一种注射用参芪扶正冻干粉针剂及其制备方法 所属技术领域
本发明属中药制药领域，更具体是涉及一种注射用参芪扶正冻干粉针制剂及其制备方法。
背景技术
参芪扶正注射液由党参和黄芪二味中药等量组方而成，临床上对气虚型的晚期肿瘤患者有良好疗效，具有益肺健脾、补气养血的扶正作用，能明显改善病、患者的临床症状，提高生存质量。与化疗药配合应用，具有增效减毒，提高自身免疫力的作用。但目前注射用的剂型为液体，稳定性较差，贮存一定时间后往往出现pH值改变，引起外观色泽变深，甚至出现浑浊和沉淀，使澄明度不合格；现有的参芪扶正注射液采用水提醇沉法工艺制备(中成药部颁标准WS-459(Z-065)-95和WS-387(Z-50)-99)，用水加热提取后醇沉除杂，醇沉工艺在纯化除杂的同时，除掉了党参和黄芪中的多糖，而党参多糖和黄芪多糖具有较好的提高免疫力的作用(张晓君，胡黎，赖小平，等。党参多糖对小鼠免疫和造血功能的影响[J].中药新药与临床药理2003，14(3)：174-176；刘星谐，王美英，吴厚生，等。黄芪多糖的分离及其免疫活性的研究[J].天然产物研究与开发，1994，16(1)：23；单俊杰，王顺春，刘涤，等。黄芪多糖的化学和药理研究进展[J].上海中医药大学学报2000，14(3)：61-65)；另外，注射液产品采用安瓿灌装，给运输和贮存带来不便。
【发明内容】
本发明的目的在于提供一种稳定性好、运输贮存方便、制备工艺更合理的注射用参芪扶正冻干粉针制剂。其特征在于对党参和黄芪依次采用醇提法和水提法提取其有效成分，既保留了注射液中原有的有效组分，又增加了党参和黄芪药材中具有增强免疫作用地多糖组分，将醇提取物和水提取物分别采用醇沉法精制，水提取物利用活性炭脱色、中空纤维柱超滤，两种提取物干燥后分别得到醇提有效部位和水提多糖有效部位。以醇提有效部位4-12g，水提多糖有效部位1-10g，加注射用甘露醇5-50g、注射用氯化钠4-12g，用注射用水配成溶液600-1400ml，调节pH值至7-7.5，滤过、灭菌，分装于西林瓶，低温冷冻干燥，即得。
本发明内容通过以下技术方案实现：
一、药材前处理
将药材党参、黄芪分别拣选、洗净、烘干、粉碎成颗粒。
二、提取工艺
取等量的党参、黄芪药材一定量，每次加5-15倍50％-90％的乙醇(v/v)加热回流提取2次，滤过，药渣保留备用，合并滤液，减压浓缩至每1ml含2g生药；搅拌下加入乙醇，使含醇量达60-70％，充分搅拌后静置24小时，滤过，滤液浓缩至每1ml含3g生药；搅拌下加入乙醇，使含醇量达70-80％，充分搅拌后静置24小时，滤过，滤液浓缩至干，得醇提有效部位。
药渣加入6-14倍量去离子水煎煮提取2次，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至每1ml含2g生药的浓缩液；加入乙醇至含醇量为60-70％后静置，滤过。加入乙醇至含醇量为70-80％后静置，滤过，得沉淀，取沉淀加蒸馏水溶解，活性炭脱色，滤过；60℃真空干燥，得水提多糖粗品。将多糖粗品加蒸馏水溶解，过中空纤维柱超滤(截留分子量大于6000)，滤液减压浓缩至干，得多糖有效部位。
三、注射用参芪扶正冻干粉针剂的制备
取醇提有效部位4-12g，水提多糖有效部位1-10g，加注射用甘露醇5-50g、注射用氯化钠4-12g，用注射用水配成溶液600-1400ml，调节pH值至7-7.5，滤过、灭菌，分装于西林瓶，低温冷冻干燥，即得。
配方为：
党参和黄芪的醇提有效部位4-12g；
党参和黄芪的水提多糖有效部位1-10g；
注射用甘露醇：5-50g；
注射用氯化钠：4-12g；
注射用水600-1400ml。
优选配方为：
党参和黄芪的醇提有效部位6-10g；
党参和黄芪的水提多糖有效部位4-8g；
注射用甘露醇：5-10g；
注射用氯化钠：6-10g；
注射用水800-1200ml。
本发明将通过实施例作进一步的说明
实施例1
1处方：党参40克 黄芪40克
2工艺：取处方量党参、黄芪药材，加热回流提取2次，每次加80％乙醇8倍量提取1小时，滤过，药渣保留备用；滤液合并，减压浓缩至每1ml相当于2g生药，加乙醇搅拌使含醇量达70％，静置24小时；滤过，滤液减压浓缩至每1ml相当于3g生药，再加乙醇搅拌使含醇量达80％，静置24小时；滤过，滤液减压浓缩至干，得到醇提有效部位。药渣加去离子水煎煮提取2次，每次加6倍量去离子水煎煮1小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩，加乙醇搅拌使含醇量达70％，静置，滤过。取沉淀加蒸馏水溶解，加乙醇搅拌使含醇量达80％，静置，滤过，沉淀60℃真空干燥，得水提多糖粗品。将多糖粗品加蒸馏水溶解制成1％的溶液，用0.1％活性炭脱色，滤过，过中空纤维柱超滤(截留分子量大于6000)，滤液减压浓缩至干，得多糖有效部位。取醇提部位8g，水提多糖有效部位6g，加注射用水使溶解，加氯化钠8g，加甘露醇10g，调节pH值至7.0-7.5，加0.1％活性炭脱色，滤过，灭菌，低温冷冻干燥，即得。
实施例2
1处方：党参40克黄芪40克
2工艺：取处方量党参、黄芪药材加热提取2次，每次加70％乙醇10倍量提取1小时，滤过，药渣保留备用，滤液合并，减压浓缩至每1ml相当于2g生药，加乙醇搅拌使含醇量达70％，静置24小时；滤过，滤液减压浓缩至每1ml相当于3g生药，再加乙醇搅拌使含醇量达80％，静置24小时；滤过，滤液减压浓缩至干，得到醇提有效部位。药渣每次加6倍量去离子水煎煮，，提取2次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩，加乙醇搅拌使含醇量达70％，静置，滤过。取沉淀加蒸馏水溶解，滤液加乙醇搅拌使含醇量达80％，静置，滤过，沉淀60℃真空干燥，得水提多糖粗品。将多糖粗品加蒸馏水溶解制成1％的溶液，用0.1％活性炭脱色，滤过，过中空纤维柱超滤(截留分子量大于6000)，滤液减压浓缩至干，得多糖有效部位。取醇提部位8g，水提多糖有效部位6g，加注射用水使溶解，加氯化钠6g，加甘露醇20g，调节pH值至7.0-7.5，用0.1％活性炭脱色，滤过，灭菌，低温冷冻干燥，即得。
实施例3
1处方：党参40克黄芪40克
2工艺：取处方量党参、黄芪药材，加热回流提取2次，每次加80％乙醇8倍量提取1小时，滤过，药渣保留备用；滤液合并，减压浓缩至每1ml相当于2g生药，加乙醇搅拌使含醇量达70％，静置24小时；滤过，滤液减压浓缩至每1ml相当于3g生药，再加乙醇搅拌使含醇量达80％，静置24小时；滤过，滤液减压浓缩至干，得到醇提有效部位。药渣加去离子水煎煮提取2次，每次加6倍量去离子水煎煮1小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩，加乙醇搅拌使含醇量达70％，静置，滤过。取沉淀加蒸馏水溶解，加乙醇搅拌使含醇量达80％，静置，滤过，沉淀60℃真空干燥，得水提多糖粗品。将多糖粗品加蒸馏水溶解制成1％的溶液，用0.1％活性炭脱色，滤过，过中空纤维柱超滤(截留分子量大于6000)，滤液减压浓缩至干，得多糖有效部位。取醇提部位8g，水提多糖有效部位6g，加注射用水使溶解，加氯化钠6g，加乳糖10g，调节pH值至7.0-7.5，加0.1％活性炭脱色，滤过，灭菌，低温冷冻干燥，即得。
实施例4
1处方：党参40克黄芪40克
2工艺：取处方量党参、黄芪药材，加热回流提取2次，每次加60％乙醇8倍量提取1小时，滤过，药渣保留备用；滤液合并，减压浓缩至每1ml相当于2g生药，加乙醇搅拌使含醇量达60％，静置24小时；滤过，滤液减压浓缩至每1ml相当于3g生药，再加乙醇搅拌使含醇量达70％，静置24小时；滤过，滤液减压浓缩至干，得到醇提有效部位。药渣加去离子水煎煮提取2次，每次加6倍量去离子水煎煮1小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩，加乙醇搅拌使含醇量达60％，静置，滤过。取沉淀加蒸馏水溶解，加乙醇搅拌使含醇量达70％，静置，滤过，沉淀60℃真空干燥，得水提多糖粗品。将多糖粗品加蒸馏水溶解制成1％的溶液，用0.1％活性炭脱色，滤过，过中空纤维柱超滤(截留分子量大于6000)，滤液减压浓缩至干，得多糖有效部位。取醇提部位8g，水提多糖有效部位6g，加注射用水使溶解，加氯化钠4g，加甘露醇5g，乳糖5g，调节pH值至7.0-7.5，加0.1％活性炭脱色，滤过，灭菌，低温冷冻干燥，即得。
注射用参芪扶正冻干粉针剂的药效学实验
注射用参芪扶正冻干粉针剂在组方的原料药的组成上与参芪扶正注射液基本相同，但由于工艺方法上的改进，使注射用参芪扶正冻干粉针剂不但在提取成分中加入了能增强人体免疫的多糖成份，而且在药效学方面也表现出了更好的效果。
以免疫器官重量，腹腔巨噬细胞吞噬功能为指标，比较了注射用参芪扶正冻干粉针剂与参芪扶正注射液对小鼠免疫活性的影响，结果参芪扶正冻干粉针效果明显好于参芪扶正注射液。
1、注射用参芪扶正冻干粉针和参芪扶正注射液对小鼠免疫器官的影响
取昆明种小白鼠36只(由军事医学科学院动物实验中心提供)，体重在20±2g，随机分成3组。ip剂量为200mg/kg，连续给药7天，末次给药次日，将小鼠断头处死，取胸腺、脾脏称重，以mg/g体重为指标计算脾脏指数和胸腺指数，结果见表1。注射用参芪扶正冻干粉针能明显增加正常小鼠的胸腺重量，参芪扶正注射液则无此作用。注射用参芪扶正冻干粉针和参芪扶正注射液均能显著增加小鼠脾脏重量，见表1。
表1 参芪扶正冻干粉针和参芪扶正注射液对小鼠免疫器官的影响(x±s，n＝12)
剂量
组别 胸腺指数(mg/g) 脾脏指数(mg/g)
(mg/kg)
对照 - 17.544±2.98 48.30±7.35
注射用参芪扶正冻干 131.25±
200 21.365±5.12*
粉针 14.23***
阳性对照(参芪扶正 121.23±
200 17.891±3.05
注射液) 16.45***
与对照组比较：*P＜0.05 ***P＜0.01
2、注射用参芪扶正冻干粉针和参芪扶正注射液对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
给药方式同上，末次给药次日，断头处死小鼠，迅速剪开小鼠腹腔皮肤，无菌注射Hank’s溶液3mL，轻揉腹部，抽取腹腔液，1000r/min离心10min。用磷酸缓冲液定容，加入0.5％鸡红细胞0.2mL，于37℃，5％CO2培养箱孵育30min。离心推片，用瑞氏液染色，镜检，计算吞噬百分数和吞噬指数，结果见表2。注射用参芪扶正冻干粉针和参芪扶正注射液均能增加小鼠腹腔巨噬细胞的数量，但注射用参芪扶正冻干粉针促吞噬作用较参芪扶正注射液更显著，见表2。
表2 注射用参芪扶正冻干粉针和参芪扶正注射液对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬的影响(x±s，n＝12)
剂量 吞噬百分率
组别 吞噬指数
(mg/kg) (％)
对照组 - 0.000±0.000 0.00±0.00
注射用参芪扶正冻干 0.263±
200 5.02±3.12**
粉针 0.157*
阳性对照(参芪扶正注 0.013±
200 0.73±0.61*
射液) 0.010
与对照组比较：*P＜0.05 **P＜0.01