水华蓝藻在多花紫树组培中的资源化利用方法.pdf

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种水华蓝藻在多花紫树组培中的资源化利用方法。该方法包括如下步骤，(1)初代诱导培养：初代诱导培养基为1/2WPM+6-BA0.3～0.8mg/L+IBA0.02～0.05mg/L+3～5％水华蓝藻藻粉+白糖20g/L；(2)继代增殖培养：继代增殖培养基为3/4WPM+6-BA0.8～1.2mg/L+IBA0.05～0.1mg/L+3～5％水华蓝藻藻粉+白糖20g/L；(3)组培苗生根：生根培养基为2/5WPM+NAA0.1～0.3mg/L+IAA0.1～0.3mg/L+1～2％水华蓝藻藻粉+白糖15g/L；(4)试管苗的驯化和移栽。本发明建立了一个低廉高效的多花紫树组培快繁体系，可缩短周期时长10％，节约成本25％，为水华蓝藻的资源化利用提供了一种高附加值的处置新方法。

权利要求书1.  一种水华蓝藻在多花紫树组培中的资源化利用方法，其特征在于：包括如下步骤，(1)初代诱导培养水华蓝藻藻粉经过高压灭菌后作为初代诱导培养基的成份；初代诱导培养基为：1/2WPM+6-BA 0.3～0.8mg/L+IBA 0.02～0.05mg/L+3～5％水华蓝藻藻粉+白糖20g/L+琼脂5～8g/L，pH5.8；从健壮多花紫树植株上获取外植体，外植体经常规消毒后接种于初代诱导培养基上；培养温度为25±2℃，光照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h；(2)继代增殖培养水华蓝藻藻粉经过高压灭菌后作为继代增殖培养基的成份；继代增殖培养基为：3/4WPM+6-BA 0.8～1.2mg/L+IBA 0.05～0.1mg/L+3～5％水华蓝藻藻粉+白糖20g/L+琼脂5～8g/L，pH5.8；将初代诱导培养得到的多花紫树无菌苗的茎段或茎尖无菌接种于继代增殖培养基上进行培养，培养温度为25±2℃，光照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h；(3)组培苗生根水华蓝藻藻粉经过高压灭菌后作为生根培养基的成份；生根培养基为：2/5WPM+NAA 0.1～0.3mg/L+IAA 0.1～0.3mg/L+1～2％水华蓝藻藻粉+白糖15g/L+琼脂5～8g/L，pH5.8；将增殖培养获得的多花紫树无菌丛生芽切成单株接种于生根培养基上，培养温度为25±2℃，光 照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h；(4)试管苗的驯化和移栽将多花紫树生根试管苗从培养室移至塑料大棚放置4～7d后，去瓶盖炼苗3～4d，然后从瓶内取出多花紫树幼苗，将幼苗移栽入穴盘的栽培基质中，覆膜保湿5～7d，其间每天通风透气，视光照强度适当加盖遮阳网，一周后完全揭除塑料薄膜小拱棚，喷施1000倍液的甲基托布津，此后进行正常的栽培管理。2.  如权利要求1所述的水华蓝藻在多花紫树组培中的资源化利用方法，其特征在于：所述步骤(1)中的外植体为多花紫树带腋芽半木质化茎段。3.  如权利要求1所述的水华蓝藻在多花紫树组培中的资源化利用方法，其特征在于：所述步骤(4)中多花紫树生根试管苗从瓶内取出后，先用0.1％多菌灵对其根部处理10s，再将幼苗移栽入穴盘的栽培基质中。4.  如权利要求1所述的水华蓝藻在多花紫树组培中的资源化利用方法，其特征在于：所述步骤(4)中通风透气的频率为每天两次，每次10～15min。

说明书水华蓝藻在多花紫树组培中的资源化利用方法
技术领域
本发明涉及一种植物组织培养方法，具体涉及一种水华蓝藻在多花紫树组培中的资源化利用方法，属于生物技术领域。
背景技术
多花紫树(Nyssa sylvatica)为珙桐科蓝果树属落叶乔木，高达30米，树冠阔圆卵形，枝干水平伸展，入秋叶片转为猩红色，极其美丽。本种原产北美，阳性树种，喜光、耐水湿、耐寒、适应性强、速生、抗污染、抗风，宜作行道树、庭荫树、景观树和防风林树种等，若与银杏、枫香、七叶树等配植，可形成色彩斑斓的秋景。通过多花紫树组织培养，不仅可以克服现有繁殖技术如种子繁殖所存在的缺陷，扩大其繁殖系数，实现规模化繁殖，而且可以在保存其原有优良性状的基础上，实现多花紫树种苗的快速繁殖和壮苗生产。
植物组培工厂化育苗中，如何减少培养基费用尤其植物生长调节物质费用通常是降低植物组培苗成本的关键，如果能通过培养基改造，既降低培养基成本，又能促进试管苗的增殖和生长，则可以显著提高工厂化育苗的经济效益。
随着人口的增长和工农业生产的发展，大量工农业废水和生活污水排入水体，使水体富营养化程度加剧，其结果导致湖泊、河流、池塘中浮游藻类尤其是蓝藻大量繁殖生长而出现水华。当水华出现时， 水面被厚厚的蓝绿色湖靛所覆盖。在藻体大量死亡分解的过程中，不但散发恶臭、破坏景观，同时藻细胞破裂后释放出的多种藻毒素对人和动物的饮用水安全构成严重威胁。蓝藻可高效吸收和消纳水体中大量的氮、磷和有机污染物，直接将其打捞移出水面是去除水体氮磷等营养元素、降低水体富营养化程度和保护水体生态环境最直接、最安全、最有效的应急和治理方法，但是如果打捞后的蓝藻得不到及时有效的处置，随意堆放，不仅会因为蓝藻腐烂发臭产生二次污染，还可能由于腐烂的蓝藻通过径流使养分再次进入水体。通过对蓝藻资源利用的可行性研究，试图寻找出一种有效的蓝藻利用途径，不仅可以减少捞藻的二次污染，还可以使其变废为宝，化害为利。
据报道日本对蓝藻资源化利用的措施主要是将藻类作为有机肥料，它的肥效优于一般化肥，氮、磷、钾含量均高于豆饼、紫云英等植物性有机肥料，且蓝藻中不含对作物及人体有害的重金属，使用后不会污染土壤。本申请从水华蓝藻含有藻蓝蛋白、细胞多糖和色素等丰富营养成分出发，通过高压灭菌提高了营养物质的利用率，减少了蓝藻毒素的危害，从而提高了多花紫树的组培快繁效益。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种水华蓝藻在多花紫树组培中的资源化利用方法，以建立一个低廉高效的多花紫树组培快繁体系。
本发明解决所述技术问题的方案是：一种水华蓝藻在多花紫树组培中的资源化利用方法，包括如下步骤，
(1)初代诱导培养
水华蓝藻藻粉经过高压灭菌后作为初代诱导培养基的成份；初代诱导培养基为：1/2WPM+6-BA 0.3～0.8mg/L+IBA 0.02～0.05mg/L+3～5％水华蓝藻藻粉+白糖20g/L+琼脂5～8g/L，pH5.8；从健壮多花紫树植株上获取外植体，外植体经常规消毒后接种于初代诱导培养基上；培养温度为25±2℃，光照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h；
(2)继代增殖培养
水华蓝藻藻粉经过高压灭菌后作为继代增殖培养基的成份；继代增殖培养基为：3/4WPM+6-BA 0.8～1.2mg/L+IBA 0.05～0.1mg/L+3～5％水华蓝藻藻粉+白糖20g/L+琼脂5～8g/L，pH5.8；将初代诱导培养得到的多花紫树无菌苗的茎段或茎尖无菌接种于继代增殖培养基上进行培养，培养温度为25±2℃，光照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h；
(3)组培苗生根
水华蓝藻藻粉经过高压灭菌后作为生根培养基的成份；生根培养基为：2/5WPM+NAA 0.1～0.3mg/L+IAA 0.1～0.3mg/L+1～2％水华蓝藻藻粉+白糖15g/L+琼脂5～8g/L，pH5.8；将增殖培养获得的多花紫树无菌丛生芽切成单株接种于生根培养基上，培养温度为25±2℃，光照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h。
(4)试管苗的驯化和移栽
将多花紫树生根试管苗从培养室移至塑料大棚放置4～7d后，去 瓶盖炼苗3～4d，然后从瓶内取出多花紫树幼苗，将幼苗移栽入穴盘的栽培基质中，覆膜保湿5～7d，其间每天通风透气，视光照强度适当加盖遮阳网，一周后完全揭除塑料薄膜小拱棚，喷施1000倍液的甲基托布津，此后进行正常的栽培管理。
3～5％水华蓝藻藻粉指在每升培养基中添加30～50g水华蓝藻藻粉；1～2％水华蓝藻藻粉指在每升培养基中添加10～20g水华蓝藻藻粉。水华蓝藻采集自昆明滇池，用25号浮游生物网收获滇池水华蓝藻,晒干获得水华蓝藻藻粉。
所述步骤(1)中的外植体为多花紫树带腋芽半木质化茎段。
所述步骤(4)中多花紫树生根试管苗从瓶内取出后，先用0.1％多菌灵对其根部处理10s，再将幼苗移栽入穴盘的栽培基质中。
所述步骤(4)中通风透气的频率为每天两次，每次10～15min。
本发明建立了一个低廉高效的多花紫树组培快繁体系，可缩短周期时长10％，节约成本25％，为水华蓝藻的资源化利用提供了一种高附加值的处置新方法。
具体实施方式
实施例1
一种水华蓝藻在多花紫树组培中的资源化利用方法，包括如下步骤，
1.初代诱导培养
水华蓝藻藻粉经过高压灭菌后作为初代诱导培养基的成份；初代 诱导培养基为：1/2WPM+6-BA 0.3～0.8mg/L+IBA 0.02～0.05mg/L+3～5％水华蓝藻藻粉+白糖20g/L+琼脂5～8g/L，pH5.8；从健壮多花紫树植株上获取多花紫树带腋芽半木质化茎段外植体，外植体经常规消毒后接种于初代诱导培养基上；培养温度为25±2℃，光照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h；
2.继代增殖培养
水华蓝藻藻粉经过高压灭菌后作为继代增殖培养基的成份；继代增殖培养基为：3/4WPM+6-BA 0.8～1.2mg/L+IBA 0.05～0.1mg/L+3～5％水华蓝藻藻粉+白糖20g/L+琼脂5～8g/L，pH5.8；将初代诱导培养得到的多花紫树无菌苗的茎段或茎尖无菌接种于继代增殖培养基上进行培养，培养温度为25±2℃，光照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h；
3.组培苗生根
水华蓝藻藻粉经过高压灭菌后作为生根培养基的成份；生根培养基为：2/5WPM+NAA 0.1～0.3mg/L+IAA 0.1～0.3mg/L+1～2％水华蓝藻藻粉+白糖15g/L+琼脂5～8g/L，pH5.8；将增殖培养获得的多花紫树无菌丛生芽切成单株接种于生根培养基上，培养温度为25±2℃，光照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h；
4.试管苗的驯化和移栽
将多花紫树生根试管苗从培养室移至塑料大棚放置4～7d后，去瓶盖炼苗3～4d，然后从瓶内取出多花紫树幼苗，用水轻轻洗净培养基，将待栽的多花紫树幼苗根部用0.1％多菌灵处理10s后，将幼苗 移栽入穴盘的栽培基质中，覆膜保湿5～7d，其间每天通风透气10～15min两次，视光照强度适当加盖遮阳网，一周后完全揭除塑料薄膜小拱棚，喷施1000倍液的甲基托布津，此后进行正常的栽培管理。
本发明建立了一个低廉高效的多花紫树组培快繁体系，可缩短周期时长10％，节约成本25％。