干扰素阴道泡腾胶囊及制备方法 【技术领域】
本发明涉及药物领域。具体涉及一种干扰素阴道泡腾胶囊及制备方法。
背景技术
干扰素具有抗病素、抗细胞增生和免疫调节的作用，所以自它被发现后至今已成为可以广泛应用于治疗病毒性疾病和某些肿瘤的有效药物，例如治疗病毒性肝炎、带状疱疹，抗脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、流感病毒……等等。
慢性宫颈炎、宫颈糜烂为妇科常见病、多发病，已婚妇女约有半数以上受此病的困扰。究其发病原因，多为HPV-16、HPV-18感染所致，且为诱发宫颈癌的高危因素。由于干扰素是一种生物活性物质，具有对光、热敏感及在液体状态下不稳定的特性，如何将其制备成稳定、均一、高效、方便的治疗妇科病毒性感染的阴道用药物即成为研制的目标。目前国内绝大部分干扰素的剂型为注射剂、栓剂、滴眼剂、片剂、凝胶剂、喷雾剂等剂型，但到目前为止，尚未发现一种专为治疗妇女慢性宫颈炎、宫颈糜烂的供阴道给药的干扰素泡腾胶囊制剂。
中国专利申请CN1284381公开的《重组人干扰素α凝胶剂及生产方法》中描述的是制备成半固体的凝胶型制剂，其中含有大量的水分，容易引起干扰素蛋白活性成分的水解降解作用，另外还有加入诸如苯甲酸钠的防腐剂等对干扰素可能有损害的化学物质。为此中国专利申请CN1324659提供了《一种含有生物活性因子的阴道喷雾剂》，该发明为避免干扰素在溶液中可能发生的不稳定因素，提出了在临用时才将含干扰素原料的干燥组分加入到另一部分中药提取溶液中去。因此从提高干扰素制剂稳定性的剂型来看，通常采用粉针剂是比较有利的。但是粉针剂是需要注射给药方式，存在不方便的一些缺陷。
采用栓剂剂型，减少水份的不利影响，有利于阴道给药途径和局部治疗效果，如中国专利申请CN1315206《干扰素栓剂及其生产方法》、CN1105849《硬质多孔松泡体栓及其制造工艺》描述的是一种制备干扰素栓的工艺方法。但其工艺中都有将干扰素要放入熔融的栓剂基质中混合均匀地过程，此时的熔融温度可能会引起干扰素蛋白活性成分的受热失活影响。
CN1140088A《白细胞干扰素口含片及其制法》、CN1227124A《β干扰素含片及其制备方法》公开的是固体口服片剂，CN1381273《干扰素阴道给药片及制备工艺》公开的是阴道给药的固体片剂，这些都有利于避免水份储存时对干扰素的影响。但在制备过程中都必须经受相当大压力对含干扰素原料部分强烈的受压作用，可能会造成干扰素活性成分部分失活的不利影响。
【发明内容】
本发明所要解决的技术问题在于提供一种干扰素阴道给药的泡腾胶囊剂，这种胶囊剂具有工艺简单，用药方便，快速崩解并迅速泡腾覆盖创伤面释放药物，不污染衣物，均匀性和稳定性好的特点。
本发明公开的干扰素阴道泡腾胶囊处方重量百分比配方组成为：
组分 用量范围
干扰素 4×109IU～11×109IU
水溶性辅料 16％～84％
泡腾崩解剂 2％～67％
辅助性崩解剂 0～20％
粘合剂 适量
制成 10000粒胶囊
本发明所述的干扰素为天然或重组干扰素α-2b，及其类似物。
本发明所述的水溶性辅料可选自乳糖、甘露醇、葡萄糖、山梨醇等的一种或多种混合物。
本发明所述的泡腾崩解剂可选自碳酸盐和酸类物质，其中碳酸盐包括碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钙、碳酸钾或碳酸氢钾等；酸类物质包括苹果酸、柠檬酸、酒石酸、海藻酸或硼酸等。
本发明所述的粘合剂可选自聚乙烯吡硌烷酮、羟丙基甲基纤维素或乙醇等。
本发明所述的辅助性崩解剂为常用的药用辅料如：淀粉、预胶化淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡硌烷酮或交联羧甲基纤维素钠等。
本发明所要解决的另一技术问题是公开上述干扰素阴道泡腾胶囊的制备方法。
本发明公开的干扰素阴道泡腾胶囊的制备包括下列步骤：
(1)制备干扰素颗粒
将干扰素或其类似物在溶剂介质中溶解稀释，加入部分水溶性辅料，混合均匀后，真空干燥，干燥温度控制在零下30℃至室温25℃范围内，制得含主药的固态物，然后再用等量递增法的原则，追加部分水溶性辅料，经放大稀释后得干扰素粉末颗粒，检测颗粒含水量和均匀度应符合规定要求，并测定干扰素含量；
(2)制备泡腾细粒
将碳酸盐和酸类物质的泡腾崩解剂混合均匀，加入适量的粘合剂进行混合制粒，使泡腾崩解的辅料颗粒粒径范围小于75μm占1％-30％，大于300μm占5％-50％；
(3)将步骤(1)和(2)制得的颗粒，添加辅助性崩解剂，混合均匀，总混合物的水份控制在0.2～5.0％范围内，填充胶囊即得。
本发明方法中所用溶剂包括纯化水、缓冲溶液等，其中缓冲溶液可选自硼酸缓冲溶液，磷酸缓冲溶液，柠檬酸缓冲溶液或乙酸缓冲溶液等，其pH值在3.0-8.0之间。
本发明将干扰素α-2b这类蛋白质(多肽)物质经上述工艺处理后，制成较大体积的原料药粉，与其它药用辅料混合均匀，装入胶囊，达到了使干扰素α-2b基本不失活、均匀性好的目的，且保护药物不受光线、湿气的影响。
对本发明干扰素阴道泡腾胶囊进行崩解度和溶出度试验，结果表明本发明泡腾胶囊崩解迅速，溶出完全，见表1、表2。
表1 干扰素α-2b阴道泡腾胶囊崩解时限汇总表批号 规格 崩解时限(分) 1 2 3 4 5 6990301 80万IU/粒 5’05”5’10”4’50”5’08”5’11”5’09”990302 80万IU/粒 5’07”5’20”5’19”5’13”5’15”5’22”990303 80万IU/粒 5’12”5’30”5’22”5’18”5’12”5’17”010601 80万IU/粒 6’07”6’10”6’12”6’18”6’20”6’12”
15分钟胶壳全部溶化
表2 干扰素α-2b阴道泡腾胶囊溶出情况汇总表
说明：(1)样品溶出情况以生物活性测定数据表示
(2)样品于37±1℃溶解液中崩解后10分钟取样，分别
测定每份样本的效价 批号 规格 生物活性(×105IU/粒) 1 2 3 4 5 6 7 8 990311 40万IU/粒 6.63 4.62 6.10 4.14 6.53 3.18 3.93 - 990322 40万IU/粒 5.32 5.32 4.77 5.05 6.94 - - - 990301 80万IU/粒 9.02 8.66 9.16 9.67 8.19 8.67 8.20 10.1 990302 80万IU/粒 8.67 7.24 8.08 8.33 9.67 8.15 7.76 9.29 990303 80万IU/粒 9.68 8.19 7.33 8.54 9.16 8.42 9.94 8.67 010601 80万IU/粒 8.79 8.32 8.20 8.55 9.29 8.00 8.67 8.43 96011 40万IU/粒 4.12 4.15 4.47 4.62 4.34 4.18 3.62 4.01 96012 40万IU/粒 4.05 4.12 4.54 4.28 4.21 4.49 3.88 4.03 96013 40万IU/粒 4.12 4.01 4.35 4.41 4.19 4.25 3.98 4.07
对本发明干扰素阴道泡腾胶囊进行稳定性考察试验，结果表明本发明泡腾胶囊经温度为25℃、37℃连续6个月的加速试验和2-8℃的二年长期试验，其效价(生物活性)及外观均未见明显变化，见表3-1、3-2、3-3，体现了良好的稳定性。
表3-1 干扰素α-2b阴道泡腾胶囊稳定性考察结果汇总表
加速试验：温度25℃ 批号 观察 项目 观察结果(万IU/粒) 0月 1月 2月 3月 6月 990301 80万IU/粒 外观 硬胶囊，白 色粗粉末 未见变化 未见变化 未见变化 未见变化 效价 90.2 87.7 87.7 104.0 99.3 990302 80万IU/粒 外观 硬胶囊，白 色粗粉末 未见变化 未见变化 未见变化 未见变化 效价 94.0 94.0 87.7 116.0 91.4 990303 80万IU/粒 外观 硬胶囊，白 色粗粉末 未见变化 未见变化 未见变化 未见变化 效价 104.0 91.4 106.0 88.8 93.9
表3-2 加速试验：温度37℃ 批号 观察 项目 观察结果(万IU/粒) 0月 1月 2月 3月 6月 990301 80万IU/粒 外观 硬胶囊，白 色粗粉末 未见变化 未见变化 未见变化 未见变化 效价 90.2 87.7 86.5 111.0 96.7 990302 80万IU/粒 外观 硬胶囊，白 色粗粉末 未见变化 未见变化 未见变化 未见变化 效价 94.0 96.6 84.1 97.8 89.0 990303 80万IU/粒 外观 硬胶囊，白 色粗粉末 未见变化 未见变化 未见变化 未见变化 效价 104.0 92.7 88.9 103.0 92.8
表3-3 干扰素α-2b阴道泡腾胶囊稳定性考察结果汇总表
长期试验：温度4℃批号 规格 (万 IU/ 粒) 考察项目 观察结果 0月 3月 6月 9月 12月 15 月 18月 24月1 40 外观 硬胶囊的内 容物为白色 粗粉末 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 效价 (万IU/粒) 41.2 41.5 44.7 46.2 43.4 41.8 36.2 40.1 溶出度 - - - - - 合格 合格 合格2 40 外观 硬胶囊的内 容物为白色 粗粉末 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 效价 (万IU/粒) 40.5 41.2 45.4 42.8 42.1 44.9 38.8 40.3 溶出度 - - - - - 合格 合格 合格3 40 外观 硬胶囊的内 容物为白色 粗粉末 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 效价 (万IU/粒) 41.2 40.1 43.5 44.1 41.9 42.5 39.8 40.7 溶出度 - - - - - 合格 合格 合格4 80 外观 硬胶囊的白 色粗粉末 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 效价 (万IU/粒) 90.2 104.0 98.1 96.7 92.7 91.2 89.9 90.15 80 外观 硬胶囊的白 色粗粉末 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 效价 (万IU/粒) 94.0 100.0 95.4 102.0 92.7 88.7 86.2 96.66 80 外观 硬胶囊的内 容物为白色 粗粉末 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 效价 (万IU/粒) 104.0 98.0 92.8 105.0 98.0 86.3 92.4 100.0 7 80 外观 硬胶囊的内 容物为白色 粗粉末 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 未见 变化 效价 (万IU/粒) 94.0 91.5 89.0 91.4 80.7 - 88.0 70.3
本发明所要解决的再一技术问题是公开上述干扰素阴道泡腾胶囊在制备治疗宫颈炎、宫颈糜烂药物中的应用。
本发明干扰素阴道泡腾胶囊经阴道给药，通过阴道粘膜上皮吸收，直接在局部发挥抗病毒作用，进入体内的干扰素一部分经蛋白酶水解，另一部分经尿液原型排出体外，对宫颈炎、宫颈糜烂具有很好的治疗效果。
对本发明泡腾胶囊进行一般药理学试验、急性毒性试验、长期毒性试验和阴道局部刺激试验：
1.一般药理学试验
阴道内给药为临床剂量(6700IU/kg)的5倍(33500IU/kg简称低剂量)和50倍(335000IU/kg简称高剂量)的条件下，(以下试验均用同样剂量)。材料：动物ICR小鼠，体重19-21克，雌雄各半，SD大鼠体重160-175克雌雄各半；猫2.9±0.9kg。
(1)对小鼠自发活动的影响
阴道给药60分钟后，观察10分钟内小鼠自发活动次数。
结果：对照组394±95次/10min；高剂量组406±101次/10min；低剂量组388±115次/10min，给药组无论是高剂量、低剂量与对照组比较，其自发活动次数无统计学差别，P＞0.05。
(2)对苯丙胺中枢兴奋作用的影响
阴道给药60分钟，皮下注射苯丙胺8毫克/kg，15分钟后记录小鼠自发活动次数。
结果：注射苯丙胺后各组小鼠自发活动次数明显增加，与对照组相比有显著生物学意义，P＜0.01，但用苯丙胺的各组，其自发活动无统计学差别，P＞0.05。
(3)对小鼠睡眠时间的影响
阴道给药60分钟后，分别从腹腔注射戊巴比妥钠50mg/kg，以小鼠反射消失和恢复作为睡眠时间的指标。
结果：阴道给药组和注射戊巴比妥钠的小鼠，无论是高剂量组还是低剂量组，小鼠睡眠时间与戊巴比妥钠值相比，均无统计学差别，P＞0.05。
(4)对小鼠士的宁惊厥作用的影响
阴道给药60分钟后，皮下注射士的宁1mg/kg，观察出现惊厥的时间。
结果：阴道给药组并不影响士的宁的惊厥反应时间，无统计学差别，P＞0.05。
(5)对大鼠体温的影响
阴道给药后60分钟、120分钟、240分钟时各测一次肛温。
结果：给药前后各组大鼠肛温均无统计学差别，P＞0.05。
(6)对麻醉猫血压的影响
阴道给药后观察300分钟内的血压、呼吸、心率影响。
结果：与对照组相比均无统计学差别，P＞0.05。
2.家兔急性毒性试验
阴道一次给药达临床剂量的1000倍，观察14天。
结果：置于阴道后未见异常反应，其一般活动、食欲、粪便正常，观察14天未见死亡。
3.大鼠长期毒性试验
阴道给药相当于临床剂量的50倍、25倍和5倍，连续给药90天并观察恢复期30天的大鼠一般症状、血液生化指标和病理学检查。
(1)一般症状观察
外观体重、饲料消耗量与对照组相比无明显差异，P＞0.05。
(2)外周血象白细胞、红细胞、血小板、凝血功能等测定表明，无论是在90天的给药期间还是恢复期的30天，各组检查均在正常范围内，均无统计学差别，P＞0.05。
(3)血液生化指标测定
肝肾功能、血脂、白/球蛋白及电解质测定，测定表明无论是在90天的给药期间还是恢复期的30天，各组检查均在正常范围内，均无统计学差别，P＞0.05。
(4)病理学检查
大体观察：分别给药第45天、90天和停药第30天处死，观察内脏各脏器未见异常变化。各脏器失重和相对系数，各组检查均在正常范围内，均无统计学差别，P＞0.05。
病理检查：检查给药第90天和恢复期第30天各组大鼠主要器官，均未见与给药有关的病理组织学变化。
(5)血中抗干扰素抗体的检测
在40天、90天、120天采血用ELISA法检测干扰素抗体滴度。
结果：在连续阴道给药90天和停药后30天，无论是高剂量、低剂量均未检测出干扰素抗体。
4.家兔阴道局部刺激试验
将阴道泡腾胶囊(80万IU/粒)置入家兔阴道，每日一粒，连续一周，于末次给药后24小时处死家兔，解剖时切开阴道，观察纵切面有无充血、水肿等病理变化。无论是空白胶囊还是含药胶囊对家兔阴道黏膜经一周给药，未见家兔阴道出现明显充血、水肿和分泌物增加。
上述试验结果表明，重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊是一种低毒性、安全的阴道内使用制剂。
临床研究结果也证明，干扰素α-2b阴道泡腾胶囊治疗妇科宫颈糜烂总有效率为66.2％，而对照组(妇炎宁)为43.3％，且其它多项观察指标，如：白带常规、清洁度、阴道pH值、滴虫、念珠菌检查，部分病例作人乳头瘤状病毒(HPV)、人单纯疱疹病毒II型(HSV-II)、人巨细胞病毒(HCMV)等，均明显优于妇炎宁，且无任何刺激和不良反应，更能为患者自行治疗提供方便(见表4)。与奥平组对照试验结果见表5。
表4 重组干扰素α-2b阴道泡腾胶囊临床观察统计分析报告(与妇炎宁组比较)
干扰素 妇炎宁组
项目 有效率 有效率 P值
例数 有效 无效 例数 有效 无效
(％) (％)
月经改善 213 6 207 2.8 60 1 59 1.7 ＞0.05
腰酸改善 112 91 21 81.3 37 17 20 45.9 ＜0.01
外阴瘙痒 84 79 5 94.0 21 17 4 81.0 ＞0.05
接触性出血 51 47 4 92.2 16 13 3 81.3 ＞0.05
白带性状 191 172 19 90.1 52 37 15 71.2 ＜0.01
阴道灼热 41 40 1 97.6 12 9 3 75.0 ＜0.05
阴道PH 213 167 46 78.4 60 29 31 48.3 ＜0.01
白带清洁度 213 183 30 85.9 60 29 31 48.3 ＜0.01
阴道念珠菌 213 6 207 2.8 60 5 55 8.3 ＞0.05
糜烂面积 213 141 72 66.2 60 26 34 43.3 ＜0.01
表5重组干扰素同类产品治疗宫颈糜烂疗效对比(与奥平组) 对比项目奥平组干扰素α-2b组临床表现月经变化未统计4.6％好转外阴瘙痒改善88.9％94.0％消失白带性状改变改善89.7％90.1％改善阴道灼热未统计97.6％消失泌尿系统症状改善1/1 11/11改善治疗中出现全身症状3.2％0％实验室检查阴道PH值未测78.4％达正常白带清洁度未测85.9％达正常HPV转阴100％转阴100％HSV-II转阴100％转阴100％CMV转阴92.6％转阴100％宫颈糜烂面积治疗后总有效率62.6％66.2％
本发明干扰素阴道泡腾胶囊，不仅能够在阴道给药时有非常快速的崩解、溶扩散的性质，和很好的储存稳定性；而且在本发明的干扰素胶囊剂制造工艺过程中，对于干扰素蛋白活性成分造成损害或损失达到最低限度，还能有效控制胶囊剂中主药含量的均匀度；是一种质量可靠，疗效确切，使用方便的新型干扰素阴道给药制剂。
【具体实施方式】
实施例1
1.处方：
干扰素α-2b 10.5×109IU
葡萄糖 1100g
山梨醇 450g
苹果酸 420g
碳酸氢钠 150g
碳酸钠 180g
预胶化淀粉 350g
交联聚维酮 60g
0.5％羟丙基甲基纤维素醇水溶液 50g
10％聚乙烯吡硌烷酮醇水溶液 180g
制成 10000粒胶囊
2.制备工艺
将干扰素原液倒入200毫升磷酸盐缓冲液(0.2mol/L pH7.2)中，混合均匀，加入处方中的山梨醇辅料搅拌混合，在温度20度下真空干燥24小时以上，取出后与处方中的葡萄糖逐渐等量递增混合，制成含干扰素主药的颗粒部分。
按处方称取苹果酸、碳酸氢钠和碳酸钠的用量，放入沸腾制粒机中，通风沸腾物料，进风温度设定为60度，10分钟后，按处方中的0.5％羟丙基甲基纤维素乙醇溶液和10％聚乙烯吡硌烷酮乙醇溶液的混合溶液，喷雾造粒，直至制得含泡腾成分的均匀颗粒。
按照处方，称取经烘箱70度干燥4小时以上的预胶化淀粉和交联聚维酮，与上述的两种颗粒均匀混合。
将最终混合颗粒装入胶囊，测干扰素α-2b效价：9.02×105IU/粒，水份：1.13％。
实施例2
1.处方：
干扰素α-2b 10.5×109IU
甘露醇 1900g
柠檬酸 380g
碳酸氢钠 230g
碳酸钠 110g
羧甲基淀粉钠 240g
交联聚维酮 30g
12％聚乙烯吡硌烷酮乙醇溶液 280g
制成 10000粒胶囊
2.制备工艺
将干扰素原液与300毫升柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(0.1mol/LpH6.6)中，再加入甘露醇混合，按例1方法处理，温度保持在零下5度时真空干燥，制成含干扰素主药的粉末颗粒部分。
按处方称取柠檬酸、碳酸氢钠和碳酸钠的用量，放入快速搅拌制粒机，混合5分钟，一边搅拌，一边加入聚乙烯吡硌烷酮乙醇溶液，完成后，继续搅拌5～7分钟，直至形成均匀颗粒。放入气流烘箱，65度干燥3～5小时。
按照处方，称取经烘箱70度干燥过的羧甲基淀粉钠和交联聚维酮，与上述的两种颗粒均匀混合。
将最终混合颗粒装入胶囊，测干扰素α-2b效价：8.01×105IU/粒，水份：1.48％。
实施例3
干扰素α-2b 5×109IU
乳糖 2150g
酒石酸 290g
碳酸钙 200g
碳酸钠 60g
羧甲基淀粉钠 270g
8％聚乙烯吡硌烷酮乙醇溶液 320g
制成 10000粒胶囊
2.制备工艺
干扰素原料液粉末化工艺中，缓冲液采用乙酸-乙酸钠(0.2mol/LpH7.4)，处理温度控制在零下20度，其余工艺步骤同实施例1。测干扰素α-2b效价：4.12×105IU/粒，水份：1.12％。
实施例4
干扰素α-2b 5×109IU
山梨醇 2050g
硼酸 280g
碳酸氢钠 120g
碳酸钠 100g
淀粉 365g
10％聚乙烯吡硌烷酮乙醇溶液 340g
制成 10000粒胶囊
2.制备工艺
干扰素原料液用硼酸缓冲液(0.1mol/L pH6.2)稀释，粉末化工艺中将处理温度控制在零下10度，其余工艺步骤同实施例2。测干扰素α-2b效价：4.05×105IU/粒，水份：1.13％。