用于细胞靶向和诱导细胞凋亡的融合蛋白及其使用方法 【发明领域】
本发明涉及选择性靶向细胞诱导细胞凋亡的物质组成和方法。本发明涉及选择性靶向细胞以使细胞死亡的物质组成和方法。
【发明背景】
最近，鉴定出西尼罗病毒(WNV)的核蛋白具有诱导它所存在的细胞凋亡的能力。这个发现在PCT专利(申请号PCT/US01/31355)中有描述，收录于此作为参考文献。
同样的，已经鉴定出艾滋病病毒(HIV)附属蛋白Vpr能阻滞细胞循环并诱导细胞凋亡。这个发现在PCT专利(申请号PCT/US01/10028)中有描述，收录于此作为参考文献。
除了这些蛋白外，已知其它蛋白，例如半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶也能诱导细胞凋亡。
找到一种能将细胞凋亡诱导蛋白的活性成份引入到有效成份中从而消除特异细胞的药物组合物和方法是很有必要的。
【发明内容】
本发明提供了包含一个细胞凋亡诱导蛋白组份和一个细胞靶向组份的融合蛋白。
本发明提供了能靶向细胞和诱导细胞死亡的物质组成和方法。本发明描述了诱导细胞死亡的方法，该方法包括用一定量的含一个细胞凋亡诱导蛋白组份和一个细胞靶向组份的融合蛋白接触细胞的步骤。融合蛋白按能诱导细胞死亡的有效剂量来给药。
本发明提供了包含一个蛋白酶组份和一个细胞靶向组份的融合蛋白。
本发明提供了能靶向细胞和诱导细胞死亡的物质组成和方法。本发明描述了诱导细胞死亡的方法，该方法包括用一定量的含一个蛋白酶组份和一个细胞靶向组份的融合蛋白接触细胞地步骤。融合蛋白按能诱导细胞死亡的有效剂量来给药。
具体实施例
本文中，术语“细胞凋亡诱导蛋白”和“AIP”可交换使用，意思是指当存在于某一细胞中时，能诱导细胞凋亡的蛋白或其片段。
本文中，术语“蛋白酶组份”的意思是指融合蛋白的组份，是仍保持作为蛋白酶功能的或能被转换成活性蛋白酶的蛋白酶序列或片段。
本文中，关于细胞死亡或凋亡的术语“诱导”是指引发细胞死亡事件的行为，包括引发导致细胞死亡的部分凋亡途径的细胞事件的行为。
本文中，术语“凋亡”是指真核细胞死亡的形式，该死亡形式与坏死相区别，它包括细胞骨架断裂，细胞质收缩与浓缩，磷脂酰丝氨酸在细胞膜外表面表达和起泡，导致细胞膜结合泡或凋亡小体的形成。细胞凋亡的综述见：Utz & Anderson，2000，生死选择：通过信号分子的蛋白酶水解调节凋亡，细胞死亡分化，7：589-602(Utz & Anderson，2000，Life and death decision：regulation of apoptosis by proteolysis of signaling molecules，Cell Death Differ.，7：589-602)。
在本文所特指的及附加的权利要求中，除非其内容有另外的详细说明，单数形式“一个”包括复数形式。因此，比如，“一个细胞”就包括了两个或更多细胞的混合物。
本文中，关于衣壳蛋白或其功能性片段的短语“诱导细胞死亡的有效剂量”和“诱导细胞死亡的有效水平”意思是指能有效引发杀死细胞事件的与细胞接触的衣壳蛋白或其功能性片段的量，或表达于细胞中的衣壳蛋白或其功能性片段的水平。
本文中，术语“蛋白”是指不限于最小长度的氨基酸残基的聚合物。多肽、肽、寡肽、二聚体、多聚体和类似物均包括在该定义中。完整蛋白及其片段也都包括在此定义中。该术语也包括蛋白的表达后修饰形式，包括但不限于糖基化、乙酰化、磷酸化等。
本文中，“可注射的药物组合物”是指可用于病人的无菌、无热源和无任何微粒的制药上可接受的组合物。见Remington’s药物科学，第18版，Gennaro编辑，Mack出版公司，Easton，PA，1990，美国(Remington’s PharmaceuticalSciences，18th Ed.，Gennaro ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1990 andU.S.A.)。
本文中，“制药学可接受的载体”包括任何本身对接受药物组合物的个体不导致有害效果的载体。例如，一个“制药学可接受的载体”应该不导致对接受者有害的抗体的产生。合适的“制药学可接受的载体”为专业人士所知，并在前述的Remington’s药物科学(Remington’s pharmaceutical Sciences)一书中有描述。
本文中，“过度增生细胞”是指在不适当的或非正常的时间或地点生长、分化或增生的细胞，包括那些本应该处于G0期或静止状态的却进入细胞周期的细胞。例如，肿瘤细胞就包括在“过度增生细胞”里。具有“过度增生细胞”特性或与之相关的疾病或状况包括癌症、自身免疫、非恶性生长和牛皮癣。
本文中，“治疗”包括改善和/或消除具过度增生细胞特性或与之相关的疾病或状况。
本文中，“个体”是指能用本发明的药物组合物治疗的人和非人类动物。
本文中，“给药”包括但不限于肿瘤内注射、经皮肤的、肠胃外的、皮下的、肌肉内的、口服和局部传递等方法。
本文中，关于药物组合物给药时用的“肿瘤内注射”是指将药物组合物直接注射进入肿瘤位点。
本发明来源于对WNV衣壳蛋白(Cp)在肿瘤衍生细胞中的凋亡诱导活性、HIV附属蛋白Vpr具类似活性、线粒体蛋白AIF和多种其它内源蛋白如半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶家族具凋亡诱导活性的发现。已发现存在于细胞中的这些AIPs能诱导细胞凋亡途径，并最终导致细胞死亡。AIPs的细胞凋亡诱导活性使其能用于杀死快速生长的细胞，包括癌细胞和与自体免疫疾病有关的免疫细胞。
根据本发明的一些方面，提供含有一个与靶向组份相连接AIP组份的融合蛋白，该靶向组份是一个将靶向破坏的细胞类型所表达蛋白的特异配体。该配体可以是一天然配体、一种抗体或其片段、或特异结合于细胞蛋白的另一类型的分子。
根据本发明的一些方面，提供含有一个与靶向组份相连接蛋白酶组份的融合蛋白，该靶向组份是一个将靶向破坏的细胞类型所表达蛋白的特异配体。该配体可以是一天然配体、一种抗体或其片段、或特异结合于细胞蛋白的另一类型的分子。可举例的蛋白酶是抗原加工相关转运蛋白(TAP)。
根据靶向破坏的细胞类型来分，融合蛋白可用于治疗多种疾病。例如，如果配体靶向结合肿瘤细胞表达蛋白，该融合蛋白可用于治疗癌症、减少或消除肿瘤。如果配体靶向结合特定的免疫细胞表达蛋白，该融合蛋白可用于治疗自体免疫疾病。类似的，通过细胞的选择性消除可治疗其它疾病。
在一些具体实例中，配体可为一种已知靶细胞蛋白的配体。可举例的配体包括特异于共刺激分子、细胞因子(细胞因子受体的配体)、生长因子(生长因子受体的配体)和趋化因子(趋化因子受体的配体)的配体。其它配体可以是抗体，包括特异结合于靶细胞蛋白如v-erb-b2成红细胞白血病病毒致癌基因同源体2(erbB2)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、fms相关酪氨酸激酶3(Flt-3)；细胞因子受体；生长因子受体和趋化因子受体的重组抗体和抗体片段。可举例的配体有：CD28和细胞毒性T细胞相关抗原4(CTLA-4)都是CD80的天然配体；CD28也是CD86的天然配体；CD40的天然配体是CD40L；诱导性协同刺激分子配体(ICOSL)的天然配体是诱导性协同刺激分子(ICOS)；细胞间粘附分子(ICAM-1)的天然配体是白细胞功能相关抗原-3(LFA-3)；淋巴细胞活化诱导受体(41BB)的天然配体是41BBL；单核细胞克隆刺激因子受体(MCSFR)的天然配体是单核细胞克隆刺激因子(MCSF)；游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)的天然配体是FL3L；CC趋化因子受体2(CCR2)、CC趋化因子受体2(CCR3)和CC趋化因子受体2(CCR5)的天然配体是单核细胞趋化肽-3(MCP-3)和正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)。人致炎细胞因子包括结合于白介素-1(IL-1)受体的IL-1α和结合于组织坏死因子(TNF)受体的TNF-α和TNF-β。Th1细胞因子包括白介素-2(IL-2)、白介素-15(IL-15)和白介素-18(IL-18)，Th2细胞因子包括结合于各自受体的白介素-4(IL-4)，白介素-5(IL-5)和白介素-10(IL-10)。粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是另一个根据本发明可用于靶向细胞的因子。
融合蛋白可在AIP组份和配体组份之间或在蛋白酶组份和配体组份之间包含有一个蛋白酶切割位点。可举例的切割位点是能被已知存在于靶向消除细胞中的蛋白酶所识别的切割位点。
本发明的实施使用专业领域的传统分子生物学方法和重组DNA技术。这些技术在书中均有具体描述。见，如Sambrook等，分子克隆：实验室手册(第二版)，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约(1998)【Sambrook et al.，eds.，Molecular Cloning：A Laboratory Manual(2nd ed.)Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor，NY(1998)】；Ausubel等，分子生物学通用手册，John Wiley和Sons，纽约(2000)【Ausubel et al.，eds.，Current Protocols inMolecular Biology，John Wiley & Sons，New York，NY(2000)】；Glover，DNA克隆：实用方法，卷I和II【Glover，ed.，DNA Cloning：A Practical Approach，Vols.I & II】；Colowick和Kaplan，酶学方法，学术出版社【Colowick & Kaplan，eds.，Methods in Enzymology，Academic Press】；Weir和Blackwell，免疫学实验手册，卷I-IV，Blackwell科学出版社(1986)【Weir & Blackwell，eds.，Handbookof Experimental Immunology，Vols.I-IV，Blackwell Scientific Pubs.(1986)】；Fields，Knipe和Howley，病毒领域(第三版)，卷I和II，Lippincott Williams和Wilkins出版社，(1996)【Fields，Knipe，& Howley，eds.，Fields Virology(3rded.)Vols.I & II，Lippincott Williams & Wilkins Pubs.(1996)】；Coligan等，免疫学通用手册，John Wiley和Sons，纽约，(2000)【Coligan et al.，eds.，CurrentProtocols in Immunology，John Wiley & Sons，New York，NY(2000)】，收录在此均作为参考文献。
对诱导细胞凋亡的蛋白功能性片段的鉴定可按常规方法进行并获得衣壳蛋白。同样，配体的鉴定也可按常规方法进行。包含活性AIP组份和活性配体组份的融合蛋白的构建工作可以完成。专业人士能容易的鉴定融合蛋白是否靶向细胞并诱导细胞凋亡。
本发明的治疗用途包括使用融合蛋白通过选择性靶向细胞并诱导其凋亡来治疗与过度增生细胞相关的疾病，比如癌症或牛皮癣和自体免疫疾病。本发明包含该融合蛋白的药物组合物。本发明的药物组合物特别有用于具实体瘤特性的癌症。刺激过度增生细胞凋亡的能力为破坏过度增生细胞从而减少肿瘤提供了一种方法。在癌症和牛皮癣这样的具有不适当的细胞过度增生特性的疾病中，该药物组合物可用于通过诱导细胞凋亡来停止过度增生从而进行的疾病治疗。
WNV衣壳蛋白或其功能性片段可用上述易得有效的起始材料按常规方法生产。编码WNV衣壳蛋白的核苷酸序列和蛋白的氨基酸序列一样都是已知的。一系列的WNV分离物的全基因组在GenBank中公布和获得，包括分离物2741(登记号为AF206518)，NY99-火烈鸟382-99株(登记号为AF196835)和登记号为M12294的分离物。收录于此的各项均作为参考文献。有许多关于WNV基因组序列信息的公开资料和与GenBank中序列信息相关的引用文献。每一条这些参考文献，包括公开可获得的序列信息均收录于此作为参考文献。
衣壳蛋白的序列信息和其它黄病毒族病毒的核苷酸序列也可在GenBank中查到。作为非限制实例，GenBank中提供的病毒株和分离物的全基因组序列包括：JEV(登记号为M18370，D90194和D90195)、SLEV(登记号为M16614)、YFV(登记号为AF 094612，U17067，U17066，U54798，U21055，U21056和X03700)、DENV(登记号为M23027，U88536和U88537)、BVDV(登记号为M31182)和HCV(登记号为AF207773和AF207774)，均收录于此作为参考文献。其它AIP序列，例如HIV Vpr和多种半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶的序列都是已知的。Vpr的氨基酸序列在美国1993年12月15日申请的系列号为08/167,608的专利中公开，收录于此作为参考文献。鉴定Vpr蛋白特异作用并停止细胞周期的区域的数据在1997年8月14日申请的临时申请专利60/055,754中有描述，收录于此作为参考文献。
具普通专业技能的技术人员可以使用商业化的表达载体和系统或用已知的方法和易得有效的起始材料制成的载体生产融合蛋白。表达系统包含均对多种宿主是易得有效并为专业已知的必需的控制序列，比如启动子和多聚腺苷酸信号和优选的增强子。见，例如，分子生物学通用方法，John Wiley和Sons，纽约(2000)【Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons，New York，NY(2000)】。因此，目的蛋白可在原核和真核系统中制备，产生一系列的蛋白加工形式。
尽管Bacillus Subtilis和Psedomonas等系统也很有用，但使用最普通的原核系统仍为E.coli。原核系统适用的控制序列包括组成和诱导性启动子，包括但不限于lac启动子、trp启动子；杂合启动子如tac启动子、λ噬菌体P1启动子。一般来说，在这些宿主中生产的异源蛋白可为融合或成熟形式。当目的序列以成熟蛋白的形式产生时，生产的序列前可能加入了一不需有效除去的甲硫氨酸。因此，在大肠杆菌中生产时，本发明权利要求的多肽和蛋白的序列前可以有一N末端Met。此外，也可构建一个在多肽编码序列前加入一个能使蛋白分泌的可操作的信号肽序列的构建物。当在原核宿主中以这种方式生产时，信号肽序列在分泌中除去。
现在，广泛类型的真核宿主也能用于生产重组异源蛋白。像在大肠杆菌中一样，真核宿主也可以用生产目的蛋白的表达系统直接进行转化，但需提供更为通用的信号肽序列以有效地分泌蛋白。真核系统的额外的优点是它们能加工存在于高等生物编码蛋白基因组序列中的内含子。真核系统也提供多种能导致例如糖基化、C末端酰胺化、某些氨基酸残基氧化或衍生化、构象控制等的加工机制。
通常使用的真核系统包括但不限于酵母细胞、真菌细胞、昆虫细胞、哺乳细胞、鸟细胞和高等植物细胞。可操作的适合这些宿主细胞类型的启动子是有效的。终止序列和增强子序列比如杆状病毒多面体启动子也是有效的。如上所述，启动子可以是组成的或诱导的，例如，在哺乳动物表达系统中，鼠金属硫蛋白启动子能通过加入重金属离子来诱导。
构建适合目的宿主的表达系统的细节是专业技术人员所知的。对于重组生产的蛋白而言，其DNA编码序列与选择的表达载体进行适当的相连，并转化到合适的宿主中，宿主在能表达异源蛋白的条件下培养和保存。本发明中蛋白的生产是按适合的已知专业方法，通过裂解细胞或者从培养液中回收的。
具有普通专业技能的技术人员能用熟知的技术分离这些表达系统生产的融合蛋白。
除了用重组技术生产这些蛋白外，自动氨基酸合成仪也可应用于融合蛋白的生产。值得进一步注意的是，如果此处蛋白是合成的，非基因编码的氨基酸置换也是可行的。可替换的残基包括，例如，分子式为H2N(CH2)nCOOH(n＝2-6)的氨基酸。这些中性、非极性氨基酸有肌氨酸(Sar)，t-丁基丙氨酸(t-BuAla)，t-丁基甘氨酸(t-BuGly)，N-甲基异亮氨酸(N-MeIle)，和正亮氨酸(NIue)。例如，能替换Trp，Tyr或Phe的苯甘氨酸，是芳香族中性氨基酸；瓜氨酸(Cit)和甲硫氨酸亚砜(MSO)是中性极性氨基酸；环乙基丙氨酸(Cha)是中性非极性氨基酸，半胱磺酸(Cya)是酸性氨基酸，鸟氨酸(Orn)是碱性氨基酸。脯氨酸残基的构象赋予特性可通过被羟脯氨酸(Hyp)替换一个或更多残基而得知。
用于治疗自体免疫疾病和以细胞过度增生为特性的疾病的药物组合物包括融合蛋白和一个可药用的载体或佐剂，专业人员可根据所选择的给药模式来选择制成该药物组合物的方式。合适的药用载体见该领域的标准参考书Remington的药物科学(同上)(Remington’s Pharmaceutical Sciences)。
任何给药途径的一个普遍要求是有效并且施用方便。在本发明的一个具体实例中，药物组合物是通过注射的方式给药。在一个首选的具体实例中，药物组合物是通过肿瘤内注射的方式给药。其它给药方式包括但不限于：表皮渗透、经过皮肤、皮下、腹膜内、粘膜或一般持续性给药。
针对肠胃外的给药方式，黄病毒衣壳蛋白或其功能性片段能被制成例如溶液、悬浮液、乳剂或与药用肠胃外赋形剂相关联的冻干粉末。例如，这种赋形剂可为水、盐水、Ringer式溶液、葡萄糖溶液和5％人血清白蛋白；也可以使用脂质体和非水性赋形剂，例如脂肪油。赋形剂或冻干粉末可包含保持渗透压(如氯化钠，甘露醇)和化学稳定性(如缓冲液和防腐剂)的添加物。制剂用通用技术进行无菌处理。例如，一个通过注射给药的肠胃外药用成份可按活性成份占1.5％的质量比溶于0.9％氯化钠溶液中来制备。
虽然个体需求的剂量是可变化的，但专业领域包括了制剂有效用量优化范围的鉴定方法。人们也能很容易的从动物试验结果来进行推断【Katocs等，Remington的药物科学，第27章，18版，Gennaro编辑，Mack出版社，伊斯顿，宾夕法尼亚州，1990(Katocs et al.，Chapter 27 In：Remington’sPharmaceutical Sciences，18th Ed.，Gennaro，ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1990)】。一般来说，专业技术人员可根据一些因素来调整制剂有效用量所需的剂量，这些因素包括受药者的年龄、健康状况、身体条件、体重、疾病或障碍的类型和程度、治疗频率、并行治疗的性质、如果需要，还会包括预期效果的性质和范围【Nies等，Goodman和Gilman的治疗的药物基础，第3章，第9版，Hardman等编辑，McGraw-Hill，纽约，NY，1996(Nies et al.，Chapter3 In：Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics，9th Ed.，Hardman et al.，eds.，McGraw-Hill，New York，NY，1996)】。通常，融合蛋白每日剂量在大约1μg～100mg每公斤体重。较合适剂量一般为0.5-50mg每公斤每天，优选为1-10mg每公斤每天，每天1-6次或持续释放的给药方式能有效的获得预期效果。
本发明中的药物组合物可按单份剂量或多份剂量的方式给药。本发明的药物组合物也可按单独的治疗药剂或与其它治疗药剂结合的方式给药。本发明的治疗方法也可以与传统治疗结合，按顺序或同时施用。
含融合蛋白的药物组合物可按任何能使活性药剂到达受药者体内药剂作用位点的方式给药。因为蛋白以口服给药时容易被消化分解，因此通常使用肠道外给药方式，即静脉注射、皮下注射、肌肉内注射以优化吸收。此外，本发明的药物组合物可在过度增生位点或其附近进行注射。例如，施用方式可为直接注射进入实体瘤团块或其直接邻近的组织。如果治疗的个体患牛皮癣，融合蛋白可用一可药用的局部载体制成制剂，该制剂可作为如霜、露或药膏的形式局部施用。
实例
下列有登记号和参考文献的序列在此可作为参考。
西尼罗病毒 AF202541 HNY1999株
西尼罗病毒 NC001563 全基因组
HIV Vpr
VPR AJ404325 vpr，gag，pol，vif，vpu，env和nef
VPR AF316862 vif，vpr(喀麦隆分离物)
VPR AF325763 vif，vpr(南非分离物)
AIF
AIF XM010246 也称为“程序性细胞死亡8”或“PDCD8”
AIF NM004208
TAP
TAP AF009510 也被称为TAP相关蛋白
TAP AF314222 选择性拼接
TAP AB010639 TAP相关蛋白2
巨噬细胞集落刺激因子
登记号AAA59572
Cerretti，D.P.等，分子免疫学，25(8)，761-770(1988)【Cerretti，D.P.et al.，Mol.Immunol.25(8)，761-770(1988)】
登记号AAB51235
Visvader，J.和Verma，I.M.，分子细胞生物学，9(3)，1336-1341(1989)【Visvader，J.and Verma，I.M.，Mol.Cell.Biol.9(3)，1336-1341(1989)】
登记号P09603
wong等，科学，235(4795)，1504-1508(1987)【wong et al.，Science 235(4795)，1504-1508(1987)】
Cerretti等，分子免疫学，25(8)761-770(1988)【Cerretti et al.，Mol.Immuno.25(8)761-770(1988)】
Kawasaki等，科学，230(4723)291-296(1985)【Kawasaki et al.，Science，230(4723)291-296(1985)】
趋化因子(C-C motif)受体5
登记号4502639
Raport，C.J.等，生物化学杂志，271(29)，17161-17166(1996)【Raport，C.J.et al.，J.Biol.Chem.271(29)，17161-17166(1996)】
单核细胞趋化蛋白(MCP-3)
登记号CAA50407
Minty，A.等，欧洲细胞因子网刊，4(2)，99-110(1993)【Minty，A.et al.，Eur.Cytokine Netw.4(2)，99-110(1993)】
登记号AAC03538
pFLT3
fms相关酪氨酸激酶3
登记号4758396
Small，D.等，美国科学院院报，91，459-463(1994)【Small，D.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.91，459-463(1994)】
登记号P36888
Small，D等，美国科学院院报，91，459-463(1994)【Small，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.91，459-463(1994)】
pFLT3LG
fms相关酪氨酸激酶3配体
登记号4503751
4-1BB
登记号AAA53133
Alderson，M.R.等，欧洲免疫学杂志，24(9)，2219-2227(1994)【Alderson，M.R.etal.，Eur.J.Immunol.24(9)，2219-2227(1994)】
4-1BBL
登记号P41273
Alderson，M.R.等，欧洲免疫学杂志，24(9)，2219-2227(1994)【Alderson，M.R.etal.，Eur.J.Immunol.24(9)，2219-2227(1994)】
RANTES
登记号BAA76939
Liu，H.等，美国科学院院报，96(8)，4581-4585(1999)【Liu，H.et al.，PNASU.S.A.96(8)，4581-4585(1999)】
登记号1065018
登记号XM012656
登记号NM002985
CCR1/MIP1R
登记号P32246
Neote，K.等，细胞，72(3)415-425(1993)【Neote，K.et al.，Cell，72(3)415-425(1993)】
Gao，J.L.等，实验药物杂志，177(5)1421-1427(1993)【Gao，J.L.et al.，J.Exp.Med.177(5)1421-1427(1993)】
Nomura，H.等，国际免疫学，5(10)1239-1249(1993)【Nomura，H.et al.，Int.immunol.5(10)1239-1249(1993)】
CCR5
登记号P56493
Kuhmann，S.E.等，病毒学杂志，71(11)8642-8656(1997)【Kuhmann，S.E.et al.，J.Virol.71(11)8642-8656(1997)】
Murayama，Y.等【Murayama，Y.et al.，】
CCR2
登记号P41597
Charo，I.F.等，美国科学院院报，91(7)2752-2756(1994)【Charo，I.F.et al.，PNAS，U.S.A.91(7)2752-2756(1994)】
Yamagami，S.等，生物化学生物物理学研究交流，202(2)1156-1162(1994)【Yamagami，S.et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.，202(2)1156-1162(1994)】Wong，L.M.等，生物化学杂志，272(2)1038-1045(1997)【Wong，L.M.et al.，J.Biol.Chem.，272(2)1038-1045(1997)】
CCR3
登记号P51677
Combadiere，C.等，生物化学杂志，270(28)16491-16494(1995)【Combadiere，C.et al.，J.Biol.Chem.，270(28)16491-16494(1995)】
Combadiere，C.等，生物化学杂志，270 30235(1995)【Combadiere，C.et al.，J.Biol.Chem.，270 30235(1995)】
Dougherty，B.L.等，实验药物杂志，183(5)2349-2354(1996)【Dougherty，B.L.etal.，J.Exp.Med.183(5)2349-2354(1996)】
CD40配体
登记号P29965
Graf，D等，欧洲免疫学杂志，22(12)3191-3194(1992)【Graf，D.et al.，Eur.J.Immunol.22(12)3191-3194(1992)】
Hollenbaugh，D.等，欧洲分子生物学组织杂志，11(12)4313-4321(1992)【Hollenbaugh，D.et al.，Embo.J.11(12)43 13-4321(1992)】
Spriggs，M.K.等，细胞，72 291-300(1993)【Spriggs，M.K.et al，Cell，72 291-300(1993)】
Spriggs，M.K.等，实验药物杂志，176(6)1543-1550(1992)【Spriggs，M.K.et al.，J.Exp.Med.176(6)1543-1550(1992)】
Gauchat等，Febs通讯，315(3)259-266(1993)【Gauchat et al.，Febs.Lett.315(3)259-266(1993)】
CD86
登记号5901920
Azuma等，自然，366(6450)76-79(1993)【Azuma et al.，Nature 366(6450)76-79(1993)】
Reeves等，哺乳动物基因组，8(8)581-582(1997)【Reeves et al.，Mamm.Genome 8(8)581-582(1997)】
CD80
登记号4885123
Selvakumar等，免疫遗传学，36(3)175-181(1992)【Selvakumar et al.，Immunogenetic 36(3)175-181(1992)】
Freeman等，血液，79(2)489-494(1992)【Freeman et al.，Blood 79(2)489-494(1992)】
CD40
登记号4507581
Stamenkovic等，欧洲分子生物学杂志，8(5)1403-1410(1989)【Stamenkovicet al.，Embo.J.8(5)1403-1410(1989)】
LFA-3
登记号BAA05922
ICAM1
登记号AAB51145
CD28
登记号5453611
Lee等，免疫学杂志，145(1)344-352(1990)【Lee et al.，J.Immunol.145(1)344-352(1990)】
人IL-1α的核苷酸和氨基酸序列是已知的，见Telford等，(1986)核酸研究，14：9955-9963【Telford et al.，(1986)Nucl.Acids Res.14：9955-9963】，Furutani等，(1985)核酸研究，14：3167-3179【Furutani et al.，(1986)Nuci.Acids Res.14：3167-3179】，March，等(1985)自然，315：641-647【March et al.，(1985)Nature，315：641-647】和登记号为Swissprot PO1583的序列，收录于此作为参考文献。
人IL-2的核苷酸和氨基酸序列是已知的，见Holbrook等，(1984)美国科学院院报，81：1634-1638【Holbrook et al.，(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81：1634-1638】，Fujita等，(1983)美国科学院院报，80：7473-7441【Fujita et al.，(1983)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，80：7473-7441】，Fuse等，(1984)核酸研究，12：9323-9331【Fuse et al.，(1984)Nucl.Acids Res.12：9323-9331】，Taniguchi等，(1983)自然，302：305-310【Taniguchi等，(1983)自然，302：302-310】，Maeda等，(1983)生物化学生物物理研究交流，115：1040-1047【Maeda等，(1983)Biochem.Biophys.Res.Comm.115：1040-1047】，Devos等，(1983)核酸研究，11：4307-4323【Devos et al.，Nucl.Acids Res.(1983)11：4307-4323】和登记号为Swissprot PO1585的序列，收录于此作为参考文献。
人IL-4的核苷酸和氨基酸序列是已知的，见Arai等，(1989)免疫学杂志，142：274-282【Arai et al.，(1989)J.Immunol.142：274-282】，Otsuka等，(1987)核酸研究，15：333-344【Otsuka et al.，(1987)Nucl.Acids Res.15：333-344】，Yokota等，(1986)美国科学院院报，83：5894-5898【Yokota et al.，(1986)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，83：5894-5898】，Noma等，(1984)自然，319：640-646【Noma et al.，(1984)Nature，319：640-646】，Lee等，(1986)美国科学院院报，83：2061-2063【Lee et al.，(1986)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，83：2061-2063】和登记代码为Swissprot 05112(鼠IL-4的登记号为Swissprot07750)的序列，收录于此作为参考文献。
人IL-5的核苷酸和氨基酸序列是已知的，见Campbell等，(1987)美国科学院院报，84：6629-6633【Campbell et al.，(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84：6629-6633】，Tanabe等，(1987)生物化学杂志，262：16580-16584【Tanabeet al.，(1987)J.Biol.Chem.262：16580-16584】，Campbell等，(1988)欧洲生物化学杂志，174：345-352【Campbell et al.，(1988)Eur.J.Biochem.174：345-352】，Azuma等，(1986)核酸研究，14：9149-9158【Azuma et al.，(1986)Nucl.Acids Res.14：9149-9158】，Yokota等，(1986)美国科学院院报，84：7388-7392【Yokota et al.，(1986)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84：7388-7392】和登记号为Swissprot PO5113的序列，收录于此作为参考文献。
人IL-10的核苷酸和氨基酸序列是已知的，见Viera等，(1991)美国科学院院报，88：1172-1176【Viera et al.，(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88：1172-1176】和登记号为SwissprotP22301的序列。
人IL-15的核苷酸和氨基酸序列是已知的，见Grabstein等，(1994)科学，264：965-968【Grabstein et al.，(1994)Science，264：965-968】和登记号为Swissprot U03099的序列，收录于此作为参考文献。
人IL-18核苷酸和氨基酸序列是已知的，见Ushio等，(1996)免疫学杂志，156：4274-4279【Ushio et al.，(1996)J.Immunol.156：4274-4279】和登记号为D49950的序列，收录于此作为参考文献。
人TNF-α的核苷酸和氨基酸序列是已知的，见Pennica，(1984)自然，312：724-729【Pennica，(1984)Nature，312：724-729】和登记号为SwissprotPO1375的序列，收录于此作为参考文献。
人TNF-β的核苷酸和氨基酸序列是已知的，见Gray，(1984)自然，312：721-724【Gray，(1984)Nature，312：721-724】和登记号为Swissprot PO1374的序列，收录于此作为参考文献。