用于治疗人乳头状瘤病毒相关性癌症和其他上皮性肿瘤的肽.pdf

本发明涉及分子药理学领域，特别是发展用于治疗上皮性肿瘤且主要是那些与致癌型HPV相关的上皮性肿瘤的肽。本发明主要的目的是鉴别肽，其结构可使得其通过直接与酪蛋白激酶II(CKII)磷酸化结构域相互作用而封闭CKII磷酸化结构域。本发明显示具有不同氨基酸序列的十一环肽，其在体外抑制CKII的磷酸化，在HPV－16转化细胞(CaSki)上表现出细胞毒性并且增加这些细胞对于干扰素(IFN)抑制细胞生长作用的敏感性。而且，本发明涉及与其它可穿透进入细胞的肽和化合物相缀合或融合的这些肽的应用以及肽和化学模拟分子的应用。

权利要求书
1、  结合并抑制酪蛋白激酶II(CKII)磷酸化位点的肽以及所述肽的任何的同系物或模拟变体(合成的或重组的)，所述肽具有如下序列：
a.CSVRQGPVQKC；
b.CSSCQNSPALC；
c.CQIPQRTATRC；
d.CAKQRTDPGYC；
e.CWMSPRHLGTC；
f.CRNCTVIQFSC；
g.CHYIAGTVQGC；
h.CPLVSLRDHSC；
i.CKQSYLHHLLC；
j.CFQPLTPLCRC；
k.CQSYHELLLQC。

2、  权利要求1的肽，其具有环状结构。

3、  权利要求1或2的肽，其包含在一种融合多肽中。

4、  包含权利要求1-3中任一项的一种或不同的肽以及适当的载体的药物组合物。

5、  权利要求4的药物组合物，其额外含有一种细胞因子。

6、  权利要求5的药物组合物，所述的细胞因子是干扰素(IFN)。

7、  权利要求1-3中任一项的肽在抑制肿瘤细胞增殖中的应用。

8、  权利要求7的应用，其是在治疗HPV相关的和非相关的肿瘤中的应用。

9、  权利要求7的应用，其是在治疗HPV相关性癌前期病变中的应用。

10、  权利要求7-9中任一项的应用，其中所述肽与细胞因子共同使用。

11、  权利要求10的应用，其中的细胞因子是干扰素。

12、  权利要求7-9中任一项的应用，其中所述肽用于治疗对IFN治疗具有抗性的HPV感染患者。

13、  一种哺乳动物表达载体，含有编码权利要求1-3中任一项的肽的DNA序列。

说明书用于治疗人乳头状瘤病毒相关性癌症和其他上皮性肿瘤的肽
本发明涉及分子药理学领域，特别是发展用于治疗HPV相关性上皮性肿瘤的肽，所述的肽可通过直接与酪蛋白激酶II磷酸化结构域作用而封闭此CKII磷酸化结构域。
CKII是一个苏氨酸/丝氨酸酶，与细胞增殖有关，在恶性转化过程中它主要定位在细胞核内(Tawfic S，Yu S，Wang H，Faust R，Davis A，AhmedK，2001，Histol.Histopathol.16：573-582)。
基于在不同上皮性实体瘤中发现存在高水平的CKII的报导，目前认为在恶性转化中，由这个酶诱发的磷酸化是一个重要的事件及肿瘤进展的标志(Seldin DC，Leder P，1995，Science 267：894-897)(Faust RA，GapanyM，Tristani P，Davis A，Adams GL，Ahmed K，1996，Cancer Letters101：31-35)。另一方面，通过增加乳腺上皮细胞中Wnt/β-连环蛋白(beta-catenine)信号转导途径，CKII在转基因小鼠中过量表达导致乳腺导管肿瘤发生(Landesman-Bollag E，Romien Mourez R，Song DH，Sonenshein GE，Cardiff RD，Seldin DC，2001，Oncogene 20：3247-3257)。
在上皮性肿瘤中，HPV来源的肿瘤代表一大部分。例如，大多数的泌尿生殖器官肿瘤与这些肿瘤病毒相关，宫颈鳞状上皮细胞来源的肿瘤中已经证明有99.7％存在HPV DNA序列(Walboormers JM，Jacobs MV，Manos MM，Bosch FX，Kummer JA，Shah KV，Snijders PJ，Peto J，Meijer CJ，Munoz N，1999，J.Pathol 189：12-19)。同样，WHO报道每年世界范围内约有500000宫颈癌病人(Parkin DM，Laara E，Muir CS，1980，Int.j.Cancer41：184-1972)。在古巴，每年有370名宫颈癌妇女死于这种疾病(Organizacion Panamericana de la Salud，1999，Basic Country Health Profilesfor the Americas，Cuba，206-219)。
依据病变是否进展为恶性，可将HPV分类为致癌性HPV和非致癌性HPV(Lorincz AT，Temple GF，Kurman Rj，Jenson AB，Lancaster WD，1987，J.Natl，Cancer lnst.79：671-677)。HPV-16和18与通常发展为恶性的上皮内肿瘤形成相关，超过90％的不典型增生(dysplasia)和宫颈癌都与这两种HPV型相关(Fujinaga Y，Shimada M，Okasawa K，Fukushima M，Kato I，Fujinaga K，1991 J.Gen.Virol 72：1039-1044)。
因为还没有获得根治HPV相关性肿瘤的治疗或预防疫苗，使用靶向病毒转录和癌基因蛋白质的抑制剂变得更吸引人。生物调节剂如IFN已经被有效的用于某些HPV相关性疾病如湿疣、足底疣和呼吸道多发性乳头状瘤病(Koromilas AE，Li S，Matlashewski G，2001.Cytokine & GrowthFactor Reviews 12：157-170)。在以前的HPV-转化细胞(HeLa)实验中，我们已经证明持续暴露在IFN-α中，这些细胞可产生一个恶性表型逆转，并伴随HPV mRNA表达的抑制(Lopez-Ocejo O，Perea SE，Reyes A，VigoaL，Lopez-Saura P，1993，J.IFN Res 13：369-375)。在同样的细胞模型中，我们发现IFN-α通过抑制内源性病毒转录调节HPV mRNA(Perea SE，Lopez-Ocejo O，Garcia-Milian R，Arana MJ，1995，J.IFN & Cytokine Res15：495-501)。在宫颈癌病人的试验性研究中，我们观察到IFN-α治疗可调节mRNA表达，这与细胞系获得的结果一致(Garcia-Milian R，Rios MA，Diaz D，Silveira M，Guilar O，Arnigo M，Arana MJ，Perea SE，1996，J.IFNand Cytokine Res 16：709-713)。尽管发现了IFN可用作调节剂调节HPVmRNA表达量，但大量的数据指出在临床实验过程中40％-50％的病人存在一个可变的IFN反应和对于这种细胞因子的抵抗现象(Arany I，TyringSK，Stanley MA，Tomai MA，Miller RL，Smith MH，McDermott，DJ，SladeHB，1999，Antiviral Res 43：55-63)。一些分子和临床证据显示E7癌基因蛋白质在IFN抵抗现象中起到一个关键作用。例如，已经报道E7与IFN诱导的转录因子(p48)结合，因此，通过封闭转录激活影响IFN反应(BarnardP and McMillan NAJ，1999，Virology 259：305-313)。此外，也报道在E7存在时，IFN调节因子(IRF-1)改变(Park JS，Kim EJ，Kwon HJ，Hwang ES，Namkoong SE，um SJ，2000，J Biol Chem 275：6764-6769)(Perea SE，Massimi P，Banks L，2000，J Mol Med 5：661-666)。在临床试验中，IFN反应被认为依赖于含有HPV的病变中的E7的表达(Frazer IH，McMillanNAJ，1997，Papillomatosis and condyloma acuminate.Clinical Applicationsof the Interferons(RStuart Harris and RD Penny，eds)Pp79-90.Chapman andHall Medical，London)。E7癌基因蛋白质在这些癌基因病毒诱导的恶性转化中起了一个重要的作用。因此，已经证明，E7诱导原代细胞的永生(immortalization)在永生过程的开始便引起突变和染色体异常(Mougin C，Humbey O，Gay C，Riethmuller D，2000，J.Gynecol Obstet.Biol.Reprod29：13-20)。另一方面，我们已经证实E7基因稳定转染导致敏感肿瘤细胞中IFN抗性表型的出现(Moro A，Calixto A，Suarez E，Arana MJ，Perea SE，1998，Bioch BIOPH Res Comm 245：752-756)。同样地，已经报道E7癌基因蛋白质分别通过Cys 24和C末端结构域结合并封闭肿瘤抑制基因如成视网膜细胞瘤(Rb)和胰岛素样生长因子结合蛋白3”(IGFBP-3)的功能(Nevins JR，1992，Science 258：424-429)(Zwerschke W and Jansen-Durr P，2000，Advances in Cancer Res 78：1-29)。相似地，E7蛋白质内成对的Ser31/Ser 32被证实为CKII酶的底物(Hashida T，Yasumoto S，1990，Biochem.Biophys Res.Comm 172：958-964)并且这个结构域对于所述癌基因蛋白质的转化能力(Barbosa MS，Edmonds C，Fisher C，Schiller JT，Lowy DR，Vousden K，1990，EMBO J 9：153-160)(Chien W-M，Parker JN，Schmidt-Grimminger D-C，Broker TR，Chow LT，2000，Cell Growth & Differentiation11：425-435)和抑制IFN信号级联(Perea SE，Lopez-Ocejo O，GarciaMilian R，Banks L，Arana MJ，1996，Eur.Cytokine Net 7：503)都是必需的。
基于CKII磷酸化位点在对IFN的HPV-抗性和癌症发展的作用而设计的能够封闭该结构域的药物可能成为治疗癌症的有效工具。到目前为止，还没有描述过抑制E7或其它细胞底物上的CKII磷酸化位点的分子。
关于E7癌基因蛋白质，仅仅描述了封闭Rb结合位点的肽(Cys 24)(Webster KR，Koleman KG，1997，US5625031)(Oliff AI，Riemen MW，EP0412762 A2 910213)和其它C末端区域(39-98)(Pidder J-D，ZwerschkeW，2000，EP0969013)。
到目前为止，在临床和前期临床试验中，已经描述的一些候选疫苗集中在开发HPV E7特异性的CTL反应上(Chen C，Wang CC，Hung C，Pardoll DM，Wu T，2000，Vaccine 18：2015-2022)(Chen CH，Ji H，SuhK W，Choti MA，Pardoll DM，Wu TC，1999，Gene Ther 12：1972-1981)。但是，注重于CTL反应的方法面临着涉及HPV生物学的不同障碍。例如，HPV致癌型下调CTL反应必需的MHC I类抗原(Connor ME，Stern PL，1990，Int J Cancer 46：1029-1034)。而且，在肿瘤条件下，E7表达量与局部免疫抑制相关联，这也可以影响CTL反应的适当发展(Le Buanec H，D’AnnaR，Lachgar A，Zagury JF，Bernard J，Lttlele D，d’Alessio P，Hallez S，Giannouli C，Burny A，Bizzini B，Gallo RC，Zagury D，1999，biomedPharmacother 53：424-431)(Lee SJ，Cho YS，Shim JH，Lee KA，Ko KK，ChoeYK，Park SN，Hoshino T，Kim S，Dinarello CA，Yoon DY，2001，J Immunol167：497-504)。依据以上要素，将CTL疫苗与靶向E7的药物组合起来似乎可能具有很好的前景。
同样地，预防性HPV疫苗方法面临一个高收益和成本风险，这是因为以下不同的生物学的和社会学的原因，包括：1)HPV初次感染后的长潜伏期，2)对于HPV感染机制缺乏了解，3)没有适于HPV增殖的动物模型，4)物种特异性和5)评价预防性HPV疫苗的社会性影响可能需要很长时间。因此，使用特异性靶向病毒癌基因蛋白质的药物可能提供优于这些集中操纵免疫系统的方法的优点。
本发明的实质
本发明的实质和创新在于首次描述了可以直接抑制CKII磷酸化位点并在体内产生针对HPV-16宫颈癌细胞的细胞毒作用的环肽(cyclicpeptide)。而且，这些肽可增加细胞对IFN抑制细胞生长作用的敏感性。
详细描述本发明
本发明主要涉及能与CKII磷酸化位点结合的肽，其具有如下的序列：
(a)CSVRQGPVQKC(SEQ ID No.1)
(b)CSSCQNSPALC(SEQ ID No.2)
(c)CQIPQRTATRC(SEQ ID No.3)
(d)CAKQRTDPGYC(SEQ ID No.4)
(e)CWMSPRHLGTC(SEQ ID No.5)
(f)CRNCTVIQFSC(SEQ ID No.6)
(g)CHYIAGTVQGC(SEQ ID No.7)
(h)CPLVSLRDHSC(SEQ ID No.8)
(i)CKQSYLHHLLC(SEQ ID No.9)
(j)CFQPLTPLCRC(SEQ ID No.10)
(k)CQSYHELLLQC(SEQ ID No.11)
本发明也包括所述肽的任何同系物变体或模拟物，其经合成或重组获得，以及含有所列的肽的任何融合肽。任何肽，如果其结构能够在CKII各自的底物上封闭CKII磷酸化位点，即被认为是同系物变体。同样地，其结构可封闭这样的磷酸化位点地任何化学分子(非肽)被认为是模拟物变体。
本发明的其它目的是包含一或多种本发明的肽及适当的载体的药物组合物。
同样地，本发明包含所述肽单独或与任何其它适合的分子如细胞因子和干扰素联合使用以1)抑制癌细胞增殖、2)治疗HPV相关的和不相关的癌症和3)治疗HPV相关性癌前期病变的用途。
此外，本发明的肽可用于治疗抗干扰素治疗的HPV感染病人。
本发明的其它方面中，包含含有编码任何上述肽的DNA序列的哺乳动物细胞的表达载体。
本发明的肽具有一个环状结构，它们主要的特性是具有结合CKII磷酸化位点并废除了这样的生物化学作用的能力。所附序列表描述了所述的肽。另一方面，也示出了所述肽对HPV-16转化细胞产生的体内影响。
所述肽通过它们抑制先前所报道的作为CKII磷酸化的最佳的共有结构域的RRREEETEEE序列的磷酸化(Promega Cat：V5661)和包含在HPV-16 E7癌基因蛋白质28-38区域的磷酸化位点的能力而定义。
为定义本发明描述的肽，构建一个十一氨基酸环肽文库并在丝状噬菌体的P8区域上表达。使用合成的E7的28-38区域作为靶来筛选文库，所述区域缀合了生物素以固定到一个固体表面上。使用抗噬菌体P8区域的特异性抗体通过免疫检测筛选出结合E7的28-38区域的噬菌体。最后，与E7的28-38区域高效结合的11个噬菌体相应的DNA被测序，并通过固相方法化学合成各自的肽。合成的肽经HPLC进一步纯化，通过质谱分析，最后评价其体外和体内的效力。
依据本发明，尽管在此描述的环肽具有不同的氨基酸序列，它们可同等抑制CKII磷酸化作用。这指示，这些肽与CKII磷酸化位点的相互作用主要是基于它们的结构而不是序列自身。
在本发明中，也证明线性肽抑制CKII磷酸化位点的能力较低。这个发现加强了结构在这些肽与这样的结构域的结合能力上的重要性。而且，这个发现也提示其它与CKII磷酸化位点结合的模拟分子的功效。
为了完成CKII内源底物的胞内作用，所述肽可被化学缀合或遗传融合到细胞穿透肽(cell penetrating peptide)，该肽属于如人类免疫缺陷病毒(HIV-1)Tat1(Schwarze SR，Dowdy SF，2000，Trends Pharmacol 21：45-48)，果蝇触角足基因编码的转录因子(Derossi D，et al，1996，J.Biol Chem271：18188-18193)，单纯疱疹病毒(HSV)VP22蛋白质(Lindgreen M，et al，2000，Trends Pharmacol Sci 21：99-103)，穿透子(penetratin)和运送子(transportan)(Gariepy J，Kawamura K，2001，Trends Biotech 19：21-28)等的蛋白质。在本发明中，为检测所述体内假说，合成的环肽与报道是HIV-1Tat1蛋白质的细胞穿透肽(GRKKRRQRRRPPQC)和一个属于SV40T大抗原(KKKRKVE)的核定位信号融合。
本发明的数据清楚地显示环肽对HPV-16(CaSki)转化的宫颈癌细胞具有剂量依赖性的细胞毒性。这些结果提示可使用这些肽作为治疗工具治疗如宫颈上皮性肿瘤的相同组织学来源的肿瘤和癌前期病变。同样地，体内实验数据显示环肽比它们各自的线性结构更有效，因此增强了结构对其作用的重要性。
同样地，本发明描述的环肽在携带HPV-18的HeLa细胞和HPV阴性的非小细胞肺癌来源的H-82细胞上是有效的。这些结果与本发明中体外获得的结果相互关联，其中肽不仅封闭HPV-16 E7上的CKII磷酸化位点，而且封闭了其它含有这样位点的蛋白质。事实上，所述的肽对于HPV-阴性肿瘤细胞是有效的，这为其可能用于治疗其它上皮性肿瘤提供了依据。本发明的其它结果指出，使用所述环肽治疗CaSKi细胞增加了细胞对于IFN-α抑制细胞生长的敏感性。鉴于早先的证据显示HPV-16 E7上的CKII磷酸化位点对于封闭IFN信号级联是必需的(Perea SE，López-Ocejo O，García Milián R，Banks L，Arań a MJ，1996，Eur，CytokineNet 7：503)，所述的肽可被用于克服在HPV感染观察到的常见的IFN抗性。
本发明的目的也与编码每个所述肽的DNA有关。DNA可被导入哺乳动物表达载体并进一步转染HPV-16转化和非转化细胞。含有编码各个肽的寡核苷酸的载体也可被用作HPV相关性癌症的基因治疗的替代剂。
原则上，所述的肽可与其它药物以及那些基于抗HPV的细胞应答的治疗性疫苗联合用于治疗HPV相关性疾病。
本发明通过以下实施例进一步阐述。
实施例
实施例1：肽对CKII磷酸化位点的作用
该分析基于使用底物序列RRREEETEEE的体外磷酸化反应，该序列代表CKII磷酸化作用的最佳的共有结构域。在50μl的25mM Tris-HCL，pH7.5，1μ Ci32P-γATP，100μM ATP，2mg/ml底物肽，0.2M NaCl，10mMMgCl和1单位CKII酶(Promega)中完成反应。反应在37℃孵育10分钟。然后，取5μl反应液点在PE-81层析纸上(Whatmann)，用10mMH3PO4洗4遍。最后，检测滤纸的放射性，cpm水平显示每个样品的CKII酶活性。同时，实验中加入一个特异性CKII抑制剂如肝素作为内对照。图1显示的数据证明环肽对CKII磷酸化作用的抑制达到80％。而且，线性肽也抑制E7上28-38区域的CKII磷酸化，但是与环肽比较抑制程度较小。这些证据说明所述的肽抑制CKII磷酸化位点并提示结构在与靶序列的相互作用中起到重要的作用。
实施例2：肽对HPV-16 E7磷酸化的作用
该分析基于E.Coli表达的HPV-16 E7癌基因蛋白质的体外磷酸化反应，该癌基因蛋白质在E.Coli中作为与谷胱甘肽S转移酶(GST)融合的融合蛋白质而表达。酶反应前，使用谷胱甘肽琼脂糖凝胶珠(Pharmacia)亲和层析纯化E7-GST融合蛋白。混合反应体系如下：50μl缓冲液25mMTris-HCL，pH7.5，1μ Ci32P-γATP，100μM ATP，40μl含有E7-GST的珠，0.2M NaCl，10mM MgCl和1单位CKII(Promega)。将反应物在37℃孵育40分钟。然后，用0.5ml缓冲液洗脱珠3次，最后，用10％的SDS-PAGE电泳分析E7-GST的磷酸化水平。将先前暴露于干胶的X-Ray胶片显色，可见磷酸化蛋白质。经光密度测定量化E7磷酸化。图2数据指示所述肽对于抑制HPV-16 E7上的CKII磷酸化位点均有效。
实施例3：肽对HPV-16转化细胞和HPV-18转化细胞(分别是CaSki和HeLa)增殖情况的影响
在该分析中，使用含10％胎牛血清(FCS)(Gibco)的DMEM培养基将CaSki或HeLa细胞以2×104细胞/ml接种于96孔培养板(Costar)。24小时后，将15μM到500μM剂量范围之间的肽加入培养基。5％CO2孵育96小时，最终，在每孔中加入20μl MTS溶液(1.90mg/ml)(Promega)。随后，培养板在同样的孵育环境中保持1个小时，最后在490nm分析吸光度。结果表示为相对于无肽对照的生长的百分数。为此目的，化学合成环肽和线性肽并与HIV-1 Tat-1细胞穿透肽融合，其可以穿透进入细胞质和细胞核(Schwarze SR，Dowdy SF，2000，Trends Pharmacol 21：45-48)。从这个实验获得的数据证明所述肽对CaSki(HPV-16)和HeLa(HPV-18)细胞均产生了剂量依赖效应(图3A和3B)。这个实施例显示本发明的肽对于HPV-16和HPV-18都是有效的。
实施例4：肽对HPV-阴性肿瘤细胞的增殖情况的影响
在该分析中，使用含10％胎牛血清(FCS)(Gibco)的DMEM培养将H-82细胞(小细胞肺癌)以2×104细胞/ml接种于96孔板(Costar)。24小时后，将15μM到500μM剂量范围之间的肽加入培养基。5％CO2孵育96小时，最终，在每孔中加入20μl MTS溶液(1.90mg/ml)(Promega)。随后，培养板在同样的孵育环境中保持1个小时，最后在490nm分析吸光度。结果表示为相对于无肽对照的生长的百分数。在此分析中，如上所述使用与HIV-1 Tat-1细胞穿透肽融合的本发明所述的环肽。从这个实验获得的结果证明本发明所述肽对H-82细胞的增殖具有剂量依赖效应。图4证明本发明的肽对于HPV转化细胞以及来自其它部位和组织学类型的肿瘤细胞如小细胞肺癌都是有效的。
实施例5：肽对CaSki细胞中的HPV-16对IFN治疗的反应的影响
在该分析中，使用含10％胎牛血清(FCS)(Gibco)的DMEM培养将CaSki细胞以2×104细胞/ml接种于96孔板(Costar)。24小时后，将120μM的各种所述肽加入到培养基。24小时后，加入1000到31.5U/ml范围之间的IFN-α。5％CO2孵育96小时，随后在每孔中加入20μl MTS1.90mg/ml。此外，培养板在同样的孵育环境中保持1个小时，最后在490nm读取吸光度。数据显示为相对于对照的生长的百分数。在这些实验中，使用了本发明所述肽的环状变体与属于上述HIV Tat-1蛋白质的细胞穿透肽融合。图5观察到的结果证明，将CaSki细胞预先用本发明所述的肽孵育使得这些细胞对于IFN-α抗增殖作用变得敏感。这些数据提示可应用本发明所述的肽治疗那些IFN治疗无效的HPV-感染的病人。
实施例6：抑制CKII磷酸化作用的肽在植入人类肿瘤的裸鼠模型中的抗肿瘤作用
这些试验使用6-8周龄雌性BalbC小鼠。以盐溶液(PBS)重悬H-125细胞(非小细胞肺癌)，以1000000细胞/ml进行肿瘤植入。腹部皮下接种细胞悬液。将肽(序列表中的序列1)与细胞一起施用，肽每隔一天施用连续一个月。该分析中，评价了1和10mg/Kg体重之间的剂量。为了检测抗癌作用，测定进展参数。在人肿瘤植入实验动物的模型中，这些数据显示抑制CKII磷酸化作用的肽具有抗肿瘤效应。
本发明的优势
1.提供了可广泛应用的药物，其不仅可用于HPV相关性疾病，也可用于具有高水平CKII内源活性的实体瘤。
2.28-38区域在HPV中是保守的，这一点使得在与各型HPV相关的疾病中使用这种药物成为可能。
3.将这些肽作为治疗分子施用于人类时，其显示出低抗原性。
4.是容易制造和低价的药物。
附图说明
图1：肽对CKII磷酸化作用的影响
图2：肽对HPVE7 CKII磷酸化作用的影响
图3A：肽对CaSki细胞增殖的影响
图3B：肽对HeLa细胞增殖的影响
图4：肽对肺肿瘤细胞增殖的影响
图5：肽对HPV-16转化细胞对IFN作用的反应的影响
图6：抑制CKII磷酸化作用的肽在植入人类肿瘤的裸鼠中的抗肿瘤作用
                                序列表
<110>遗传和生物技术工程中心
<120>用于治疗人乳头状瘤病毒相关性癌症和其他上皮性肿瘤的肽
<130>Sequences
<140>
<141>
<160>11
<170>PatentIn Ver.2.1
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<212>PRT
<213>Artificial Sequence
<220>
<223>Description of the Artificial Sequence：Peptide 1
<220>
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<400>1
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<210>2
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<212>PRT
<213>Artificial Sequence
<220>
<223>Description of the Artificial Sequence：Peptide 2
<220>
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<222>(1)..(11)
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  1               5                  10
<210>3
<211>11
<212>PRT
<213>Artificial Sequence
<220>
<223>Description of the Artificial Sequence：Peptide 3
<220>
<221>PEPTIDE
<222>(1)..(11)
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  1               5                  10
<210>4
<211>11
<212>PRT
<213>Artificial Sequence
<220>
<223>Description of the Artificial Sequence：Peptide 4
<220>
<221>PEPTIDE
<222>(1)..(11)
<400>4
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  1               5                  10
<210>5
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<212>PRT
<213>Artificial Sequence
<220>
<223>Description of the Artificial Sequence：Peptide 5
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<223>Description of the Artificial Sequence：Peptide 6
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<213>Artificial Sequence
<220>
<223>Description of the Artificial Sequence：Peptide 7
<220>
<221>PEPTIDE
<222>()..(11)
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<212>PRT
<213>Artificial Sequence
<220>
<223>Description of the Artificial Sequence：Peptide 8
<220>
<221>PEPTIDE
<222>(1)..(11)
<400>8
Cys Pro Leu Val Ser Leu Arg Asp His Ser Cys
  1               5                  10
<210>9
<211>11
<212>PRT
<213>Artificial Sequence
<220>
<223>Description of the Artificial Sequence：Peptide 9
<220>
<221>PEPTIDE
<222>(1)..(11)
<400>9
Cys Lys Gln Ser Tyr Leu His His Leu Leu Cys
  1               5                  10
<210>10
<211>11
<212>PRT
<213>Artificial Sequence
<220>
<223>Description of the Artificial Sequence：Peptide 10
<220>
<221>PEPTIDE
<222>(1)..(11)
<400>10
Cys Phe Gln Pro Leu Thr Pro Leu Cys Arg Cys
  1               5                  10
<210>11
<211>11
<212>PRT
<213>Artificial Sequence
<220>
<223>Description of the Artificial Sequence：Peptide 11
<220>
<221>PEPTIDE
<222>(1)..(11)
<400>11
Cys Gln Ser Tyr His Glu Leu Leu Leu Gln Cys
  1               5                  10