一种红茴香冻干粉针剂及其制备方法 【技术领域】
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种红茴香冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术
腰肌劳损是一种自觉症重而又无器质性改变的慢性腰痛的总称，例如，长时间的体力劳动或单一弯腰干活的姿势，日复一日的重复，较易发生腰肌劳损。另外，腰部受风寒，潮湿侵袭所引起慢性腰背部僵硬、疼痛也属腰肌劳损，日常生活中腰部扭伤、闪腰，由于未能及时治愈，遗留下来的慢性腰痛以及慢性风湿病引起的肌筋膜炎，肌筋膜炎亦归属于腰肌劳损的范围内。总之，腰肌劳损包括许多原因引起的慢性腰背痛，而没有阳性体征，X线腰椎片也无异常发现，但是病人情绪低沉，性情急躁，治疗见效小或无效，腰腿酸困无力，办事效率低以至于缺乏热心，信心等现象。本病治疗，基本原则是在医生的指导下科学地加强背肌、四肢肌的锻炼，提高多方位的肌群运动的力度，增强其代偿性，减轻其病损区域肌组织的负荷，便于损伤后的修复。生活上坚持睡硬板床，睡觉时腰下垫一薄枕，原发腰部酸困空虚疲劳感可缓解或消失，次日起床腰部亦有明显的解乏感。关于本病的治疗，无论是理疗、体疗，还是推拿按摩或针炙均需要四个字，“坚持”和“信心”方能彻底治愈腰肌劳损。但这些物理疗法需要患者大量的时间和巨大的毅力，患者往往在病症稍微好转的情况下，不在继续坚持，从而导致病症继续恶化，给患者精神和肉体带来很大的痛苦，而医药治疗往往用一些芬必得、扶他灵、消炎痛等药，这些药只能短时间内缓解症状，但长时间应用该类药品有很大的副作用，因此，医生和患者急需一种治疗该类病症并有镇痛作用地中药用于临床，红茴香注射液在临床上解决了这方面的问题，但红茴香有毒，在临床应用时，医生都非常小心，害怕给患者带来新的痛苦，并且注射液这种剂型，不利于运输和储存。
红茴香，来源于木兰科植物红茴香IlliciumhenryiDelis，味苦，性温有毒，临床上药用其根皮，具有祛风通络、散瘀止痛之功效，是民间治疗风湿痹痛、跌打损伤的良药，红茴香的种籽、果皮、根皮中含有哈那诺明，这是作用于神经系统的毒素，其毒性很强，可以引起严重的中毒，直至危及生命；红茴香注射液是采用乙醇浸渍7-10天，进行提取分离，该提取方法耗时过长，给生产过程带来很大的弊端。并且该制备方法没有对哈那诺明进行含量限定。
查阅专利文献，未发现红茴香注射制剂的专利。
【发明内容】
基于上述原因，本发明采用挥发油提取、2-羟丙基β-环糊精包合、乙醇超声提取、聚酰胺柱纯化的方法，得到红茴香有效部位，控制有毒成分哈那诺明不高于1PPM，与药用辅料混合，制备成冻干粉针剂，本发明工艺大大缩短了时间，在工业化生产过程中可以节省很多时间，更适合生产过程，药理实验表明，本发明冻干粉针剂，具有很好的安全性，与市售同类品种比较，具有更好的药理作用。
本发明通过以下技术方案实现的。
一.工艺制法
(1)取红茴香，粉碎，用挥发油提取器提取挥发油，得到的挥发油，残渣备用，按照挥发油：2-羟丙基β-环糊精体积重量比为1∶20-40的比例，将2-羟丙基β-环糊精用蒸馏水制成饱和溶液，放入30℃-40℃的水浴中，严格控制好温度，等到2-羟丙基β-环糊精饱和水溶液达到水浴温度，进行搅拌，缓慢滴加挥发油，继续搅拌12-24小时，在冰箱放置12-24小时，30℃-40℃干燥，得到挥发油包合物；
(2)取上述残渣，放入超声提取罐中，加入4-8倍、65％-85％的乙醇，进行超声提取，控制温度室温，控制超声频率为30-90KHZ，提取时间45-75分钟，提取2-4次，合并提取液，滤过，回收乙醇至尽，静置过夜，浓缩液上聚酰胺柱，用6-10倍柱体积的水洗，再用6-8倍、70％-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，浓缩干燥，与上述挥发油包合物混合，得到红茴香有效部位；(控制有效部位中哈那诺明含量不高于0.0001％)
(3)本发明制剂处方为：
红茴香挥发油包合物9-15重量份，提取挥发油后残渣的醇提物6-10重量份，药用辅料75-85重量份；
(4)将红茴香有效部位加注射用水，加入药用辅料溶解完全，用葡甲胺调PH值，灭菌，灌装，冷冻干燥，得到红茴香冻干粉针剂。
药用辅料中冻干赋形剂为甘露醇、蔗糖、乳糖中的一种或几种。
二.检测分析
1.红茴香制剂总黄酮(以芦丁计)含量测定
实验药物：红茴香注射液(浙江泰康制药有限公司，1ml)
红茴香冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供，用注
射用水溶解成1ml溶液)
其他实验试剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)
实验方法：根据部颁标准第二十分册“红茴香注射液”[含量测定]的方法进行检测
分析。
实验结果：见表1
表1不同制剂含量分析
容量 总黄酮(以芦丁计)
组别
(ml) (mg/瓶)
红茴香注射液 1 4.96
红茴香冻干粉针剂 1 6.39
2.红茴香制剂中哈那诺明检测分析
高效液相色谱法进行检测分析
实验药物：哈那诺明标准品(沈阳药科大学中成药分析教研室提供)
红茴香注射液(浙江泰康制药有限公司，1ml)
红茴香冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供，用注
射用水溶解成1ml溶液)
其他实验试剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)
实验方法：
对照品溶液制备：精密称定干燥恒重的哈那诺明标准品5mg，置25ml容量瓶中，
用蒸馏水∶甲醇＝9∶1溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml容量瓶，加上述蒸馏水、甲醇溶液至刻度，摇匀，得对照品溶液。
标准曲线的制备：精密称取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0与5.0ul，上高效液相仪，进行测定，得到结果进行绘制标准曲线。
制剂含量测定：分别精密量取两种红茴香注射制剂1ml，置25ml容量瓶中，加蒸馏水∶甲醇＝9∶1稀释至刻度，分别取5ul，进样，得到结果，按照标准曲线进行计算，换算含量百分比。
实验结果：见表2。
表2 不同红茴香注射制剂中哈那诺明含量比较
哈那诺明
组别
PPM
红茴香注射液 1.4
红茴香冻干粉针剂 0.6
结论：通过以上检测分析实验，我们可以得到本发明冻干粉针剂有效成分含量有很大提高，有毒成分含量大大降低，充分说明本发明工艺具有实际意义。
三.药理实施例
实施例1
急性毒性实验
实验药物：红茴香注射液(浙江泰康制药有限公司，1ml)
红茴香冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供，用注
射用水溶解成1ml溶液)
其他实验试剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)
实验动物：健康小鼠18-22g，雌雄各半，共40只。
实验方法：将两种制剂，小鼠尾静脉给药，按照人给药剂量的50倍，按照体表面
积换算成小鼠给药剂量0.13ml(为了方便注射，将两种制剂进行稀释，
使0.13ml稀释成0.20ml，因此给药量0.20ml)，每天给药1次，连续
7天，观察小鼠死亡情况，记录数据，见表3：
表3 小鼠用药、死亡情况
动物数 死亡数 死亡率
组别
(只) (只) (％)
红茴香注射液 20 8 40
红茴香冻干粉针剂 20 1 5
注：对死亡小鼠进行解剖，发现红茴香冻干粉针剂组死亡小鼠内脏器官没有任何变化，分析原因可能属于意外死亡，而红茴香注射液小鼠进行解剖，发现中枢神经系统均遭到破坏，而使小鼠死亡，因此说明红茴香注射液没有控制有毒成分哈那诺明，因此导致小鼠死亡。
实施例2
对醋酸致痛的镇痛作用
实验动物：昆明种小鼠(20±2)g，雌雄兼用。
实验药物：红茴香注射液(浙江泰康制药有限公司，1ml)
红茴香冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供，用注
射用水溶解成1ml溶液)
其他实验试剂(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)
实验方法：小鼠30只，分为3组，每组10只，将本发明冻干粉针剂用注射用水
溶解与红茴香注射液相同密度的溶液，按照0.5g生药/kg给药剂量给小鼠
尾静脉给药，每天1次，给药3天，生理盐水组给药容量0.2ml/只，每天
1次，给药3天，于末次给药后1h，ip1％醋酸致痛，观察记录20min内各组
小鼠出现扭体动物数及扭体反应次数，与对照组比较，作显著性测定。结果
见表4：
表4小鼠扭体次数比较
组别 扭体动物 扭体次数 抑制率
(％)) (％)
生理盐水 100 50.1±9.6 -
红茴香注射液 100 31.6±4.7** 36.9
本发明红茴香冻干粉针剂 100 19.6±3.1**[*] 60.9[*]
注：与生理盐水组比较**P＜0.01，与阳性对照组比较[*]P＜0.05
结论：通过以上药理实验充分说明，本发明红茴香冻干粉针剂具有很好的安全性，与市售同类品种比较具有更好的药理作用。
四.制备实施例
实施例1
(1)本发明原料药为：
红茴香50克
(2)取红茴香，粉碎，用挥发油提取器提取挥发油，得到的挥发油，残渣备用，按照挥发油：2-羟丙基β-环糊精体积重量比为1∶20的比例，将2-羟丙基β-环糊精用蒸馏水制成饱和溶液，放入30℃的水浴中，严格控制好温度，等到2-羟丙基β-环糊精饱和水溶液达到水浴温度，进行搅拌，缓慢滴加挥发油，继续搅拌12小时，在冰箱放置12小时，30℃干燥，得到挥发油包合物9克；
(3)取上述残渣，放入超声提取罐中，加入4倍、65％的乙醇，进行超声提取，控制温度室温，控制超声频率为30KHZ，提取时间45分钟，提取2次，合并提取液，滤过，回收乙醇至尽，静置过夜，浓缩液上聚酰胺柱，用6倍柱体积的水洗，再用6倍、70％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，浓缩干燥，得到醇提物6克与上述挥发油包合物混合，得到红茴香有效部位15克；(控制有效部位中哈那诺明含量不高于0.9PPM)
(4)本发明制剂处方为：
红茴香挥发油包合物9克 提取挥发油后残渣的醇提物6克
药用辅料蔗糖85克；
(5)将红茴香有效部位加注射用水，加入药用辅料溶解完全，用葡甲胺调PH值，灭菌，灌装，冷冻干燥，得到红茴香冻干粉针剂1000瓶。
实施例2
(1)本发明原料药为：
红茴香50克
(2)取红茴香，粉碎，用挥发油提取器提取挥发油，得到的挥发油，残渣备用，按照挥发油：2-羟丙基β-环糊精体积重量比为1∶40的比例，将2-羟丙基β-环糊精用蒸馏水制成饱和溶液，放入40℃的水浴中，严格控制好温度，等到2-羟丙基β-环糊精饱和水溶液达到水浴温度，进行搅拌，缓慢滴加挥发油，继续搅拌24小时，在冰箱放置24小时，40℃干燥，得到挥发油包合物15克；
(3)取上述残渣，放入超声提取罐中，加入8倍、85％的乙醇，进行超声提取，控制温度室温，控制超声频率为90KHZ，提取时间75分钟，提取4次，合并提取液，滤过，回收乙醇至尽，静置过夜，浓缩液上聚酰胺柱，用10倍柱体积的水洗，再用8倍、90％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，浓缩干燥，得到醇提物10克与上述挥发油包合物混合，得到红茴香有效部位25克；(控制有效部位中哈那诺明含量不高于0.7PPM)
(4)本发明制剂处方为：
红茴香挥发油包合物15克 提取挥发油后残渣的醇提物10克
药用辅料乳糖75克；
(5)将红茴香有效部位加注射用水，加入药用辅料溶解完全，用葡甲胺调PH值，灭菌，灌装，冷冻干燥，得到红茴香冻干粉针剂1000瓶。
实施例3
(1)本发明原料药为：
红茴香50克
(2)取红茴香，粉碎，用挥发油提取器提取挥发油，得到的挥发油，残渣备用，按照挥发油：2-羟丙基β-环糊精体积重量比为1∶25的比例，将2-羟丙基β-环糊精用蒸馏水制成饱和溶液，放入35℃的水浴中，严格控制好温度，等到2-羟丙基β-环糊精饱和水溶液达到水浴温度，进行搅拌，缓慢滴加挥发油，继续搅拌16小时，在冰箱放置14小时，35℃干燥，得到挥发油包合物11.26克；
(3)取上述残渣，放入超声提取罐中，加入6倍、70％的乙醇，进行超声提取，控制温度室温，控制超声频率为40KHZ，提取时间50分钟，提取3次，合并提取液，滤过，回收乙醇至尽，静置过夜，浓缩液上聚酰胺柱，用8倍柱体积的水洗，再用7倍、75％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，浓缩干燥，得到醇提物9.25克与上述挥发油包合物混合，得到红茴香有效部位20.51克；(控制有效部位中哈那诺明含量不高于0.6PPM)
(4)本发明制剂处方为：
红茴香挥发油包合物11.26克 提取挥发油后残渣的醇提物9.25克；
药用辅料甘露醇79.49克；
(5)将红茴香有效部位加注射用水，加入药用辅料溶解完全，用葡甲胺调PH值，灭菌，灌装，冷冻干燥，得到红茴香冻干粉针剂1000瓶。
实施例4
(1)本发明原料药为：
红茴香50克
(2)取红茴香，粉碎，用挥发油提取器提取挥发油，得到的挥发油，残渣备用，按照挥发油：2-羟丙基β-环糊精体积重量比为1∶30的比例，将2-羟丙基β-环糊精用蒸馏水制成饱和溶液，放入35℃的水浴中，严格控制好温度，等到2-羟丙基β-环糊精饱和水溶液达到水浴温度，进行搅拌，缓慢滴加挥发油，继续搅拌18小时，在冰箱放置20小时，32℃干燥，得到挥发油包合物12.36克；
(3)取上述残渣，放入超声提取罐中，加入7倍、70％的乙醇，进行超声提取，控制温度室温，控制超声频率为60KHZ，提取时间65分钟，提取3次，合并提取液，滤过，回收乙醇至尽，静置过夜，浓缩液上聚酰胺柱，用9倍柱体积的水洗，再用8倍、85％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，浓缩干燥，得到醇提物6.33克与上述挥发油包合物混合，得到红茴香有效部位18.68克；(控制有效部位中哈那诺明含量不高于0.7PPM)
(4)本发明制剂处方为：
红茴香挥发油包合物12.36克 提取挥发油后残渣的醇提物6.33克
药用辅料81.32克；
(5)将红茴香有效部位加注射用水，加入药用辅料溶解完全，用葡甲胺调PH值，灭菌，灌装，冷冻干燥，得到红茴香冻干粉针剂1000瓶。
实施例5
(1)本发明原料药为：
红茴香100克
(2)取红茴香，粉碎，用挥发油提取器提取挥发油，得到的挥发油，残渣备用，按照挥发油：2-羟丙基β-环糊精体积重量比为1∶35的比例，将2-羟丙基β-环糊精用蒸馏水制成饱和溶液，放入36℃的水浴中，严格控制好温度，等到2-羟丙基β-环糊精饱和水溶液达到水浴温度，进行搅拌，缓慢滴加挥发油，继续搅拌23小时，在冰箱放置22小时，38℃干燥，得到挥发油包合物26.58克；
(3)取上述残渣，放入超声提取罐中，加入5倍、80％的乙醇，进行超声提取，控制温度室温，控制超声频率为85KHZ，提取时间70分钟，提取2次，合并提取液，滤过，回收乙醇至尽，静置过夜，浓缩液上聚酰胺柱，用9倍柱体积的水洗，再用6倍、85％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，浓缩干燥，得到醇提物17.68克与上述挥发油包合物混合，得到红茴香有效部位44.26克；(控制有效部位中哈那诺明含量0.8PPM)
(4)本发明制剂处方为：
红茴香挥发油包合物26.58克 提取挥发油后残渣的醇提物17.68克
药用辅料甘露醇、蔗糖155.74克；
(5)将红茴香有效部位加注射用水，加入药用辅料溶解完全，用葡甲胺调PH值，灭菌，灌装，冷冻干燥，得到红茴香冻干粉针剂2000瓶。
实施例6
(1)本发明原料药为：
红茴香500克
(2)取红茴香，粉碎，用挥发油提取器提取挥发油，得到的挥发油，残渣备用，按照挥发油：2-羟丙基β-环糊精体积重量比为1∶30的比例，将2-羟丙基β-环糊精用蒸馏水制成饱和溶液，放入30℃的水浴中，严格控制好温度，等到2-羟丙基β-环糊精饱和水溶液达到水浴温度，进行搅拌，缓慢滴加挥发油，继续搅拌24小时，在冰箱放置20小时，40℃干燥，得到挥发油包合物141克；
(3)取上述残渣，放入超声提取罐中，加入8倍、75％的乙醇，进行超声提取，控制温度室温，控制超声频率为75KHZ，提取时间55分钟，提取4次，合并提取液，滤过，回收乙醇至尽，静置过夜，浓缩液上聚酰胺柱，用8倍柱体积的水洗，再用6倍、90％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇至尽，浓缩干燥，得到醇提物95克与上述挥发油包合物混合，得到红茴香有效部位236克；(控制有效部位中哈那诺明含量0.7PPM)
(4)本发明制剂处方为：
红茴香挥发油包合物141克，提取挥发油后残渣的醇提物95克
药用辅料甘露醇、蔗糖、乳糖764克；
(5)将红茴香有效部位加注射用水，加入药用辅料溶解完全，用葡甲胺调PH值，灭菌，灌装，冷冻干燥，得到红茴香冻干粉针剂10000瓶。