一种羟基红花黄色素A与丹酚酸A的药物组合物及试剂盒.pdf

本发明涉及一种用于治疗心脑血管疾病的药物组合物，具体涉及一种羟基红花黄色素A与丹酚酸A的药物组合物及试剂盒。一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，包含羟基红花黄色素A和丹酚酸A。本发明开发的羟基红花黄色素A和丹酚酸A单体的组合物制成复方制剂或者组合施用，能够有效提高有效成分的含量，同时排除市售产品中的杂质，极大的改善甚至消除目前市售产品引起过敏反应明显的现状。本发明提供的药物组合物，疗效显著，适合临床应用。

1.  一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于：包含羟基红花黄色素A和丹酚酸A。

2.  根据权利要求1所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于：包含高纯度的羟基 红花黄色素A和丹酚酸A，所述高纯度是指有效成分含量不少于90％。

3.  根据权利要求2所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于：所述的高纯度的羟 基红花黄色素A含量不少于98％。

4.  根据权利要求2或3所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于：所述的高纯度 的丹酚酸A含量不少于98％。

5.  根据权利要求1-4任意一项所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于：所述的 羟基红花黄色素A和丹酚酸A的重量比为0.5:1-32:1。

6.  根据权利要求5所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于：所述的羟基红花黄 色素A和丹酚酸A的重量比为8:1。

7.  根据权利要求1-6任意一项所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于，所述的 羟基红花黄色素A的用量约为0.1-10mg/kg，且丹酚酸A的用量约为0.05-2.5mg/kg。

8.  权利要求1-6任意一项所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物作为活性成分的药物制剂， 包括片剂、口服液、颗粒剂、滴丸剂、软硬胶囊剂、缓控释制剂或注射剂。

9.  权利要求1-6任意一项所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物在制备治疗心脑血管疾病 药物中的应用。

10.  一种试剂盒，包含羟基红花黄色素A和丹酚酸A，其中羟基红花黄色素A为0.1-10mg， 丹酚酸A为0.05-2.5mg。

一种羟基红花黄色素A与丹酚酸A的药物组合物及试剂盒
技术领域
本发明涉及一种用于治疗心脑血管疾病的药物组合物，具体涉及一种羟基红花黄色素A与丹酚酸A的药物组合物及试剂盒。
背景技术
中药红花来源于菊科植物Carthamus tinctorious L.的干燥花，性辛、温，具有活血通经散瘀止痛的功效。现代药理学研究表明，红花的主要活性组分集中在水溶性的红花黄色素。红花黄色素为黄酮类化合物，具有扩张冠状动脉、抗氧化、抗炎等功效，同时其还是一种血小板活化因子抑制剂，可抑制血栓的形成，用于心脑血管疾病的治疗。进一步的研究表明，红花黄色素是三种水溶性成分的混合物：羟基红花黄色素A、红花黄色素B和红花黄色素C，其中羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow-A)的含量最高，为药典规定的红花品质元素，是红花药理功效的最有效水溶性成分，其结构式如下：

丹酚酸A，化学名为(2R)-3-(3,4-二羟基苯基)-2-[(E)-3-[2-[(E)-2-(3,4-二羟基苯基)乙烯基]-3,4-二羟基苯基]丙-2-烯酰]氧丙酸，属于酚酸类化合物，为丹参水溶性成分中活性最高的成分。药理学研究表明，丹酚酸A具有极强的抗氧化活性，可以清除体内的自由基，具有心脑血管疾病的治疗和预防作用、抗肝纤维化、神经细胞的保护作用等。另外，经宋延平、孔令姗等人研究发现，丹酚酸A相比丹酚酸B改善大鼠心肌缺血的作用更强，而甄永苏等人的研究发现，丹酚酸A具有抗肿瘤作用，可以增强抗癌药物的疗效，其结构式如下：

目前国内已上市的丹红注射液是中药丹参、红花经提取而成的复方制剂，共有31个主要有效成分，包括丹参酮、丹酚酸B、红花黄色素等，有效成分含量较低。获批适应症为：活血化瘀，通脉舒络。用于瘀血闭阻所致的胸痹及中风，证见：胸痛，胸闷，心悸，口眼歪斜，言语蹇涩，肢体麻木，活动不利等症；冠心病、心绞痛、心肌梗塞，瘀血型肺心病，缺血性脑病、脑血栓。临床应用已证实其有效性，但丹红注射液存在最主要的不良反应是过敏反应，主因是由于制剂成分复杂、国内的制药工艺不能完全把丹红注射液针剂中的杂质排除引起的。基于丹参、红花复方制剂的药学价值及国内外心脑血管庞大的用药市场，寻找和开发组方精炼、疗效确切、安全有效的新的中药组合物具有重要的临床和科学价值。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的缺陷，提供一种更为合理，有效成分含量高，副作用小，可控性强的适合临床应用的药物新组合物及试剂盒，本发明的另一目的为提供该药物组合物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。
一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于包含羟基红花黄色素A和丹酚酸A。
本发明所述的羟基红花黄色素A可以由现有技术进行制备，从红花中提取、纯化、精制后获得(如参照CN201410355732.2中的制备方法)，也可直接购买市售产品或购买羟基红花黄色素A粗品纯化精制而得。
本发明所述的丹酚酸A可由现有技术进行制备，从丹参中提取、纯化、精制后获得(如参照CN201310487751.6中的制备方法)，也可购买直接市售产品或购买丹酚酸粗品纯化精制而得。
所述治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于该组合物包含高纯度的 羟基红花黄色素A和丹酚酸A。
本发明所述高纯度是指有效成分含量不少于90％。
优选的，高纯度的羟基红花黄色素A含量不少于98％。
优选的，高纯度的丹酚酸A含量不少于98％。
优选的，羟基红花黄色素A和丹酚酸A的重量比为0.5:1-32:1，更优选为4:1-16:1，最优选为8:1。
由所述药物组合物作为活性成分的药物制剂，还可进一步含有药用的粘合剂或/和填充剂或/和崩解剂或/和润滑剂或/和矫味剂或/和润湿剂或/和助流剂，其特征在于包括但不限于片剂、口服液、颗粒剂、滴丸剂、软硬胶囊剂、缓控释制剂、注射剂，优选为冻干粉针剂。进一步的，本发明还提供了所述的药物组合物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。
本发明经药效学实验证明在急性脑缺血的动物模型中具有显著的治疗效果。实验用动物为大鼠，羟基红花黄色素A高剂量组的脑梗面积平均为24.2％，丹酚酸A高剂量组脑梗面积平均为19.9％，均显著低于溶剂对照组的37.6％，两种药物联合应用在羟基红花黄色素A:丹酚酸A重量比为0.5:1-32:1之间均能显示出不同程度的治疗作用，尤以4:1-16:1时协同作用更佳，8:1时协同作用最佳。
更进一步的，在本发明羟基红花黄色素A和丹酚酸A的重量比例范围内，申请人发现(换算到人体施用剂量)，当羟基红花黄色素A的用量约为0.1-10mg/kg，丹酚酸A的用量约为0.05-2.5mg/kg时具有都具有疗效和协同效果；优选的羟基红花黄色素A的用量范围为0.5-2.5mg/kg；优选的丹酚酸A的用量范围为：0.1-0.5mg/kg；更优选的，羟基红花黄色素A的用量为1.25mg/kg，且丹酚酸A用量约为0.15mg/kg；或羟基红花黄色素A的用量为2.5mg/kg，且丹酚酸A的用量约为0.3mg/kg。
进一步的，本发明还提供了一种试剂盒，包含羟基红花黄色素A和丹酚酸A，其中羟基红花黄色素A为0.1-10mg，丹酚酸A为0.05-2.5mg。
所述的试剂盒包含高纯度的羟基红花黄色素A和丹酚酸A。
本发明所述高纯度是指有效成分含量不少于90％。
优选的，高纯度的羟基红花黄色素A含量不少于98％。
优选的，高纯度的丹酚酸A含量不少于98％。
优选的，所述的试剂盒中的羟基红花黄色素A和丹酚酸A的重量比为0.5:1-32:1，更优选为4:1-16:1，最优选为8:1。
更进一步的，在本发明羟基红花黄色素A和丹酚酸A的重量比例范围内，申请人发现(换算到人体施用剂量)，当羟基红花黄色素A的用量约为0.1-10mg/kg，丹酚酸A的用量约为0.05-2.5mg/kg时具有都具有疗效和协同效果；优选的羟基红花黄色素A的用量范围为0.5-2.5mg/kg；优选的丹酚酸A的用量范围为：0.1-0.5mg/kg；更优选的，羟基红花黄色素A的用量为1.25mg/kg，且丹酚酸A用量约为0.15mg/kg；或羟基红花黄色素A的用量为2.5mg/kg，且丹酚酸A的用量约为0.3mg/kg。
进一步的，由所述试剂盒中的羟基红花黄色素A或丹酚酸A作为活性成分的药物制剂，还可进一步含有药用的粘合剂或/和填充剂或/和崩解剂或/和润滑剂或/和矫味剂或/和润湿剂或/和助流剂，其特征在于包括但不限于片剂、口服液、颗粒剂、滴丸剂、软硬胶囊剂、缓控释制剂、注射剂或冻干粉针剂。
本发明开发的羟基红花黄色素A和丹酚酸A单体的组合物制成复方制剂或者组合施用，能够有效提高有效成分的含量，同时排除市售产品中的杂质，极大的改善甚至消除目前市售产品引起过敏反应明显的现状。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐述本发明，应理解，以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。
下列实施例中所用方法如无特别说明，均为常规方法。以下实施例中所需要的材料或试剂，如无特殊说明均为市场购得。
实施例
1.受试药物
羟基红花黄色素A：本品呈黄色粉末，由浙江永宁药业股份有限公司提供。
丹酚酸A：本品呈淡黄色粉末，由浙江永宁药业股份有限公司提供。
2.剂量设置及分组
2.1.单药剂量设置：
羟基红花黄色素A设四个剂量为：5mg/kg，10mg/kg，20mg/kg和40mg/kg。
丹酚酸A设四个剂量为：1.25mg/kg，2.5mg/kg，5mg/kg和10mg/kg。
另设生理盐水对照组。
2.2.复方配比剂量设置
羟基红花黄色素A与丹酚酸A按照拉丁方排列后共有16组，单药各有四个剂量组合溶剂对照组，共25组(见表1)，每组n＝10。
表1羟基红花黄色素A与丹酚酸A不同剂量间的配比

2.3.给药途径及给药溶积
给药途径为尾静脉注射，给药容积为2ml/kg，各组给药时间为脑梗实验完成后，即刻给药。
2.4.实验动物
品系：SD大鼠；
级别：SPF级；
性别：雄性； 
数量：260只；
动物生产许可证号：SCXK(沪)2012-0002、SCXK(沪)2013-0016；
实验动物质量合格证编号：2007000573596、2008001642733、2008001642014、2007000569748、2008001641026；
动物由第二军医大学实验动物中心移至实验单位动物房后分笼适应性饲养三天，用普通大鼠饲料喂养，自由饮水，光线12小时明暗自动转换，室内温度20-22℃。
2.5.实验仪器
手术显微镜:型号XTS-4A,江苏镇江中天光学仪器有限责任公司；
双极电凝器：型号SD-78,上海医疗器械高技术公司；
Strong Series Micro Motor Handpiece：STRONG 90-102，Saeshin Precision Co.；
电子天平：型号T-1000，Max＝1000g，d＝0.1g，e＝5g，美国双杰兄弟(集团)有限公司，常熟双杰测试仪器厂。
3.实验方法
大鼠用15％的水合氯醛按2ml/kg腹腔注射麻醉大鼠，以左侧侧卧固定在手术台上，剔去左侧颞顶部及面部的鼠毛，常规酒精消毒后在左眼和左耳之间切开皮肤，分离颞肌和咬肌，暴露颞骨翼板，于手术显微镜下在颞骨和颞鳞骨结合靠近口侧1mm处用电钻做2mm×2mm的骨窗，用撬棒撬开颅骨。此时，透过硬脑膜即可见一条较直且分支较少的小血管，即为大脑中动脉。它几乎垂直路过嗅束向上而行。用电凝镊电凝灼烧嗅束内1mm至大脑下静脉之间的大脑中动脉，然后依次缝合颞肌和皮肤，静脉注射药物。为预防感染，肌肉注射0.2万单位大青霉素钠。待大鼠苏醒后，回笼饲养。
24h后断头取脑，去除嗅球、小脑和脑干，-20℃冰箱中速冻30min左右，便于切片。将冰冻好的大脑等分切成7片，将切片置于0.5％的TTC染液中37℃避光温孵10min，染非缺血区为玫瑰红色，梗死区为白色，用注射器吸干TTC染液，加入10％的甲醛避光保存24h后用数码相机拍照，用图像分析工具(ImageJ)求出正面和反面梗死区和非梗死区半脑的面积，计算出梗死面积占大脑切面总面积的百分率。
4.观察指标
有效率：即大鼠治疗显效的比例。
梗死面积(％)：即大鼠梗死面积占该侧大脑半球急面积的百分比。

Q值：用于表示两种药物相互影响的一个参数，若小于1，表示两种药物产生拮抗作用；1-1.15，显示两种药物显示加合作用；大于1.15，显示两种药物显示协同作用。
5.统计分析
实验数据以均数±标准差表示，对变量进行组间二样本等方差假设的t检验统计分析，以P<O.05为具有统计学显著性差异标准。
6.实验结果
羟基红花黄色素A和丹酚酸A单独用于抗大鼠急性脑缺血就有非常好的效果，两个药物均有量效关系存在，即药物剂量越大，抗脑缺血效果就越好。从表2中可以看出，羟基红花黄色素A高剂量组的脑梗面积平均为24.2％；丹酚酸A高剂量组脑梗面积平均为19.9％，均显著低于溶剂对照组的37.6％。
与溶剂对照组比较，在不同剂量的配比研究中，两种药物联合应用抗急性脑缺血效果各不一致，研究哪一组配比协同性最好，尚需用药物协同性检验公式检验后确定(见表2)。
表2两种药物单用和不同剂量组合对大鼠急性脑缺血梗死面积百分率的影响 


***P<0.001vs control
从表2中可以看出，羟基红花黄色素A:丹酚酸A(mg/kg:mg/kg)＝0.5:1-32:1时，均有不同程度的降低梗死面积的效果，而4:1-16:1间协同性较好，以8:1为最优。
以上内容仅仅是对本发明工艺路线所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明的构思或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。