一种治疗癌症的颗粒剂及其质量控制方法.pdf

本发明涉及一种具有抗癌，消炎，平喘作用，主要用于食道癌、胃癌、肺癌、肝癌等疾病治疗的中成药消癌平颗粒剂的制备方法和质量控制方法。由乌骨藤为原料药制成，药剂还含助溶剂β－环糊精100重量份，含矫味剂阿斯巴甜3重量份，含成型剂糊精390重量份。制备工艺中采用β－环糊精助溶、喷雾干燥及干式制粒等先进的方法，使有效成分完全保留，便于连续性GMP条件下大型生产。质量控制方法有乌骨藤的薄层鉴别、绿原酸的含量测定、总酚酸的含量测定及总生物碱的含量测定。

1.  一种治疗癌症的颗粒剂，由3750重量份乌骨藤为原料药制成，其特征是：含助溶剂β-环糊精100重量份，含矫味剂阿斯巴甜3重量份，含成型剂低聚乳糖390重量份。

2.  根据权利要求1所述的一种治疗癌症的颗粒剂的制备方法，按具体步骤如下：
称取乌骨藤备用；
加水煎煮三次，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10时停止；得清膏，加入包合剂β-环糊精100重量份，充分搅拌，在喷雾状态下通入热空气，进行喷雾干燥，热空气进风温度170-180℃，出风温度70-90℃，得喷干粉，再加成型剂低聚乳糖390重量份，加入矫味剂阿斯巴甜3重量份，在18-60℃温度下干式制粒，整粒、分装，每袋4g，即得。

3.  根据权利要求1所述的一种颗粒的乌骨藤鉴别方法，其特征是：
取本品约10g，研细，加热水100ml溶解，浓缩至20ml，置分液漏斗中，加浓氨试液1ml，用二氯甲烷40ml、30ml分别萃取两次。合并萃取液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，另取对照药材10g，加50％乙醇100ml回流提取30分钟，浓缩至20ml，置分液漏斗中，加浓氨试液0.5ml用二氯甲烷40ml、30ml分别萃取两次，合并提取液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展缸内置一小氨水瓶，饱和1小时后以体积比为20∶2∶0.25的二氯甲烷-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

4.  根据权利要求1所述的一种颗粒剂的绿原酸的含量测定方法，其特征是：
对照品溶液的制备  精密称取于60℃减压干燥至恒重的绿原酸对照品适量，精密称定，甲醇配制成每1ml中含绿原酸0.025mg；
供试品溶液的制备  取本品装量差异项下内容物，研细，取粉末0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失得重量，摇匀，10000rpm高速离心10分钟，取上清液，即得；
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
流动相为：体积比为23∶77的甲醇-0.1％三氟乙酸水；
检测波长为326nm，流速：1ml/min；
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪。

5.  根据权利要求4所述的一种颗粒剂的绿原酸的含量测定方法，其特征是：
流动相为：体积比为23∶77的甲醇-0.1％磷酸水。

6.  根据权利要求1所述的一种颗粒的质量控制方法，其特征是：
以50％甲醇为空白对照，检测波长为326nm，
对照品溶液的制备  精密称取于60℃减压干燥至恒重的绿原酸对照品适量，精密称定，用流动相制成每1ml约含0.01mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备  取本品装量差异项下内容物，研细，取粉末0.05g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失重量，摇匀，10000rpm高速离心10分钟，取上清液，即得；
分别取对照品溶液与供试品溶液适量置比色皿中，测定总酚酸的含量。

7.  根据权利要求1所述的一种消癌平颗粒的质量控制方法，其特征是：
取本品内容物，研细，取粉末10.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，0.5％盐酸水溶液超声提取3次，每次30ml，滤过，合并滤液；滤液用氯仿洗涤5次，每次20ml，弃去氯仿液，酸水液用氨水调节pH值至10，加氯化钠饱和，用氯仿振摇提取5次，每次20ml，合并5次萃取的氯仿液，挥去溶剂即得总生物碱，将萃得的总生物碱105℃干燥至恒重，移至干燥器中，冷却后迅速称重，测定总生物碱的含量。

一种治疗癌症的颗粒剂及其质量控制方法
〔技术领域〕
本发明涉及一种用于食道癌、胃癌、肺癌、肝癌等疾病的中成药制剂消癌平颗粒的制备方法、质量控制方法，属中药领域。
〔背景技术〕
肿瘤是常见病，多发及高致死的疾病，其中食道癌、胃癌、肺癌、肝癌则是该系统疾病中死亡率最高的种类。肿瘤的发病率有明显的年龄特点，它随着年龄的增长而增加，年龄越大，发病率越高，该类药物的研究日益重视，应用也日益广泛。现代化学药物主要是抑制肿瘤生长的细胞毒类药物，多为对症治疗且副作用很大，大部分严重影响免疫和消化系统。其中还没有既能抑制肿瘤生长又对人体消化、免疫系统无副作用的安全、高效、可供长期服用的药物，而发扬中医药传统优势，开发制剂稳定、用药安全、剂量准确、质量可控、疗效可靠的中药制剂具有重要意义。
中药消癌平糖浆是一种用于食道癌、胃癌、肺癌、肝癌等疾病的中药成药制剂，由主原料药乌骨藤制成，乌骨藤为萝摩科牛奶菜属植物通关藤的干燥藤茎，乌骨藤具有抗癌，消炎，平喘作用。目前市售的消癌平糖浆的提取工艺都是经过水煎煮然后过滤除去沉淀及不溶物制成的，这会导致一部分水溶性较差如酚酸类及生物碱类等有效成分的损失，从而影响药物的疗效；此外，糖浆剂呈溶液状态，一些有效成分如绿原酸等在水溶液中不稳定，也会导致有效成分含量的降低。同时该制剂质量控制方法较落后，只有简单的定性鉴别，无法更好地控制其质量，保证疗效。上述的原因，使消癌平糖浆难以达到现代药物的疗效高、稳定性好、质量控制精确度高等要求。所以，本发明的内容就是提供一种黄芪精颗粒新剂型的制备方法及其质量控制方法。
〔发明内容〕
本发明的目的之一是提供一种中药消癌平颗粒的制备方法，目的之二是提供一种消癌平颗粒的质量控制方法。
发明消癌平颗粒剂由乌骨藤3750重量份为原料药制成，药剂还含助溶剂β-环糊精100重量份，含成型剂低聚乳糖390重量份。
本发明将消癌平颗粒剂，采用先进的制备工艺，如β-环糊精助溶、喷雾干燥、干式制粒等制备而成，使绿原酸、总酚酸以及总生物碱等有效成分保留更多，提高了本方的疗效。
本发明消癌平颗粒剂的质量控制方法：1、对乌骨藤进行了薄层鉴别；2、以高效液相色谱法测定了绿原酸的含量；3、以紫外分光光度法测定了总酚酸的含量；4、以重量法测定了其中总生物碱的含量，这大大提高了制剂的质量控制标准，有效地保证制剂的疗效。
本发明的消癌平颗粒剂的制备方法按如下步骤：
取乌骨藤3750重量份，加水煎煮三次，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.06～1.12(50℃)，得清膏，加入包合剂β-环糊精100重量份，充分搅拌，在喷雾状态下通入热空气，进行喷雾干燥，热空气进风温度170-180℃，出风温度70-90℃，得喷干粉，再加成型剂低聚乳糖390重量份，加入矫味剂阿斯巴甜3重量份，在18-60℃温度下干式制粒，整粒、分装，每袋4g，即得。
本发明的消癌平颗粒剂的质量控制方法如下：
(1)乌骨藤的薄层鉴别
取本品约10g，研细，加热水100ml溶解，浓缩至20ml，置分液漏斗中，加浓氨试液1ml，用二氯甲烷40ml、30ml分别萃取两次。合并萃取液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取对照药材10g，加50％乙醇100ml回流提取30分钟，浓缩至20ml，置分液漏斗中，  加浓氨试液0.5ml用二氯甲烷40ml、30ml分别萃取两次，合并提取液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展缸内置一小氨水瓶，饱和1小时后以二氯甲烷-甲醇-浓氨试液(20∶2∶0.25)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)绿原酸的含量测定
对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇制成每1ml中含0.025mg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备：取粉末0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30min。放冷，称重，用50％甲醇补足失重，摇匀，，高速(10000rpm)离心10分钟，取上清液，即得。
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流速：1.0ml/min；
流动相为：
甲醇                            23体积
0.1％三氟乙酸水                 77体积
流动相还可以为
甲醇                             23体积
0.1％磷酸水溶液                  77体积
检测波长为326nm；
理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000。
(3)总酚酸的含量测定
紫外分光光度计检测
检测波长为326nm；
以甲醇溶液为空白对照，用紫外分光光度法(中国药典2000年版一部附录VA)检测总酚酸的含量。
(4)总生物碱的含量测定
以氯仿为萃取溶剂萃取生物碱
重量法计算总生物碱含量。
〔具体实施方式〕
实施例一  消癌平颗粒剂的制备
称取乌骨藤375g，醇提取两次，第一次煎煮2小时，第二次煎煮2小时，合并醇液，滤过，回收乙醇，浓缩成相对密度1.10(70℃)得浸膏，60℃保温，加β-环糊精10g，搅拌均匀，喷雾干燥，得喷干粉，加阿斯巴甜0.5g，乳糖39g，混匀，物料在50℃温度下干式制粒，整粒，得棕色颗粒100g。按每次服用量4.0g分装成袋。
实施例二  β-环糊精分散助溶条件的选择
由于本方所含一些酚酸类有效成分的水溶解性较差，提取液中常会有沉淀产生，故采用β-环糊精使其更好的分散，增加其溶解性。为了选择β-环糊精分散的最佳条件，进行了四次比较试验。
称取乌骨藤18.75kg，加水煎煮三次，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10(50℃)，得清膏，将清膏分成等量的5份，分别加不同量的β-环糊精，搅匀后，网筛滤过，喷雾干燥得喷干粉。以总酚酸作为考察指标，考察其对总酚酸保留率的影响，结果见表1。
表1 β-环糊精用量对总酚酸保留率的影响

结果表明，β-环糊精用量为25g时助溶效果仍不理想，当增加至50g时，总酚酸的保留率较高，如β-环糊精用量再增加为100g及200g时，与50g时指标成分的保留率差异不大，考虑到生产成本及助溶效果，最佳β-环糊精的用量为100g。
实施例三  消癌平颗粒与消癌平糖浆中主要有效成分含量比较
将“消癌平颗粒”与“消癌平糖浆”进行了含量测定比较试验，以其中的绿原酸、总酚酸及总生物碱的含量为指标，实验结果如下表。
 表3“消癌平颗粒”与“消癌平糖浆”进行了含量测定比较试验
                                       指标成分
组别
                            绿原酸     总酚酸    总生物碱
消癌平糖浆(mg/l 5ml)          3.4        87.5       4.8
消癌平颗粒(mg/袋)             5.2        142.4      8.7
颗粒比原糖浆剂的提高率(％)    52.94      62.74      81.25
由上表测得的结果表明，消癌平颗粒中绿原酸、总酚酸、总生物碱的含量与消癌平糖浆(每15ml消癌平糖浆中所含生药量与每袋消癌平颗粒所含生药量相当)相比有明显的提高。本制剂采用了β-环糊精地包结，使得一些水溶性较差的酚酸类成分及生物碱类成分得到了很好的保留，且制成混悬型颗粒，使提取药液的成分充分保留，有效成分含量明显增高。而原糖浆剂中，上述的有效成分会在药液浓缩、过滤时会损失，且酚酸类成分如绿原酸等在水溶液中稳定性差而易分解破坏，也会影响有效成分的含量。
实施例四  进、出风温度对喷雾干燥粉的影响
喷雾干燥条件对成分的保留及颗粒成型极为重要。为利于有效成分的保留和颗粒成型，对进风温度、出风温度进行比较如表4。
                 表4  进、出风温度对喷雾干燥粉的影响
进风温度(℃)  出风温度(℃)  绿原酸保留率(％)  含水量(％)  对制粒的影响
    190           90             75.1            2.9          稍差
    180           80             84.1            3.3          较好
    180           70             90.5            4.3          很好
    170           80             94.5            4.5          很好
    170           70             96.7            5.0          较好
制粒试验结果表明，本制剂半成品细粉粒的含水量在4.0～6.0％时，可以直接干式制得粒度、硬度适宜的颗粒；含水量高于8.0％时，颗粒流动性较差，制粒后水分难以控制在5％以内；含水量小于4.0％时，颗粒的细粉稍多，产率会下降。因此应控制喷雾干燥的进风温度为170-180℃，出风温度70-90℃。
实施例五  消癌平颗粒剂按下列方法质量控制(一)
乌骨藤鉴别  取本品约10g，研细，加热水100ml溶解，浓缩至20ml，置分液漏斗中，加浓氨试液1ml，用二氯甲烷40ml、30ml分别萃取两次。合并萃取液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取对照药材10g，加50％乙醇100ml回流提取30分钟，浓缩至20ml，置分液漏斗中，加浓氨试液0.5ml用二氯甲烷40ml、30ml分别萃取两次，合并提取液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展缸内置一小氨水瓶，饱和1小时后以二氯甲烷-甲醇-浓氨试液(20∶2∶0.25)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例六  消癌平颗粒剂按下列方法质量控制(二)
绿原酸的含量测定：
【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2000版一部附录61页)测定。
其中流动相系统试验表明：以甲醇-0.1％磷酸水溶液(23∶77)(v/v)为流动相时与以甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液(23∶77)(v/v)取得相似的分析图谱，但三氟乙酸为有机酸，它对色谱仪器及色谱柱的影响均比磷酸小，以三氟乙酸作流动相pH试剂更适宜。
系统适用性试验  Waters510泵，紫外486检测器，淮阴汉邦公司Kromasil反相C18柱(4.6*250mm，5μm)，甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液(23∶77)(v/v)为流动相，流速为1ml/min；检测波长为327nm。
理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备  精密称取于60℃减压干燥至恒重的绿原酸对照品适量，精密称定，甲醇配制成每1ml中含绿原酸0.025mg。
供试品溶液的制备  取本品装量差异项下内容物，研细，取粉末0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30min(超声功率为250w，频率为50KHz)。放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失重量，摇匀，高速(10000rpm)离心10分钟，取上清液，即得。
测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，计算，即得。
本品每袋含绿原酸(C₁₅H₁₈O₉)不得少于4.0mg。
实施例七  消癌平颗粒剂按下列方法质量控制(三)
总酸的含量测定：
【含量测定】照紫外分光光度法(中国药典2000年版一部附录VA)测定。
仪器：岛津UV-2487紫外分光光度计。
以50％甲醇为空白对照，检测波长为326nm。
对照品溶液的制备  精密称取于60℃减压干燥至恒重的绿原酸对照品适量，精密称定，用流动相制成每1ml约含0.01mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备  取本品装量差异项下内容物，研细，取粉末0.05g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30min(超声功率为250w，频率为50KHz)。放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失重量，摇匀，高速(10000rpm)离心10分钟，取上清液，即得。
测定法  分别取对照品溶液与供试品溶液适量置比色皿中，测定，即得。
本品每袋含总酚酸以绿原酸(C₁₅H₁₈O₉)计，不得少于120mg。
实施例八  消癌平颗粒剂按下列方法质量控制(四)
总生物碱的含量测定：
【含量测定】重量法测定总生物碱的含量
测定方法  取本品装量差异项下内容物，研细，取粉末10.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，0.5％盐酸水溶液超声提取3次，每次30ml，滤过，合并滤液；滤液用氯仿洗涤5次，每次20ml，弃去氯仿液，酸水液用氨水调节pH值至10，加氯化钠饱和，用氯仿振摇提取5次，每次20ml，合并5次萃取的氯仿液，挥去溶剂即得总生物碱，将萃得的总生物碱105℃干燥至恒重，移至干燥器中，冷却后迅速称重，计算供试品中总生物碱的含量测定。
本品每袋含总生物碱，不得少于7.0mg。
附图说明：
图1  绿原酸对照品HPLC图
图2  缺乌骨藤阴性样品HPLC图
图3  复方乌骨藤颗粒样品HPLC图