一种治疗贫血的再造生血中药制剂及制备方法 【技术领域】
本发明涉及一种治疗贫血疾病的中药制剂及制备方法。
背景技术
贫血疾病(包括再障贫血)在中医认为属于“血虚、虚劳”范畴，病机在脾肾，因脾统血、肾主骨、骨生髓。肾虚者则髓亏而至贫血。因此，该再造生血制剂从补肾入手，精心筛选红参、黄芪、阿胶、鹿茸等名贵地道药材，使其具有显著的滋阴补肾，温补肾阳，活血、凉血、止血、气血双补的独特功效，适用于气血两亏招致“肾阴虚、肾阳虚、肾阴阳虚、肾阴阳两虚、脾肾阳虚、肝肾阴虚”等症型。现有治疗再障贫血的中药制剂，其疗效单一，治愈率低，特别是不能同时治疗多种贫血疾病。
【发明内容】
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种治疗贫血的再造生血中药制剂及制备方法，该中药制剂可以滋阴补肾、补气生血、活血止血，能有效治疗多种贫血病症，针对再障贫血、缺铁性贫血、营养不良贫血、溶血性贫血、慢性病贫血、血小板减少症、白细胞减少症等贫血症状有显著的疗效。
本发明提供以下技术方案：一种治疗贫血的再造生血中药制剂，该中药制剂由下列原料按重量的百分比配制而成：酒制菟丝子5-30％、去芦红参1-12％、鸡血藤3-20％、阿胶1-12％、当归2-15％、女贞子1-12％、黄芪2-15％、益母草1-12％、熟地黄2-15％、白芍1-12％、制何首乌2-15％、淫羊藿1-12％、酒制黄精1-15％、去毛鹿茸0.1-2％、党参1-15％、麦冬1-12％、仙鹤草1-15％、炒白术1-12％、盐制补骨脂1-12％、枸杞子1-15％、墨旱莲1-12％。
所述中药制剂由下列原料按重量的最佳适用配比配制：酒制菟丝子12.0％、去芦红参3.6％、鸡血藤8.4％、阿胶3.6％、当归6.0％、女贞子3.6％、黄芪6.0％、益母草3.6％、熟地黄6.0％、白芍3.6％、制何首乌6.0％、淫羊藿3.6％、酒制黄精4.8％、去毛鹿茸0.4％、党参4.8％、麦冬3.6％、仙鹤草4.8％、炒白术3.6％、盐制补骨脂3.6％、枸杞子4.8％、墨旱莲3.6％。
所述中药制剂可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、口服液、糖浆剂及其他临床可接受的剂型。
所述片剂的制备方法，按以下工艺方法制成：(1)取益母草、墨旱莲、仙鹤草、鸡血藤、菟丝子、黄精、熟地黄、女贞子、麦冬、黄芪、淫羊藿粉碎成粗块，加入以上各组分总重量3-8倍量水，加热煎煮2-4次，每次1-4小时，分次滤过，合并滤液，浓缩至稠膏状，其密度为1.0-1.5；(2)取红参、鹿茸、当归、何首乌、党参、枸杞子、补骨脂、阿胶、白芍、白术粉碎成60-120目的细粉，过筛；(3)将(1)法制得的稠膏与(2)法制得的药粉混合，60-100℃干燥，粉碎，过筛，淀粉或糊精及其他辅料制成颗粒，干燥，整粒，加入硬脂酸镁或其他辅料，压制成片。
所述胶囊剂的制备方法，按以下工艺方法制成：取上述片剂制备方法中(1)法制得的稠膏与(2)法制得的药粉混合，60-100℃干燥，粉碎，过筛，装入胶囊即可。
所述颗粒剂的制备方法，按以下工艺方法制成：取上述片剂制备方法中(1)法的稠膏与(2)法制得的药粉混合，60-100℃干燥，粉碎，过筛，淀粉或糊精及其他辅料制成颗粒。
所述散剂的制备方法，按以下工艺方法制成：取上述片剂制备方法中(1)法制得的稠膏与(2)法制得的药粉混合，即可。
所述丸剂的制备方法，按以下工艺方法制成：取上述片剂制备方法中(1)法制得的稠膏与(2)法制得地药粉混合，60-100℃干燥，粉碎成粉，取药粉重量80-130％的蜂蜜煮沸，过滤，将药粉、80-130％蜂蜜及0-15％水混合均匀后制成丸剂。
所述口服液的制备方法，按以下工艺方法制成：取益母草、墨旱莲、仙鹤草、鸡血藤、菟丝子、黄精、熟地黄、女贞子、麦冬、黄芪、淫羊藿、红参、鹿茸、当归、何首乌、党参、枸杞子、补骨脂、阿胶、白芍、白术粉碎成粗块，加入以上各组分总重量3-8倍量水，加热煎煮2-4次，每次1-4小时，分次滤过，合并滤液，浓缩；浓缩后药液加入药液总重量0.1-1％的防腐剂、0.1-2％的矫味剂混合均匀，制成口服液。
所述糖浆剂的制备方法，按以下工艺方法制成：(1)取益母草、墨旱莲、仙鹤草、鸡血藤、菟丝子、黄精、熟地黄、女贞子、麦冬、黄芪、淫羊藿、红参、鹿茸、当归、何首乌、党参、枸杞子、补骨脂、阿胶、白芍、白术粉碎成粗块，加入以上各组分总重量3-8倍量水，加热煎煮2-4次，每次1-4小时，分次滤过，合并滤液，浓缩；(2)将蔗糖溶于煮沸的蒸馏水中，职称浓度为85％(g/ml)或64.7％(g/g)的单糖浆；(3)将(1)法浓缩后药液加入(2)法制得的单糖中，加入适量蒸馏水制成糖浆剂。
该中药制剂进行了大量的动物急性毒性试验、动物长期毒性试验、动物药效学试验以及治疗疾病的大量临床试验，对该药投入治疗疾病的使用环节提供了科学而客观的依据。其试验方法和试验结果分别如下：
1、治疗贫血的再造生血中药制剂动物急性毒性试验：
药物：复方“再造生血散”，由吉林省辽源亚东药业股份有限公司提供，过120目筛细粉，浅米黄色。实验前用蒸馏水配成混悬液。现用现配。
急性毒性：选18～22克小鼠30只，按8克/公斤剂量灌胃给药一次，连续观察3天动物无一例死亡，因药物浓度无法再继续增大，故口服给药小鼠半数致死量未能测出。本实验还做了亚急性毒性试验。结果表明：再造生血散按上述剂量给药后，各项检查指标及病理组织切片均未见任何明显异常。
2、治疗贫血的再造生血中药制剂动物长期毒性试验：
试验目的：观察大鼠连续灌胃给予再造生血片3个月所产生的毒性反应，以确定临床用药的安全性。
试验药物：再造生血片，由吉林省辽源亚东药业股份有限公司提供，批号：990101。
试验动物：Wister种大鼠，雌雄各半：雄性平均体重为98.5±12.1g，雌性平均体重为111.2±10.93g，由白求恩医科大学动物部提供。
试验方法：将试验动物随机分为三组：对照组；再造生血片高剂量7.0g/kg；低剂量2.8g/kg组，每组20只，雌雄各半，每日按剂量灌胃给药，容量为2.0ml/100g体重；对照组给予等容量饮用水，连续十二周。
给药期间观察动物一般状态，每周称重一次，停药次日各组动物腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg麻醉，于腹主动脉取血测定血液各项指标；分离血清进行肝、肾功能检查，取出并称重大鼠主要脏器，按体重计算脏器系数，同时对其进行肉眼及镜下病理等检查，剩余半数动物停药继续饲养两周，观察恢复期变化。
试验结果：(1)一般状态：再造生血片7.0g/kg，2.8g/kg两个剂量组大鼠在给药期间活动正常。进食量、饮水、排便无明显异常，无死亡。(2)体重：再造生血片两个剂量组大鼠给药期间及恢复期体重增长变化与对照组无明显差异。(3)血液学检查：再造生血片两个剂量组给药12周后，所测各项指标均在正常范围内，与对照组比较无显著差异。(4)血清生化学检查：再造生血片两个剂量组在连续给药12周后，各项生化学指标均在正常范围内，与对照组比较无明显差异。(5)组织学观察①肉眼观察：再造生血片两个剂量组与对照组大鼠在各给药期限结束后，均进行尸体解剖，肉眼观察及组织切片观察，未见明显病理学改变。
试验结论：再造生血片高、低二个剂量给大鼠灌胃十二周后，未见动物外观、体重增长；血液学、血清生化学及主要脏器的毒性变化，说明再造生血片在所用剂量和用药时间内无明显毒性作用。
3、动物药效学试验：
(1)再造生血中药制剂对骨髓细胞核酸及蛋白质代谢的影响
材料与方法：杂种小鼠40只，雌雄各半，分为两大组第一组20只，为正常小鼠组，其中10只为空白对照，另10只给生血散2g/kg，共12天，处死，采血查外周血常规，在无菌条件下取骨髓，冲入Eagle内，过4号针头离心洗涤使呈2.5×107/ml在Eagle液内打匀，每管内加入细胞悬液0.1ml，Eagle培养液0.8ml，同位素0.1ml37℃温浴4小时，离心去上清液中游离3H，再顺次在49型玻璃膜片抽滤70℃干燥1小时，加闪烁液以国产Fj353型液闪测定，并以107细胞数/ml，中前体参入DNA、RNA或蛋白质中的PmOL值计算。
所用同位素(3H)TdR(掺入DNA)比度23CL/Mm(3H)UR(掺入RNA)比度23CL/mM，3HLeu(掺入蛋白质)比度22CL/Mm，放化纯度96％以上，由北京原子能所提供。
实验结果：
(a)正常小鼠外周血象的变化：生血散对正常小鼠外周血象无明显影响，见表1。
组别 Hb RBC(万/mm3) WBC PLT(万/mm3)表1
Control 9.5±1.2 493±99 5240±1792 11.1±2.1
Treated 10.1±1.7 486±56 4669±2228 11.8±2.7
t 0.8 0.2 0.7 0.6
p ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05
(b)生血散对由放射线菌素D所致骨髓抑制(给药后12小时)小鼠外周血象中给生血散组的Hb及血小板显著高于对照组(P＜0.05)，见表2。
组别 Hb RBC(万/mm3) WBC PLT(万/mm3)表2
Control 10.8±4.0 489±69 5320±1844 9.3±1.7
Treated 15.3±3.3 488±79 6215±4146 11.7±1.9
t 4.2 1.1 0.6 2.2
p ＜0.01 ＞0.05 ＞0.05 ＜0.05
(c)生血散对小鼠骨髓细胞(正常鼠)的核酸，蛋白质合成无明显促进作用，见表3。
表3
Tdr into DNA UR into RNA LeUintop rote in
组别 pmol/4h.107cell pmol/4h.107cell pmol/4h.107cell
Control 21.16±4.6 6.1±1.2 0.44±0.07
Treated 20.7±3.8 5.8±1.1 0.50±0.10
t 0.24 0.39 0.25
p ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05
(d)生血散对由于放射线菌素D射后所致骨髓核酸及蛋白质合成的抑制状态，有保获和促进核酸及蛋白质合成作用，见表4。
表4
Tdr into DNA UR into RNA LeUintop rote in
组别 pmol/4h.107cell pmol/4h.107cell pmol/4h.107cell
Control 4.3±0.69 1.16±0.19 0.23±0.04
Treated 12.76±0.69 4.34±0.81 0.47±0.11
t 7.54 12.2 6.48
p ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001
试验结果表明：骨髓细胞分裂过程中DNA的复制，RNA信息的表达以及蛋白质的合成是重要的环节与过程，这一过程的强度标志骨髓造血机能的活跃，并且比形态学观察更敏感。生血散对正常小鼠骨髓细胞这一过程没有明显的干扰作用，而对由于腹腔注射放线菌素D所致骨髓抑制状态则有显著的保获和促进合成的作用。由此可以证明生血散可以促进骨髓核酸及蛋白质代谢机能低下状态的动物，使之维持正常状态，为临床治疗再生障碍性贫血及由于化疗所致继发性骨髓抑制提供实验依据。
(2)再造生血中药制剂对60CO照射及环磷酰胺化疗损伤造成的白细胞减少的治疗效果试验：
药物：再造生血片，0.35g/片，由吉林省辽源亚东药业股份有限公司提供，批号：990101；环磷酰胺(CY)：上海市十二中药厂生产。
动物：昆明种小鼠，NIH小鼠，由本院实验动物部提供。
照射条件：医院60CO室提供γ射线照射源，照射距离0.25m，剂量率0.53Gy/min，全身一次性照射，剂量为3.5Gy。
(a)对小鼠60CO照射后外周血象的影响
取昆明种小白鼠50只，体重20～25g，雌雄各半，随机分成4组；阴性对照组，60CO3.5Gy照射组，再造生血片1.4g/kg，0.7g/kg(相当于临床人日用量的10倍、5倍)。各组动物每日灌胃给药一次，给药体积1ml/1001g。照射线及阴性组给予等体积生理盐水。各组动物于照射前连续给药5天，照射后继续给药15天，末次给药后24h处死小鼠，检查外周血象。结果见表5。
组别 剂量 WBC(109/L) RBC(1012/L) Hb(g/L) BPC(109/L)表5
阴性对照组 ----- 29.4±5.2 4.7±0.3 14.2±6.9 352±63
60CO照射组 11.2±4.7** 4.8±0.2 14.4±7.2 325±94
再造生血片 0.7g/kg 21.3±6.5Δ 4.7±0.5 14.2±14 347±78
再造生血片 1.4g/kg 28.5±7.2ΔΔ 4.8±0.3 144±9.0 391±92
与对照组比较：**P＜0.01
与60CO照射组比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
由表5可见，小鼠60CO照射后只有外周白细胞明显降低，与对照组比差异非常显著，(P＜0.01)，再造生血片组有抗60CO照射引起白细胞降低作用，经统计学处理非常显著(P＜0.05，P＜0.01)，其它指标与对照组及照射后比较均无明显差异。
(b)对Cy所致外周血象的影响
取健康NIH小鼠40只，体重18-22g，雌雄各半，随机分成4组，每组10只；阴性对照组、Cy组、再造生血片1.4g/kg0.7g/kg(相当于临床人日用量的10倍、5倍)组。各组动物每日灌胃给药一次，连续15天，给药第5天、第10天分别ip Cy200mg/kg。第15天处死动物，检查外周血象。结果见表6。
组别 剂量 WBC(109/L) RBC(1012/L) Hb(g/L) BPC(109/L)表6
阴性对照组 ----- 26.8±6.4 160±7 5.6±0.3 398±83
Cy组 200mg/kg 15.9±3.7** 132±15** 4.5±0.6 229±51**
再造生血片 1.4g/kg 24.5±7.2ΔΔ 146±13 4.6±0.4 283±64Δ
再造生血片 0.7g/kg 26.3±4.2ΔΔ 149±9 4.7±0.6 369±85Δ
与对照组比较：**P＜0.01
与Cy组比较：ΔΔP＜0.05
由表6可见，Cy可使小鼠白细胞、血小板及血红蛋白含量明显降低，与对照组比较差异显著(P＜0.01)。再造生血片1.4g/kg、0.7g/kg两剂量组可使Cy所致的白细胞、血小板和血红蛋白的降低恢复接近正常，与Cy组比较有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)。
(c)对小鼠照射后肝脂质过氧化的影响
取试验(a)处死动物肝脏，采用TBA法测定肝丙二醛(MDA)的含量，结果见表7。
组别 n 剂量 MDA(nmol/g肝)表7
阴性对照组 10 ----- 22.7±9.3
60CO3.5GY组 10 ----- 46.8±21.6**
再造生血片 10 0.7g/kg 31.3±15.7Δ
再造生血片 10 1.4g/kg 28.4±12.1Δ
与对照组比较：**P＜0.01
与60CO照射组比较，ΔP＜0.05。
表7表示，60CO3.5GY组小鼠肝MDA含量明显增加，与对照组比较差异非常显著(P＜0.01)。再造生血片1.4g/kg、0.7g/kg两剂量组可以减少肝MDA形成，与对照组比较差异显著(P＜0.05)。
以上实验表明：再造生血片具有补肝健脾、益气养血功效，再造生血片对60CO照射几环磷酰胺化疗损伤造成的小鼠白细胞减少具有显著的治疗与预防作用，并具有一定的抗脂质氧化作用。
本发明具有的有益效果：本发明除了做过以上药效学试验以外，还经过大量的临床试验观察，在不同医院对300例病人进行了跟踪，结果表明该制剂对治疗慢性再生障碍性贫血有良好的治疗作用，总有效率可达81％，愈显率达35％，明显优于血宝胶囊对照组，疗效优于康力龙、左旋咪唑等药品，无不良反应和副作用，对治疗再障贫血以及白细胞减少症等贫血症状有显著的疗效。另外，该中药制剂还针对368个不同病例，在不同的医院、不同地区对住院和门诊病人分别进行了用药治疗，针对缺铁性贫血、营养不良性贫血、慢性病贫血、溶血性贫血等8种贫血疾病进行了观察统计，总有效率在68.6％至89.6％之间，其中缺铁性贫血治愈率为91.12％，营养不良性贫血治愈率90.3％，溶血性贫血治愈率85.2％，慢性病贫血治愈率79.3％，白细胞减少疾病治愈率72.3％，该中药制剂综合治疗各种贫血疾病有较好的疗效。
【具体实施方式】
一种治疗贫血的再造生血中药制剂，可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、口服液、糖浆剂及其他临床可接受的剂型。
该中药制剂由下列原料按重量的百分比配制而成：酒制菟丝子5-30％、去芦红参1-12％、鸡血藤3-20％、阿胶1-12％、当归2-15％、女贞子1-12％、黄芪2-15％、益母草1-12％、熟地黄2-15％、白芍1-12％、制何首乌2-15％、淫羊藿1-12％、酒制黄精1-15％、去毛鹿茸0.1-2％、党参1-15％、麦冬1-12％、仙鹤草1-15％、炒白术1-12％、盐制补骨脂1-12％、枸杞子1-15％、墨旱莲1-12％。
最佳适用配比为：酒制菟丝子12.0％、去芦红参3.6％、鸡血藤8.4％、阿胶3.6％、当归6.0％、女贞子3.6％、黄芪6.0％、益母草3.6％、熟地黄6.0％、白芍3.6％、制何首乌6.0％、淫羊藿3.6％、酒制黄精4.8％、去毛鹿茸0.4％、党参4.8％、麦冬3.6％、仙鹤草4.8％、炒白术3.6％、盐制补骨脂3.6％、枸杞子4.8％、墨旱莲3.6％。
其重量这样称取：菟丝子12.0g、去芦红参3.6g、鸡血藤8.4g、阿胶3.6g、当归6.0g、女贞子3.6g、黄芪6.0g、益母草3.6g、熟地黄6.0g、白芍3.6g、制何首乌6.0g、淫羊藿3.6g、酒制黄精4.8g、去毛鹿茸0.4g、党参4.8g、麦冬3.6g、仙鹤草4.8g、炒白术3.6g、盐制补骨脂3.6g、枸杞子4.8g、墨旱莲3.6g。
片剂的制备方法：(1)取益母草、墨旱莲、仙鹤草、鸡血藤、菟丝子、黄精、熟地黄、女贞子、麦冬、黄芪、淫羊藿粉碎成粗块，加入以上各组分总重量3-8倍量水，加热煎煮2-4次，每次1-4小时，分次滤过，合并滤液，浓缩至稠膏状，其密度为1.0-1.5；(2)取红参、鹿茸、当归、何首乌、党参、枸杞子、补骨脂、阿胶、白芍、白术粉碎成60-120目的细粉，过筛；(3)将(1)法制得的稠膏与(2)法制得的药粉混合，60-100℃干燥，粉碎，过筛，淀粉或糊精及其他辅料制成颗粒，干燥，整粒，加入硬脂酸镁或其他辅料，压制成片。
胶囊剂的制备方法：取上述片剂制备方法中(1)法制得的稠膏与(2)法制得的药粉混合，60-100℃干燥，粉碎，过筛，装入胶囊即可。
颗粒剂的制备方法：取上述片剂制备方法中(1)法的稠膏与(2)法制得的药粉混合，60-100℃干燥，粉碎，过筛，淀粉或糊精及其他辅料制成颗粒。
散剂的制备方法：取上述片剂制备方法中(1)法制得的稠膏与(2)法制得的药粉混合，即可。
丸剂的制备方法：取上述片剂制备方法中(1)法制得的稠膏与(2)法制得的药粉混合，60-100℃干燥，粉碎成粉，取药粉重量80-130％的蜂蜜煮沸，过滤，将药粉、80-130％蜂蜜及0-15％水混合均匀后制成丸剂。
口服液的制备方法：取益母草、墨旱莲、仙鹤草、鸡血藤、菟丝子、黄精、熟地黄、女贞子、麦冬、黄芪、淫羊藿、红参、鹿茸、当归、何首乌、党参、枸杞子、补骨脂、阿胶、白芍、白术粉碎成粗块，加入以上各组分总重量3-8倍量水，加热煎煮2-4次，每次1-4小时，分次滤过，合并滤液，浓缩；浓缩后药液加入药液总重量0.1-1％的防腐剂、0.1-2％的矫味剂混合均匀，制成口服液。
糖浆剂的制备方法：(1)取益母草、墨旱莲、仙鹤草、鸡血藤、菟丝子、黄精、熟地黄、女贞子、麦冬、黄芪、淫羊藿、红参、鹿茸、当归、何首乌、党参、枸杞子、补骨脂、阿胶、白芍、白术粉碎成粗块，加入以上各组分总重量3-8倍量水，加热煎煮2-4次，每次1-4小时，分次滤过，合并滤液，浓缩；(2)将蔗糖溶于煮沸的蒸馏水中，职称浓度为85％(g/ml)或64.7％(g/g)的单糖浆；(3)将(1)法浓缩后药液加入(2)法制得的单糖中，加入适量蒸馏水制成糖浆剂。