用至少两种标记物标记液体的方法以及检测它们的方法 本发明涉及用至少两种标记物标记液体的方法，其中所述标记物在600-1200nm光谱区域吸收并再发射荧光，且至少一种标记物的吸收范围与至少另一种标记物的吸收范围重叠。
本发明还涉及检测通过本发明方法标记的液体中标记物的方法，包括使用在所述标记物吸收范围内发射放射线的光源，并检测所述标记物再发射的荧光，其中至少一个光源在至少一种标记物与至少另一种标记物地重叠吸收范围内发射放射线，并且光源的数目少于或等于标记物的数目。
本发明还涉及通过本发明方法标记的液体。
人们经常需要标记液体，以便在随后(例如使用这些液体时)用适当方法检测这样标记过的液体。这使得能够例如把享受优惠税收政策的燃料油与通常被征收更高税收的柴油区别开，或能够在大工厂例如炼油厂中标记液体产品管流以追踪它们。
如果液体的标记人眼睛看不见，则需要使用能在光谱可见区之外吸收和/或发射放射线的标记物。因为需要在加入低水平标记物情况下达到检测的极度灵敏性和实现可靠的标记，所以首要问题尤其是将所吸收的放射作为荧光再发射出去的标记物。该发射的放射线的频率通常比吸收的放射线低(STOKES放射)，在少见情况下与吸收的放射线频率相同(共振荧光)，或甚至比其频率高(ANTI-STOKES放射)。
烃和烃混合物(例如各种等级的柴油、汽油发动机燃料以及其它矿物油)的标记具有显著经济意义。由于这些液体自身通常在约600nm以下的光谱区域具有高的吸收和/或发荧光，因此所用标记物在约600nm以上吸收和/或发荧光并不令人惊奇。
理想情况是，用作标记物的化合物应当具有下述基本特征：在600-1200nm光谱区域有强吸收，在可见光谱区域有很小或没有吸收/发荧光，在约600-约1200nm光谱区域发射强荧光，当以低于1ppm(重量比)的浓度加到欲标记液体中时，发射出可检测水平的荧光，在欲标记液体中具有适当溶解度。
此外，根据具体应用需要，用作标记物的化合物可能必须满足一个或多个下述要求：与液体中存在的其它标记物和任意其它添加剂溶混(标记和可能添加的液体彼此之间也应当混溶)，单独存在或溶解在欲标记液体中时对于外部条件例如温度、光、湿度等有适当稳定性，对于它们所用于的环境例如内燃机、储罐等无害，在毒理学和生态学方面是安全的。
WO94/02570描述了标记液体的方法，其中是使用选自不含金属和含有金属的酞菁染料、不含金属和含有金属的萘菁染料(naphthalocyanine)、镍-二硫杂环戊二烯(dithiolene)复合物、芳胺的铵化合物、次甲基染料和奥方形酸染料的、在600-1200nm有最大吸收和/或在620-1200nm发射最强荧光的标记物。其中还描述了基本上包括检测液体中存在的标记物的荧光的方法，其中标记物在所述光谱区域吸收放射。该引用文献还描述了标记物的检测器。然而，其中没有明确提及同时使用两种或两种以上标记物。
US5525516同样描述了使用在NIR区域发荧光的化合物标记矿物油的方法。其中是使用取代的酞菁染料、取代的萘菁染料和方形酸或克酮酸衍生物来作为标记物。该美国专利在说明书部分(第3栏，第35-40行)指出，不仅使用一种在IR区域发荧光的化合物来标记一种或多种矿物油在该发明范围内，而且使用两种或两种以上在IR区域发荧光的化合物来标记一种或多种矿物油也在该发明范围内。该专利还指出，对于所述两种或两种以上化合物，应当选择彼此间在足够不同的波长处吸收IR放射和/或再发射荧光的化合物，这样才不会干扰单独检测。该专利认为(第4栏，第25-28行)，使用当时现有技术中的检测装置，可辨别出在相差最低达20nm波长处的吸收/荧光的差异。该文献明确地排除了使用具有重叠吸收区域的标记物。此外，该专利还指出(第3栏，第41-44行)，这个或这些荧光化合物应当优选在850nm以下波长具有吸收，这是因为矿物油在850nm以上波长具有吸收。
US5525516还要求保护鉴别用一种或多种标记物标记的矿物油的方法。其中是将标记的矿物油或掺入到矿物油中的标记物暴露于670-850nm范围内(吸收范围)的电磁放射中。但是除此之外，没有提供任何当已经用一种以上标记物将矿物油标记时如何继续进行的进一步信息。
US5710046描述了标记汽油的方法，其中也是基本上通过检测溶于汽油中的基本上不含金属的荧光染料来进行的。用600-2500nm波长谱带的放射线将适当标记的汽油激发，检测染料在约600-2500nm波长谱带发射的荧光，使用所得检测信号来鉴别标记的样本。该文献还详细地描述了用于检测标记汽油样本中的荧光染料的检测器的构造。然而，其中没有讨论使用多种标记物(染料)。
如果要标记来自不同起源或不同制造商的液体、例如烃和烃混合物(例如柴油和汽油燃料以及其它矿物油)，并且如果每种液体只能使用一种标记物，则需要使用多种不同标记物。这些不同标记物在其吸收和/或荧光特性方面必须足够不同，以鉴别出液体的起源和/或制造商。此外，仅用一种标记物标记液体会使得他人易于通过加入适当标记物来伪造未标记液体。当在化学和性质方面相同的液体要纳不同的税时，这一问题就显得尤其突出。例如燃料油和柴油。
本发明的目的是使用两种或两种以上标记物来标记液体，使其具有难以复制的“指纹”标志。
我们已经发现，通过使用至少两种标记物来标记液体的方法可实现本发明目的，其中所述标记物在600-1200nm光谱区域吸收并再发射荧光，并且至少一种标记物的吸收范围与至少另一种标记物的吸收范围重叠。
优选使用各自的最大吸收波长在600-1200nm光谱区域内的标记物。
一方面，使用其中在至少一种标记物的吸收范围与至少另一种标记物的吸收范围之间有重叠的两种或两种以上标记物使得能够使用多种具有所述波长范围的标记物。然而，更重要的是，他人出于欺诈目的而使用的任意化合物都不仅需要具有与原始标记物类似的最大吸收，而且在其余吸收范围内需要具有与后加标记物类似的特征。
例如，我们假定每一种欺诈性标记物仅具有一个与原始标记物符合的相当窄的最大吸收。我们进一步假定原始标记物还具有在某些程度上重叠的吸收范围，即已经实行了本发明意义上的标记。然后，如果使用仅在最大吸收区域发射的光源，则上述两种情况就具有类似荧光光谱。然而，如果使用在欺诈性标记物没有任何吸收、但是原始标记物具有重叠吸收范围的波长处发射的光源，则在后一情况下能检测到这些标记物发射的荧光，但是在前一情况下不能检测到标记物发射的荧光。
举另一个例子。我们假定原始标记物M1的最大吸收位于M1的最大吸收与另一原始标记物M2的最大吸收之间的吸收重叠区域。那么如果所述标记物M1和M2分别在其最大吸收处被激发，则M1的荧光信号将仅是由于其被激发而产生的，而所述标记物M2的荧光信号将具有由于其被激发所产生的部分(在M2的最大吸收)和由于所述标记物M1被激发而产生的另一部分(在其最大吸收以及同时在所述标记物M1和M2之间的吸收重叠区域)。与之截然不同的是，不具有所述吸收范围重叠的相应欺诈性标记物将在其最大吸收被激发，从而仅表现出其各自的荧光信号。在本说明书下文中将对此作更详细讨论。
在本发明标记液体的方法中，优选使用n种标记物的组合，其中n是2-10的整数，即2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明标记液体的方法中，特别优选使用n种标记物的组合，其中n是2-6的整数，即2、3、4、5或6。
在本发明标记液体的方法中，非常特别优选使用n种标记物的组合，其中n是2-4的整数，即2、3或4。
在本发明方法以及其中采用n=2-10、n=2-6或n=2-4种标记物组合的优选实施方案中使用的优选标记物是选自不含金属和含有金属的酞菁染料、不含金属和含有金属的萘菁染料、镍-二硫杂环戊二烯复合物、芳胺的铵化合物、次甲基染料、方形酸染料和克酮酸染料的化合物。
合适的酞菁染料是例如式Ⅰa酞菁染料其中Me1是两个氢、两个锂、镁、锌、铜、镍、VO、TiO、AlCl、AlO-C1-C20-烷基、AlNH-C1-C20-烷基、AlN(C1-C20-烷基)2、AlO-C6-C20-芳基、A1-NH-C6-C20-芳基或AlN(C6-C20-芳基)2、AlN-Het，其中N-Het是饱和或不饱和5元、6元或7元杂环，所述杂环在环中除了含有至少一个氮原子以外，还可含有1个或2个另外的氮原子和/或另外的氧原子或硫原子，所述杂环未取代或被C1-C4-烷基、苯基、苄基或苯乙基单取代-三取代，并且所述杂环通过环氮原子与铝原子连接，或者Me1是Si(OH)2，R1-R16中至少有4个基团分别独立地为式W-X1所示基团，其中W为化学键、氧、硫、亚氨基、C1-C4-烷基亚氨基或苯基亚氨基，X1是被或未被1-4个氧原子以醚官能团形式间隔、具有或不具有苯基取代基的C1-C20-烷基或C3-C10-环烷基，金刚烷基或取代或未取代苯基，饱和5元、6元或7元杂环，所述杂环在环中还可含有1个或2个另外的氮原子和/或一个另外的氧原子或硫原子，所述杂环未取代或被C1-C4-烷基、苯基、苄基或苯乙基单取代-三取代，并且所述杂环通过环氮原子连接在苯环上，R1-R16中剩余基团分别为氢、卤素、羟基磺酰基或C1-C4-二烷基氨磺酰基。
合适的酞菁染料还有例如式Ⅰb酞菁染料其中R17与R18或R18与R19或R19与R20成对形成式X2-C2H4-X3所示基团，其中X2和X3中一个是氧，另一个是亚氨基或C1-C4-烷基亚氨基，R19与R20或R17与R20或R17与R18分别独立地为氢或卤素，且Me1定义同上。
除了上述酞菁染料之外，其它合适酞菁染料描述在US5526516的通式Ⅰ以及例举的表3中、和US5703229的通式Ⅱ以及例举的表3中。
合适的萘菁染料是例如式Ⅱ萘菁染料其中Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y5、Y7和Y8分别独立地为氢、羟基、C1-C20-烷基、C3-C10-环烷基或C1-C20-烷氧基，其中所述烷基可分别被1-4个氧原子以醚官能团形式间隔，并且可被苯基取代，或者Y1-Y8独立地为饱和5元、6元或7元杂环，所述杂环在环中还可含有1个或2个另外的氮原子和/或一个另外的氧原子或硫原子，所述杂环未取代或被C1-C4-烷基、苯基、苄基或苯乙基单取代-三取代，并且所述杂环通过环氮原子连接在苯环上，Y9、Y10、Y11和Y12分别独立地为氢、其中烷基可分别被1-4个氧原子以醚官能团形式间隔的C1-C20-烷基或C1-C20-烷氧基、卤素、羟基磺酰基或C1-C4-二烷基氨磺酰基，Me2是Me1，或者是基团其中Y17和Y18分别独立地为羟基、C1-C20-烷氧基、C1-C20-烷基、C2-C20-链烯基、C3-C20-链烯氧基、或基团其中Y19是C1-C20-烷基、C2-C20-链烯基或C4-C20-链二烯基，且Y20和Y21分别独立地为C1-C12-烷基、C2-C12-链烯基或上述基团OY19。
其中Y1-Y8中至少有一个基团不是氢的式Ⅱ萘菁染料是特别优选的。
除了上述萘菁染料之外，其它合适萘菁染料描述在US5526516的通式Ⅱ以及例举的表4中、和US5703229的通式Ⅲ以及例举的表4中。
合适的镍-二硫杂环戊二烯复合物是例如式Ⅲ所示复合物其中L1、L2、L3和L4分别独立地为被或未被1-4个氧原子以醚官能团形式间隔的C1-C20-烷基、苯基、其中烷基可分别被1-4个氧原子以醚官能团形式间隔的C1-C20-烷基苯基或C1-C20-烷氧基苯基，或者L1与L2和/或L3与L4一起形成式所示基团。
合适的铵化合物是例如式Ⅳ化合物其中Z1、Z2、Z3和Z4分别独立地为被或未被1-4个氧原子以醚官能团形式间隔的C1-C20-烷基、C1-C20链烷酰基、或式所示基团，其中Z6是氢、被或未被1-4个氧原子以醚官能团形式间隔的C1-C20-烷基、或C1-C20-链烷酰基，Z7是氢、或被或未被1-4个氧原子以醚官能团形式间隔的C1-C20-烷基，Z8是氢、被或未被1-4个氧原子以醚官能团形式间隔的C1-C20-烷基、或卤素，且An是等价阴离子。
合适的次甲基染料是例如式Ⅴ所示化合物其中环A和B可分别独立地苯并稠合和被取代，E1和E2分别独立地为氧、硫、亚氨基或式-C(CH3)2-或-CH=CH-所示基团，D是式所示基团，其中E3是氢、C1-C6-烷基、氯或溴，且E4是氢或C1-C6-烷基，Q1和Q2分别独立地为苯基、C5-C7-环烷基、C1-C12-烷基，其中所述烷基被或未被1-3个碳原子以醚官能团形式间隔，并且被或未被下述基团取代：羟基、氯、溴、羧基、C1-C4-烷氧基羰基、丙烯酰氧基、异丁烯酰氧基、羟基磺酰基、C1-C7-链烷酰基氨基、C1-C6-烷基氨基甲酰基、C1-C6-烷基氨基甲酰氧基、或式G(K)3所示基团，其中G是氮或磷，K是苯基、C5-C7-环烷基或C1-C12-烷基，An是等价阴离子，且n是1、2或3。
合适的方形酸染料是例如在US5526516的通式Ⅲ以及例举的表2中、和US5703229的通式Ⅳ以及例举的表2中描述的化合物。
合适的方形酸染料还包括薁方形酸染料，例如下式Ⅵ所示化合物其中J是C1-C12-亚烷基，T1是氢、卤素、氨基、羟基、C1-C12-烷氧基、苯基、取代苯基、羧基、C1-C12-烷氧基羰基、氰基或式-NT7-CO-T6、-CO-NT6T7或O-CO-NT6T7所示基团，其中T6和T7分别独立地为氢、C1-C12-烷基、C5-C7-环烷基、苯基、2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基或环己基氨基羰基，T2、T3、T4和T5分别独立地为氢或C1-C12-烷基，所述烷基被或未被卤素、氨基、C1-C12-烷氧基、苯基、取代苯基、羧基、C1-C12-烷氧基羰基或氰基取代，条件是：当T5是氢时，薁环内的取代基J-T1和T2的环位置可在一个或两个薁环内互换。
合适的方形酸染料还包括例如下式Ⅵa所示化合物：其中Ar分别独立地为未取代或被C1-C20-烷氧基、C1-C20-烷基氨基、C1-C20-二烷基氨基或C1-C20-烷硫基取代的5元或6元芳香环或杂芳环，例如苯基、萘基、噻吩、吡啶或噻唑。其中所述烷基可分别被1-4个氧原子以醚官能团形式间隔，并且可被苯基取代。
Ar优选为被所述基团在2-位、2,4-位或2,4,6-位单取代、二取代或三取代的苯基。当苯基被多取代时，这些取代基优选相同。其中两个Ar相同的化合物是特别优选的。
合适的克酮酸染料是例如在US5526516的通式Ⅳ以及例举的表5中描述的化合物。
上式中的任意烷基、亚烷基或链烯基都可以是直链或支链基团。
在式Ⅰa、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ或Ⅵa中，可被1-4个氧原子以醚官能团形式间隔的适宜C1-C20-烷基是例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、己基、2-甲基戊基、庚基、辛基、2-乙基己基、异辛基、壬基、异壬基、癸基、异癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、3,5,5,7-四甲基壬基、异十三烷基(上述异辛基、异壬基、异癸基和异十三烷基是俗称，并衍生自通过羰基合成法获得的醇-参见Ullmanns Encyklopdieder technischen Chemie第4版，第7卷，第215-217页，以及第11卷，第435和436页)、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基、2-甲氧基乙基、2-乙氧基乙基、2-丙氧基乙基、2-异丙氧基乙基、2-丁氧基乙基、2-甲氧基丙基、3-甲氧基丙基、2-乙氧基丙基、3-乙氧基丙基、2-丙氧基丙基、3-丙氧基丙基、2-丁氧基丙基、3-丁氧基丙基、2-甲氧基丁基、4-甲氧基丁基、2-乙氧基丁基、4-乙氧基丁基、2-丙氧基丁基、4-丙氧基丁基、2-丁氧基丁基、4-丁氧基丁基、3,6-二氧庚基、3,6-二氧辛基、4,8-二氧壬基、3,7-二氧辛基、3,7-二氧壬基、4,7-二氧辛基、4,7-二氧壬基、4,8-二氧癸基、3,6,8-三氧癸基、3,6,9-三氧十一烷基、3,6,9,12-四氧十三烷基、或3,6,9,12-四氧十四烷基。
在式Ⅰa或Ⅱ中，合适的C3-C10-环烷基是可被1-4个氧原子以醚官能团形式间隔的直链或支链环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、四氢呋喃基、环己基、四氢吡喃基、环庚基、氧杂环庚烷基、1-甲基环丙基、1-乙基环丙基、1-丙基环丙基、1-丁基环丙基、1-戊基环丙基、1-甲基-1-丁基环丙基、1,2-二甲基环丙基、1-甲基-2-乙基环丙基、环辛基、环壬基或环癸基。
在式Ⅰa、Ⅰb或Ⅱ中，Me1和Me2中的AlO-C6-C20-芳基、Al-NH-C6-C20-芳基或AlN(C6-C20-芳基)2中的适当C6-C20-芳基是，例如任选被最高达2个C1-C7-烷基、最高达3个C1-C4-烷基、最高达4个C1-C3-烷基、或最高达5个甲基或乙基取代的苯基，或任选被最高达2个C1-C5-烷基、最高达3个C1-C3-烷基、或最高达4个甲基或乙基取代的萘基，这些任选存在的烷基取代基已在上述C1-C20-烷基部分中提及过。
在式Ⅰa、Ⅰb或Ⅱ中，Me1和Me2的AlN-Het中的适当N-Het衍生自例如吡咯、吡咯烷、吡唑、吡唑烷、咪唑、咪唑啉、1H-1,2,3-三唑、1,2,3-三唑烷、1H-1,2,4-三唑、1,2,4-三唑烷、吡啶、哌啶、吡嗪、哌嗪、哒嗪、吗啉、1H-氮杂、2H-氮杂、azepan、噁唑、噁唑烷、噻唑、噻唑烷、1,2,3-噁二唑、1,2,4-噁二唑、1,3,4-噁二唑、1,2,3-噁二唑烷、1,2,4-噁二唑烷、1,3,4-噁二唑烷、1,2,3-噻二唑、1,2,4-噻二唑、1,3,4-噻二唑、1,2,3-噻二唑烷、1,2,4-噻二唑烷、1,3,4-噻二唑烷，所述杂环未取代，或被C1-C4-烷基、苯基、苄基或苯乙基单取代、二取代或三取代。相应的任选的C1-C4-烷基已在上述C1-C20-烷基部分中提及过。
在式Ⅰa或Ⅱ中，用于定义R1-R16或Y1-Y8的适当杂环基团衍生自在环中还可含有1个或2个另外的氮原子和/或另外的氧原子或硫原子的饱和5元、6元或7元杂环，例如吡咯烷、吡唑烷、咪唑啉、1,2,3-三唑烷、1,2,4-三唑烷、哌啶、哌嗪、吗啉、azepan、噁唑烷、噻唑烷、1,2,3-噁二唑烷、1,2,4-噁二唑烷、1,3,4-噁二唑烷、1,2,3-噻二唑烷、1,2,4-噻二唑烷、1,3,4-噻二唑烷，所述杂环未取代，或被C1-C4-烷基、苯基、苄基或苯乙基单取代、二取代或三取代。相应的C1-C4-烷基已在上述C1-C20-烷基部分中提及过。
在式Ⅰ、Ⅱ或Ⅵa中，合适的苯基取代的C1-C20-烷基是例如苄基或1-苯基乙基或2-苯基乙基。
在式Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ或Ⅵa中，可被1-4个氧原子以醚官能团形式间隔的适当C1-C20-烷氧基是例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、戊氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基、2-乙基己氧基、异辛氧基、壬氧基、异壬氧基、癸氧基、异癸氧基、十一烷氧基、十二烷氧基、十三烷氧基、异十三烷氧基、十四烷氧基、十五烷氧基、十六烷氧基、十七烷氧基、十八烷氧基、十九烷氧基、二十烷氧基、2-甲氧基乙氧基、2-乙氧基乙氧基、2-丙氧基乙氧基、2-异丙氧基乙氧基、2-丁氧基乙氧基、2-甲氧基丙氧基、3-甲氧基丙氧基、2-乙氧基丙氧基、3-乙氧基丙氧基、2-丙氧基丙氧基、3-丙氧基丙氧基、2-丁氧基丙氧基、3-丁氧基丙氧基、2-甲氧基丁氧基、4-甲氧基丁氧基、2-乙氧基丁氧基、4-乙氧基丁氧基、2-丙氧基丁氧基、4-丙氧基丁氧基、2-丁氧基丁氧基、4-丁氧基丁氧基、3,6-二氧庚氧基、3,6-二氧辛氧基、4,8-二氧壬氧基、3,7-二氧辛氧基、3,7-二氧壬氧基、4,7-二氧辛氧基、4,7-二氧壬氧基、4,8-二氧癸氧基、3,6,8-三氧癸氧基、3,6,9-三氧十一烷氧基、3,6,9,12-四氧十三烷氧基、或3,6,9,12-四氧十四烷氧基。
在式Ⅱ或Ⅵa中，合适的苯基取代的C1-C20-烷氧基是例如苄氧基或1-苯基乙氧基或2-苯基乙氧基。
在式Ⅰa、Ⅲ或Ⅵ中，合适的取代苯基是例如被C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、羟基或卤素取代的苯基。取代基的数目通常为1-3个。尤其是苯基被1个或2个C1-C6-烷基或C1-C6-烷氧基取代。对于单取代，取代基优选在对位。对于二取代，取代基优选在2,3-位、2,4-位、3,4-位和3,5-位。
在式Ⅰb、Ⅱ、Ⅳ或Ⅵ中，卤素是例如氟、氯或溴。
式Ⅰa中的W和式Ⅰb中的X2或X3是例如甲基亚氨基、乙基亚氨基、丙基亚氨基、异丙基亚氨基或丁基亚氨基。
式Ⅰa中的R1-R16和式Ⅱ中的Y9-Y12是例如二甲基氨磺酰基、二乙基氨磺酰基、二丙基氨磺酰基、二丁基氨磺酰基、或N-甲基-N-乙基氨磺酰基。
式Ⅱ中的C2-C20-链烯基和C4-C20-链二烯基分别是例如乙烯基、烯丙基、丙-1-烯-1-基、甲代烯丙基、乙代烯丙基、丁-3-烯-1-基、戊烯基、戊二烯基、己二烯基、3,7-二甲基辛-1,6-二烯-1-基、十一-10-烯-1-基、6,10-二甲基十一-5,9-二烯-2-基、十八-9-烯-1-基、十八-9,12-二烯-1-基、3,7,11,15-四甲基十六-1-烯-3-基、或二十-9-烯-1-基。
式Ⅱ中的C3-C20-链烯氧基是例如烯丙氧基、甲代烯丙氧基、丁-3-烯-1-基氧基、十一-10-烯-1-基氧基、十八-9-烯-1-基氧基、或二十-9-烯-1-基氧基。
式Ⅳ中的Z6是例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基、或2-乙基己酰基。
如果式Ⅴ中的环A和/或B被取代，合适的取代基是例如C1-C6-烷基、苯基-C1-C6-烷氧基、苯氧基、卤素、羟基、氨基、C1-C6-烷基氨基、C1-C6-二烷基氨基或氰基。环上取代基的数目通常为1-3。
式Ⅴ中的E3、E4、Q1和Q2分别是例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔戊基或己基。
Q1和Q2还可以是例如己基、2-己基戊基、庚基、辛基、2-乙基己基、异辛基、壬基、异壬基、癸基、异癸基、十一烷基、十二烷基、环戊基、环己基、2-甲氧基乙基、2-乙氧基乙基、2-甲氧基丙基、3-甲氧基丙基、2-乙氧基丙基、3-乙氧基丙基、2-羟基乙基、2-羟基丙基、3-羟基丙基、2-氯乙基、2-溴乙基、2-氯丙基、3-氯丙基、2-溴丙基、3-溴丙基、2-羧基乙基、2-羧基丙基、3-羧基丙基、2-甲氧基羰基乙基、2-乙氧基羰基乙基、2-甲氧基羰基丙基、3-甲氧基羰基丙基、2-乙氧基羰基丙基、3-乙氧基羰基丙基、2-丙烯酰氧基乙基、2-丙烯酰氧基丙基、3-丙烯酰氧基丙基、2-异丁烯酰氧基乙基、2-异丁烯酰氧基丙基、3-异丁烯酰氧基丙基、2-羟基磺酰基乙基、2-羟基磺酰基丙基、3-羟基磺酰基丙基、2-乙酰基氨基乙基、2-乙酰基氨基丙基、3-乙酰基氨基丙基、2-甲基氨基甲酰基乙基、2-乙基氨基甲酰基乙基、2-甲基氨基甲酰基丙基、3-甲基氨基甲酰基丙基、2-乙基氨基甲酰基丙基、3-乙基氨基甲酰基丙基、2-甲基氨基甲酰基氧基乙基、2-乙基氨基甲酰基氧基乙基、2-甲基氨基甲酰基氧基丙基、3-甲基氨基甲酰基氧基丙基、2-乙基氨基甲酰基氧基丙基、3-乙基氨基甲酰基氧基丙基、2-(三甲基铵)乙基、2-(三乙基铵)乙基、2-(三甲基铵)丙基、3-(三甲基铵)丙基、2-(三乙基铵)丙基、3-(三乙基铵)丙基、2-(三苯基鏻)乙基、2-(三苯基鏻)丙基、或3-(三苯基磷)丙基。
式Ⅳ或Ⅴ中的An衍生自例如有机或无机酸阴离子。在这种连接中，特别优选的是甲磺酸盐、4-甲基苯磺酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、七氟丁酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、高氯酸盐、四氟硼酸盐、硝酸盐、六氟磷酸盐、或四苯基硼酸盐。
式Ⅵ中的J是例如亚甲基、亚乙基、1,2-亚丙基、1,3-亚丙基、1,2-亚丁基、1,3-亚丁基、2,3-亚丁基、1,4-亚丁基、1,5-亚戊基、1,6-亚己基、七亚甲基、八亚甲基、九亚甲基、十亚甲基、十一亚甲基、或十二亚甲基。
式Ⅵ中的T2、T3、T4和T5分别是例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、2-甲基丁基、己基、2-甲基戊基、庚基、辛基、2-乙基己基、异辛基、壬基、异壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、氟甲基、氯甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、2-氟乙基、2-氯乙基、2-溴乙基、1,1,1-三氟乙基、七氟丙基、4-氯丁基、5-氟戊基、6-氯己基、氰基甲基、2-氰基乙基、3-氰基丙基、2-氰基丁基、4-氰基丁基、5-氰基戊基、6-氰基己基、2-氨基乙基、2-氨基丙基、3-氨基丙基、2-氨基丁基、4-氨基丁基、5-氨基戊基、6-氨基己基、2-羟基乙基、2-羟基丙基、3-羟基丙基、2-羟基丁基、4-羟基丁基、5-羟基戊基、6-羟基己基、2-甲氧基乙基、2-乙氧基乙基、2-丙氧基乙基、2-异丙氧基乙基、2-丁氧基乙基、2-甲氧基丙基、2-乙氧基丙基、3-乙氧基丙基、4-乙氧基丁基、4-异丙氧基丁基、5-乙氧基戊基、6-甲氧基己基、苄基、1-苯基乙基、2-苯基乙基、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、2-(4-甲基苯基)乙基、羧基甲基、2-羧基乙基、3-羧基丙基、4-羧基丁基、5-羧基戊基、6-羧基己基、甲氧基羰基甲基、乙氧基羰基甲基、2-甲氧基羰基乙基、2-乙氧基羰基乙基、3-甲氧基羰基丙基、3-乙氧基羰基丙基、4-甲氧基羰基丁基、4-乙氧基羰基丁基、5-甲氧基羰基戊基、5-乙氧基羰基戊基、6-甲氧基羰基己基、或6-乙氧基羰基己基。
式Ⅵ中的T1是例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、异丙氧基羰基、丁氧基羰基、异丁氧基羰基、仲丁氧基羰基、叔丁氧基羰基、戊氧基羰基、异戊氧基羰基、新戊氧基羰基、叔戊氧基羰基、己氧基羰基、庚氧基羰基、辛氧基羰基、异辛氧基羰基、壬氧基羰基、异壬氧基羰基、癸氧基羰基、异癸氧基羰基、十一烷氧基羰基、十二烷氧基羰基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、戊氧基、己氧基、乙酰基氨基、氨基甲酰基、一甲基氨基甲酰基、二甲基氨基甲酰基、一乙基氨基甲酰基、二乙基氨基甲酰基、一环己基羰基、苯基氨基甲酰基、二甲基氨基甲酰基氧基、或二乙基氨基甲酰基氧基。
特别值得注意的标记物还包括式Ⅱa萘菁染料其中Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7和Y8分别独立地为氢、羟基、C1-C4-烷基、或C1-C20-烷氧基，Me2是Me1或基团其中R19是C1-C13-烷基或C10-C20-链二烯基，且Y20和Y21分别独立地为C1-C13-烷基或C2-C4-链烯基。
需要特别指出的是其中Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7和Y8分别独立地为羟基、C1-C20-烷氧基、尤其是C1-C10-烷氧基的式Ⅱa萘菁染料。所述烷氧基可相同或不同。需要进一步特别指出的是其中Me2是2个氢的式Ⅱa萘菁染料。
特别值得注意的标记物还包括式Ⅲ镍-二硫杂环戊二烯复合物，其中L1、L2、L3和L4分别独立地为苯基、C1-C20-烷基苯基、C1-C20-烷氧基苯基、或被羟基或C1-C20-烷基取代的苯基，或者L1与L2以及L3与L4分别一起形成式所示基团。
需要特别指出的是其中L1和L4分别为苯基、且L2和L4分别为式4-[C2H5-C(CH3)2]-C6H4所示基团的式Ⅲ镍-二硫杂环戊二烯复合物。
在本发明方法和优选实施方案中使用的标记物优选为上述式Ⅰa酞菁染料和在US5525516的表3中列出的酞菁染料、上述式Ⅱ萘菁染料和在US5525516的表4中列出的萘菁染料，特别优选为上述式Ⅱa萘菁染料。需要特别指出的是其中Me1或Me2为两个氢的酞菁染料和萘菁染料。
酞菁染料通常覆盖600-约850nm的光谱区域，萘菁染料通常覆盖约800nm以上的光谱区域。
式Ⅰa酞菁染料本身是已知的，并描述在例如DE-B-1073739或EP-A-155780中，或者可通过常规方法制得，例如用于制备酞菁染料或萘菁染料的方法，和在例如F.H.Moser,A.L.Thomas“萘菁染料”，CRC Press,Boca Rota,Florida,1983，或J.Am.Chem.Soc.Volume 106，第7404-7410页，1984中描述的方法。式Ⅰb酞菁染料本身同样是已知的，并描述在例如EP-A-155780中，或者可通过上述现有技术(Moser,J.Am.Chem.Soc.)的方法制得。
式Ⅱ萘菁染料本身也是已知的，并描述在例如EP-A-336213、EP-A-358080、GB-A-2168372或GB-A-2200650中，或者可通过上述现有技术(Moser,J.Am.Chem.Soc.)的方法制得。
式Ⅲ镍-二硫杂环戊二烯复合物本身也是已知的，并描述在例如EP-A-192215中。
式Ⅳ铵化合物本身也是已知的，并描述在例如US-A-3484467中，或者可通过其中所述的方法制得。
式Ⅴ次甲基染料本身也是已知的，并描述在例如EP-A-464543中，或者可通过其中所述的方法制得。
US5525516和US5703229以及它们各自的引用文献中描述了方形酸染料的制备。
US5525516及其引用文献中描述了克酮酸染料的制备。
式Ⅵ薁方形酸染料本身也是已知的，并描述在例如EP-A-310080或US-A-4990649中，或者可通过其中所述的方法制得。
可用作为标记物的至少两种上述化合物的组合通过本发明方法标记的液体一般是有机液体，例如醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、异丁醇、仲丁醇、戊醇、异戊醇、新戊醇或己醇，二醇，例如1,2-乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、1,2-丁二醇、2,3-丁二醇、1,4-丁二醇、二甘醇、三甘醇、一缩二丙二醇、或二缩三丙二醇，醚，例如甲基叔丁基醚、1,2-乙二醇一甲基醚、1,2-乙二醇二甲基醚、1,2-乙二醇一乙基醚、1,2-乙二醇二乙基醚、3-甲氧基丙醇、3-异丙氧基丙醇、四氢呋喃或二氧杂环己烷，酮，例如丙酮、甲基乙基酮或双丙酮醇，酯，例如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸丁酯，脂族或芳族烃，例如戊烷、己烷、庚烷、辛烷、异辛烷、石油醚、甲苯、二甲苯、乙基苯、四氢萘、十氢萘、二甲基萘、石油溶剂，天然油，例如橄榄油、豆油、向日葵籽油，或天然或合成机油、液压油或齿轮油，例如汽车机油或缝纫机油、或制动液，矿物油，例如汽油、煤油、柴油或燃料油。
上述化合物可特别用于标记其中某些鉴定是强制性的、例如出于纳税原因而进行强制性鉴定的矿物油。为了使这种鉴定的成本维持最低，并且使标记的矿物油与其它存在组分的可能相互作用减至最小，需要将标记物的量保持在尽可能小的水平。将标记物的量保持在尽可能小的水平上的另一原因是，可以抑制标记物可能具有的破坏作用，例如对内燃机的燃料入口和废气出口区域有破坏作用。
如上所述，通常需要使用具有高荧光量子产率、即能将高比例的所吸收的放射量子作为荧光量子再发射出去的标记化合物来标记液体。
以能保证可靠检测的量将用作标记物的这些化合物加到液体中。标记物在标记液体中的总量(按重量计)通常为约0.1-5000ppb，优选为1-2000ppb，特别优选为1-1000ppb。
为了标记液体，通常将上述用作标记物的化合物，或者更准确地说，将至少两种标记物的组合以溶液(贮备液)形式加入。当欲标记的液体是矿物油时，用于制备这些贮备液的溶剂优选为芳香烃，例如甲苯、二甲苯或高沸点芳香烃混合物。
为了避免使贮备液具有太高的粘度(从而具有差的可计量性和可操作性)，通常将标记物的总浓度设置为占这些贮备液总重量的0.5-50％。
本发明还提供了检测通过本发明方法或其优选实施方案标记的液体中标记物的方法，包括使用在所述标记物的吸收范围内发射放射线的光源，并检测所述标记物再发射的荧光，其中至少一个所述光源在至少一种标记物与至少另一种其他标记物的重叠吸收范围发射放射线，并且光源的数目少于或等于标记物的数目。
将使用下述定义：其中消光系数等于在标记物Mμ最大吸收处的消光系数的x％或x％以上的标记物Mμ的波长范围定义为“x％波长间隔”Lμ(x)。因为，例如在优选实施方案中的标记物数目n为2-10或2-6或2-4,μ可分别相应地为1-10或1-6或1-4的整数数值(分别相当于标记物M1、M2、M3、…、M9、M10或M1、M2、M3、…、M5、M6或M1、M2、M3、M4)。则相应的间隔分别为L1(x)、L2(x)、…、L9(x)、L10(x)或L1(x)、L2(x)、…、L5(x)、L6(x)或L1(x)、L2(x)、L3(x)、L4(x)。这些间隔通常是连接的，但是也可以不连接。例如，具体间隔Lμ(x)还可以由2个或2个以上亚间隔组成，这些亚间隔的全体(并集)称为Lμ(x)。
根据标记物和/或欲标记的液体，x的值可单独选取，或可作为特殊要求的函数“定义”标记物Mμ的吸收范围。当欲标记的液体具有高度吸收时，对于x，例如10、20、25或甚至50的值是可取的。相反，当标记物具有高吸收能力和/或欲标记液体在所确定的波长范围具有很小吸收(若有的话)时，例如5或3的x值就足够了。依据这些x值，例如L3(10)、L3(20)和L3(25)是表示波长间隔，其中标记物M3在这些间隔内的消光系数分别至少为在M3最大吸收处的消光系数的10％、20％或25％。同样，L3(5)和L3(3)是用于定义波长间隔，其中标记物M3在这些间隔内的消光系数分别至少为在M3最大吸收处的消光系数的5％和3％。甚至在全体标记物内使用不同x值也是可取的。为了简明起见，在下文中Lμ(x)(代表标记物Mμ的x％间隔)只写为Lμ。
用于依据本发明进行标记的不同标记物Mμ的间隔Lμ(x)的定义还基于在可比条件下(已经根据测定中所用溶剂的空白值校正过)测定的、它们各自的吸收光谱。
与上述观察相一致的是，其中标记物Mμ的最大吸收位于其中的波长间隔可同样称为间隔Lμ(x)。在这种情况下，按照需要，x可以为例如80、90、95或甚至99的值。
在与其中标记物数目n为数值6的优选实施方案相对应的示例中，6种不同标记物M1、M2、M3、M4、M5和M6产生间隔L1、L2、L3、L4、L5和L6。以数学术语来说，这些间隔的重叠区域是它们的交集，因此在本文中称为Lμν。它们可系统列为：L1∩L2=L12(μ=1,ν=2),L1∩L3=L13(μ=1,ν=3),L1∩L4=L14(μ=1,ν=4),L1∩L5=L15(μ=1,ν=5),L1∩L6=L16(μ=1,ν=6),L2∩L3=L23(μ=2,ν=3),L2∩L4=L24(μ=2,ν=4),L2∩L5=L25(μ=2,ν=5),L2∩L6=L26(μ=2,ν=6),L3∩L4=L34(μ=3,ν=4),L3∩L5=L35(μ=3,ν=5),L3∩L6=L36(μ=3,ν=6),L4∩L5=L45(μ=4,ν=5),L4∩L6=L46(μ=4,ν=6),和L5∩L6=L56(μ=5,ν=6)。间隔Lμ自身的重叠区域(Lμν，其中ν=μ)可类似地定义为：L1∩L1=L11=L1(μ=1,ν=1),L2∩L2=L22=L2(μ=2,ν=2),L3∩L3=L33=L3(μ=3,ν=3),L4∩L4=L44=L4(μ=4,ν=4),L5∩L5=L55=L5(μ=5,ν=5),和L6∩L6=L66=L6(μ=6,ν=6)。
在总共n种标记物中，任意两种标记物之间的可能重叠区域的数目N通常按N=n/2·(n-1)计算。因此在n等于6的本示例中，获得了上述15个重叠间隔。应当理解，各自的重叠区域Lμν(例如L34)当然等同于重叠区域Lνμ(例如L43)，因此不再重复考虑。
依据本发明，至少一致标记物的吸收范围应当与至少另一种标记物的吸收范围重叠。例如6种标记物M1-M6，这意味着15个重叠区域中必须至少有一个是非空集。
可能性如下所述，例如：A)所有相邻波长间隔Lμ和L(μ+1)都形成非空重叠(交集)；所有不相邻的波长间隔Lμ和Lν(ν＞μ+1)都不具有任何“高级”重叠(交集)，即都形成空集，即：对于ν=μ+1或ν=μ-1,Lμν≠{φ}；对于ν≠μ+1或ν≠μ-1,Lμν={φ}(“高级”重叠)。
这意味着在上述示例中，仅存的重叠是L12、L23、L34、L45和L56(和与间隔L1、L2、L3、L4、L5和L6等同的L11、L22、L33、L44、L55和L66)。所有其它重叠都是空集。通过使用在这些重叠区域发射的5个光源，所有6种标记物M1-M6都被激发以再发射荧光，其中每一光源同时激发两种标记物。一般情况下，在区域L12、L23、…、L(n-2)(n-1)和L(n-1)n发射的n-1个光源将激发n种标记物Mμ。此外，标记物M1和Mn(例如M6)分别仅具有一个重叠区域(L12或L(n-1)n例如L56)，而其它标记物(例如M2-M5)分别具有两个重叠区域(例如Mμ具有重叠区域L(μ-1)μ和Lμ(μ+1))。B)至少一种标记物Mμ具有与标记物M(μ+2)的波长间隔L(μ+2)交叉以形成“高级”重叠Lμ(μ+2)的波长间隔Lμ。如果该“高级”重叠区域与通常也是如此的标记物M(μ+1)的波长间隔L(μ+1)重叠，则将产生间隔Lμ、L(μ+1)和L(μ+2)的“三重”重叠Lμ(μ+1)(μ+2)。因此，通过使用在该区域发射的光源，就能同时激发标记物Mμ、M(μ+1)和M(μ+2)以再发射荧光。如果采用数学术语，其可用下述公式表示：对于ν=μ+2,Lμν≠{φ}，即(Lμ(μ+2)=)Lμ∩L(μ+2)≠{φ}；和L(μ+1)∩[Lμ∩L(μ+2)]=L(μ+1)∩Lμ∩L(μ+2)=Lμ∩L(μ+1)∩L(μ+2)=Lμ(μ+1)(μ+2)≠{φ}。
在上述示例中，有6种标记物M1-M6，这意味着有例如与间隔L2(重叠L22)重叠的重叠区域L13，即形成交集(L1∩L3)∩L2=L1∩L3∩L2=L1∩L2∩L3，可按照与上述2个间隔的交集类似的方式将该交集简写为3个间隔的交集L123(或通常为Lμνω)。其还可以直接表示为：Lμνω=Lμων=Lνωμ=Lνμω=Lωμν=Lωνμ，即所有“置换”区域彼此都相等。
通过使用例如在重叠L123、L45和L56发射的3个光源，可将所有6种标记物M1-M6都激发以再发射荧光，其中光源(L123)同时激发标记物M1、M2和M3，光源(L45)和(L56)分别同时激发标记物M4和M5以及标记物M5和M6。或者，在后一情况下，也可使用不在区域L56而仅在区域L66-L56、即在间隔L6减L5与L6的重叠(交集)中发射的光源。这样将只激发标记物M6，但是不激发标记物M5。
如果另外还有重叠L456，则仅仅2个分别在区域L123和L456发射的光源就足以激发所有6种标记物M1-M6的荧光发射，同时激发标记物M1、M2和M3，以及同时激发标记物M4、M5和M6。
Mμ′表示不彼此重叠、但是各自具有比得上标记物Mμ的最大吸收波长的标记物。
对于相当于上述方案A)的混合物，即具有区域L12、L23、L34、L45和L56(和等同于间隔L1、L2、L3、L4、L5和L6的区域L11、L22、L33、L44、L55和L66)的6种标记物M1-M6的混合物，可仅仅用5个合适的光源(称为a(Lμν)，即a(L12)、a(L23)、a(L34)、a(L45)和a(L56))即可将所有标记物激发。与之相反，6种标记物M1′、M2′、M3′、M4′、M5′和M6′的混合物不能被光源a(L12)-a(L56)激发以再发射荧光。这种混合物与现有技术例如US5525516提出使用的混合物相一致。
上述方案B)也同样如此。单个光源a(L123)能激发标记物M1、M2和M3。对于标记物M1′、M2′和M3′，只有标记物M2′能被激发(如果其最大吸收波长在区域L123内的话)。然而，标记物M1′和M3′不能被该光源激发以再发射荧光。
依据本发明，还可使用例如具有重叠L123、L34、L55(=L5)和L66(=L6)的标记物M1-M6来标记液体。光源a(L123)、a(L34)、a(L55)和a(L66)将激发所有标记物。与之相反，对于标记物M1′-M6′，这些光源将仅激发标记物M5′、M6′和也许是M2′，但是不激发标记物M1′、M3′和M4′。
此外，依据本发明，可使用例如(按定义)具有重叠L12的标记物M1和M2的混合物。如果例如标记物M1最大吸收的波长间隔(该“主要吸收范围”可按需定义为例如L1(80)、L1(90)、L1(95)或L1(99))(参见上文)落入区域L12内，则可使用在标记物M1和M2各自的最大吸收(或各自的“最大吸收范围”)(例如一个是L1(80)、L1(90)、L1(95)或L1(99)，另一个是L2(80)、L2(90)、L2(95)或L2(99))发射的2个光源a(L1)和a(L2)。M1再发射的荧光的强度完全决定于从光源L(1)所吸收的放射强度。与之相反，M2再发射的荧光的强度是由M2从光源a(L2)和光源a(L1)在重叠区域L12吸收的放射强度决定的。对于M1′和M2′的混合物，M1′或M2′再发射的荧光的强度分别完全是由各自从光源a(L1)和a(L2)吸收的放射强度决定的。该M1′和M2′的混合物与现有技术例如US 5525516提出使用的混合物相一致。
还可以使用相当于方案A)和/或方案B)的标记物与跟其它标记物没有任何重叠区域的标记物的混合物。作为进一步防止欺诈性作假的保护措施，可通过检测由不同的、确定的光源组合激发的荧光来检测标记物。通过下文中的方案来举例说明，但是这并不表示对本发明的任何限制。实施例1：标记物M1-M4具有重叠L12、L23和L34。与标记物M1-M4各自的最大吸收对应的波长间隔L1(x)、L2(x)、L3(x)和L4(x)(这些“主要吸收范围”可定义为例如Lμ(x)，其中x是例如80、90、95或99(％)，参见上文)与区域L12、L23和L34无任何重叠(交集)。组合1.1：使用光源a(L1(x))、a(L2(x))、a(L3(x))和a(L4(x))。标记物再发射它们各自的荧光。没有任何组合激发的荧光。组合1.2：使用光源a(L12)、a(L23)和a(L34)。标记物再发射它们各自的由于组合激发所产生的荧光。a(L12)激发标记物M1和M2，a(L23)激发标记物M2和M3,a(L34)激发标记物M3和M4，以再发射荧光。如果标记物M1-M4同时被光源激发，则由a(L12)和a(L23)导致的激发与由a(L23)和a(L34)导致的激发分别决定标记物M2和M3的荧光强度。如果标记物被光源依次激发，则再发射的荧光是以各自的亚光谱形式获得的，所述亚光谱表现出由于标记物M2和M3所致的、不同于前一情形的荧光强度分布。然而，可将这些(3个)亚光谱合并起来(通过算术方法，例如通过适当计算机程序)以形成前一情形的整个光谱。通常情况下，组合1.2(组合激发)的标记物M1-M4的荧光发射强度分布与组合1.1的强度分布不同。因此，对于标记物混合物或包含该标记物混合物的液体，依据组合1.1和1.2的检测顺序就产生了“双重指纹”。当然，在组合1.1和1.2中描述的光源也可彼此组合。实施例2：标记物M1-M4具有重叠L12、L23和L34。与标记物M1-M4各自的最大吸收对应的波长间隔L1(x)、L2(x)、L3(x)和L4(X)(这些“主要吸收范围”可定义为例如Lμ(x)，其中x是例如80、90、95或99(％)，参见上文)与区域L12、L23和L34有重叠(交集)，例如L12∩L1(x)≠{φ}、L23∩L2(x)≠{φ}、L23∩L3(x)≠{φ}、以及L34∩L4(x)≠{φ}。组合2.1：使用光源a(L1(x))、a(L2(x))、a(L3(x))和a(L4(x))。标记物再发射它们各自的由于组合激发所产生的荧光。a(L1(x))激发标记物M1和M2,a(L2(x))和a(L3(x))激发标记物M2和M3,a(L4(x))激发标记物M3和M4，以再发射荧光。组合2.2：使用光源a(L1(x))、a(L3(x))和a(L4(x))。标记物再发射它们各自的由于组合激发所产生的荧光。a(L1(x))激发标记物M1和M2,a(L3(x))激发标记物M2和M3,a(L4(x))激发标记物M3和M4,以再发射荧光。关于通过光源的同时或依次激发，与实施例1组合1.2相联系的注释在此处也同样适用。然而，强度比例与组合2.1所产生的强度比例不同。组合2.3：使用光源a(L12)、a(L23)和a(L34)。标记物再发射它们各自的由于组合激发所产生的荧光。a(L12)激发标记物M1和M2，a(L23)激发标记物M2和M3,a(L34)激发标记物M3和M4，以再发射荧光。关于通过光源的同时或依次激发，与实施例1组合1.2相联系的注释在此处也同样适用。通常情况下，组合2.3的标记物M1-M4的荧光发射强度分布与组合2.1以及2.2的强度分布不同。因此，对于标记物混合物或包含该标记物混合物的液体，依据组合2.1、2.2和2.3的检测顺序就产生了“三重指纹”。当然，在组合2.1、2.2和2.3中描述的光源也可彼此组合。
为了依据本发明标记液体，应当理解，也可使用标记物的相对量不同的标记物组合。例如，可用其中M1-M4的摩尔比为M1∶M2∶M3∶M4=1∶1∶1∶1的标记物混合物来标记液体，可用比例为例如2∶1∶1∶1、4∶1∶1∶1、8∶1∶1∶1、2∶2∶1∶1、2∶4∶1∶1、2∶8∶1∶1、4∶4∶1∶1、4∶8∶1∶1、8∶8∶1∶1、2∶2∶2∶1、2∶2∶4∶1、2∶2∶8∶1、2∶2∶2∶2、2∶2∶2∶4、2∶2∶2∶8或比例为其适当置换的标记物混合物来标记另一液体。
如果想仅用不同浓度的固定的标记物混合物(例如M1-M4)标记不同液体，则各自的浓度通常选取为使液体与液体之间至少由于两个因子而不同，以保证检测的无歧义性。然而，优选用彼此间标记物摩尔比例不同的标记物混合物来标记不同液体。
激发和检测依据本发明标记的液体中的荧光的基本构造包括：盛有标记液体的样本比色杯，激发单位(A)，包括：α1)通常装配有准直镜片的光源，和α2)位于光源对面远离光源的样本比色杯一侧、并反射透射放射以增强照射到样本内的强度的平面镜，检测单位(D)，包括δ1)光检测器(通常具有准直镜片)，在其前面通常有安置的滤光器(例如截止或干涉滤光器)和任选安置的NIR偏振器，其中该光检测器是以使沿其方向再发射的荧光是入射(或成像)光并被检测的方式布置的，和δ2)位于光检测器对面远离光检测器的样本比色杯一侧、并反射以相反方向(远离光检测器)再发射的荧光并由此增强检测灵敏度的凹面镜。
WO94/02570中大体上阐明了这种构造(在光源的放射检测方面不同)。荧光无需垂直检测，但是实际上可以以关于放射检测的任意所需角度检测。然而，通常不采用0°-180°的角度。
下文中的观测将采用下述定义：
通常意义上的激发和检测单位分别称为A和D(参见上文)。通常意义上的标记物将称为M。
利用适当光源调节至具体波长间隔Lμ(与“重叠”Lμμ或Lμμμ同义)、重叠Lμν或重叠Lμνω(即光源在标记物Mμ的波长间隔Lμ中、在标记物Mμ与Mν的重叠区域中、或在标记物Mμ、Mν和Mω的重叠区域中发射放射线)的激发单位始终称为A(Lμνω)，或更简短地称为Aμνω，或者不同的这种单位称为Aμ1ν1ω1、…、AμnVnωn，其中例如n等于2-10或2-6或2-4，参数μ、ν和ω(或μ1、…、μn,ν1、…、νn，和ω1、…、ωn)可分别为1-10、1-6和1-4的值。当然，由于上述Lμνω的定义，多个单位Aμνω是等同的。例如，由于L123定义为L1∩L2∩L3(=L3∩L1∩L2=L2∩L3∩L1=L2∩L1∩L3=L1∩L3∩L2=L3∩L2∩L1)，单位A123(μ1=1、ν2=2且ω3=3)、A312(μ3=3、ν1=1且ω2=2)、A231(μ2=2、ν3=3且ω1=1)、A213(μ2=2、ν1=1且ω3=3)、A1 32(μ1=1、ν3=3且ω2=2)和A321(μ3=3、ν2=2且ω1=1)是等同的。与单个单位相同的这些另外单位不应当再考虑，就象在开头给出的定义重叠区域的等同重叠Lμν和Lνμ一样。
当然，高级“重叠”例如Lμνωχ等和适当的光源Aμνωχ等是可能的。然而，本文中不再另外考虑这些高级“重叠”。
必须认为Aμ、Aμμ和Aμμμ是同义的术语，并且是指在标记物Mμ的波长间隔Lμ(=Lμμ=Lμμμ)内发射放射线的同等激发单位。
通过例如适当滤光器(和任选的偏振器)被特定调节至从一种标记物Mμ中再发射的荧光上的特定检测单位称为Dμ(或检测通道μ)。
因此，例如可给3种标记物M1、M2和M3指定激发单位A1(=A11=A111)、A2(=A22=A222)、A3(=A33=A333)、A12(=A112=A122)、A13(=A113=A133)、A23(=A223=A233)和A123，以及相适应的检测单位D1、D2和D3。
此外，对于例如2种标记物M1和M2(如果它们有重叠区域L12)，对于所述标记物M1和M2的荧光，也可用等同的单位A12来激发。然后通过各自的单位D1和D2来检测荧光。于是该激发和检测组合可写为A12/D1和A12/D2。
如果在激发单位A中，仅仅是通过使用适当的光源α1μνω来使其与各自的重叠Lμνω相适应(即该光源在标记物Mμ的波长间隔Lμ中、在标记物Mμ与Mν的重叠区域中、或在标记物Mμ、Mν和Mω的重叠区域中发射放射线)，则对于n种标记物，该激发单位称为A(μ1ν1ω1、…、μnνnωn)，其中例如n等于2-10或2-6或2-4，参数μ1、…、μn,ν1、…、νn,和ω1、…、ωn可分别为1-10、1-6和1-4的值。例如，A(111,112,223)(=A(1,12,23))表示激发单位，该激发单位可通过使用光源α1111(=α11)、α1112(=α112)和α1223(=α123)而与标记物M1的波长间隔L1(重叠L111)和标记物M1与M2以及M2与M3的重叠L12和L23相适应。
对于其中仅仅是通过使用适当的光检测器和/或滤光器(和任选的偏振器)来使检测单位与各标记物Mμ再发射的荧光相适应的检测单位Dμ，当有n种标记物时，该检测单位称为D(1,2)、D(1,2,3)等一直到D(1,2,3,…,9,10)，或D(1,2)、D(1,2,3)等一直到D(1,2,…,5,6)，或D(1,2)、D(1,2,3)、D(1,2,3,4)，此处n依次等于例如2-10或2-6或2-4。
如果n种标记物Mμ(其中n为例如2-10或2-6或2-4)的重叠Lμνω分别依次被与其适应的各单位Aμνω激发，并且各标记物Mμ再发射的荧光是通过Dμ检测的，则这可分别通过符号“Aμ1ν1ω1/D1、Aμ2ν2ω2/D2、…”等一直到“…Aμ9ν9ω9/D9、Aμ10ν10ω10/D10”，或“Aμ1ν1ω1/D1、Aμ2ν2ω2/D2、…”等一直到“…Aμ5ν5ω5/D5、Aμ6ν6ω6/D6”，或“Aμ1ν1ω1/D1、Aμ2ν2ω2/D2、Aμ3ν3ω3/D3、Aμ4ν4ω4/D4”来表示。
如果用适当数目的单位Aμνω将n种标记物Mμ的重叠Lμνω同时激发，并用n个单位Dμ同时检测它们再发射的荧光，则这可写为“Aμ1ν1ω1/Aμ2ν2ω2/…/Aμnνnωn/D1/D2/…/Dn”。注解：在上述排列中，可存在n个或更少的单位Aμνω。为了简明起见，将这些单位Aμνω写为“Aμ1ν1ω1/Aμ2ν2ω2/…/Aμnνnωn”。
如果用适当数目的单位Aμνω将n种标记物的重叠Lμνω同时激发，并用一个单位D、例如多波长检测器(由光学分散元件例如棱镜或隔膜和直线检测器或平面检测器构成)检测标记物Mμ再发射的荧光，则这可写为“Aμ1ν1ω1/Aμ2ν2ω2/…/Aμnνnωn/D”。
实际上，通过单位A激发的标记样本之间必须有区别，Ⅰ)在相同样本体积中Ⅱ)在不同样本体积中。
对于情况Ⅰ)，可使用下述方法和检测装置的示例性构造(此处n为例如2-10或2-6或2-4)：Ⅰ.1)Aμ1ν1ω1/D1、Aμ2ν2ω2/D2、…、Aμn-1νn-1ωn-1/Dn-1、Aμnνnωn/Dn(n种标记物Mμ分别在重叠Lμνω中由其相应的单位Aμνω激发，通过单位Dμ分别检测标记物Mμ的荧光发射)。a)该构造与开头提及的和在WO94/02570中举例说明构造基本一致。不同之处在于，对于每一标记物Mμ，都使用适当的单位Aμνω和Dμ。可采取径向环绕着样本比色杯的多(等于欲检测的标记物的数目)对单位Aμνω和Dμ的空间偏转排列的形式。样本比色杯优选具有圆形截面。然而，通过单位Aμνω照射的样本体积(或样本路径)不是严格地完全相同的。但是激发射线(位于一个平面上)在一片共用样本体积中交叉。多个单位Aμνω可(并且通常是)相同。例如，当有3种标记物M1-M3(例如具有重叠L12和L23)时，适当的(三)对A12/D1、A12/D2和A23/D3或A12/D1、A23/D2和A23/D3可用于激发和检测。n种标记物Mμ的激发和检测组合不仅可依次进行，还可同时进行。b)该构造与开头提及的和在WO94/02570中举例说明构造基本一致。不同之处在于，单位Aμνω与Dμ的光源α1μνω和光检测器δ1μ分别位于适当转盘上(代替单个的平面镜α2μνω和凹面镜δ2μ，在这种情况下，每次仅使用一个固定的平面镜或凹面镜是可取的)。为了检测标记物Mμ，分别通过转动各自的转盘将相应的光源α1μνω和相应的先检测器δ1μ移到激发和检测位置。对于测定的每一标记物，穿过标记样本的射线轨道以及照射的样本体积都相同。n种标记物Mμ的激发和检测组合仅可依次进行。c)通过使用例如可在一端或两端用窗户(该窗户是用与比色杯相同的材料制得的)密封、或在两端被密封并优选具有侧面样本入口和出口的圆柱形样本比色杯，可实现对构造的修饰。与a)下面的描述相似的是，单位Aμνω的光源α1μνω可位于转盘上(在这种情况下，仅使用一个固定的平面镜以替代单个的面镜α2μνω是可取的)。各个单位Aμνω以与比色杯纵轴平行的方向照射样本。可将各个单位Dμ(这次当然还有它们各自的亚单位δ2μνω)环绕着样本比色杯径向放置(因此总是与激发光的放射方向垂直)以检测样本再发射的荧光。n种标记物Mμ的激发和检测组合仅可依次进行(当然，潜在情形是，多个标记物同时再发射的荧光可通过单位Dμ同时检测)。Ⅰ.2)A/D1、A/D2、…、A/Dn-1、A/Dn(所有n种标记物Mμ都由“多色”光源同时激发，并通过它们各自检测通道Dμ检测)。a)该构造可与在Ⅰ.1)的b)中描述的构造类似。然而，仅使用一个多色激发单位A，以替代用于亚单位α1μνω的适当转盘。依据Ⅰ.1)的b)中描述的构造进行检测。n种标记物Mμ的激发和检测组合仅可依次进行。b)如果依据Ⅰ.1)的c)中描述的构造使用圆柱形样本比色杯，则例如单位A将以与比色杯纵轴平行的方向照射样本。将各个单位Dμ环绕着样本比色杯径向放置(因此与激发光的放射方向垂直)。n种标记物Mμ的激发和检测组合既可依次进行，也可同时进行。Ⅰ.3)Aμ1ν1ω1/D、Aμ2ν2ω2/D、…、Aμn-1νn-1ωn-1/D、Aμnνnωn/D(n种标记物Mμ分别在重叠Lμνω中由相应的单位Aμνω激发，并通过单位Dμ分别检测标记物Mμ的荧光发射)。a)该构造可与在Ⅰ.1)的b)中描述的构造类似。然而，仅使用一个检测单位D、例如多波长检测器，以替代用于光检测器δ1μ的适当转盘。依据Ⅰ.1)的b)中描述的构造进行激发。n种标记物Mμ的激发和检测组合仅可依次进行。b)如果依据Ⅰ.1)的c)中描述的构造使用圆柱形样本比色杯，则例如单位D以与比色杯纵轴平行的方向检测再发射的荧光。将各个单位Aμνω(以及它们相应的平面镜α2μνω)环绕着样本比色杯径向放置(因此与比色杯的纵轴垂直)。n种标记物Mμ的激发和检测组合既可依次进行，也可同时进行。
此处所提及的构造可能性比得上在Ⅰ.2)的a)和b)中提及的构造可能性，并且仅在激发和检测单位的空间交替方面有所不同。Ⅰ.4)A(μ1ν1ω1、μ2ν2ω2、…、μn-1νn-1ωn-1、μnνnωn)/D1,A(μ1ν1ω1、μ2ν2ω2、…、μn-1νn-1ωn-1、μnνnωn)/D2,…,A(μ1ν1ω1、μ2ν2ω2、…、μn-1νn-1ωn-1、μnνnωn)/Dn-1,A(μ1ν1ω1、μ2ν2ω2、…、μn-1νn-1ωn-1、μnνnωn)/Dn(n种标记物Mμ分别在重叠Lμνω被激发，并通过它们各自的检测通道Dμ来检测)。a)该构造可与在Ⅰ.2)的a)中描述的构造类似。然而，用例如(实例a1)包含可互换光源α1μνω的激发单位A来替代用于光源α1μ的转盘。然而，A还可包含各自的照射是例如(实例a2)通过光导纤维或光导纤维束或光源单个射线的共线重叠(通过光元件，例如分束器、二色分束器、隔膜等)而定向的多光源α1μνω，这样射线将在相同位置进入样本比色杯。依据Ⅰ.2)的a)中描述的构造检测各自的荧光。n种标记物Mμ的激发和检测组合仅可依次进行。b)如果依据Ⅰ.1)的c)中描述的构造使用圆柱形样本比色杯，则例如a)中所述单位A(实例a1或实例a2)将以与比色杯纵轴平行的方向照射样本。将各个单位Dμ环绕着样本比色杯径向放置(因此每一Dμ都与激发光的放射方向垂直)。使用与实例a1相对应的单位A,n种标记物Mμ的激发和检测组合仅可依次进行。使用与实例a2相对应的单位A,n种标记物Mμ的激发和检测组合既可依次进行，也可能同时进行。Ⅰ.5)Aμ1ν1ω1/D(1,2,…,n-1,n)、Aμ2ν2ω2/D(1,2,…,n-1,n)、…、Aμn-1νn-1ωn-1/D(1,2,…,n-1,n)、Aμnνnωn/D(1,2,…,n-1,n)(n种标记物Mμ通过它们各自的单位Aμνω分别在重叠Lμνω被激发，并被检测)。a)该构造可与在Ⅰ.1)的b)中描述的构造类似。用例如(实例a1)包含可互换光检测器和/或可互换滤光器(和任选的偏振器)δ1μ的检测单位D来替代用于光检测器δ1μ的适当转盘。然而，D还可包含多个光检测器δ1μ，其中各再发射荧光是例如(实例a2)通过光导纤维或光导纤维束而定向到该光检测器。依据Ⅰ.1)的b)中描述的构造进行激发。n种标记物Mμ的激发和检测组合仅可依次进行。b)如果依据Ⅰ.1)的c)中描述的构造使用圆柱形样本比色杯，则例如a)中所述单位D(实例a1或实例a2)以与比色杯的纵轴平行的方向检测再发射的荧光。将各个单位Aμνω环绕着样本比色杯径向放置(因此与比色杯的纵轴垂直)。使用与实例a1相对应的单位D,n种标记物Mμ的激发和检测组合仅可依次进行。使用与实例a2相对应的单位D,n种标记物Mμ的激发和检测组合既可依次进行，也可同时进行。Ⅰ.6)A(μ1ν1ω1、μ2ν2ω2、…、μn-1νn-1ωn-1、μnνnωn)/D(1,2,…,n-1,n)(n种标记物Mμ分别在重叠Lμνω被激发，并被检测)。
该构造可用例如(实例a1)包含可互换光源α1μνω或各自的照射是例如(实例a2)通过光导纤维或光导纤维束或光源单个射线的共线重叠(通过光元件，例如分束器、二色分束器、隔膜等)而定向的光源α1μνω的激发单位A来实行，这样射线将在相同位置进入样本比色杯。因此可用例如(实例a1)包含可互换光检测器和/或可互换滤光器(和任选的偏振器)δ1μ或各再发射荧光是例如(实例a2)通过光导纤维或光导纤维束定向的多个光检测器δ1μ的检测单位D。对于A(实例a1)/D(实例a1)、A(实例a1)/D(实例a2)和A(实例a2)/D(实例a1)，n种标记物Mμ的激发和检测组合仅可依次进行，对于A(实例a2)/D(实例a2)，n种标记物Mμ的激发和检测组合既可依次进行，也可同时进行。
激发单位和检测单位之间的几何关系基本上符合开头和WO94/02570中描述的情况。Ⅰ.7)Aμ1ν1ω1/Aμ2ν2ω2/…/Aμn-1νn-1ωn-1/Aμnνnωn/D1/D2/…/Dn-1/Dn(n种标记物Mμ在重叠区域被相应的单位Aμ同时激发，并通过单位Dμ同时检测)。
基本上采用在Ⅰ.1)的a)、Ⅰ.2)的b)、Ⅰ.3)的b)、Ⅰ.4)的b)实例a2、Ⅰ.5)的b)实例a2以及Ⅰ.6)的A(实例a2)/D(实例a2)中描述的几何学关系进行n种标记物的同时激发和检测。
在情况Ⅱ)中，即在不同样本体积中进行激发，可使用下述方法和检测装置的示例性构造(此处n为例如2-10或2-6或2-4)：Ⅱ.1)A1/D1、A2/D2、…、An-1/Dn-1、An/Dn(n种标记物Mμ分别在重叠区域Lμνω被相应的单位Aμνω激发，并通过各自的单位Dμ检测)。
各对Aμνω/Dμ的排列基本上与在上文和Ⅰ.1)a)解释的以及在WO94/02570中举例说明的几何学关系相一致。也就是说，单位Aμνω的光轴(相当于激发光束的方向)和相应单位Dμ的光轴位于一个平面上，该平面与样本比色杯的纵轴垂直。这两个光轴形成在0°-180°范围内的角χ，其服从下述定义：在单位Aμνω放射方向上投影，根据相应的单位Dμ是位于该投影方向的右侧还是左侧，该角为+χ或-χ。若用符号表示，其分别为Aμνω(+)Dμ和Aμνω(-)Dμ；即一方面为Aμ1ν1ω1(+)D1、Aμ2ν2ω2(+)D2、Aμ3ν3ω3(+)D3等，另一方面为Aμ1ν1ω1(-)D1、Aμ2ν2ω2(-)D2、Aμ3ν3ω3(-)D3等。空间不同的样本体积的激发(和检测)是通过将各对Aμνω/Dμ在平行平面中排列而实行的。平面的顺序可以为Aμ1ν1ω1(+)D1、Aμ2ν2ω2(+)D2、Aμ3ν3ω3(+)D3、…、Aμnνnωn(+)Dn的形式(等同于Aμ1ν1ω1(-)D1、Aμ2ν2ω2(-)D2、Aμ3ν3ω3(-)D3、…、Aμnνnωn(-)Dn的形式)，或者为例如Aμ1ν1ω1(+)D1、Aμ2ν2ω2(-)D2、Aμ3ν3ω3(+)D3、…、Aμn-1νn-1ωn-1(-/+)Dn-1、Aμnνnωn(+/-)Dn的形式。如果例如单位Aμνω成行排列，则在前一情况下，单位Dμ也在样本比色杯的一侧(右手边)排成一长行，在后一情况下，单位Dμ在样本比色杯的相反一侧排成两行。平面的平移也是可理解的。然而，只有当每一单位Aμνω发射的激发光仍然垂直地入射到样本比色杯的外表面上时，才考虑这种平面平移。对于具有长方形横断面的比色杯通常会如此，而对于具有圆形横断面的比色杯通常不会如此。
还可将这些平面彼此相对地旋转。沿着比色杯的纵轴投影，则属于两个相邻单位Aμνω的光轴形成在0°-360°范围内的角。例如，当n是2、3、4、5或6(并且是规则的螺旋排列)时，相邻单位Aμνω之间的角将是180、120、90、72或60°。当n等于3、4、5或6时，余角240、270、288和300°(或-120、-90、-72、或-60)意味着排列中有相应的反螺旋(当n等于2、即180°时，则不存在)。还要指出，平面不仅能以顺序Aμ1ν1ω1(+)D1、Aμ2ν2ω2(+)D2、Aμ3ν3ω3(+)D3、…、Aμnνnωn(+)Dn(等同于顺序Aμ1ν1ω1(-)D1、Aμ2ν2ω2(-)D2、Aμ3ν3ω3(-)D3、…、Aμnνnωn(-)Dn)存在，还能以例如顺序Aμ1ν1ω1(+)D1、Aμ2ν2ω2(-)D2、Aμ3ν3ω3(+)D3、…、Aμn-1νn-1ωn-1(-/+)Dn-1、Aμnνnωn(+/-)Dn存在。当n等于2(180°)或4(90°)时，通常使用具有长方形横截面的比色杯，而当n等于3(120°)、5(72°)或6(60°)时，通常使用具有圆形横截面的比色杯(等于n等于2或4，当然也可使用这种比色杯)。采用所述排列，n种标记物Mμ的激发和检测的组合不仅可同时进行，而且还可以依次进行。Ⅱ.2)Aμ1ν1ω1/D、Aμ1ν1ω1/D、…、Aμn-1νn-1ωn-1/D、Aμnνnωn/D(n种标记物Mμ分别在重叠区域被相应的单位Aμνω激发，并用检测单位D、例如多波长检测器检测)。a)依据Ⅱ.1)所指出的方式排列单位Aμνω。如果单位Aμνω排成一行(实例a1)，则可将单位D固定在适当的χ-位上，条件是其放射入口窗户足够大或使用适当的成像镜片。否则(实例a2)必须(平移)调节到适当位置。对于其它排列的单位Aμνω(实例a3)，必须将单位D(平移和旋转)再调节到相应的χ-位上。因此，在实例a1中，n种标记物Mμ的激发和检测的组合不仅可同时进行，而且还可以依次进行，但是在实例a2和a3中仅可依次进行。b)也可大体上按照Ⅰ.3)的b)所述方式进行排列；即单位D的光轴与圆柱形样本比色杯的纵轴平行，并依据Ⅱ.1)所指出的方式排列单位Aμνω。然而，这将导致不同的通路长度(各标记物Mμ再发射的荧光按其路径通过样本到达单位D的通路长度)、和不同的立体角(荧光落在单位D上的角度，或更准确地说，是其检测窗口)。这可能导致检测强度不精确，或者在评价中必须被适当地考虑。然而，大体来讲，在这些排列中，n种标记物Mμ的激发和检测的组合不仅可同时进行，而且还可以依次进行。Ⅱ.3)Aμ1ν1ω1/D(1,2,…,n-1,n)、Aμ2ν2ω2/D(1,2,…,n-1,n)、…、Aμn-1νn-1ωn-1/D(1,2,…,n-1,n)、Aμnνnωn/D(1,2,…,n-1,n)(n种标记物Mμ分别在重叠区域Lμνω被相应的单位Aμνω激发，并被检测)。a)该排列基本上与在Ⅱ.2)的a)中描述的排列相一致。用例如(实例a1)包含可互换光检测器和/或可互换滤光器(和任选的偏振器)δ1μ的检测单位来替代一个单位D(例如多波长检测器)。然而，D还可包含多个光检测器δ1μ，其中各再发射荧光是例如(实例a2)通过光导纤维或光导纤维束而定向到该光检测器。使用与实例a1相符合的单位D,n种标记物Mμ的激发和检测的组合仅可依次进行，这是因为需要改变亚单位δ1μ并任选(平移或平移和旋转)再调节单位D。使用与实例a2相符合的单位D,n种标记物Mμ的激发和检测的组合既可依次进行，并且如果例如通过适当的光学设备将标记物Mμ同时再发射的荧光通过光学透镜集中到光导纤维或光导纤维束上，也可同时进行(采用适当排列的单位Aμνω)。b)该排列基本上与在Ⅱ.2)的b)中描述的排列相一致。用例如(实例a1)包含可互换光检测器和/或可互换滤光器(和任选的偏振器)δ1μ的检测单位来替代一个单位D(例如多波长检测器)。然而，D还可包含多个光检测器δ1μ，其中各再发射荧光是例如(实例a2)通过光导纤维或光导纤维束而定向到该光检测器。使用与实例a1相符合的单位D,n种标记物Mμ的激发和检测的组合仅可依次进行。使用与实例a2相符合的单位D,n种标记物Mμ的激发和检测的组合既可依次进行，也可同时进行。关于不同通路长度和标记物Mμ再发射的荧光的立体角的Ⅱ.2)b)中的观察在此处当然也适用。Ⅱ.4)Aμ1ν1ω1/Aμ2ν2ω2/…/Aμn-1νn-1ωn-1/Aμnνnωn/D1/D2/…/Dn-1/Dn(n种标记物在重叠区域Lμνω被相应的单位Aμνω同时激发，并通过单位Dμ同时检测)。
大体上使用在Ⅱ.1)、Ⅱ.2)a)的实例a1、Ⅱ.2)b)、Ⅱ.3)a)的实例a2、和Ⅱ.3)b)的实例a2中描述的排列和几何学关系，进行n种标记物的同时激发和检测。
在情况Ⅰ中(即当在相同样本体积中激发时)的检测装置构造的排列和示例性方法可特别用于依次连续激发n种标记物Mμ。
在情况Ⅱ中(即当在不同样本体积中激发时)的检测装置构造的排列和示例性方法可特别适用于同时激发所有n种标记物Mμ。此外，在这些检测装置构造的排列和示例性方法中，其中可在不同空间位置同时检测各再发射荧光的检测装置构造的排列和示例性方法是特别适用的。
通常情况下，单位Aμνω发射的激发光可以以脉冲形式或连续地、即以连续波(CW)方式照射到样本内。此外，可用频率fμνω调制各单位Aμνω发射的激发光的强度，这样单位Aμνω将激发类似于fμνω-强度调制的、可选择性地通过Dμ检测的、标记物Mμ的荧光发射。对于这种情况，通常使用不同于主网络频率(通常是50Hz)和该频率的整数和半整数倍频的调制频率。当同时激发和检测由所有标记物Mμ再发射的荧光时，可使用不同的调制频率fμνω，以把荧光归属于各自的标记物Mμ，并获得更好的信噪比。通常用锁入法检测强度-调制的荧光信号。
用于检测已经依据本发明方法标记的液体中标记物的本发明方法的优选实施方案包括，在相同样本体积中通过各标记物相应的单位Aμνω依次连续激发n种标记物Mμ，并(依次连续)检测各Mμ再发射的荧光。
用于检测已经依据本发明方法标记的液体中标记物的本发明方法的另一优选实施方案包括，在相同样本体积中通过各标记物相应的单位Aμνω同时激发n种标记物Mμ，并用多波长检测器同时或依次检测各Mμ再发射的荧光。
用于检测已经依据本发明方法标记的液体中标记物的本发明方法的另一优选实施方案包括，在相同样本体积中通过多色单位A同时激发n种标记物Mμ，并用多波长检测器同时或依次检测各Mμ再发射的荧光。
用于检测已经依据本发明方法标记的液体中标记物的本发明方法的另一优选实施方案包括，在相同样本体积中通过强度用频率fμνω调制的、各标记物相应的单位Aμνω同时激发n种标记物Mμ，并同时或依次检测各Mμ再发射的强度-调制的荧光。
用于检测已经依据本发明方法标记的液体中标记物的本发明方法的另一优选实施方案包括，在不同样本体积中通过单位Aμνω同时激发n种标记物Mμ，并用各自的单位Dμ同时或依次检测Mμ再发射的荧光。
单位Aμνω优选包含半导体激光器、半导体二极管或固态激光器作为光源α1μνω。如果想将所有或某些标记物Mμ在其主要吸收范围Lμ(x)(其中x是例如80、90、95或99)激发，则单位Aμνω中使用的光源α1μνω优选为在λmax-100nm-λmax+20nm光谱区域内具有最大发射的半导体激光器、半导体二极管或固态激光器，其中λmax是各标记物Mμ的最大吸收波长。这些最大发射通常在各标记物相应的最大吸收范围内。或者，如上所述，可通过适当选择x来调节主要吸收范围Lμ(x)。
单位Dμ中的光检测器δ1μ优选为半导体检测器，尤其是硅光电二极管或锗光电二极管。
如果想将所有或某些标记物Mμ在其主要吸收范围Lμ(x)(其中x是例如80、90、95或99)激发，在单位Dμ的光检测器δ1μ中使用的滤光器优选为在λmax-λmax+80nm范围内具有短波传输截止的干扰滤光器和/或截止滤光器，其中λmax是各相应标记物Mμ的最大吸收波长。
如果需要的话，还可使用一个或多个NIR偏振器。
下文中的实施例举例说明本发明。实施例1：
将0.5ppm A(PcH2-(3′-甲基苯氧基)4)和0.5ppm B(PcH2-(3′-甲基哌啶子基)4)的混合物溶于无铅汽油发动机燃料(RON 95)中，PcH2代表酞菁染料系统，其中Me1(式Ⅰa)是两个氢，并且在式Ⅰa中的基团对R1和R4、R5和R8、R9和R12、以及R13和R16当中，每对基团都是有一个基团为氢、另一基团为3′-甲基苯氧基或3′-甲基哌啶子基。
标记物A和B的吸收光谱在所用激光的685和754nm波长处具有表1所示吸收(任意单位)：表1激光吸收A吸收B685nm1.31510.3137754nm0.01710.9954
从表1中可看出，685nm激光在激发A的同时也激发了B，尽管程度较小。
用685nm激光激发A和用754nm激光激发B,B发射的荧光信号由B被685nm激光激发所产生的信号部分和B被754nm激光激发所产生的信号部分组成。
使用A和与A没有重叠区域的(欺诈性)标记物B′,A被685nm激光激发，B′被754nm激光激发，由于没有B′被685nm激光激发B′所产生的信号，在B′的荧光区域内检测的荧光信号将较小。
此外，为了双重保证鉴别出A和B的标记物混合物(或更准确地说，标记的液体)，可一方面在标记物A和B的荧光区域内确定穿过适当滤器的同时激发的荧光的整个强度，另一方面，确定用一个激光器和另一个激光器激发的荧光的单独强度。这三个测定合在一起形成了(可能的)独特的指纹。实施例2：
将0.5ppm B(PcH2-(3′-甲基哌啶子基)4)和0.5ppm C(NcH2-(OC4H9)8)的混合物溶于无铅汽油发动机燃料(RON 95)中，NcH2代表萘菁染料系统，其中Me2(式Ⅱ)是两个氢，并且在式Ⅱ中的所有基团对Y1和Y2、Y3和Y4、Y5和Y6、以及Y7和Y8都是OC4H9。
标记物B和C的吸收光谱在所用激光的754和855nm波长处具有表2所示吸收(任意单位)：表2激光吸收B吸收C754nm0.99540.3824855nm0.00371.9860
从表2中可看出，754nm激光在激发B的同时也激发了C，尽管程度较小。
用754nm激光激发B和用855nm激光激发C,C发射的荧光信号由C被754nm激光激发所产生的信号部分和C被855nm激光激发所产生的信号部分组成。
使用B和与B没有重叠区域的(欺诈性)标记物C′,B被754nm激光激发，C′被855nm激光激发，由于没有C′被754nm激光激发所产生的信号，在C′的荧光区域内检测的荧光信号将较小。
此外，为了双重保证鉴别出B和C的标记物混合物，可如实施例1所述，测定同时或独自激发的荧光信号。实施例3
将0.5ppm的化合物A、B和C的混合物溶于无铅汽油发动机燃料(RON 95)中，并用3个激光器在685、754和855nm同时激发。经由通三个通带滤波器(透过波长为720、790和860nm)将所产生的荧光过滤，并借助于硅针二极管检测。获得了表3所示荧光强度(任意单位)。
表3通带滤波器荧光信号720nm2705790nm572855nm1589实施例4：
将2/9(0.22)ppm化合物A、8/9(0.88)ppm化合物B和8/9(0.88)ppm化合物C的混合物溶于无铅汽油发动机燃料(RON 95)中，并用3个激光器在685、754和855nm同时激发。经由通三个通带滤波器(透过波长为720、790和860nm)将所产生的荧光过滤，并借助于硅针二极管检测。获得了表4所示荧光强度(任意单位)。表4通带滤波器荧光信号720nm2340790nm950855nm2705
从实施例3和4可清楚地看出，(给以适当校准)通过各自荧光信号的强度能辨别出不同相对比例的标记物和不同绝对量的标记物。