用于猪的竞争排斥培养物 发明背景
【发明领域】
本发明涉及确定成分的用于控制沙门氏菌在猪中建群的竞争排斥培养物或微生态制剂。
尽管研究人员以及公众健康机构的努力，但是在过去的20年中人类沙门菌病的发病率增加。每年实际报导的人沙门氏菌感染病例数目超过40,000。然而，传染病中心估计每年在美国人沙门氏菌感染的真正发病率可能高达2到4百万例。动物性食物产品，包括猪仍是人类感染的重要来源。
除了沙门氏菌对人类健康的影响外，在猪中沙门氏菌的感染每年给美国养猪业造成1亿多美元的损失(Schwartz，1990，“中西部猪中的沙门菌病”，位于：美国动物健康学会会刊，pp，443-449)。在美国，由猪霍乱沙门氏菌(S.cholerasuis)(猪甲状旁腺的致病菌)所造成的沙门菌病发生最为频繁。尽管猪可暴露于多种来源的广泛宿主范围的沙门氏菌，如鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)，但是猪霍乱沙门氏菌是一种适应宿主的并且很少从非猪来源分离到的病原体(Schwartz，出处同上)。因此，猪霍乱沙门氏菌对新动物的自然感染主要通过从其胃肠道释放病原体至猪圈的感染动物的水平传播而发生。
先有技术描述
考虑到沙门氏菌在环境中的广泛存在，故不可能完全保护动物而不暴露于沙门氏菌中。因此，研究人员继续研究增加暴露于沙门氏菌中动物对建群抗性的方法。研究集中于疫苗的评价、保护性正常肠道菌群的建立，以及将会抑制沙门氏菌生长和建群地食物添加剂的鉴定。宿主免疫性对沙门氏菌建群的作用尚不清楚，并且是否免疫反应刺激将有效增强建群抗性还不确定。实验性疫苗还未证实一直有效。
开发正常的肠道微生物区系可增加对胃肠道沙门氏菌建群的抗性已得到充分证实。在家禽业中，已证实给小鸡口腔接种从成年鸡盲肠内容物或粪便掉落物中制备的厌氧细菌培养物微生态区系，也称为微生态制剂(定义为对施用其的动物具有有利效应的细菌培养物)有效地降低沙门氏菌建群[Snoeyenbos等，鸟类疾病，23：904-913，(1979)，Schneitz等，Acta Pathol.Microbiol.Scand.Sect.B.，89：109-116，(1981)，和Stavric等，J.Food Prot.，48：778-782，(1985)]。相反，预防小鸡被这些盲肠厌氧菌建群的家禽饲养实践，使小鸡对沙门氏菌的建群更为易感[Pivnick等，J.Food Prot.，44：909-916，(1981)]。通过在小鸡肠道中快速建群(Pivnick等，出处同上)、竞争肠壁上的附着位点(Snoeyenbos等，出处同上)或通过制备抑制肠道病原菌生长的抑菌或杀菌挥发性脂肪酸[Barnes等，J.Hyg.Camb.，82：263-283，(1979)和美国临床营养杂志，33：2426-2433，(1980)，Corrier等，鸟类疾病，34：668-676，(1990)和鸟类疾病，34：617-625，(1990)和Hinton等，鸟类疾病，34：626-633，(1990)]，这些微生态制剂可降低沙门氏菌的建群。
用微生物的混合培养物在一日龄小鸡中建立正常的肠道菌群已在数个欧洲国家广泛用于控制沙门氏菌建群。然而，由于未确定数目和类型的微生物存在于混合培养物中，故该系统在美国还没广泛接受。该方法广泛使用的一个缺陷有下面的事实，即该产品的组成不能够标准化，并且因此该产品不能够大规模贮存或制备而无组成和效应的变化。同样，因为起始材料总是成年家禽的肠道内容物，故该产品可能含有病原性病毒、细菌、或寄生虫，它们对家鸡的健康可能是危险的。更有甚者，美国食品与药物管理局近年来要求所有未确定的培养物必需得到批准。
发明概述
我们现在发现了有效控制或抑制猪沙门氏菌建群的确定的细菌微生态制剂或组合物。这些微生态制剂由至少部分特征分析过的群体或基本上生物学纯的细菌培养物所组成，包括：粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、牛链球菌(Streptococcus bovis)、梭状梭菌(Clostridium clostridiforme)、共生梭菌(Clostridiumsymbiosum)、多枝梭菌(Clostridium ramosum)、脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)、吉氏拟杆菌(Bacteroides distasonis)、普通拟杆菌(Bacteroids vulgatus)、多形拟杆菌(Bacteroidesthetaiotamicron)和粪拟杆菌(Bacteroides caccae)。
在使用中，将该微生态制剂从有效抑制其沙门氏菌建群的量施用至受试猪中。上述的微生态制剂也可与常规饲料结合，从而提供了一种可由猪口腔摄入的新的饲料产品。
根据此发现，提供一种改进的用于控制猪中沙门氏菌建群的方法和组合物是本发明的目的。
通过下面的描述本发明的其它目的和优势将变得显而易见。
发明详述
本发明的微生态制剂当施用于猪中时对于控制其中沙门氏菌建群、减少从胃肠道中释放沙门氏菌至猪圈中、降低猪群中平均沙门氏菌浓度、和/或降低由该病原菌建群的猪的百分比是有效的。本发明可通过任何类型的猪来完成，包括但不限于家养猪及食用肉猪(hog)。当施用至猪时，该微生态制剂提供了对多种沙门氏菌，尤其是猪霍乱沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌的持续保护。
该微生态制剂从无沙门氏菌猪的盲肠中形成。正如在实施例1中所要更为详细描述的，取出猪盲肠，接种至适当的培养基中，并且立即以一定的培养基更新而置于连续流培养条件下直到达到稳定状态或平衡。当回收并施用至猪时，将得到的命名为Pcf1的稳定状态培养物作为控制沙门氏菌在治疗动物中建群的微生态制剂显示出显著的效应。
稳定状态的培养物Pcf1由不超过40种兼性及厌氧细菌的稳定混合物所组成。Pcf1的组成已进行了部分的特征分析，并且包括至少以下基本上生物学纯细菌的群体：
粪肠球菌，
牛链球菌，
梭状梭菌，
共生梭菌，
多枝梭菌，
脆弱拟杆菌，
吉氏拟杆菌，
普通拟杆菌，
多形拟杆菌和
粪拟杆菌。稳定态培养物Pcf1可直接用作微生态制剂，或贮存备用。至于后者，该培养物可按所述贮存为混合物，或可对该单个细菌进行分离、贮存及随后重组。
作为微生态制剂具有控制猪中沙门氏菌效应的其它培养物可来自稳定态培养物Pcf1。根据一个候选实施方案，通过将该培养物进行系列稀释可降低稳定态培养物Pcf1中菌种的数目，然后可用系列稀释的培养物作为接种物恢复连续流培养直至再次达到稳定态。该方法也可用新的稳定态培养物作为接种物加以重复从而获得具有连续减少群体的其它稳定态培养物。
用这种方式的系列稀释，已经从Pcf1中得到另外2种稳定的稳态培养物，名为Pcf2和Pcf3。尽管这些培养物与Pcf1相比由更少的细菌种类所组成，不过它们仍然维持用作猪中微生态制剂的有效性。当分析时，测定稳态培养物Pcf3由10种上述细菌所组成。稳态培养物Pcf2和Pcf3也可直接用作微生态制剂或贮存备用，或者用作混合物或者可分离、贮存且随后重组单个细菌。
稳定态培养物Pcf1和Pcf3已于1997年9月17日根据布达佩斯条约而保藏于美国典型培养物保藏中心(12301 Parklawn Drive，Rockville，MD 20852，美国)并且分别得到保藏号ATCC 202036和ATCC 202037。Pcf1和Pcf3的单个菌株在实施例1和3中进行了特征分析。
也可通过从其群体中去除一种或更多种细菌而改变稳态培养物Pcf1或Pcf3的组成而对效率几乎没有下降或未下降。例如，但并不局限于此，可以设想去除多余的、属于具有多个菌株或种类那些属的菌株而没有明显降低效率。
在优选的实施方案中，该微生态制剂由来自保藏的稳定态培养物Pcf1或Pcf3的细菌混合物所组成。然而，在另一种可选实施方案中，待用细菌中的许多种可获自已知或标准的菌株，或获自从猪回收的分离物，例如，但并不局限于此，在保藏的稳态培养物中，肠球菌、链球菌、梭菌或拟杆菌中的一种或更多种其它菌株可代替相同属或种类的菌株。为了增加使用已知菌株贮备培养物的效率，可将细菌优选与稳态培养物中的其它生物一起经过猪(消化道)，然后从粪便或粪便盲肠内容物中回收和分离而使其与该猪相适应。当使用猪分离物时，可用本领域中常规的技术或按照DeLoach等所述[美国专利5,308,615](在此掺入其内容供参考)从成年猪的粪便或盲肠内容物中分别分离和回收这些细菌。
可以设想也可根据Nurmi等，美国专利4,689,226的技术(在此掺入其内容供参考)任选地筛选本发明细菌菌株粘附到受试猪消化道上皮细胞上的能力。
可对来源于稳态培养物Pcf1或Pcf3修饰的任何培养物进行筛选从而筛选出那些对抑制沙门氏菌在靶动物中建群显示出最佳效率的组合物。在一种实施方案中，与本领域中常规方法以及实施例3-7中所述的一样，筛选可用沙门氏菌接种而在体内进行。简言之，将稳态的培养物按这里所述施用至无沙门氏菌的动物。在培养物确立于肠道中足够一段时间后，通常为一天后，将动物用活的沙门氏菌培养物接种、孵育并随后杀死并分析盲肠内容物沙门氏菌的建群。与未治疗对照相比在治疗群体中降低的沙门氏菌释放几率、降低的平均沙门氏菌浓度(CFU)或建群动物更低的百分比表示有效抑制沙门氏菌建群。
本发明大量的微生态制剂可在适当的培养基中用本领域常规的厌氧培养技术对细菌的批量培养或者持续培养加以制备。这其中，连续培养是特别优越的，因为稳定态培养物非常稳定并可在稳定状态培养下无限制地维持。用于大规模培养的接种物可以是稳定态培养物的样品或种子，或者是这些细菌的保藏物或保藏培养物或基本上生物学纯的分离物。这些细菌可混合培养，或在分别的培养基中培养且随后合并而易于标准化。根据后一种技术，合并之前每种细菌的终浓度应该在大约108到109个生物体/ml之间。然而，本领域中的技术人员将会认识到该浓度不是关键并且可以变化。一般地，当在批量培养中进行大规模制备时，在收获前应将培养物温育大约6-72个小时。
本发明微生态制剂的使用不受具体的制备方法影响；由任何一种上述方法制备的微生态制剂可以相同的方式使用。制备后，这些细菌培养物可单独或联合而直接施用至受试动物。任选地，该微生态制剂可用适当的载体，包括但不限于乳糖或脱脂牛奶进一步配制，或者与少量的饲料混合用作预混合物(premix)。为了贮存的稳定性和处置的方便易行也可将这些培养物冷冻干燥。这些冷冻干燥的培养物可直接施用至动物或者，作为选择，在使用前重新调制。其中特别一提的是，这些细菌中的一种或全部可用本领域中常规的技术，包括但不限于包装于海藻酸胶中的技术而包装于胶囊中。虽不希望受下面理论约束，但据信这种方式的封装可能防止有些细菌将上部肠道中的乳酸浓度降至非理想的水平。其也可保护细菌并允许它们到达盲肠，在此乳酸的利用是合乎需要的。
本发明的微生态制剂也可与有效控制家养动物或猪中沙门氏菌的其它基本上生物学纯的细菌以及尤其是那些产生乳酸或挥发性脂肪酸的细菌混合。其它适当的细菌包括消化链球菌(Peptostreptococcus)或丙酸杆菌(Propionibacterium)种类但并不局限于此。本领域中常规或已知的用于治疗家养动物和猪的佐剂和特别是用于抑制或治疗肠道病原菌的佐剂可包括，例如，抗毒素、驱蠕虫药或选定的抗生素，如由Hogg所述(“消化系统疾病”：1984年农业年鉴：动物健康，家畜及宠物，美国政府印刷局，1984-451-784，99.290-293)。然而，应该避免可能对微生态制剂效率产生有害影响的任何抗生素的使用。当使用时，这些抗生素可与微生态制剂一起施用或分别施用。
虽然本发明的微生态制剂主要通过与动物饲料或水混合后将其通过口腔摄入而施用或导入到消化道中，但可设想其也可通过直接喷洒或喷雾该制剂至动物口腔中而口腔施用。其它的可选方案包括直接注射至胃肠道。
该微生态制剂的施用可在动物生活中的任何时间。然而，在优选的实施方案中将该微生态制剂在出生的大约4个小时内施用至新生猪或小猪，并且在大约24小时后重复施用。
该微生态制剂以基本上有效抑制沙门氏菌在治疗猪中建群的量施用，这种抑制可能包括，与未治疗的动物相比，降减沙门氏菌释放、降低平均沙门氏菌浓度或降低建群动物百分比中的一种或更多种情况。适当的量可由本领域的技术人员容易地加以测定，并且将随动物的年龄和大小而有一定程度的变化。在优选的实施方案中，当治疗新生猪时，将5ml剂量的活性稳定态培养物经口腔施用。
下面的实施例意在仅仅进一步说明本发明并且并不意在限定由权利要求所定义的本发明范围。
实施例1
微生态制剂的制备
起始接种物起始接种物获自5周商业猪(饲养于USDA-FAPRLin College Station，Texas)的盲肠，该猪在无抗生素下用典型饲养员的食用肉猪饲料饲养。将该头猪杀死并且立即将其盲肠内容物采集至无氧舱(Coy Laboratory Products，Ann Arbor，MI)中并且将50克的部分立即用作连续流培养器中的种子接种物。将剩下的盲肠内容物与5％甘油混合，并贮存于-70℃摄氏度。所有的步骤均在干净的无氧条件下进行。
连续流培养器 连续流培养在装配有具有1150ml工作体积的2.0l恒化器(Wier型)的BioFlo I发酵罐(New Brunswick科技公司，Edison，NJ)中进行。当在连续流条件下培养和维持培养物时，使用下面的参数：
…0.0416-1的稀释比率(相应于0.80ml/分钟的流速和24小时的恒化器更新时间)，
…39℃的温度，和
…2000rpm的搅拌速率。通过用无O2的CO2恒定气流充满恒化器而维持无氧条件。
在连续流条件下盲肠生物的培养使用培养基为Viande Levure(VL)培养基(pH5.5)。将培养基制备于13.3l的PYREX恒化器中，于15psi高压灭菌1.5小时。该培养基成分为：
培养基成分 克/升
胰蛋白胨 10
酵母提取物 5
NaCl 5
牛肉提取物 2.4
L-半胱氨酸HCL 0.6
葡萄糖 2.5灭菌后将该培养基置于无O2的CO2环境中并使其冷却至室温。
用无菌的VL培养基填充1150ml的恒化器并使其在以盲肠内容物接种前静置48小时以确保无菌。将恒化器用50g盲肠内容物接种并立即按上述在连续培养中无氧温育。每日采集用于分析挥发性脂肪酸和pH的样品。6天后培养物达到稳定态条件，pH为6.1。该培养物命名为Pcf1。当培养物pH、OD600和挥发性脂肪酸浓度基本上维持恒定时稳定态条件得到恢复。
达到稳定态条件后，通过在无菌条件下对Pcf1进行5次1∶10的系列稀释而从Pcf1形成第二种培养物。该第二种稳定态培养物命名为pcf2。然后通过重复该系列稀释/连续流培养过程而从Pcf2形成第三种培养物。以1∶10的比例将Pcf2系列稀释总共8次。该稀释物用于接种另一种恒化器并且在相同的条件下再次重复连续流培养直到达到稳定状态。此第三种稳定态培养物命名为Pcf3。
无菌收集连续流培养物的样品，铺板于固体培养基上从而分离纯菌落，并且以与Nisbet等所述基本上相同的方式(美国专利5,478,557)(在此掺入其内容供参考)对单个分离子进行特征分析。在稳定态培养物Pcf3中鉴定到10个细菌分离物。利用生化与酶促方法以及本领域常规的抗微生物易感性方式(Holdeman等，1997，厌氧菌实验指南，第4版，弗吉利亚多技术学院及州立大学，Blacksburg，VA；Farmer等，1985，临床微生物学杂志.，21：46-76；Lennette等，1985，临床微生物学，第4版，美国衍生物学会，华盛顿特区；和Devriese等，1987，Int.J.Syst.Bacteriol.，37：257-259，在此掺入其内容供参考)鉴定10个细菌分离子。稳定态培养物Pcf3的结果描述于实施例2中。因为Pcf3是通过系列稀释而源自Pcf1，故Pcf1一定含有相同的分离子。
稳定态培养物Pcf3中的细菌鉴定为：
粪肠球菌
牛链球菌
梭状梭菌，
共生梭菌，
多枝梭菌，
脆弱拟杆菌，
吉氏拟杆菌，
普通拟杆菌，
多形拟杆菌和
粪拟杆菌。
这种被特征分析由10种细菌分离子所组成的连续流培养物显示出在混合培养中的兼容性生长、在酸性环境(pH5.0到6.5)中的可存活性以及产生挥发性脂肪酸(VFA)作为发酵终产物。
包括所有10种上述细菌菌株的稳定态或竞争排斥培养物Pcf1和Pcf3已于1997年9月17日根据布达佩斯条约而保藏于美国典型培养物保藏中心(12301 Parklawn Drive，Rockville，MD 20852，美国)，并且分别得到保藏号，ATCC 202036和202037。
实施例2
细菌的特征分析
对实施1中10个分离子的每个进行特征分析。用基本上与Nisbet等所述(5,478,557)相同的技术进行分析。每个分离子的结果描述如下。根据标准的培养与生化标准鉴定所有细菌。分离子1号
细胞特征.细菌1为格兰氏阳性、不动的球菌。
培养和菌落特征分析. 细菌1为兼性厌氧性的，当在有氧或无氧温育时在血琼脂上显示良好的生长。菌落为非溶血性的。该细菌在胆汁七叶苷和m肠道球菌琼脂上于37℃及45℃有氧下温育时显示出良好的生长。该细菌水解七叶苷。该细菌于10℃在胰胨豆胨培养基中也显示出良好的生长。
过氧化氢酶和氧化酶实验.细菌1为过氧化氢酶-阴性和氧化酶-阴性。
API RAPID STREP系统试验(Analytab Products，Plainview，NY)。细菌1的结果列于表1中。
其它试验.细菌1在用于格兰氏-阳性球菌的耐盐培养基中显示出良好的生长。该细菌为亚碲酸盐耐性以及万古霉素敏感性的。
细菌鉴定.用上面的结果，将细菌1鉴定为粪肠球菌2。分离子2号
细胞特征.细菌2号为格兰氏阳性、不动的球菌。
培养和菌落特征.细菌2为兼性厌氧性的，当在有氧或无氧温育时在血液琼脂上显示出良好的生长。这些菌落为非溶血性的。该细菌在胆汁七叶苷及m肠道球菌琼脂上于37℃和45℃有氧下温育时显示出良好的生长。该细菌水解七叶苷。该细菌在10℃于胰胨豆胨培养基中未能产生可见的生长。该细菌在用于格兰氏阳性球菌的耐盐培养基未能产生可见的生长。该细菌为非亚碲酸盐耐性的，但为万古霉素敏感性的。
过氧化氢酶和氧化酶试验.细菌2为过氧化氢酶阴性以及氧化酶阴性的。
API RAPID STREP系统试验.细菌2的结果列于表2中。
细菌鉴定.与上面结果一起用API RAPID STREP鉴定，将细菌2鉴定为牛链球菌生物型1。分离子3号
细胞特征.细菌3为格兰氏可变型(gram-variable)形成孢子的杆菌。这些细胞具有尖端并且成单和成对出现。孢子为卵形且为亚端生的。
培养和菌落特征.细菌3必需为无氧性生长，当在无氧条件下于无氧Brucella血琼脂(BRU)上时显示良好的生长，但当在有氧条件下时未能在BRU上生长。在BRU上无氧温育3天后，这些菌落大、白色、略微型成峰状，具有略微扇形的边缘并且为非溶血性的。
API AN-IDENT系统试验(Analytab Products，Plainview，NY)。细菌3的结果列于表3中。
GC结果.由细菌3在PYG培养物中产生的VFAs的量列于表4中。
PRESUMPTO PLATE试验.细菌II.1的结果列于表5中。
分化盘结果.细菌3对卡那霉素、万古霉素、利福平和青霉素敏感，但对制肠菌素和红霉素具有抗性。
基于类似性指数的微生物鉴定系统.通过整个细胞脂肪酸含量的MIDI微生物鉴定系统将细菌3鉴定为梭状梭菌，其类似性指数为88％。与上面结果一起用MIDI鉴定，将细菌3鉴定为梭状梭菌。分离子4号
细胞特征.细菌4为格兰氏阳性、形成孢子的杆菌。这些细胞有尖端并且成单及成对出现。
培养及菌落特征.细菌4必需为无氧性生长，当在无氧条件下温育时在无氧布鲁氏杆菌血液琼脂(BRU)上显示出良好的生长，但当有氧条件下温育时未能在BRU上生长。在BRU上无氧温育3天后，菌落中等大小、略带灰色、扁平、具有略微扇形的边缘，并且为非溶血性的。
硝酸盐试验.细菌4为硝酸盐阳性。
API AN-IDENT系统试验.细菌4的结果列于表6中。
GC结果.由细菌4在PYG培养物中产生VFAs的量列于表7中。
PRESUMPTO平板试验.细菌4的结果列于表8中。
分化盘结果.细菌4对卡那霉素、万古霉素、利福平和青霉素敏感，但对制肠菌素和红霉素具有抗性。
基于类似性指数的微生物鉴定系统.通过整个细胞的脂肪酸含量的MIDI微生物鉴定系统将细菌II.2鉴定为共生梭菌CFA类群2，其类似性指数为81％。与上面结果一起，用MIDI鉴定，将细菌II.2鉴定为共生梭菌。分离子5号
细胞特征.细菌5为格兰氏可变型、形成孢子的杆菌。细胞长并且细。孢子为圆形且端生的。
培养和菌落特征.细菌5必需为厌氧型生长，当在无氧条件下温育时于无氧布鲁氏杆菌血液琼脂(BRU)上显示出良好的生长。于BRU上无氧温育3天后，菌落为中等大小、灰绿色、升起呈突起状、全部具有扇形边缘并且为非溶血性的。
硝酸盐试验.细菌5为硝酸盐阴性。
API AN-IDENT系统试验.细菌5的结果列于表9中。
其它试验.细菌5对万古霉素敏感并且为利福平抗性的。
细菌的鉴定.与上面的结果一起用API AN-IDENT鉴定，将细菌5鉴定为多枝梭菌。分离子6号
细胞特征.细菌6为格兰氏阴性的杆菌。这些细胞为各种长度的球杆菌或直线杆菌。
培养及菌落特征.细菌6必需为厌氧型生长，当在无氧条件下温育时在无氧布鲁氏杆菌血液琼脂(BRU)上显示良好的生长。但在有氧条件下温育时未能在BRU上生长。于BRU上无氧温育3天后，菌落略微突起，中等大小、白色、环状而具有完整边缘。该细菌在拟杆菌胆汁七叶苷琼脂(BBE)上显示良好的生长，其中七叶苷水解明显。
API AN-IDENT系统试验.细菌6的结果列于表10中。
PRAS(PY)碳水化合物发酵试验.对于细菌6，pH值列于表11中。
Presumpto平板试验.细菌6的结果列于表12中。
分化盘结果.细菌6对利福平敏感，但对青霉素、卡那霉素、制肠菌素及万古霉素具有抗性。
细菌鉴定.与上面的结果一起用API AN-IDENT鉴定，将细菌6鉴定为脆弱拟杆菌。分离子7号
细胞特征.细菌7为格兰氏阴性杆菌。这些细胞为圆形末端的直线杆菌并且成单出现。
培养及菌落特征.细菌7必需为无氧性生长，当在无氧条件下温育时于无氧布鲁氏杆菌血液琼脂(BRU)上显示出良好的生长，但当有氧条件下温育时未能在BRU上生长。于BRU上无氧温育3天后，这些菌落为凸起状，中等大小、黄白色、环状而具有完整边缘。该细菌在拟杆菌胆汁七叶苷琼脂(BBE)上显示良好的生长，其中七叶苷水解明显。
API AN-IDENT系统试验.细菌7的结果列于表13中。
PRAS(PY)碳水化合物发酵试验.对于细菌7，pH值列于表14中。
Presumpto平板试验.细菌7的结果列于表15中。
分化盘结果.细菌7对利福平敏感，但对青霉素、卡那霉素、制肠菌素和万古霉素具有抗性。
细菌鉴定.与上面结果一起用API AN-IDENT鉴定，将细菌7鉴定为吉氏拟杆菌。分离子8号
细胞特征.细菌8为格兰氏阴性杆菌。这些细胞为球杆菌，成单及偶尔成对出现。
培养及菌落特征.细菌8必需为厌氧型生长，当在厌氧条件下温育时于厌氧布鲁氏杆菌血液琼脂(BRU)上表现出良好的生长。于BRU上无氧温育3天后，菌落为凸形，白色、小而具有完整边缘的环状。该细菌在拟杆菌胆汁七叶苷(BBE)上显示良好的生长，但七叶苷未被水解。
API AN-IDENT系统试验.细菌8的结果列于表16中。
PRAS(PY)碳水化合物发酵试验.对于细菌8，pH值列于表17中。
Presumpto平板试验.细菌8的结果列于表18中。
分化盘结果.细菌8对利福平敏感，但对青霉素、卡那霉素、制肠菌素和万古霉素具有抗性。
细菌分化.用上面的结果，将细菌8鉴定为普通拟杆菌。分离子9号
细胞特征.细菌9为格兰氏阴性杆菌。染色不规则的细胞为具有圆形末端的多形杆菌，并且成单及成对出现。
培养及菌落特征.细菌9必需为无菌性生长，当在无氧条件下温育时于无氧布鲁氏杆菌血液琼脂(BRU)上表现出良好的生长，但当在有氧条件下温育时未能在BRU上生长。于BRU上无氧温育3天后，菌落为凸形，中等大小、白色且具有完整末端的环状。该细菌在拟杆菌胆汁七叶苷琼脂(BBE)上显示良好的生长，其中七叶苷的水解明显。
API AN-IDENT系统试验.细菌9的结果列于表19中。
PRAS(PY)碳水化合物发酵试验.对于细菌9，pH值列于表20中。
Presumpto平板试验.细菌9的结果列于表21中。
分化盘结果.细菌9对利福平敏感，但对青霉素、卡那霉素、制肠菌素和万古霉素具有抗性。
细菌鉴定.与上面的结果一起，用API An-IDENT鉴定，将细菌9鉴定为多形拟杆菌。分离子10号
细胞特征.细菌10为格兰氏-阴性杆菌。这些细胞为球杆菌，并且成单个出现。
培养与菌落特征.细菌10必需在无氧条件下生长，当在无氧条件下温育时于无氧布鲁氏杆菌血液琼脂(BRU)上显示出良好的生长。但当在有氧条件下温育时未能在BRU上生长。于BRU上无氧温育3天后，菌落为凸形，小至中等大小、略带白色、具有完整边缘的环状。该细菌在拟杆菌胆汁七叶苷琼脂(BBE)上显示出良好的生长，其中七叶苷水解明显。
API AN-IDENT系统试验.细菌10的结果列于于表22中。
PRAS(PY)碳水化合物发酵试验.对于细菌10，这些值列于表23中。
Presumpto平板试验.细菌10的结果列于表24中。
分化盘结果.细菌10对利福平敏感，但对青霉素、卡那霉素、制肠菌素及万古霉素具有抗性。
细菌鉴定.用上面的结果，将细菌10鉴定为粪拟杆菌。
实施例3
幼猪体内实验
进行实验从而测定Pcf1和Pcf3对于降低沙门氏菌在幼猪盲肠中建群以及沙门氏菌释放的效率。
实验设计.获取当日出生的幼猪崽并且分成三组：沙门氏菌接种的未治疗对照组、沙门氏菌接种的Pcf1治疗猪崽以及沙门氏菌接种的Pcf3治疗的猪崽。接受Pcf1或Pcf3的猪崽通过于出生后的大约4小时通过将每头猪口腔管饲5ml活性稳定态培养物并且于断奶时重复而提供。猪崽通过断奶后一天口腔管饲以7×106cfu猪霍乱沙门氏菌而加以接种。
猪崽霍乱沙门氏菌的释放通过培养从沙门氏菌接种后每只猪崽收集到的直肠擦拭标本而加以测定。释放的累积几率测定为沙门氏菌培养阳性每只治疗组擦拭标本的数目。沙门氏菌用基本上与Nisbet等(5,478,557)所述相同的技术加以测定。断奶后2周杀死所有猪崽，并通过尸体解剖收集组织与盲肠内容物并且测定沙门氏菌的建群。测定的组织包括扁桃体、肺、支气管淋巴结、回肠结肠淋巴结和回肠结肠连接处。这些结果示于表25中。
实施例4
除了未检测培养物Pcf1、沙门氏菌接种剂量为7×108cfu并且猪崽在接种后7天杀死外，重复实施例3的分析。结果见表26。
实施例5
除了沙门氏菌接种剂量为108cfu并且所有猪崽均在接种后7天时杀死外，再次重复实施例3的分析。这些结果示于表27中。
实施例6
除了未测定培养物Pcf3、Pcf1在出生后4和24小时施用、将猪崽于48小时龄接种以104cfu猪霍乱沙门氏菌，以及在接种后9天杀死猪崽外，再次重复实施例3的分析。结果示于表28。
实施例7
除了沙门氏菌接种剂量为104cfu，并且于接种后9天杀死猪崽外再次重复实施例3的分析。这些结果示于表29中。
应当明白前面的详细描述仅仅是通过说明的方式给出并且在不偏离本发明精神和范围时可在其中作修饰和改变。
表1. 细菌1 API Rapid STREP系统试验的结果
酶/底物 反应 酶/底物 反应
丙酮酸 +/+ 核糖 +/+
马尿酸水解 +/+ 阿拉伯糖 -/-
七叶苷水解 +/+ 甘露醇 +/+
吡咯烷酮基-2-萘酰胺 +/+ 山梨醇 +/+
α-半乳糖苷酶 +/+ 乳糖 +/+
β-葡糖醛酸糖苷酶 -/- 海藻糖 -/-
β-半乳糖苷酶 -/- 菌粉 -/-
碱性磷酸酶 -/- 棉子糖 +/+
亮氨酸芳基酰胺酶 +/+ 淀粉 +/+
精氨酸双水解酶 +/+ 糖原 -/-
*复制子1/复制子2数据表2.细菌2 API Rapid STREP系统试验的结果酶/底物 反应 酶/底物 反应丙酮酸 +/+ 核糖 -/-马尿酸水解 -/- 阿拉伯糖 -/-七叶苷水解 +/+ 甘露醇 +/+吡咯烷酮基-2-萘酰胺 -/- 山梨醇 -/-α-半乳糖苷酶 +/+ 乳糖 +/+β-葡糖醛酸糖苷酶 -/- 海藻糖 +/+β-半乳糖苷酶 -/- 菌粉 -/-碱性磷酸酶 -/- 棉子糖 +/+亮氨酸芳基酰胺酶 +/+ 淀粉 +/+精氨酸双水解酶 -/- 糖原 +/+*复制子1/复制子2数据表3.细菌3 API An-IDENT系统试验的结果酶/底物 反应 酶/底物 反应吲哚产生 -/- 亮氨酸氨肽酶 -/-N-乙酰-葡糖苷酶 -/- 脯氨酸氨肽酶 -/-α-葡糖苷酶 -/- 焦谷氨酸芳基酰胺酶 -/-α-阿拉伯糖苷酶 -/- 酪氨酸氨肽酶 -/-β-萄糖苷酶 -/- 精氨酸氨肽酶 -/-α-岩藻糖苷酶 -/- 丙氨酸氨肽酶 -/-磷酸酶 -/- 组氨酸氨肽酶 -/-α-半乳糖苷酶 +/+ 苯丙氨酸氨肽酶 -/-β-半乳糖苷酶 +/+ 甘氨酸氨肽酶 -/-吲哚乙酸 +/+ 过氧化氢酶 -/-精氨酸利用 +/+*复制子1/复制子2数据表4.细菌3PYG培养的GC结果
挥发性 对照* 培养
脂肪酸 PYG PYG
甲酸 - -
乙酸 - ++
丙酸 - -
异丁酸 - -
丁酸 - -
异戊酸 - T
戊酸 - -VFAs的量表达如下：-＝不产生； T＝痕量产生；+＝产生小量；++＝产生中等量；并且+++＝产生大量。*未接种的PYG培养基。表5.细菌3 Presumpto平板系统试验的结果Presumpto 象限号 琼脂培养基 生长能力/生化试验 结果平板号I 1 LD培养基 生长 +++
吲哚 -
2 LD-七叶苷 生长 +++
过氧化氢酶 -
七叶苷水解 +
3 LD-卵黄 生长 +++
卵磷脂酶 -
脂肪酶 -
蛋白水解 -
4 LD-胆汁 生长 EII 1 LD-DNA 生长 +++
DNA酶 -
2 LD-葡萄糖 生长 +++
葡萄糖发酵 +
3 LD-牛奶 生长 +++
酪蛋白水解 -
4 LD-淀粉 生长 +++
淀粉水解 -III 1 LD-甘露糖 生长 +++
甘露醇发酵 -
2 LD-乳糖 生长 +++
乳糖发酵 +
3 LD-鼠李糖 生长 +++
鼠李糖发酵 +
4 LD-明胶 生长 +++
明胶水解 -与LD培养基比较在LD-胆汁琼脂上的生长比较：I：较少生长；且E＝相同生长。表6.细菌4的API An-IDENT系统试验的结果酶/底物 反应 酶/底物 反应吲哚产生 -/- 亮氨酸氨肽酶 -/-N-乙酰-葡糖苷酶 -/- 脯氨酸氨肽酶 -/-α-葡糖苷酶 -/- 焦谷氨酸芳基酰胺酶 -/-α-阿拉伯糖苷酶 -/- 酪氨酸氨肽酶 -/-β-萄糖苷酶 -/- 精氨酸氨肽酶 -/-α-岩藻糖苷酶 -/- 丙氨酸氨肽酶 -/-磷酸酶 -/- 组氨酸氨肽酶 -/-α-半乳糖苷酶 -/- 苯丙氨酸氨肽酶 -/-β-半乳糖苷酶 -/- 甘氨酸氨肽酶 -/-吲哚乙酸 -/- 过氧化氢酶 -/-精氨酸利用 +/+*复制子1/复制子2数据表7.细菌4 PYG培养的GC结果
挥发性 对照* 培养
脂肪酸 PYG PYG
甲酸 - -
乙酸 - ++
丙酸 - -
异丁酸 - -
丁酸 - +
异戊酸 - T
戊酸 - -VFAs的量表达如下：-＝不产生；T＝产生痕量；+＝产生小量；++＝产生中等量；并且+++＝产生大量。*未接种的PYG培养基。表8.细菌4 Presumpto平板系统试验的结果Presumpto 象限号 琼脂培养基 生长能力/生化试验 结果平板号I 1 LD培养基 生长 +++
吲哚 -
2 LD-七叶苷 生长 +++
过氧化氢酶 -
七叶苷水解 -
3 LD-卵黄 生长 +++
卵磷脂酶 -
脂肪酶 -
蛋白水解 -
4 LD-胆汁 生长 EII 1 LD-DNA 生长 +++
DNA酶 -
2 LD-葡萄糖 生长 +++
葡萄糖发酵 +
3 LD-牛奶 生长 +++
酪蛋白水解 -
4 LD-淀粉 生长 +++
淀粉水解 -III 1 LD-甘露糖 生长 +++
甘露醇发酵 +
2 LD-乳糖 生长 +++
乳糖发酵 -
3 LD-鼠李糖 生长 +++
鼠李糖发酵 -
4 LD-明胶 生长 +++
明胶水解 -与LD培养基比较在LD-胆汁琼脂上的生长比较：I：较少生长；且E＝相同生长。表9.细菌5 API An-IDENT系统试验的结果酶/底物 反应 酶/底物 反应吲哚产生 -/- 亮氨酸氨肽酶 -/-N-乙酰-葡糖苷酶 +/+ 脯氨酸氨肽酶 -/-α-葡糖苷酶 +/+ 焦谷氨酸芳基酰胺酶 -/-α-阿拉伯糖苷酶 -/- 酪氨酸氨肽酶 -/-β-萄糖苷酶 +/+ 精氨酸氨肽酶 -/-α-岩藻糖苷酶 -/- 丙氨酸氨肽酶 -/-磷酸酶 -/- 组氨酸氨肽酶 -/-α-半乳糖苷酶 -/- 苯丙氨酸氨肽酶 -/-β-半乳糖苷酶 -/- 甘氨酸氨肽酶 -/-吲哚乙酸 -/- 过氧化氢酶 -/-精氨酸利用 -/-*复制子1/复制子2数据表10.细菌6 API An-IDENT系统试验的结果酶/底物 反应 酶/底物 反应吲哚产生 -/- 亮氨酸氨肽酶 +/+N-乙酰-葡糖苷酶 +/+ 脯氨酸氨肽酶 -/-α-葡糖苷酶 +/+ 焦谷氨酸芳基酰胺酶 +/+α-阿拉伯糖苷酶 -/- 酪氨酸氨肽酶 +/+β-萄糖苷酶 +/+ 精氨酸氨肽酶 +/+α-岩藻糖苷酶 +/+ 丙氨酸氨肽酶 +/+磷酸酶 +/+ 组氨酸氨肽酶 +/+α-半乳糖苷酶 +/+ 苯丙氨酸氨肽酶 +/+β-半乳糖苷酶 -/- 甘氨酸氨肽酶 -/-吲哚乙酸 +/+ 过氧化氢酶 +/+精氨酸利用 -/-*复制子1/复制子2数据表11.细菌6的碳水化合物发酵试验结果碳水化合物底物 pH 结果培养基 7.0 -纤维二糖 6.6 -甘露醇 6.8 -鼠李糖 6.7 -水杨糖 6.9 -蔗糖 5.4 +海藻糖 6.9 -木聚糖 6.8 -木糖 5.3 +表12.细菌6 Presumpto平板系统试验的结果Presumpto 象限号 琼脂培养基 生长能力/生化试验 结果平板号I 1 LD培养基 生长 +++
吲哚 -
2 LD-七叶苷 生长 +++
过氧化氢酶 +
七叶苷水解 +
3 LD-卵黄 生长 +++
卵磷脂酶 -
脂肪酶 -
蛋白水解 -
4 LD-胆汁 生长 EII 1 LD-DNA 生长 +++
DNA酶 -
2 LD-葡萄糖 生长 +++
葡萄糖发酵 +
3 LD-牛奶 生长 +++
酪蛋白水解 -
4 LD-淀粉 生长 +++
淀粉水解 -III 1 LD-甘露糖 生长 +++
甘露醇发酵 -
2 LD-乳糖 生长 +++
乳糖发酵 +
3 LD-鼠李糖 生长 +++
鼠李糖发酵 -
4 LD-明胶 生长 +++
明胶水解 -与LD培养基比较在LD-胆汁琼脂上的生长比较：I：较少生长；且E＝相同生长。表13.细菌3 API An-IDENT系统试验的结果酶/底物 反应 酶/底物 反应吲哚产生 -/- 亮氨酸氨肽酶 +/+N-乙酰-葡糖苷酶 +/+ 脯氨酸氨肽酶 -/-α-葡糖苷酶 +/+ 焦谷氨酸芳基酰胺酶 -/-α-阿拉伯糖苷酶 +/+ 酪氨酸氨肽酶 -/-β-萄糖苷酶 +/+ 精氨酸氨肽酶 +/+α-岩藻糖苷酶 -/- 丙氨酸氨肽酶 +/+磷酸酶 +/+ 组氨酸氨肽酶 +/+α-半乳糖苷酶 +/+ 苯丙氨酸氨肽酶 +/+β-半乳糖苷酶 -/- 甘氨酸氨肽酶 +/+吲哚乙酸 +/+ 过氧化氢酶 +/+精氨酸利用 -/-*复制子1/复制子2数据表14.细菌8的碳水化合物发酵试验结果碳水化合物底物 pH 结果培养基 6.8 -纤维二糖 5.4 +甘露醇 6.5 -鼠李糖 5.6 +水杨苷 5.2 +蔗糖 4.9 +海藻糖 5.1 +木聚糖 6.6 -木糖 5.2 +表15.细菌7 Presumpto平板系统试验的结果Presumpto 象限号 琼脂培养基 生长能力/生化试验 结果平板号I 1 LD培养基 生长 +++
吲哚 -
2 LD-七叶苷 生长 +++
过氧化氢酶 +
3 LD-卵黄 生长 +++
卵磷脂酶 -
脂肪酶 -
蛋白水解 -
4 LD-胆汁 生长 EII 1 LD-DNA 生长 +++
DNA酶 -
2 LD-葡萄糖 生长 +++
葡萄糖发酵 +
3 LD-牛奶 生长 +++
酪蛋白水解 -
4 LD-淀粉 生长 +++
淀粉水解 -III 1 LD-甘露糖 生长 +++
甘露醇发酵 -
2 LD-乳糖 生长 +++
乳糖发酵 +
3 LD-鼠李糖 生长 +++
鼠李糖发酵 +
4 LD-明胶 生长 +++
明胶水解 -与LD培养基比较在LD-胆汁琼脂上的生长比较：I：较少生长；且E＝相同生长。表16.细菌8 API An-IDENT系统试验的结果酶/底物 反应 酶/底物 反应吲哚产生 -/- 亮氨酸氨肽酶 -/-N-乙酰-葡糖苷酶 +/+ 脯氨酸氨肽酶 -/-α-葡糖苷酶 +/+ 焦谷氨酸芳基酰胺酶 +/+α-阿拉伯糖苷酶 +/+ 酪氨酸氨肽酶 -/-β-萄糖苷酶 -/- 精氨酸氨肽酶 +/+α-岩藻糖苷酶 +/+ 丙氨酸氨肽酶 +/+磷酸酶 +/+ 组氨酸氨肽酶 +/+α-半乳糖苷酶 +/+ 苯丙氨酸氨肽酶 +/+β-半乳糖苷酶 +/+ 甘氨酸氨肽酶 +/+吲哚乙酸 +/+ 过氧化氢酶 -/-精氨酸利用 -/-*复制子1/复制子2数据表17.细菌8的API An-IDENT系统试验结果碳水化合物底物 pH 结果培养基 7.1 -纤维二糖 6.7 -甘露醇 6.9 -鼠李糖 6.0 +水杨苷 6.9 -蔗糖 5.1 +海藻糖 7.0 -木聚糖 6.9 -木糖 5.0 +表18.细菌8 Presumpto平板系统试验的结果Presumpto 象限号 琼脂培养基 生长能力/生化试验 结果平板号I 1 LD培养基 生长 +++
吲哚 -
2 LD-七叶苷 生长 +++
过氧化氢酶 -
3 LD-卵黄 生长 +++
卵磷脂酶 -
脂肪酶 -
蛋白水解 -
4 LD-胆汁 生长 EII 1 LD-DNA 生长 +++
DNA酶 -
2 LD-葡萄糖 生长 +++
葡萄糖发酵 +
3 LD-牛奶 生长 +++
酪蛋白水解 -
4 LD-淀粉 生长 +++
淀粉水解 -III 1 LD-甘露糖 生长 +++
甘露醇发酵 -
2 LD-乳糖 生长 +++
乳糖发酵 +
3 LD-鼠李糖 生长 +++
鼠李糖发酵 +
4 LD-明胶 生长 +++
明胶水解 -与LD培养基比较在LD-胆汁琼脂上的生长比较：I：较少生长；且E＝相同生长。表19.细菌9 API An-IDENT系统试验的结果酶/底物 反应 酶/底物 反应吲哚产生 +/+ 亮氨酸氨肽酶 -/-N-乙酰-葡糖苷酶 +/+ 脯氨酸氨肽酶 -/-α-葡糖苷酶 +/+ 焦谷氨酸芳基酰胺酶 -/-α-阿拉伯糖苷酶 +/+ 酪氨酸氨肽酶 -/-β-萄糖苷酶 +/+ 精氨酸氨肽酶 +/+α-岩藻糖苷酶 +/+ 丙氨酸氨肽酶 +/+磷酸酶 +/+ 组氨酸氨肽酶 +/+α-半乳糖苷酶 +/+ 苯丙氨酸氨肽酶 -/-β-半乳糖苷酶 -/- 甘氨酸氨肽酶 -/-吲哚乙酸 +/+ 过氧化氢酶 -/-精氨酸利用 -/-*复制子1/复制子2数据表20.细菌9的碳水化合物发酵试验结果碳水化合物底物 pH 结果培养基 6.8 -纤维二糖 5.5 +甘露醇 6.4 -鼠李糖 6.3 -水杨苷 6.2 -蔗糖 5.4 +海藻糖 5.3 +木聚糖 5.4 +木糖 5.1 +表21.细菌9 Presumpto平板系统试验的结果Presumpto 象限号 琼脂培养基 生长能力/生化试验 结果平板号I 1 LD培养基 生长 +++
吲哚 +
2 LD-七叶苷 生长 +++
过氧化氢酶 -
3 LD-卵黄 生长 +++
卵磷脂酶 -
脂肪酶 -
蛋白水解 -
4 LD-胆汁 生长 EII 1 LD-DNA 生长 +++
DNA酶 +
2 LD-葡萄糖 生长 +++
葡萄糖发酵 +
3 LD-牛奶 生长 +++
酪蛋白水解 -
4 LD-淀粉 生长 +++
淀粉水解 -III 1 LD-甘露糖 生长 +++
甘露醇发酵 -
2 LD-乳糖 生长 +++
乳糖发酵 +
3 LD-鼠李糖 生长 +++
鼠李糖发酵 -
4 LD-明胶 生长 +++
明胶水解 -与LD培养基比较在LD-胆汁琼脂上的生长比较：I：较少生长；且E＝相同生长。表22.细菌9 API An-IDENT系统试验的结果酶/底物 反应 酶/底物 反应吲哚产生 - 亮氨酸氨肽酶 +N-乙酰-葡糖苷酶 + 脯氨酸氨肽酶 -α-葡糖苷酶 + 焦谷氨酸芳基酰胺酶 -α-阿拉伯糖苷酶 + 酪氨酸氨肽酶 -β-萄糖苷酶 + 精氨酸氨肽酶 +α-岩藻糖苷酶 + 丙氨酸氨肽酶 +磷酸酶 + 组氨酸氨肽酶 +α-半乳糖苷酶 + 苯丙氨酸氨肽酶 +β-半乳糖苷酶 - 甘氨酸氨肽酶 -吲哚乙酸 + 过氧化氢酶 +精氨酸利用 -表23.细菌10的碳水化合物发酵试验结果碳水化合物底物 pH 结果培养基 6.5 -纤维二糖 5.8 +甘露醇 6.0 +鼠李糖 5.3 +水杨苷 6.1 -蔗糖 5.3 +海藻糖 5.2 +木聚糖 6.2 -木糖 5.1 +表24.细菌10 Presumpto平板系统试验的结果Presumpto 象限号 琼脂培养基 生长能力/生化试验 结果平板号I 1 LD培养基 生长 +++
吲哚 -
2 LD-七叶苷 生长 +++
过氧化氢酶 +
3 LD-卵黄 生长 +++
卵磷脂酶 -
脂肪酶 -
蛋白水解 -
4 LD-胆汁 生长 EII 1 LD-DNA 生长 +++
DNA酶 +
2 LD-葡萄糖 生长 +++
葡萄糖发酵 +
3 LD-牛奶 生长 +++
酪蛋白水解 -
4 LD-淀粉 生长 +++
淀粉水解 -III 1 LD-甘露糖 生长 +++
甘露醇发酵 -
2 LD-乳糖 生长 +++
乳糖发酵 +
3 LD-鼠李糖 生长 +++
鼠李糖发酵 +
4 LD-明胶 生长 +++
明胶水解 -与LD培养基比较在LD-胆汁琼脂上的生长比较：I：较少生长；且E＝相同生长。表25.在出生及断奶时用竞争性排斥培养物治疗猪的选定组织和盲
肠内容物中猪霍乱沙门氏菌的释放与分布几率治疗组b 累积释放
组织a 盲肠
几率c 内容物a
Tonsl 肺 BLym ILym Ijctn未治疗 21/65(32％) 2/5 1/5 0/5 5/5 2/5 3/5pCF1 27/77d(35％) 1/6 0/6 0/6 6/6 1/6 3/6pCF3 4/52(8％) 2/4 0/4 1/4 4/4 1/4 1/4
a猪霍乱沙门氏菌培养阳性的数目/每次治疗的猪数目。Tonsl，扁桃体；Blym，支气管淋巴结；ILym，回肠结肠淋巴结；IJctn，回肠结肠连接。通过断奶后2周尸体解剖而收集组织及盲肠内容物。
b通过口腔管饲施以治疗(5mg/猪)。猪通过断奶后一天口腔管饲7×106CFU猪霍乱沙门氏菌而接种并将所有猪在接种后2周进行尸体解剖。参考实验RA-MSBS/USDA#1-50。
c累积几率表示为猪霍乱沙门氏菌培养阳性直肠标本的数目/培养标本的总数。所有5只未治疗猪和所有6只以pCF1治疗猪均在接种后至少释放猪霍乱沙门氏菌一次，以pCF3治疗的4只猪中仅有2只具有释放的猪霍乱沙门氏菌。
d在接种后12天没有获得一只猪的直肠标本。表26.在未治疗猪及出生和断奶时以竞争排斥培养物(pCF3)治疗
猪的盲肠内容物中猪霍乱沙门氏菌释放与分布的几率治疗a 猪释放 累积释 盲肠内容物中猪霍乱
的数目 放几率b 沙门氏菌的分布c无 7/7 40/49(82％) 7/7pCF3 9/10 32/70(46％) 10/10
a竞争性排斥培养物通过口腔管饲法施用(5mg/猪)。猪通过在断奶后1天口腔管饲7×108CFU猪霍乱沙门氏菌而接种并且所有的猪均在接种后7天进行尸体解剖。尸体解剖时收集到所有猪的淋巴结均为猪霍乱沙门氏菌培养阳性。参考实验RA-MSBS/USDA#1-70。
b累积几率表示为猪霍乱沙门氏菌培养阳性的直肠标本的数目/培养标本的总数。
cCC，盲肠内容物。在未治疗猪及施用pCF3的猪中盲肠内容物中的猪霍乱沙门氏菌浓度平均为4.3log10 CFU/g。表27.出生及断奶时以竞争排斥培养物治疗猪的选定组织及盲肠内
容物中猪霍乱沙门氏菌释放和分布的几率
猪释放 累积释放 猪霍乱沙门氏菌的分布a 盲肠内容物定量b治疗c 的数目 几率d ILym IJctn CC 平均值 范围无 10/11 42/77(55％) 11/11 11/11 11/11 3.0 1.0到3.6pCF1 8/12 20/96(21％) 10/12 9/12 3/12 0.9 0到3.7pCF3 6/8 15/56(27％) 8/8 6/8 6/8 2.4 0到4.7
aILym，回肠结肠淋巴结；IJctn，回肠结肠连接；CC，盲肠内容物。
bLog10 CFU/g盲肠内容物。
c竞争性排斥培养物通过口腔管饲法施用(5ml/猪)。猪在断奶后1天通过口腔管饲108CFU的猪霍乱沙门氏菌而接种并且所有猪均在接种后7天进行尸体解剖。参考实验RA-MSBS/USDA#1-139。
d累积释放几率表示为猪霍乱沙门氏菌培养阳性的直肠标本数目/培养标本的总数目。表28.用猪获得的竞争排斥培养物治疗4小时及24小时龄幼猪崽组
织及肠道中猪霍乱沙门氏菌释放与分布的几率
动物释放 累积释放 分布a 盲肠内容物定量b治疗c 的数目 几率d ILym IJctn Col CC 平均值 范围pCF1 0/8 0/72(0％) 3/8 4/8 2/8 3/8 1.2 0-3.8未治疗 3/10 4/90(4％) 10/10 4/10 3/10 8/10 3.6 0-6.7
aILym，回肠结肠淋巴结；IJctn，回肠结肠连接；Col，结肠；CC，盲肠内容物。
bLog10 CFU/g盲肠内容物。
c通过口腔管饲法施用竞争性排斥培养物(5ml/猪)。猪在48小时龄时通过口腔管饲104CFU猪霍乱沙门氏菌而接种并且所有猪在接种后9天进行尸体解剖。参考实验RA-MSBS/USDA#1-134。
d累积几率表示为猪霍乱沙门氏菌培养阳性的直肠标本的数目/培养标本的总数。表29.用猪得到的竞争排斥培养物治疗出生及断奶时幼猪崽选定组
织和肠道中鼠伤寒沙门氏菌释放和分布几率
动物释放 累积释放 分布a 盲肠内容物定量b治疗c 的数目 几率d ILym Col CC 平均值 范围pCF1 9/9 36/81(44％) 5/9 3/9 5/9 1.3 0-1.5pCF3 6/6 23/48(48％) 5/6 6/6 6/6 2.2 1.5-4.3未治疗 6/6 37/48(77％) 3/6 2/6 6/6 1.5 1.5
aILym，回肠结肠淋巴结；Col，结肠；CC，盲肠内容物。
bLog10 CFU/g盲肠内容物。
c通过口腔管饲(5ml/猪)施用竞争性排斥培养物。猪通过在断奶后一天口腔管饲104CFU鼠伤寒沙门氏菌而接种并且所有猪均在接种后9天进行尸体解剖。参考实验RA-MSBS/USDA#2-70。
d累积释放几率表示为鼠伤寒沙门氏菌培养阳性直肠标本的数目/培养标本的总数。