表儿茶素－3－0－没食子酸酯及表没食子儿茶素－3－0－没食子酸酯抑制慢肾衰.pdf

表儿茶素－3－0－没食子酸酯和/或表没食子儿茶素－3－0－没食子酸酯，及其混合物为功效成分的制剂用于治疗慢性肾功能衰竭、尿毒症。

1.  表儿茶素-3-0-没食子酸酯和/或表没食子儿茶素-3-0-没食子酸酯，及其混合物为功效成分的制剂用于治疗慢性肾功能衰竭、尿毒症。

2.  权利要求1所述的以大黄、绿茶等植物为原料，以溶剂提取、纯化、通过分子筛色层分离得到表儿茶素-3-0-没食子酸酯和/或表没食子儿茶素-3-0-没食子酸酯，去除蒽醌和丹宁类成分。

表儿茶素-3-O-没食子酸酯及表没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯抑制慢肾衰
发明领域
本发明涉及表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯及其混合物为功效成分的制剂用于治疗慢性肾功能竭、尿毒症。
发明背景
肾功能衰竭、尿毒症目前尚属疑难症之一，是各种肾脏疾患持续发展的结果，属进行性，不可逆性临床综合症，患病率约占总人口的2.25％。目前有效治疗药物较少，现临床多采用肾移植疗法和透析疗法只能延缓病情发展，费用亦较高。肾脏移植，不仅费用昂贵且肾源难觅，术后排异、并发感染等尚难彻底解决，而影响肾(人)的存活率，为了寻求廉价有效的治疗途径对该类药品的研发，引起世界各国的普遍关注。
日本、西欧投入大量人力、物力，从天然物中寻找有效成分，中药的悠久临床历史及广博的文献资料，自然引起广泛重视。经过广泛筛选，大黄治疗慢肾衰、尿毒症已受到各国研究人员的高度重视，尤其是中医的临床实用，资料非常珍贵，极有说服力，为深入研究奠定了坚实地临床基础。
鉴于上述原因，美国、日本、欧洲各国耗资亿元进行化学、分子生物学研究，但至今难以进入临床试用，而在中国不少省市、自治州早已立项开展临床应用研究，率先将大黄直接应用于临床治疗慢肾衰、尿毒症，这是中医中药的优势，据不完全统计，近十几年来，国内有40余家医疗单位、科研院所采用单方或复方大黄制剂，剂型繁多，给药途径多种，治疗千余例肾功能衰竭及尿毒症患者大多获得一定效果。
在有效成分不清楚的条件下，供临床研究用的大黄制剂，均采取尽量保留各种成分(含有害成分)的办法，甚至采用大黄粉直接应用临床。其剂型有胶襄剂、片剂、丸剂、灌肠剂、注射剂等。从给药途径来看，有口服、肠道给药，还有注射给药。
在广泛临床研究的基础上，深入进行有效成分的研究势在必然，因为大黄等常用中药中除了有效成分外，尚有一些具一定毒副作用的化学成分，只有去除后，才能保证用药安全，降低毒副反应，对有效成分的定性、定量研究，将确保临床用药中有效成的治疗剂量，和稳定临床疗效。
有效成分的研究是多学科综合运用的结果，在药理、药化的密切配合之下，追踪有效成分，去除无效成分，才得以完成。药理实验采用生化指标与器官形态学的指导，对大黄及茶叶中100余种成分进行了药理药化试验研究，国内外现有文献均认为丹宁(Tannin)是治疗慢肾功能衰竭及尿毒症的有效成分，但本发明认为主要活性成分并非丹宁，而是表儿茶素-3-O-没食子酸酯，和表没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯，二者均为多元酚类，但并无丹宁的通性。故有被机体吸收的而发挥作用的可能。综上所述，去粗取精，确保临床用药中有效成分的含量，是提高疗效，降低毒副作用的关键所在。
发明概述
本发明的目的就是提供从大黄、绿茶等植物中提取化合物——表儿茶素-3-O没食子酸酯(ECG)和表没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯(EGCG)。
本发明的另一个目的就是提供以表儿茶素-3-O-没食子酸酯(ECG)和表没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯(EGCG)及其混合物为功效成分的制剂治疗慢性肾功能衰竭、尿毒症的应用。
表儿茶素-3-O-没食子酸酯(epicatechin-3-O-gallate简称ECG)的分子结构：

表没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯(epigallcatechin-3-O-gallateECG简称EGCG)的分子结构：

发明详述
虽然国内外文献均报道，大黄丹宁是治疗慢性肾功能衰竭、尿毒症的有效成分，但本发明从上述植物原料中以溶剂提取，分子筛色层分离，所获化合物；表儿茶素-3-O-没食子酸酯，及表没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯是治疗慢性肾功能衰竭及尿毒症的主要有效成分，二者均非丹宁。且大黄蒽醌、茶丹宁均被除去。表儿茶素没食子酸酯及表没食子儿茶素没食子酸酯均属小分子化合物，亦不具备丹宁的通性。上述二化合物的构型在结构式中亦已表达。
药理、药化研究：大黄及绿茶中，有机成分均逾百种，经过一系列提取、纯化、分离工艺所获得表儿茶素-3-O-没食子酸酯和表没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯均为灰白结晶形粉末，经紫外、红外、核磁共振(含二维谱)质谱等现代分析手段，均证实为上述化合物，其他理化常数亦一致。
肾功能衰竭、尿毒症患者，临床症状多具有肌酐、尿素氮、尿蛋白值高出正常人，活性氧清除酶活度下降及肾小球膜增生，滤过功能下降等，故实验模型依照设计下述指标。
药理实验表明：表儿茶素-3-O-没食子酸酯、表没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯及其二者的混合物能明显降低尿素氮，见表1；降低肌酐，见表2。
                  表1 有效部位对尿素氮的影响
                           剂量
天数      组别             (mg/kg              氮
                           B.w./day)         (mg/dl)
0         肾切除鼠
          对照组           -                  42.3±1.4
          治疗组I          10                 43.2±2.9
          治疗组II         20                 41.6±2.5
          肾切除鼠
20        对照组           -                  39.7±3.5
          治疗组I          10                 28.7±1.3^a
          治疗组II         20                 30.5±1.4^b
          肾切除鼠
40        对照组           -                  40.2±3.9
          治疗组I          10                 31.7±1.9^a
          治疗组II         20                 32.1±2.2^b
          肾切除鼠
60        对照组           -                  42.8±4.4
          治疗组I          10                 34.0±2.8^a
          治疗组II         20                 30.2±1.9^b
          肾切除鼠
80        对照组           -                  51.8±2.7
          治疗组I          10                 36.9±3.0^a
          治疗组II         20                 40.2±3.6^b
          正常值                              16.4±0.3
^aP＜0.01；^bp＜0.001：与对照组比较，治疗组具显著性差异
                表2 有效部位对血清肌酐的影响
                           剂量
天数      组别             (mg/kg             肌酸酐
                           B.w./day)          (mg/dl)
0         肾切除鼠
          对照组           -                  0.58±0.02
          治疗组I          10                 0.59±0.02
          治疗组II         20                 0.57±0.02
          肾切除鼠
20        对照组           -                  0.77±0.05
          治疗组I          10                 0.69±0.02^a
          治疗组II         20                 0.59±0.02^b
          肾切除鼠
40        对照组           -                  0.84±0.03
          治疗组I          10                 0.73±0.02^a
          治疗组II         20                 0.70±0.02^b
          肾切除鼠
60        对照组           -                  0.83±0.05
          治疗组I          10                 0.74±0.03^a
          治疗组II         20                 0.69±0.03^b
          肾切除鼠
80        对照组           -                  10.5±0.05
          治疗组I          10                 0.90±0.05^a
          治疗组II         20                 0.86±0.05^b
          正常值                              0.48±0.03
^aP＜0.01；^bp＜0.001：与对照组比较，治疗组具显著性差异
提高氧自由基清除酶的活力，见表3，组织病理研究表明，能抑制肾小球细胞膜的增生和减轻肾硬化损伤的程度，见表4。
              表3 对活性氧清除酶活力的影响
              剂量
                                                             GSH-Px
组别          (mg/kg       SOD              Catalase
                                                             (U/mg蛋白)
              B.w./day)   (U/mg蛋白)       (U/mg蛋白)
肾切除鼠
对照组        -           8.75±0.40       142.7±11.8       69.63±2.02
治疗组I       10          10.68±0.48^a    213.2±13.9^a    71.91±3.41^a
治疗组II      20          11.66±0.54^b    224.4±10.9^b    76.97±3.15^b
正常值                    18.33±1.00      225.9±8.7        85.12±3.95
SOD：(超氧歧化酶)；GSH-Px：(谷光胱肽氧化酶)；
^aP＜0.05；^bp＜0.01；^cp＜0.001：与对照组比较，治疗组具显著性差异
                     表4 组织病理学观察
                                      给药组               给药组
参数                 对照组
                                      (10mg)               (20mg)
肾细胞膜增殖
程度
正常                 0                0                    0
轻度                 1                3                    4
中度                 4                3                    2
重度                 1                0                    0
肾小球膜损伤
                     1.59±0.18       1.24±0.12^a         1.15±0.13^b
指数
p＜0.01：与对照组比较，治疗组具显著性差异
大黄、绿茶等植物中含有上述有效成分，但同时亦存在有害物质，如大黄蒽醌、茶丹宁(茶多酚)，去除这些有害成分，提高有效成分的纯度，力求准确定量，使临床治疗剂量准确，确保临床疗效的提高是本发明的研究宗旨。同时为制定合理的药品质量标准奠定坚实的基础。
综上所述，本发明旨在深入探索中草药治疗慢性肾功能衰竭、尿毒症的作用机理，更合理的应用天然植物有效成分，进一步提高临床治疗慢性肾功能衰竭、尿毒症效果。
应用实例：
ECG与EGCG混合物：600g
药用淀粉：       200g
粘合剂CMC(10％)  若干
将以上物质按处方配料混合、加工、制粒低温真空干燥，装胶襄，每粒含ECG与EGCG混合药物300mg，进一步临床实验，经30名患者临床服用胶襄，结果表明：治疗组尿素氮、肌酐、尿蛋白值均低于对照组，食欲、体症表现明显优于对照组，有效率达到90.6％，高出中药大黄的有效率83.2％。应指出的是服量大幅度减小。丹宁、蒽醌所致毒副反应明显降低。