一种治疗顽固性仔猪下痢的药物及其制备方法 (一)、所属技术领域
本发明涉及一种中药及其制备方法，特别是一种治疗顽固性仔猪下痢病的中药及其制备方法。
(二)、技术背景
仔猪下痢为常见多发病之一，其病原主要是由大肠杆菌所引起仔猪及其它动物的腹泻。临床特点是排灰白色、黄绿色或灰褐色稀浆糊粪便，大肠杆菌分布极广，通常不呈现致病作用，当抵抗力降低时，可引起仔猪发病。西兽医治疗以抗生素、化学合成制剂等药物。由于抗生素、化学药物等的残留毒和耐药菌株的出现，给人畜健康及养猪业的发展带来许多不良影响。目前治疗仔猪下痢的传统中药制剂如黄连素、穿心莲、板兰根、鱼腥草、金银花、马齿苋等注射液，这些药物只是对仔猪下痢进行缓解或治疗，仍然无法解决顽固性仔猪下痢的治愈问题。
(三)、发明内容
因此，广大的养猪户或大型的养猪场对疗效更好的治疗顽固性仔猪下痢病的中药制剂仍存在需求。至今为止，还没有发现任何有关本发明药物的报道，尚属首创。本发明人经过反复研究，并通过动物和临床试验的反复验证，终于找到了有更好疗效的治疗顽固性仔猪下痢地中药注射药物，从而完成了本发明。
本发明目的就是提供一种速效、高效、长效、治疗顽固性仔猪下痢的一种中药注射药物。
本发明的另外一个目的是提供上述中药的注射剂、片剂、口服液的制备方法。
本发明治疗顽固性仔猪下痢病的药物，目的是通过这样的技术方案实现的，它是由下列重量份的组分：硼砂1～3份，并配以辅助剂5％盐酸10份、奴佛卡因0.025份制成的注射剂或者辅以5％盐酸10份、黄连素0.005份、奴佛卡因0.025份制成的注射剂，或者辅以鞣酸1.5份、淀粉0.5份制成的片剂，或者辅以人工盐0.09份、5％盐酸10份制成的口服液。
本发明是以硼砂为主要原料，配以上述的辅助剂，可以制成注射剂，也可以制成片剂，还可以制成口服液。选择硼砂(含Na2B4O7·10H2O)一味中药，能够有效治疗顽固性仔猪下痢。取其硼砂甘咸凉、有小毒，清热、解毒之力，以治顽固性仔猪下痢之病，时有出奇制胜的效果。据《中药大辞典》记载“10％硼砂用平板法对大肠杆菌、绿脓杆菌、炭疽杆菌、弗氏痢疾杆菌、志贺氏痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、变形杆菌及葡萄球菌、白色念珠球菌均有抑制作用；用纸片法证明硼砂还能抑制白喉杆菌、牛型布氏杆菌、肺炎双球菌、脑膜炎球菌及溶血性链球菌等，故能有效治疗顽固性仔猪下痢病。
作为注射剂，可以优选为：本发明的药物是由硼砂2份、5％盐酸10份、奴佛卡因0.025份制成的注射剂。
作为注射剂，还可以优选为：本发明的药物是由硼砂2粉、5％盐酸10份、黄连素0.005份、奴佛卡因0.025份制成的注射剂。
作为片剂，优选为：它可以是由硼砂2份、鞣酸1.5份、淀粉0.5份制成的片剂。
作为口服液，优选为：它可以是由硼砂2份、人工盐0.09份、5％盐酸10份制成的口服液。
将本发明的药物制成注射剂的制备方法的步骤是：
(1)按上述的份量比准确称取或量取硼砂、5％盐酸、黄连素、奴佛卡因，备用；
(2)将硼砂置于玻璃容器中，加入5％盐酸，搅拌溶解，备用；
(3)将奴佛卡因加入到上述步骤(2)中制备好的盐酸硼砂溶液中，搅拌溶解，PH值为6；然后过滤，灌封，灭菌消毒，即成所需要的针剂。
(4)在上述步骤(3)中制备好的盐酸硼砂奴佛卡因溶液基础上，再将黄连素加入，搅拌溶解，PH值为6；然后过滤，灌封，灭菌消毒，即成另一种所需要的针剂。
将本发明的药物制成片剂的制备方法的步骤是：
(1)按上述的重量份准确称取硼砂、鞣酸、淀粉，各研为极细粉，备用。
(2)将上述的硼砂、鞣酸、1/4淀粉，混匀、制粒、干燥，然后加入剩余3/4淀粉，混匀，压片、烘干，装瓶，即成所需要的片剂。
将本发明的药物制成口服液的制备方法的步骤是：
(1)按上述的重量份准确称取或量取硼砂、人工盐、5％盐酸，备用。
(2)将硼砂置于玻璃容器中，加入5％盐酸，搅拌溶解，备用。
(3)将上述步骤(2)中的盐酸硼砂溶液加入已盛有人工盐的玻璃容器中不断搅拌，使人工盐溶解，PH值为6；然后过滤、灌封，灭菌消毒，即成所需的口服液。
由于采用了上述技术方案，本发明药物具有清热、解毒、抗菌、止痢的作用，治疗顽固性仔猪下痢病见效快、治愈率高。该药物的制备方法具有生产工艺流程简便，制造成本低，且具有高效、长效、剂量小、毒性小和无副作用等优点。
(四)、具体实施方式
以下通过试验例，来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些实验包括了本发明药物的药效学试验和临床疗效观察试验。
[试验例1]本发明药物对仔猪下痢病菌的体外抑菌观察
1.试验材料
1.1本发明药，庆大小诺，无锡山乐集团批号981216；氟派环，河南大明集团批号980112；思诺沙星、痢菌净，浙江单新集团批号981125。
1.2菌种 大肠杆菌K88由重庆市养猪科学研究院提供；志贺氏痢疾杆菌、弗氏痢疾杆菌、副伤寒杆菌由四川省微生物研究所供给。
1.3试剂及器材 微生物实验所需的常规试剂及设备
2.方法
2.1供试药物的制备
取10.00g恩诺沙星加入100ml双蒸水中溶解，配备成10％浓度备用。临用时取10ml试液用双蒸水稀释10倍供试；取10.00g庆大加入100ml双蒸蒸水中溶解，配成10％浓度备用。临用时取10ml试液用双蒸水稀释10倍供试；取10.00g氟派配加入100ml双蒸水中溶解，配成10％浓度备用。临用时取10ml试液用双蒸水稀释10倍供试。
2.2体外抑菌
2.2.1杯管法 取直径为90mm，高16-17mm的平底双碟，经高压灭菌后，在无菌操作下，分别注入经加热融化的2％肉液琼脂培养基20ml；均匀摊希碟底，放置水平台，待凝固后再分别加入已培养18-24h供试菌液4-5ml在培养基上，然后在每一平底双碟中置入内径为6.0±0.1mm，高10.0±0.1mm，外径7.8±0.1mm牛津杯3只，将各供试药液分别滴入各组牛津杯内，以杯满(不能溢出杯外)为准，置37℃式电热恒温箱中培养24小时，用游标卡尺测量抑菌环直径。
2.2.2抑菌强度判定标准 按《抗生素药品检验》和《中药制用经验录》的作为标准。即抑菌环直径在8.00mm或以下为不敏感(-)，抑菌环直径在8.10-13.00mm为低度敏感(+)，抑菌环直径在13.10-19.00mm为中度敏感(++)，抑菌环直径在19.10-25.00mm为高度敏感(+++)。
2.2.3二倍稀释法测定药物抑菌效价 取13×100mm灭菌有棉塞的试管11支，并编号排列于试管架上，在无菌操作下于每管中先加无菌肉汤培养基2.0ml，然后于第1支管中加入灭菌的受试中药液2.0ml，混匀后取2.0ml放入第2管中，依次类推，直到第9管取出2.0ml弃去，使成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16……等各种浓度。第10管不加药物只加菌作为对照，以便观察培养基是否适合于细菌生长。第11管中加入受试中药2.0ml，混匀取2.0ml弃去，不加受试菌，以便观察受试中药是否被污染。再将肉汤已培养6-8h的试验菌液，用无菌肉汤稀释成10-3浓度取0.1ml分别加入上述1-10管中，混匀后置37℃隔水式电热恒混箱中培养16-24h观察结果。若肉汤混浊，表示细菌生长(++、+++)；若肉汤完全清亮，表示细菌未生长(-)。
3.结果
3.1杯管法体外抑菌试验结果，本发明药物对大肠杆菌K88抑菌环直径为21.23±1.41mm；对志贺氏杆菌抑菌环直径为20.22±1.24mm；对弗氏杆菌抑菌环直径为22.12±1.52mm；对副伤寒杆菌抑菌环直径为23.22±1.63mm。实验表明，本发明药物对大肠杆菌K88、志贺氏痢疾杆菌、弗氏痢疾杆菌、副伤寒杆菌均高度敏感。详见表1。
表1本发明药物对四种泻痢杆菌的抑菌试验结果 单位：(N＝6) 药名 药物 浓度 抑菌环直径(单位：阳) 大肠杆菌 K88 X±SD 抑 菌 强 度 志贺氏 杆菌 X±SD 抑 菌 强 度 弗氏 杆菌 X±SD 抑 菌 强 度 副伤寒 杆菌 X±SD 抑 菌 强 度 本发明药物 0.20g/ml 21.32±1.41 +++ 20.22±1.24 +++ 22.12±1.52 +++ 23.22±1.63 +++ 庆大小诺 1‰ 0 抗药 0 抗药 0 抗药 7.23±0.81 抗药 思诺沙星 1‰ 38.17±0.76 +++ 7.1±0.82 抗药 8.0±0.91 抗药 12.23±1.21 ++ 氟派酸 1‰ 25.31±1.21 +++ 7.85±1.63 抗药 8.01±0.71 抗药 16.13±1.34 ++ 痢菌净 1‰ 21.31±1.23 +++ 29.38±1.43 +++ 28.32±1.54 +++ 26.71±1.82 +++
3.2试管测定药物抑菌效价试验结果，本发明药物对大肠杆菌K88、志贺氏痢疾杆菌、弗氏痢疾杆菌、副伤寒杆菌均有较强的抑制作用，其对大肠杆菌K88抑菌效价为1∶8；对志贺氏痢疾杆菌抑菌效价为1∶16；对弗氏痢疾杆菌抑菌效价为1∶8；对副伤寒杆菌抑菌效价为1∶32，实验表明，抑菌效价均在1∶8以上，详见表2。
表2本发明药物对四种菌株抑菌效价测定结果药物浓度 菌 株 试管号与稀释度 1 1∶2 2 1∶4 3 1∶8 4 1∶16 5 1∶32 6 1∶64 7 1∶128 8 1∶256 9 1∶512 10 11 1∶2 效 价0.20g/ml 大肠 杆菌 K88 - - - + + +++ +++ +++ +++ +++ - 1∶80.20g/ml 志贺 氏杆 菌 - - - - + + +++ +++ +++ +++ - 1∶160.20g/ml 弗氏 杆菌 - - - + + +++ +++ +++ +++ +++ - 1∶80.20g/ml 副伤 寒杆 菌 - - - - - + + +++ +++ +++ - 1∶32
[试验例2]本发明药物的安全性和毒性试验
1.试验材料
1.1药品 本发明药，环磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有限公司，批号991016；伊红，重庆东方试剂厂，批号980806；吉姆萨，上海试剂厂，批号981224。
1.2动物 体重18±2g的昆明小白鼠，由泸州医学院实验动物中心供给；体重4.0±0.2kg的雌性大耳白兔(无孕)，由荣昌农贸市场购回。
2.方法
2.1小鼠LD50测定
2.2小鼠慢性毒性试验
2.3小鼠骨髓细胞突变试验
2.4小鼠精子畸变试验
2.5本发明药物的安全性试验
3.结果
3.1急慢性毒性试验结果，小鼠腹腔注射LD50为2268mg/kg；腹腔注射连续2周实验观察，受试小鼠末见临床异常，内脏无肉眼可见病变。
3.2本发明药物对小鼠骨髓细胞微核试验结果详见表3
表3本发明药物对小鼠骨髓细胞微核率的影响 单位：(mg/lg，个，‰)
3.3本发明药物对小鼠骨髓细胞染色体畸变试验结果详见表4
表4本发明药物对小鼠骨髓细胞染色体畸变的影响 单位：(mg/lg，个，‰)
3.4本发明药物对小鼠精子畸变试验结果详见表5
表5本发明药物对小鼠精子畸变试验结果 单位：(mg/lg，个，‰)
3.5取雌兔3只，采用耳静脉缓缓注入200mg/kg的本发明药物，给药后每隔1h测1次，共测3次，较给药前体温下降0.2℃。试验结果，本发明药物对正常家兔体温无影响。
3.6将本发明药物用氯化钠调至PH7，取雌兔3只，取本发明药物2滴(0.05-0.1ml)滴入每只兔左眼结膜囊中，停留2min；以右眼滴入等量生理盐水对照。观察3h。试验结果，本发明药物对兔眼结膜无充血、水肿、分泌物。
3.7取雌兔3只，将两耳中部的毛剪光。左耳中部皮下注射本发明药物0.1ml，右耳中部皮下注射等量的生理盐水，观察3h。试验结果，本发明药物对兔皮下注射无刺激作用。
3.8取雌兔3只，将本发明药物1ml分别注入兔左、右后腿臀部股四头肌部位，1-3d将兔处死，纵向切开注射部位肌肉，观察有无充血、水肿、变性或坏死等。试验结果，本发明药物对兔腿部肌肉注射无刺激。
[试验例3]本发明药的抗炎作用观测
1.试验材料
1.1药品 本发明药，巴豆油由中国中药研究所提供；琼脂条，广东廉海藻加工厂，批号011016。
1.2试剂配制 称取琼脂条1g，放入烧杯中加蒸馏水100ml，然后加热溶解，配制1％琼脂制炎液，装瓶备用；量取巴豆油2ml，无水乙醇20ml，蒸馏水5ml，乙醚73ml，均放入烧杯中搅拌混匀，装瓶备用。
1.3动物 Wistar大鼠、昆明小鼠由泸州医学院实验动物中心供给。
2.方法
2.1大鼠足跖浮肿法[1、2] 将150-180g体重的10只健康雄性大鼠，随机分为本发明药物(实验)组、溶媒(对照)组，分别腹腔注射本发明药物、溶媒液1.0ml/kg。10min后于大鼠右后足跖皮下注射1％琼脂液0.1ml致炎。致炎后每隔1h用千分尺测量肿胀肢厚度，以左后足跖为对照，将左右后足跖厚度之差为肿胀程度，记录给药后1-5h足跖肿胀程度。生物统计处理，与对照组比较有无差异。
2.2小鼠耳肿法[1、2] 将18±2g体重的20只雄性小鼠，随机分为本发明药物(实验)组、溶媒(对照)组。每鼠左耳涂2％巴豆油，右耳作空白对照，于30min后两组分别腹腔注射本发明药物、溶媒液1.0ml/kg，4h后将小鼠处死。沿耳廓基线剪下两耳，用9.0mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，用万分之一光电分析称称重，以(左耳重—右耳重)左右耳重之差作为肿胀率。生物统计处理，与对照组比较有无差异。
3.结果
3.1大鼠足跖浮肿试验结果详见表6
表6发明药物对正常大鼠足跖肿胀的影响组别N 不同时间足跖肿胀程度(mm)(X±SE) 1 2 3 4 5本发明药物5 5.1±0.4※ 8.2±0.5※※ 9.5±0.8※※※ 9.2±0.9※※※ 8.7±0.7※※溶媒5 7.5±0.6 10.4±0.6 14.7±0.4 13.3±0.5 12.1±0.9
表中：与对照组比较“※”表示p＜0.05，“※※”表示p＜0.01，“※※※”表示p＜0.001。
3.2小鼠耳肿胀试验结果详见表7
表7本发明药物对正常小鼠耳肿胀的影响组别 N 肿胀率本发明药物 10 1.27±0.4※※溶媒 10 1.73±0.3
表中：与对照组比较，“※※”表示p＜0.01。
[实验例4]本发明的药物治疗仔猪下痢病的药效观察
1.试验材料
1.1药物 本发明药，氟派酸，华北制药集团，批号991208；痢菌净，西南制药集团，批号990824。
1.2病例来源 由某某种猪场和农户饲养的荣昌母猪所产的吮奶仔猪之临床病例为治疗对象。
2.方法
2.1病例诊断要点 本病多发在出生后1-2周龄的吮奶仔猪。呈现突然下痢、排灰白色，黄绿色或灰褐色浆状稀便，体温和食欲无明显改变，或食欲减退。
2.2给药剂量 本发明药物组每头每次肌肉注射2-4ml，每日注射两次，连续用药三天；西药组每头每次肌肉注射氟派酸30mg/kg，痢菌净30mg/kg，每日注射两次，连续用药三天。
2.3疗效标准 用药后五天内下痢停止，粪便恢复态，食欲恢复正常为痊愈；用药后五天内下痢停止，粪便未恢复常态，食欲增加为有效，用药后五天内下痢未减，粪便性状未改变，病情恶化或死亡为无效。
3.结果
本发明药物对仔猪下痢病治疗观察结果显示，中药组治疗542例，痊愈483例，治愈率为89.11％；有效49例，有效率为9.04％；无效10例，无效率为1.85％。本发明药物治疗仔猪下痢病总有效率达98.15％，中药组比西药组的治疗总有效率多26.59个百分点，比较差异极显著p＜0.01。祥见表8。
表8本发明药物对仔猪下痢的治疗结果组别N/P 痊愈 有效 无效 总有效率 (％) 头 ％ 头 ％ 头 ％中药组542 483 89.11 49 9.04 10 1.85 98.15西药组524 167 31.68 209 39.88 58 28.44 71.56中∶西 ＜0.01
以下通过实施例来进一步阐述本发明药的制备方法。
[实施例1]本发明药物的注射剂制备步骤如下：
(1)按上述的份量比准确称取或量取硼砂2份、5％盐酸10份、黄连素0.005份、奴佛卡因0.025分，备用；
(2)将硼砂置于玻璃容器中，加入5％盐酸，搅拌溶解，备用；
(3)将奴佛卡因加入到上述步骤(2)中制备好的盐酸硼砂溶液中，搅拌溶解，PH值为6；然后过滤，灌封，灭菌消毒，即成所需要的针剂。
(4)在上述步骤(3)中制备好的盐酸硼砂奴佛卡因溶液基础上，再将黄连素加入，搅拌溶解，PH值为6；然后过滤，灌封，灭菌消毒，即成另一种所需要的针剂。
[实施例2]本发明药物的片剂制备步骤如下：
(1)按上述的重量份准确称取硼砂2份、鞣酸1.5份、淀粉0.5份，各研为极细粉，备用。
(2)将上述的硼砂、鞣酸、1/4淀粉，混匀、制粒、干燥，然后加入剩余3/4淀粉，混匀，压片、烘干，装瓶，即成所需要的片剂。
[实施例3]本发明药物的口服液制备步骤如下：
(1)按上述份量比准确称取或量取硼砂2份、人工盐0.09份、5％盐液10份，备用；
(2)将硼砂置于玻璃容器中，加入5％盐酸，搅拌溶解，备用；
(3)将上述步骤(2)中的盐酸硼砂溶液加入已盛有人工盐的玻璃容器中不断搅拌，使人工盐溶解，PH值为6；然后过滤、灌封，灭菌消毒，即成所需的口服液。