一种提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法.pdf

本发明公开了一种提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法，包括基本培养基逐步添加西红柿瓶内壮苗培养、健壮组培苗微型茎段室内瓶外高密度生根培养、以及微型组培生根苗的炼苗和移栽。添加的西红柿培养基稳定了其低pH值生长环境，培育的苗比现有技术的苗更健壮；改室外生根为室内瓶外生根，操作方法简便生根稳定降低了管理难度；基质材料采用珍珠岩，重量轻搬运容易，生根和移植时操作效率极高，同时材料易取得。经过本技术方案制得的蓝莓微型生根苗，有效苗数量是原技术(采用完整苗)的2.5～3倍，每苗根系数量达10条，苗木健壮，生根率达到95％以上，大大降低了蓝莓组培育苗生根移植时的育苗成本。

权利要求书1.  一种提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法，其特征在于，在无菌条 件下进行初代培养和继代增殖培养，在培养得到无菌继代苗的基础上再进行 以下操作： 步骤1、对继代苗采用添加西红柿的WPM培养基进行壮苗培养，得到 健壮瓶苗； 步骤2、对健壮瓶苗进行室内瓶外微型茎段高密度生根培养，制备得到 微型生根苗； 步骤3、对微型生根苗进行室外炼苗和移栽管理，培育出标准组培容器 苗。 2.  根据权利要求1所述的提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法，其特 征在于，所述步骤1中对继代苗采用添加西红柿的WPM培养基进行壮苗培 养具体按照以下步骤实施: 步骤1.1、将继代苗接种到蓝莓继代培养基上，蓝莓继代培养基配方为 WPM+ZTR 1mg/L+西红柿5g/L，无需调节pH值，转接1次，其中，蓝莓 继代培养基即为添加西红柿的WPM培养基； 步骤1.2、将蓝莓继代培养基配方调整为WPM+ZTR 0.5mg/L+西红柿 10g/L，无需调节pH值，经多次转接后得到足够数量的健壮瓶苗，其中，蓝 莓继代培养基即为添加西红柿的WPM培养基。 3.  根据权利要求2所述的提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法，其特 征在于，所述对继代苗采用添加西红柿的WPM培养基进行壮苗培养操作时 切取带1～2个单芽的茎段接种培养基中，培养容器采用250ml罐头瓶或马 铃薯瓶，每瓶接种数量10～15棵。 4.  根据权利要求2所述的提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法，其特 征在于，所述步骤2中对健壮瓶苗进行室内瓶外微型茎段高密度生根培养具 体按照以下步骤实施： 步骤2.1、蓝莓壮苗茎段的剪取及处理：在空气中打开瓶盖，用镊子夹 出试管苗，剪去基部带有培养基的部分，再剪成带2个芽的茎段，用洁净容 器收集，立刻在激素溶液内浸泡3s捞出； 步骤2.2、茎段的扦插：生根基质置入塑料餐盒中，将步骤2.1制得的蓝 莓微型生根茎段置于盛装了生根基质的塑料餐盒内，每盒100株左右，改直 接扦插为打孔扦插； 步骤2.3、密封生根：立即用保鲜膜密封，置于温度为21℃～28℃，光 照条件为2000～3000lux光照环境条件下培养21天。 5.  根据权利要求4所述的提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法，其特 征在于，所述步骤2中生根营养液的配制方法是：配制1L的WPM培养基 加水稀释至5L，稀释后的溶液调节pH值到4.5，灭菌(改高压灭菌为煮沸 灭菌，下同)，灭菌后冷却即得到生根营养液，备用；所述激素溶液的配制 方法是：称取IBA或NAA 1g，用少量1N的NaOH溶液溶解，定容至1L， 将稀释后的溶液调节pH值至5.0，灭菌后冷却备用；所述生根基质的配制方 法是：按照珍珠岩基质与生根营养液重量比例1：5，将两者混合即制得生根 基质。 6.  根据权利要求5所述的提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法，其特 征在于，所述步骤3蓝莓组培微型生根苗的炼苗和移栽具体按照以下步骤实 施： 步骤3.1、炼苗：在温度20～25℃，光照2000lux，相对湿度70～90％ 环境条件下，步骤2.3生根苗餐盒保鲜膜划开一道口子，炼苗1～2天，之后 完全揭去保鲜膜，浇水继续炼苗1～2天； 步骤3.2、移栽：完全炼苗后收集蓝莓微型生根苗于塑料盒容器中，移 栽时用镊子夹取生根的蓝莓微型生根苗直接放入盛装移栽基质的穴盘中，置 于带有喷灌系统的苗床内，不定期喷水保湿； 步骤3.3、上盆：待穴盘苗新梢长出4-5张叶片时，带基质移栽上盆， 其中，塑料盆口径8-10cm，即移入苗圃进行正常管理。 7.  根据权利要求6所述的提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法，其特 征在于，所述移栽基质的具体制备方法如下：按照质量百分比称取泥炭70 份，珍珠岩10份，黄心土10份，稻壳8份，控释肥2份混拌均匀，浸泡消 毒，移栽前浇透水备用。

说明书一种提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法
技术领域
本发明属于植物种苗组培繁育技术领域，具体涉及一种提高蓝莓组培试 管苗炼苗成苗率的方法。
背景技术
蓝莓素有“抗氧化之王，美瞳之果”的美誉，对快节奏生活的现代都市 人来说越来越具有保健价值。我国蓝莓产业经过近15年来的快速发展已经 初具规模，但面积和产量还远远不能满足国内市场的需求。目前，国内蓝莓 种苗生产主要依靠组培技术，其技术难点集中于瓶内壮苗、瓶外生根、炼苗 移栽等环节。普遍存在繁殖系数偏低、生根率偏低、移苗操作效率偏低等“三 低”问题(以下简称“三低”问题)，大大提高了蓝莓组培育苗成本和苗木 价格，从而制约了蓝莓产业的发展。
发明内容
本发明旨在集成创新一种提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法的方 法，系统解决现有技术存在的“三低”问题。
本发明所采用的技术方案是，一种提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方 法的方法，在无菌条件下进行初代培养和继代增殖培养，在培养得到无菌继 代苗的基础上再进行以下操作：
步骤1、对继代苗采用添加西红柿的WPM培养基进行壮苗培养，得到 健壮瓶苗；
步骤2、对健壮瓶苗进行室内瓶外微型茎段高密度生根培养，制备得到 微型生根苗；
步骤3、对微型生根苗进行室外炼苗和移栽管理，培育出标准组培容器 苗。
本发明的特点还在于，
步骤1中对继代苗采用添加西红柿的WPM培养基进行壮苗培养具体按 照以下步骤实施:
步骤1.1、将继代苗接种到蓝莓继代培养基上，蓝莓继代培养基配方为 WPM+ZTR 1mg/L+西红柿5g/L，无需调节pH值，转接1次，其中，蓝莓 继代培养基即为添加西红柿的WPM培养基；
步骤1.2、将蓝莓继代培养基配方调整为WPM+ZTR 0.5mg/L+西红柿 10g/L，无需调节pH值，经多次转接后得到足够数量的健壮瓶苗，其中，蓝 莓继代培养基即为添加西红柿的WPM培养基。
对继代苗采用添加西红柿的WPM培养基进行壮苗培养操作时切取带 1～2个单芽的茎段接种培养基中，培养容器采用250ml罐头瓶或马铃薯瓶， 每瓶接种数量10～15棵。
步骤2中对健壮瓶苗进行室内瓶外微型茎段高密度生根培养具体按照以 下步骤实施：
步骤2.1、蓝莓壮苗茎段的剪取及处理：在空气中打开瓶盖，用镊子夹 出试管苗，剪去基部带有培养基的部分，再剪成带2个芽的茎段，用洁净容 器收集，立刻在激素溶液内浸泡3s捞出；
步骤2.2、茎段的扦插：生根基质置入塑料餐盒中，将步骤2.1制得的蓝 莓微型生根茎段置于盛装了生根基质的塑料餐盒内，每盒100株左右，改直 接扦插为打孔扦插；
步骤2.3、密封生根：立即用保鲜膜密封，置于温度为21℃～28℃，光 照条件为2000～3000lux光照环境条件下培养21天。
步骤2中生根营养液的配制和灭菌方法是：配制1L的WPM培养基加 水稀释至5L，稀释后的溶液调节pH值到4.5，灭菌(改高压灭菌为煮沸灭 菌，下同)。灭菌后冷却即得到生根营养液，备用；所述激素溶液的配制方 法是：称取IBA或NAA 1g，用少量1N的NaOH溶液溶解，定容至1L，将 稀释后的溶液调节pH值至5.0，灭菌后冷却备用；所述生根基质的配制方法 是：按照珍珠岩与生根营养液重量比例1：5，将两者混合即制得生根基质。
步骤3蓝莓组培微型生根苗的炼苗和移栽具体按照以下步骤实施：
步骤3.1、炼苗：在温度20～25℃，光照2000lux，相对湿度70～90％ 环境条件下，步骤2.3生根苗餐盒保鲜膜划开一道口子，炼苗1～2天，之后 完全揭去保鲜膜，浇水继续炼苗1～2天；
步骤3.2、移栽：完成炼苗后收集蓝莓微型生根苗于塑料盒容器中，移 栽时用镊子夹取生根的蓝莓微型生根苗直接放入盛装移栽基质的穴盘中，置 于带有喷灌系统的苗床内，不定期喷水保湿；
步骤3.3、上盆：待穴盘苗新梢长出4-5张叶片时，带基质移栽上盆， 其中，塑料盆口径8-10cm，即移入苗圃进行正常管理。
移栽基质的具体制备方法如下：按照质量百分比称取泥炭70份，珍珠 岩10份，黄心土10份，稻壳8份，控释肥2份混拌均匀，浸泡消毒，移栽 前浇透水备用。
本发明的有益效果是：本技术方案采用的瓶内壮苗、室内瓶外高密度集 中生根、室外炼苗移栽等方法，提高了成苗率和工作效率，系统解决蓝莓工 厂化组培育苗的“三低”问题。与现有同类技术相比，优点在于：①步骤1 继代苗培养基添加西红柿有机物进行壮苗培养，提高了试管苗的健壮程度， 更有利于生根和增强其对不良环境的抵抗能力；蓝莓自然生长时属于喜强酸 性土壤条件的植物，由于西红柿富含有机酸，添加西红柿的培养基维持低pH 值的缓冲能力大大增强，降低了未添加的培养基后期pH上升的不利影响， 还可省去每次培养基配制时调节酸碱度的麻烦。②步骤2采用的室内瓶外高 密度生根技术，方法上改变灭菌方式，实行室内操作，简易方便；环境控制 上室内可控性强，管理方便集约化，从而保证了其生根的稳定性；③步骤3 微型生根苗的室外炼苗移栽，较之同类技术的无根苗驯化时既要适应环境又 要生根，其对环境变化的适应性大大增强，生根率达到95％，比国内平均水 平高出10个百分点以上；④步骤3生根茎段仅带2个芽，仅此阶段就比现 有技术(5～6个芽)的苗木繁殖系数提高2倍以上。⑤生根采用珍珠岩作为 支持物，材料易取得重量轻，移栽时操作方便，每人每天可移栽0.8～1万株， 移栽效率是国内现有技术的2倍，显著降低了人工成本。
附图说明
图1是微型苗生根显微镜照片，其中，a为一种是微型苗生根显微镜照 片；b为另一种是微型苗生根显微镜照片，c是生根后成活情况图片，d是室 内大规模生根图片。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。
本发明提供一种提高蓝莓组培试管苗炼苗成苗率的方法，具体按照以下 步骤实施：取蓝莓半木质化或未木质化嫩梢进行无菌接种，经初代培养和继 代增殖培养，在得到继代苗的基础上再进行以下操作：
步骤1、继代苗的壮苗培养；将进入快速增殖阶段的蓝莓无菌苗，进行 壮苗培养。壮苗培养共分二个阶段进行：第一阶段的培养基组成为：基本培 养基、激素及有机添加物。基本培养基采用WPM培养基，添加激素为反式 玉米素核苷(ZTR)，浓度为1mg/L，有机添加物为西红柿，浓度为5g/L， 无需调节pH值。第二阶段将培养基激素配方调整为ZTR 0.5mg/L、有机添 加物西红柿浓度调整为10g/L，无需调节pH值。第一阶段转接1次，第二 阶段转接多次，每次转接间隔时间1个月，直至培养获得足够数量的健壮瓶 苗。每次转接操作时，要求切取带2个单芽的茎段，培养容器采用250ml罐 头瓶或马铃薯瓶，每瓶接种数量10-15棵。
步骤2、健壮瓶苗室内瓶外高密度生根培养，配制2种生根溶液：生根 营养液(1/5WPM营养溶液)和激素溶液(1mg/mL的IBA溶液)。1/5WPM 营养液配制方法是：配制1L的WPM培养基加水稀释至5L，稀释后的溶液 调节pH值到4.5，煮沸灭菌后冷却即可，备用。激素溶液的配制方法是：称 取IBA 1g，用少量1N的NaOH溶液溶解，定容至1L，将稀释后的溶液调 节pH值至5.0，煮沸灭菌后冷却备用。
将干净的珍珠岩与生根营养液按照重量比例1:5混合均匀，放入一次性 透明餐盒内，体积为餐盒体积的1/3，即得到生根基质。将长势良好的蓝莓 无菌苗新梢，无需超净工作台直接从培养瓶内取出，剪去基部带有培养基的 部分，再剪成带1～2个芽的茎段，剪后的大量茎段放入激素溶液内浸泡3s 捞出，先用铅笔粗细的木棍打孔，将浸后的茎段直接置于孔内，扦插于生根 基质中，每孔一株，共约100株。立即保鲜膜密封，置于温度为25±1℃， 2000～3000lux光照环境条件下培养21天；得到高密度微型苗，如图1所示， 其中a为一种是微型苗生根显微镜照片；b为另一种是微型苗生根显微镜照 片。
步骤3、蓝莓微型生根苗的炼苗和移栽，在温度25±1℃，光照2000lux， 相对湿度70～90％，进行过渡炼苗3～5天。炼苗后进行移栽，具体为：按 照质量百分比称取泥炭70％，珍珠岩15％，黄心土8％，稻壳8％，控释肥 2％比例混拌均匀，浸泡消毒后灌装50或72孔穴盘，移栽前浇透水备用。 移栽时用镊子夹取生根的蓝莓微型组培苗扦插于穴盘中，置于带有喷灌系统 的苗床内，20～30天左右待苗新梢长出即可移植苗床正常管理。
蓝莓小苗在试管内无菌条件下培养到足够数量时要移栽到室外进行定 植，在移栽时由于试管内小苗先前生长非常迅速且植株幼嫩，必须经过严格 缓慢的温湿度过渡，才能适应外界环境条件。苗木长势茁壮程度及生根与否 将极大影响驯化成活率。
蓝莓自然生长适宜强酸性土壤条件(pH值4.2-5.5)，蓝莓组培苗的培养 也需要低pH值条件来维持铁元素等的吸收，因此培养基要求较强酸性的培 养基条件。在培养基灭菌时和培养过程中，基质内pH值条件的变化幅度过 大就影响到蓝莓苗的增殖和生长。番茄内含有柠檬酸等酸性有机物，其维持 低pH的缓冲能力大大增强，本发明通过在蓝莓组培苗的继代培养过程中逐 步增量添加番茄有机质，维持了培养基中低pH值条件，稳定了基质中蓝莓 需要的铁等营养元素，同时番茄中的未知有机养分为蓝莓的生长提供活性营 养，提高了蓝莓组培小苗的健壮程度，从而提高了蓝莓组培苗的生根率。
利用室内生根技术提高了生根率和繁殖系数，采用西红柿、珍珠岩等物 质容易取得，质量稳定，以完整小苗进行驯化，提高了小苗对不良环境的抗 性，解决以前组培小苗既要生根又要驯化的双重障碍，从而提高移栽成活率 和成苗率。彻底解决了之前蓝莓组培育苗生根时室外蘸生根粉扦插炼苗时遇 到的“三低”等问题，适合工厂化简易生产。
经过本技术方案制得的蓝莓微型生根苗，有效苗数量是原技术(采用完 整苗)的2.5～3倍，每苗根系数量达10条，苗木健壮，生根率达到95％以 上，由于改直接扦插为打孔扦插，生根基质支持物采用珍珠岩，根系不粘连 基质轻，生根和移植时操作方法简单，效率极高，同时材料易取得，大大降 低了蓝莓组培育苗时生根移植的成本。