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1、(10)申请公布号 CN 102757405 A(43)申请公布日 2012.10.31CN102757405A*CN102757405A*(21)申请号 201210258898.3(22)申请日 2012.07.25C07D 285/135(2006.01)A61P 31/04(2006.01)(71)申请人山东理工大学地址 255086 山东省淄博市高新技术产业开发区高创园D座1012室(72)发明人朱海亮 孙娟 郭凤娇 张阳钱绍松(74)专利代理机构青岛发思特专利商标代理有限公司 37212代理人耿霞(54) 发明名称含噻二唑的香兰素衍生物、其制备方法及其用途(57) 摘要本发明涉及一。
2、类含噻二唑的香兰素衍生物、其制备方法及其用途，该衍生物具有如下结构：式中R1、R2、R3为：（1）R1=R2=H，R3=NO2；或者（2）R1=R2=H，R3=Br；或者（3）R1=R3=H，R2=NO2；或者（4）R2=R3=H，R1=Br；或者（5）R1=R3=H，R2=Br；或者（6）R1=Br，R2=H，R3=NO2；或者（7）R1=R3=H，R2=OCH3；或者（8）R1=R2=H，R3=OCH3；或者（9）R2=R3=H，R1=NO2。其制备方法是先将取代的香兰素、水合肼和异硫氰酸苯酯反应后，再加入催化剂进行反应制得。本发明提供的一类含噻二唑的香兰素衍生物对细菌具有明显的抑制作用，。
3、可以应用于制备抗菌药物，且该衍生物制备方法简单易行，易于实施。(51)Int.Cl.权利要求书2页 说明书8页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 2 页 说明书 8 页1/2页21.一类含噻二唑的香兰素衍生物，其特征在于该衍生物具有如下结构的通式：式中R1、R2、R3为：（1）R1=R2=H，R3=NO2；或者（2）R1=R2=H，R3=Br；或者（3）R1=R3=H，R2=NO2；或者（4）R2=R3=H，R1=Br；或者（5）R1=R3=H，R2=Br；或者（6）R1=Br，R2=H，R3=NO2；或者（7）R1=R3=H，R2=OCH3；或者（8）R1=R。
4、2=H，R3=OCH3；或者（9）R2=R3=H，R1=NO2。2.一种权利要求1所述的含噻二唑的香兰素衍生物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）将异硫氰酸苯酯与水合肼按照摩尔比1:12混合，加入有机溶剂，在常温或3590度下回流反应0.212h，冷却至室温减压蒸馏得到固体；有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈；（2）将步骤（1）中得到的固体溶于有机溶剂中，加入取代的香兰素，常温或3590度下回流反应0.212h，减压蒸干得到产物；取代的香兰素与步骤（1）中得到的固体摩尔比为1:1；有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈；（3）将步骤（2）中得到的产物溶于有机溶剂，加入催化剂，7090度回流0.54h后减压蒸。
5、干得到粗产物，将粗产物重结晶得到含噻二唑的香兰素衍生物；催化剂与步骤（2）中得到产物的摩尔比为0.050.5:1；有机溶剂为甲醇或乙醇；催化剂为硫酸铁铵。3.一种权利要求1所述的含噻二唑的香兰素衍生物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）将取代的香兰素与水合肼按照摩尔比1:12混合，加入有机溶剂，在常温或3590度下回流反应0.212h，冷却至室温减压蒸馏得到固体；有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈；（2）将步骤（1）中得到的固体溶于有机溶剂中，加入异硫氰酸苯酯，常温或3590度下回流反应0.212h，减压蒸干得到产物；步骤（1）中得到的固体与异硫氰酸苯酯摩尔比1:12；有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈。
6、；（3）将步骤（2）中得到的产物溶于有机溶剂，加入催化剂，7090度回流0.54h后减压蒸干得到粗产物，将粗产物重结晶得到含噻二唑的香兰素衍生物；催化剂与步骤（2）中得到产物的摩尔比为0.050.5:1；有机溶剂为甲醇或乙醇；催化剂为硫酸铁铵。4.一种权利要求1所述的含噻二唑的香兰素衍生物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：权 利 要 求 书CN 102757405 A2/2页3（1）将取代的香兰素、水合肼和异硫氰酸苯酯按照摩尔比1:1:1混合，加入有机溶剂，常温或3590度下回流反应0.212h，减压蒸干得到产物；有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈；（2）将步骤（1）中得到的产物溶于有机溶剂，加入催。
7、化剂，7090度回流0.54h后减压蒸干得到粗产物，将粗产物重结晶得到含噻二唑的香兰素衍生物；催化剂与步骤（1）中得到产物的摩尔比为0.050.5:1；有机溶剂为甲醇或乙醇；催化剂为硫酸铁铵。5.一种权利要求1所述的含噻二唑的香兰素衍生物的用途，其特征在于作为抗菌药物使用。权 利 要 求 书CN 102757405 A1/8页4含噻二唑的香兰素衍生物、 其制备方法及其用途 技术领域0001 本发明涉及香兰素衍生物，具体涉及一类含噻二唑的香兰素衍生物、其制备方法及其用途。 背景技术0002 在过去的几十年中，多药耐药微生物的问题在全球已经达到令人震惊的程度。因此，寻找高效、低副作用的抗微生物感染。
8、的新药物成为一个重要和迫切的任务。 0003 噻二唑是生产头孢唑啉、头孢卡奈、头孢西酮、唑酮头孢菌素、头孢帕罗、头孢菌素BL-S339，呋苄唑头孢菌素等医药的重要中间体，由于该类药物具有抗菌广谱、吸收好、副作用小，尤其适于口服吸收等特点，因此在临床上被广泛使用。据报道香兰素也具有一定的抗菌抗炎活性。因此，本发明将含各种取代基的香兰素引入1,3,4-噻二唑，制备含有噻二唑的香兰素衍生物。 0004 此类衍生物对细菌生长有明显的抑制作用，因此，含噻二唑的香兰素衍生物作为很有潜力的抗细菌药物的前景十分值得关注。随着1,3,4-噻二唑和香兰素类药物研究的不断深入，在对其抗菌作用机制不断了解的基础上进行。
9、有效的结构改造与修饰和分子设计，将会有越来越多的高效、低毒的含噻二唑的香兰素类抗菌药物用于临床，造福人类。 发明内容0005 本发明所要解决的技术问题是提供一类含噻二唑的香兰素衍生物、其制备方法及其用途，该衍生物对细菌具有明显的抑制作用，可以用于制备抗菌药物。 0006 本发明所述的一类含噻二唑的香兰素衍生物，该衍生物具有如下结构的通式： 0007 0008 式中R1、R2、R3为： 0009 （1）R1=R2=H，R3=NO2；或者 0010 （2）R1=R2=H，R3=Br；或者 0011 （3）R1=R3=H，R2=NO2；或者 0012 （4）R2=R3=H，R1=Br；或者 0013。
10、 （5）R1=R2=Br，R3=H；或者 0014 （6）R1=Br，R2=H，R3=NO2；或者 0015 （7）R1=R3=H，R2=OCH3；或者 说 明 书CN 102757405 A2/8页50016 （8）R1=R2=H，R3=OCH3；或者 0017 （9）R2=R3=H，R1=NO2。 0018 一类含噻二唑的香兰素衍生物的制备方法，有如下几种： 0019 方法一： 0020 （1）将异硫氰酸苯酯与水合肼按照摩尔比1:12混合，加入有机溶剂，在常温或3590度下回流反应0.212h，冷却至室温减压蒸馏得到固体；有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈； 0021 （2）将步骤（1）中得到的固。
11、体溶于有机溶剂中，加入取代的香兰素，常温或3590度下回流反应0.212h，减压蒸干得到产物；取代的香兰素与步骤（1）中得到的固体摩尔比为1:1；有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈； 0022 （3）将步骤（2）中得到的产物溶于有机溶剂，加入催化剂，7090度回流0.54h后减压蒸干得到粗产物，将粗产物重结晶得到含噻二唑的香兰素衍生物；催化剂与步骤（2）中得到产物的摩尔比为0.050.5:1；有机溶剂为甲醇或乙醇；催化剂为硫酸铁铵。 0023 方法二： 0024 （1）将取代的香兰素与水合肼按照摩尔比1:12混合，加入有机溶剂，在常温或3590度下回流反应0.212h，冷却至室温减压蒸馏得到固体；有机。
12、溶剂为甲醇、乙醇或乙腈； 0025 （2）将步骤（1）中得到的固体溶于有机溶剂中，加入异硫氰酸苯酯，常温或3590度下回流反应0.212h，减压蒸干得到产物；步骤（1）中得到的固体与异硫氰酸苯酯摩尔比1:12；有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈； 0026 （3）将步骤（2）中得到的产物溶于有机溶剂，加入催化剂，7090度回流0.54h后减压蒸干得到粗产物，将粗产物重结晶得到含噻二唑的香兰素衍生物；催化剂与步骤（2）中得到产物的摩尔比为0.050.5:1；有机溶剂为甲醇或乙醇；催化剂为硫酸铁铵。 0027 方法三： 0028 （1）将取代的香兰素、水合肼和异硫氰酸苯酯按照摩尔比1:1:1混合，加入有机。
13、溶剂，常温或3590度下回流反应0.212h，减压蒸干得到产物；有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈； 0029 （2）将步骤（1）中得到的产物溶于有机溶剂，加入催化剂，7090度回流0.54h后减压蒸干得到粗产物，将粗产物重结晶得到含噻二唑的香兰素衍生物；催化剂与步骤（1）中得到产物的摩尔比为0.050.5:1；有机溶剂为甲醇或乙醇；催化剂为硫酸铁铵。 0030 所述的含噻二唑的香兰素衍生物的用途，是可以作为抗菌药物使用。 0031 本发明的有益效果如下： 0032 本发明提供的一类含噻二唑的香兰素衍生物对细菌具有明显的抑制作用，可以应用于制备抗菌药物，且该衍生物制备方法简单易行，易于实施。 具体实施。
14、方式0033 以下结合实施例对本发明做进一步描述。 0034 实施例1： 0035 2-甲氧基-3-硝基-45-（苯胺基）-1,3,4-噻二唑-2-基苯酚的制备（采用方说 明 书CN 102757405 A3/8页6法二制备）。 0036 0037 将2-NO2-香兰素（10mmol）溶于25mL甲醇，置于带有回流装置的圆底烧瓶中。加入15mmol水合肼，油浴加热，在75下回流反应4h，冷却至室温。溶剂减压蒸干，氯仿萃取，有机层用无水Na2SO4干燥，溶剂减压蒸干得到产物。将产物（5mmol）溶于25mL乙醇中，然后加入5.5mmol异硫氰酸苯酯，80回流反应4个小时，溶剂减压蒸干，将得到的产。
15、物溶于20mL乙醇，加入5mmol的硫酸铁铵，加热80回流反应4个小时后减压蒸干溶剂，产物用无水乙醇重结晶得目标化合物1。 0038 实施例2： 0039 2-甲氧基-3-溴-4-5-（苯胺基）-1,3,4-噻二唑-2-基苯酚的制备（采用方法一制备）。 0040 0041 将异硫氰酸苯酯（10mmol）溶于25mL氯仿，置于带有回流装置的圆底烧瓶中。加入15mmol水合肼，油浴加热，在75下回流反应5h，冷却至室温。溶剂减压蒸干得到产物。将产物（5mmol）溶于25mL乙醇中，然后加入5mmol 2-溴-香兰素，80回流反应4个小时，溶剂减压蒸干，氯仿萃取，有机层用无水Na2SO4干燥，溶剂减。
16、压蒸干得到产物。将得到的产物溶于20mL乙醇，加入5mmol的硫酸铁铵，加热回流反应4个小时后减压蒸干溶剂，产物用无水乙醇重结晶得目标化合物2。 0042 实施例3： 0043 6-溴-2-甲氧基-3-硝基-4-5-（苯胺基）-1,3,4-噻二唑-2-基苯酚的制备（采用方法三制备）。 0044 说 明 书CN 102757405 A4/8页70045 将异硫氰酸苯酯（10mmol），2-硝基-5-溴-香兰素（10mmol）和水合肼（10mmol）溶于25mL乙醇，加热回流反应4小时后，溶剂减压蒸干，氯仿萃取，有机层用无水Na2SO4干燥，溶剂减压蒸干得到产物。将得到的产物溶于20mL乙醇，加入。
17、10mmol的硫酸铁铵，加热回流反应4个小时后减压蒸干溶剂，产物用无水乙醇重结晶得目标化合物3。 0046 实施例4： 0047 2-甲氧基-5-硝基-4-5-（苯胺基）-1,3,4-噻二唑-2-基苯酚的制备（采用方法二制备）。 0048 0049 将6-硝基-香兰素（10mmol）溶于25mL甲醇，置于带有回流装置的圆底烧瓶中。加入15mmol水合肼，油浴加热，在90下回流反应2h，冷却至室温。溶剂减压蒸干，氯仿萃取， 有机层用无水Na2SO4干燥，溶剂减压蒸干得到产物。将产物（5mmol）溶于25mL乙醇中，然后加入5.5mmol异硫氰酸苯酯，60回流反应6个小时，溶剂减压蒸干，将得到的产。
18、物溶于20mL乙醇，加入5mmol的硫酸铁铵，加热80回流反应4个小时后减压蒸干溶剂，产物用无水乙醇重结晶得目标化合物4。 0050 实施例5： 0051 2-甲氧基-5-溴-4-5-（苯胺基）-1,3,4-噻二唑-2-基苯酚的制备（采用方法一制备）。 0052 0053 将异硫氰酸苯酯（10mmol）溶于25mL氯仿，置于带有回流装置的圆底烧瓶中。加入15mmol水合肼，油浴加热，在75下回流反应5h，冷却至室温。溶剂减压蒸干得到产物。将产物（5mmol）溶于25mL乙醇中，然后加入5mmol 6-溴-香兰素，90回流反应2个小时，说 明 书CN 102757405 A5/8页8溶剂减压蒸干。
19、，氯仿萃取，有机层用无水Na2SO4干燥，溶剂减压蒸干得到产物。将得到的产物溶于20mL乙醇，加入5mmol的硫酸铁铵，加热80回流反应4个小时后减压蒸干溶剂，产物用无水乙醇重结晶得目标化合物5。 0054 实施例6： 0055 6-甲氧基-2,3-二溴-4-5-（苯胺基）-1,3,4-噻二唑-2-基苯酚的制备。 0056 0057 制备方法同实施例2。以5,6-二溴-香兰素代替2-溴-香兰素，得目标化合物6。 0058 实施例7： 0059 2,5-二甲氧基-4-5-（苯胺基）-1,3,4-噻二唑-2-基苯酚的制备。 0060 0061 制备方法同实施例1。以6-甲氧基-香兰素代替2-硝基-。
20、香兰素，得目标化合物7。 0062 实施例8： 0063 2,3-二甲氧基-4-5-（苯胺基）-1,3,4-噻二唑-2-基苯酚的制备。 0064 0065 制备方法同实施例1。以2-甲氧基-香兰素代替2-硝基-香兰素，得目标化合物8。 0066 实施例9： 0067 2-甲氧基-6-硝基-4-5-（苯胺基）-1,3,4-噻二唑-2-基苯酚的制备。 0068 说 明 书CN 102757405 A6/8页90069 制备方法同实施例1。以5-硝基-香兰素代替2-硝基-香兰素，得目标化合物9。 0070 实施例10： 0071 6-甲氧基-2-溴-4-5-（苯胺基）-1,3,4-噻二唑-2-基苯酚。
21、的制备。 0072 0073 制备方法同实施例1。以5-溴-香兰素代替2-溴-香兰素，得目标化合物10。 0074 实施例11：含噻二唑的香兰素衍生物抗菌活性研究 0075 1.实验材料和方法 0076 1.1药品与试剂 0077 Mueller-Hinton培养基(牛肉浸粉5g，酪蛋白水解物17.5g，淀粉1.5g，琼脂12.5g，加入1000mL蒸馏水中)、卡那霉素、青霉素、DMSO、MTT（3-（4,5-二甲基噁唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐，商品名为噁唑蓝）、异丙醇、盐酸、均为分析纯试剂、合成的化合物110、PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液0.01mol/L,pH7.4,Na2HPO4.。
22、12H2O 2.9g,KH2PO40.2g,NaCl 8.0g,KCl 0.2g,蒸馏水1000mL)。 0078 1.2菌种 0079 大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、铜绿假单胞菌(P.aeruginosa) 0080 1.3实验方法 0081 1.3.1培养基的配制 0082 取牛肉浸粉5g，酪蛋白水解物17.5g，淀粉1.5g，琼脂12.5g，加入1000mL蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装，121高压灭菌15分钟备用。 0083 1.3.2试验菌的培养 0084 在无菌室内，取大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌和铜绿假。
23、单胞菌四种试验菌株，于酒精灯下用接种针分别在四种试验菌株斜面上，刮取少量斜面菌苔，用一定量的无菌水制成菌悬液,然后取一定量加到已融化又冷却至50左右的MH培养基中，摇匀,即刻倒入无菌培养皿中,待充分冷凝后用胶塞密封后，于37培养18-24小时备用。吸取菌说 明 书CN 102757405 A7/8页10液1mL，用MH培养基按1:1000稀释，使菌液浓度约为105cfu/mL。 0085 1.3.3抗菌实验： 0086 将待测药品溶于DMSO中配制成2mg/mL的溶液，然后用二倍稀释法将药品稀释成一定 浓度梯度（50g/mL,25g/mL,12.5g/mL,3.125g/mL）与DMSO中。于。
24、灭菌微量滴定板第一条中分别加入100L的培养基，第二条为阳性对照，加入100L菌悬液。其余的孔中加入90L的菌悬液和10L的药物溶液。每个药物溶液浓度平行3次。在微量滴定板底部标明细菌名称。将处理完的培养皿于37培养24h，观察。 0087 1.3.4MIC的测定 0088 在每个微量滴定板都可以直观的测定其MIC值之后，在板的每个孔中加入50L PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液0.01mol/L,pH7.4,Na2HPO4.2H2O 2.9g,KH2PO40.2g，NaCl 8.0g，KCl0.2g,蒸馏水1000mL)，其中包含2mg MTT/mL。在室温下继续孵育4-5h。将孔中的物质移出并加。
25、入100L含有5%1mol/L HCl的异丙醇来萃取染料。继续在室温下赋育12h，于酶标仪测定各孔光吸收（OD值），测定波长550nm。根据各孔OD值计算药物对细菌生长的最小抑制浓度。 0089 最小抑制浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）：在特定环境下孵育24小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度即最小抑制浓度，根据测定的光密度（OD值），制作细菌生长抑制率的标准曲线，在标准曲线上求得其对应的药物浓度。 0090 2.实验结果 0091 测得的MIC见表1所示： 0092 表1本发明所列含噻二唑的香兰素衍生物对细菌的抑制MIC值(g/mL) 0093 说 明 书CN 102757405 A10。