莽草酸的生产工艺。
背景技术
莽草酸(Shikimic acid)，化学名为3，4，5-三羟基-1-环己烯-1-羧酸，分子式C7H10O5，分子量174.15。莽草酸是广泛存在于高等植物和微生物中莽草酸途径的中间产物，具有抗肿瘤和对心脑血管系统的作用，可作为抗禽流感药物磷酸奥司米韦(商品名达菲)以及二恶霉素、乙二醛酶抑制剂等抗肿瘤药物的合成原料。此外，在生物合成中也扮演着重要的角色，如苯丙素类化合物、芳香氨基酸、黄酮类化合物等都是通过莽草酸途径产生的。
作为一种具有多种生物活性的天然产物和化学合成的重要原料，莽草酸具有广阔的应用价值和开发前景。莽草酸的生产原料主要来自植物，目前，国内外学者在研究莽草酸的提纯工艺时，多以木兰科植物八角茴香为原料，采用醇沉-脱色-浓缩-重结晶、膜处理法或阴阳离子树脂交换等方法来获得，但未见以雪松松针为原料提取莽草酸的相关报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种生产成本低、产品纯度高的从雪松松针中提取、分离、纯化莽草酸的生产工艺。
为解决上述问题，本发明所述的一种从雪松松针中提取、分离、纯化莽草酸的生产工艺，包括以下步骤：
(1)将新鲜雪松松针置阴凉处晾干，得到干燥的雪松松针；
(2)将干燥的雪松松针用工业乙醇按8∶1～16∶1的液料体积比进行回流提取，经过滤得到提取液及料渣；
(3)将所述步骤(2)所得的提取液减压回收乙醇至无醇味，得流浸膏；
(4)将所述步骤(3)所得的流浸膏分散于水中，用石油醚萃取至醚层无色，得石油醚萃取液和水液A；所述石油醚萃取液经浓缩制成浸膏A；所述水液A用乙酸乙酯萃取至有机相无色，得乙酸乙酯萃取液和水液B；
(5)将所述步骤(4)所得的乙酸乙酯萃取液经减压浓缩，得浸膏B和乙酸乙酯；
(6)将所述步骤(5)所得的浸膏B与硅胶按1∶1～1∶2的重量比混合后淋洗，得到洗脱液；所述洗脱液经合并、浓缩、析晶、过滤后得到莽草酸粗晶，该莽草酸粗晶用甲醇溶解后，加入4～6倍甲醇重量的二氯甲烷，析出莽草酸结晶。
所述步骤(2)中工业乙醇的质量浓度为95％。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明所得的莽草酸为无色针状结晶(甲醇)，熔点(mp)：189℃～190℃。紫外灯(λ254nm)下显淡紫色荧光，10％浓H2SO4-EtOH显粉红色。ESI-MS(电喷雾质谱)m/z：173.0455[M-H]-；IR(KBr)cm-1：3482，2852-2520，1681，1647，1276，1076，929，862，73；1H-NMR(400MHz，CD3OD，δ，ppm，J/Hz)：2.112(1H，m，6-Hb)，2.623(1H，m，6-Ha)，3.655(1H，m，5-H)，3.972(1H，m，4-H)，4.371(1H，m，3-H)，6.791(1H，m，2-H)；13C-NMR(100MHz，CD3OD，δ，ppm)：31.626(C-6)，67.320(C-5)，68.411(C-4)，72.707(C-3)，130.705(C-1)，138.847(C-2)，170.040(C＝O)。
2、由于本发明采用雪松松针为原料，该原料本身容易获得，且价格低廉；同时，本发明中所使用的有机溶剂可以循环使用，因此，有效地降低了生产成本。
3、由于本发明采用醇提、萃取、硅胶柱淋洗、重结晶等步骤，因此，采用本发明方法所获得的产品纯度高达95％以上。
4、本发明步骤简单、易于推广。
具体实施方式
实施例1从雪松松针中提取、分离、纯化莽草酸的生产工艺，包括以下步骤：
(1)将新鲜雪松松针置阴凉处晾干，得到干燥的雪松松针。
(2)将3.5kg干燥的雪松松针置于江苏常熟中药制药机械总厂生产的TQ-0.5M3型多功能提取罐中，按16∶1的液料体积比加入质量浓度为95％的工业乙醇，进行回流提取，共提取3次，每次提取1h；然后过滤、合并，得到提取液及料渣，料渣废弃。
(3)将步骤(2)所得的提取液采用江苏常熟中药制药机械总厂生产的JN型减压浓缩罐进行减压回收乙醇至无醇味，得相对密度为1.05～1.10(60℃热测)的流浸膏450g；同时回收乙醇经处理再次使用。
(4)将步骤(3)所得的流浸膏分散于水中，用石油醚萃取至醚层无色，得石油醚萃取液和水液A。
石油醚萃取液采用河南巩义市予华仪器有限公司生产的RE-501型旋转蒸发仪浓缩制成105g相对密度为1.25～1.35(60℃热测)的浸膏A另用，回收石油醚重复使用。水液A用乙酸乙酯萃取至有机相无色，得乙酸乙酯萃取液和水液B，该水液B另用。
(5)将步骤(4)所得的乙酸乙酯萃取液采用河南巩义市予华仪器有限公司生产的RE-501型旋转蒸发仪减压浓缩，得75g相对密度为1.25～1.35(60℃热测)的浸膏B和乙酸乙酯，乙酸乙酯经处理再次使用。
(6)将步骤(5)所得的浸膏B与100～140目的硅胶按1∶1的重量比混合，填充于层析柱用乙酸乙酯进行淋洗，洗脱后，经薄层色谱检测收集得到洗脱液。洗脱液经合并、浓缩、析晶、过滤后得到莽草酸粗晶，该莽草酸粗晶用甲醇溶解后，加入5倍甲醇重量的二氯甲烷，析出16.46g莽草酸结晶。
经美国安捷伦公司生产的Agilent 1100高效液相色谱仪检测，该莽草酸结晶纯度大于95％。
实施例2从雪松松针中提取、分离、纯化莽草酸的生产工艺，包括以下步骤：
(1)将新鲜雪松松针置阴凉处晾干，得到干燥的雪松松针。
(2)将3.5kg干燥的雪松松针置于TQ-0.5M3型多功能提取罐中，按12∶1的液料体积比加入质量浓度为95％的工业乙醇，进行回流提取，共提取3次，每次提取1.5h；然后过滤、合并，得到提取液及料渣，料渣废弃。
(3)将步骤(2)所得的提取液采用JN型减压浓缩罐进行减压回收乙醇至无醇味，得445g相对密度为1.05～1.10(60℃热测)的流浸膏；同时回收乙醇经处理再次使用。
(4)将步骤(3)所得的流浸膏分散于水中，用石油醚萃取至醚层无色，得石油醚萃取液和水液A。
石油醚萃取液采用RE-501型旋转蒸发仪浓缩制成101g相对密度为1.25～1.35(60℃热测)的浸膏A另用，回收石油醚重复使用。水液A用乙酸乙酯萃取至有机相无色，得乙酸乙酯萃取液和水液B，该水液B另用。
(5)将步骤(4)所得的乙酸乙酯萃取液采用RE-501型旋转蒸发仪减压浓缩，得72g相对密度为1.25～1.35(60℃热测)的浸膏B和乙酸乙酯，乙酸乙酯经处理再次使用。
(6)将步骤(5)所得的浸膏B与100～140目的硅胶按1∶1.5的重量比混合，填充于层析柱用乙酸乙酯进行淋洗，洗脱后，经薄层色谱检测收集得到洗脱液。洗脱液经合并、浓缩、析晶、过滤后得到莽草酸粗晶，该莽草酸粗晶用甲醇溶解后，加入6倍甲醇重量的二氯甲烷，析出15.79g莽草酸结晶。
经高效液相色谱仪检测，该莽草酸结晶纯度大于95％。
实施例3从雪松松针中提取、分离、纯化莽草酸的生产工艺，包括以下步骤：
(1)将新鲜雪松松针置阴凉处晾干，得到干燥的雪松松针。
(2)将3.5kg干燥的雪松松针置于TQ-0.5M3型多功能提取罐中，按10∶1的液料体积比加入质量浓度为95％的工业乙醇，进行回流提取，共提取3次，每次提取1h；然后过滤、合并，得到提取液及料渣，料渣废弃。
(3)将步骤(2)所得的提取液采用JN型减压浓缩罐进行减压回收乙醇至无醇味，得438g相对密度为1.05～1.10(60℃热测)的流浸膏；同时回收乙醇经处理再次使用。
(4)将步骤(3)所得的流浸膏分散于水中，用石油醚萃取至醚层无色，得石油醚萃取液和水液A。
石油醚萃取液采用RE-501型旋转蒸发仪浓缩制成99g相对密度为1.25～1.35(60℃热测)的浸膏A另用，回收石油醚重复使用。水液A用乙酸乙酯萃取至有机相无色，得乙酸乙酯萃取液和水液B，该水液B另用。
(5)将步骤(4)所得的乙酸乙酯萃取液采用RE-501型旋转蒸发仪减压浓缩，得68g相对密度为1.25～1.35(60℃热测)的浸膏B和乙酸乙酯，乙酸乙酯经处理再次使用。
(6)将步骤(5)所得的浸膏B与100～140目的硅胶按1∶2的重量比混合，填充于层析柱用乙酸乙酯进行淋洗，洗脱后，经薄层色谱检测收集得到洗脱液。洗脱液经合并、浓缩、析晶、过滤后得到莽草酸粗晶，该莽草酸粗晶用甲醇溶解后，加入4倍甲醇重量的二氯甲烷，析出14.91g莽草酸结晶。
经高效液相色谱仪检测，该莽草酸结晶纯度大于95％。
实施例4从雪松松针中提取、分离、纯化莽草酸的生产工艺，包括以下步骤：
(1)将新鲜雪松松针置阴凉处晾干，得到干燥的雪松松针。
(2)将3.5kg干燥的雪松松针置于TQ-0.5M3型多功能提取罐中，按8∶1的液料体积比加入质量浓度为95％的工业乙醇，进行回流提取，共提取3次，提取时间依次为1.5h、1.5h、1h；然后过滤、合并，得到提取液及料渣，料渣废弃。
(3)将步骤(2)所得的提取液采用JN型减压浓缩罐进行减压回收乙醇至无醇味，得435g相对密度为1.05～1.10(60℃热测)的流浸膏；同时回收乙醇经处理再次使用。
(4)将步骤(3)所得的流浸膏分散于水中，用石油醚萃取至醚层无色，得石油醚萃取液和水液A。
石油醚萃取液采用RE-501型旋转蒸发仪浓缩制成95g相对密度为1.25～1.35(60℃热测)的浸膏A另用，回收石油醚重复使用。水液A用乙酸乙酯萃取至有机相无色，得乙酸乙酯萃取液和水液B，该水液B另用。
(5)将步骤(4)所得的乙酸乙酯萃取液采用RE-501型旋转蒸发仪减压浓缩，得64g相对密度为1.25～1.35(60℃热测)的浸膏B和乙酸乙酯，乙酸乙酯经处理再次使用。
(6)将步骤(5)所得的浸膏B与100～140目的硅胶按1∶1.25的重量比混合，填充于层析柱用乙酸乙酯进行淋洗，洗脱后，经薄层色谱检测收集得到洗脱液。洗脱液经合并、浓缩、析晶、过滤后得到莽草酸粗晶，该莽草酸粗晶用甲醇溶解后，加入5倍甲醇重量的二氯甲烷，析出14.36g莽草酸结晶。
经高效液相色谱仪检测，该莽草酸结晶纯度大于95％。
实施例5从雪松松针中提取、分离、纯化莽草酸的生产工艺，包括以下步骤：
(1)将新鲜雪松松针置阴凉处晾干，得到干燥的雪松松针。
(2)将3.5kg干燥的雪松松针置于TQ-0.5M3型多功能提取罐中，按16∶1的液料体积比加入质量浓度为95％的工业乙醇，进行回流提取，共提取3次，提取时间依次为2h、2h、1h；然后过滤、合并，得到提取液及料渣，料渣废弃。
(3)将步骤(2)所得的提取液采用JN型减压浓缩罐进行减压回收乙醇至无醇味，得450g相对密度为1.05～1.10(60℃热测)的流浸膏；同时回收乙醇经处理再次使用。
(4)将步骤(3)所得的流浸膏分散于水中，用石油醚萃取至醚层无色，得石油醚萃取液和水液A。
石油醚萃取液采用RE-501型旋转蒸发仪浓缩制成105g相对密度为1.25～1.35(60℃热测)的浸膏A另用，回收石油醚重复使用。水液A用乙酸乙酯萃取至有机相无色，得乙酸乙酯萃取液和水液B，该水液B另用。
(5)将步骤(4)所得的乙酸乙酯萃取液采用RE-501型旋转蒸发仪减压浓缩，得75g相对密度为1.25～1.35(60℃热测)的浸膏B和乙酸乙酯，乙酸乙酯经处理再次使用。
(6)将步骤(5)所得的浸膏B与100～140目的硅胶按1∶1.5的重量比混合，填充于层析柱用乙酸乙酯进行淋洗，洗脱后，经薄层色谱检测收集得到洗脱液。洗脱液经合并、浓缩、析晶、过滤后得到莽草酸粗晶，该莽草酸粗晶用甲醇溶解后，加入5倍甲醇重量的二氯甲烷，析出16.46g莽草酸结晶。
经高效液相色谱仪检测，该莽草酸结晶纯度大于95％。
实施例6从雪松松针中提取、分离、纯化莽草酸的生产工艺，包括以下步骤：
(1)将新鲜雪松松针置阴凉处晾干，得到干燥的雪松松针。
(2)将3.5kg干燥的雪松松针置于TQ-0.5M3型多功能提取罐中，按10∶1的液料体积比加入质量浓度为95％的工业乙醇，进行回流提取，共提取3次，提取时间依次为2h、2h、1h；然后过滤、合并，得到提取液及料渣，料渣废弃。
(3)将步骤(2)所得的提取液采用JN型减压浓缩罐进行减压回收乙醇至无醇味，得442g相对密度为1.05～1.10(60℃热测)的流浸膏；同时回收乙醇经处理再次使用。
(4)将步骤(3)所得的流浸膏分散于水中，用石油醚萃取至醚层无色，得石油醚萃取液和水液A。
石油醚萃取液采用RE-501型旋转蒸发仪浓缩制成101g相对密度为1.25～1.35(60℃热测)的浸膏A另用，回收石油醚重复使用。水液A用乙酸乙酯萃取至有机相无色，得乙酸乙酯萃取液和水液B，该水液B另用。
(5)将步骤(4)所得的乙酸乙酯萃取液采用RE-501型旋转蒸发仪减压浓缩，得70g相对密度为1.25～1.35(60℃热测)的浸膏B和乙酸乙酯，乙酸乙酯经处理再次使用。
(6)将步骤(5)所得的浸膏B与100～140目的硅胶按1∶1.5的重量比混合，填充于层析柱用乙酸乙酯进行淋洗，洗脱后，经薄层色谱检测收集得到洗脱液。洗脱液经合并、浓缩、析晶、过滤后得到莽草酸粗晶，该莽草酸粗晶用甲醇溶解后，加入5倍甲醇重量的二氯甲烷，析出15.36g莽草酸结晶。
经高效液相色谱仪检测，该莽草酸结晶纯度大于95％。