用生化酶标多功能分析仪测试生化超微量检测技术的方法 本发明属医学生物化学检验领域。具体说是一种用生化酶标多功能分析仪测试生化超微量快速检测技术的方法。
生化检验是医学检验的重要组成部分。生化分析朝着微量、快速、准确、方便的方向发展是当前国内外医学检验的必然趋势。
目前国内生化检验多数仍以静脉抽血、应用常量法、手工比色读取吸光度后再进行计算得出含量；而国外生产的先进的全自动生化分析仪，测试样品微量化、无需人工计算即可得出结果，但同样脱离不了静脉抽血，还存在着标本量很少的情况下开机浪费试剂的不足。为了避免病人静脉抽血，就必须要求每项测定的样品尽可能少，但又不影响结果的准确性是当前国内外生化检验存在的难点。
半自动生化分析仪，存在着在大批量标本检测中，因标准品与被测样品前后测试的时间差而直接影响测定结果的准确性，尤其是常量法手工比色测试速度慢而存在此缺点。
除上述因素外，还存在采样、检测仪器、检测方法不太过关，更重要的是没有一整套适应生化超微量和快速比色分析的配套仪器和相应的技术方法。若能实现采用指血替代静脉抽血；一滴血查肝功、一滴血查血糖、一滴血查血脂等；实现快速比色分析测试结果的技术方法，则具有更大地技术上的优越性和应用上的实际意义。
本发明的目的在于避免上述现有技术中存在的不足之处而采用现有的微孔板代替试管和比色杯，并在孔内直接进行试验操作，达到无需静脉抽血的一种用生化酶标多功能分析仪测试生化超微量检测技术的方法。
本发明的目的可以通过以下措施来达到：
一种用生化酶标多功能分析仪测试生化超微量检测技术的方法，其特征在于：
a．按末梢血常规采集方法：将聚乙烯塑料微量采血管上端口接触血滴，下端放低，边轻挤边进血至需要量后烧熔下端，用镊子捏紧封固或不封口，将微量采血塑料管折成“V”型插入一次性注射器的针头塑料套内，在针头塑料套管或采血塑料管上贴上不干胶序号，离心分离血清备用；
b．取洁净8×12标准96微孔板一块；
c．采用微量定量加样器，取标准品和被测样品，定量加入微孔板各孔内；
d．用微量可调移液器，按所需试剂用量，定量加入上述各孔内；
e．将微孔板置37℃恒温箱或水浴箱，达到试验项目所需反应时间后取出微孔板；
f．将微孔板置生化酶标多功能分析仪测量室内，在90s内同时打印出1～90份结果报告。
本发明的目的还可以通过以下措施来达到：
本发明采用1μl．2μl．3μl．5μl．10μl、20μl．25μl微量定量加样器，取标准品和被测样品，定量加入微孔板各孔内。
本发明采用50-25μl、100-500μl微量可调移液器。
本发明采用内径2-3mm的聚乙烯塑料管制成5-7cm规格的微量采血塑料管。
本发明相比现有技术方法具有如下优点：
1．取样方便。本发明采用一整套适应生化超微量检测的生化酶标多功能分析仪和相应的技术方法，不仅用指血替代了静脉抽血，减轻了患者的痛苦，而且与目前的常量法、全自动、半自动及其它各种型号的生化分析仪和现有技术方法比较，大大节省了用血量、几十倍地提高了比色测试速度。
2．检测速度快。与半自动生化分析仪以1份样品／30s计算，做各项生化检测平均快30倍以上。例如用半自动做葡萄糖测定90份样品需45min以上，而本发明技术方法仅用90s即可测试打印出结果报告。
3．同批结果误差小。目前因常量法手工比色和半自动生化分析仪测试速度慢，存在着比色时间段(如上所述的从1份样品／30s到测定90份样品需45min以上)之间对结果的误差。而用本发明的技术方法在大批量标本检测中，避免了因标准品与被测样品前后测试的时间差而直接影响测定结果的准确性。
4．结果准确，重复性好。用生化酶标多功能分析仪和本发明的技术方法，用终点法所做生化项目的精密度、线性、相关系数、标准差、变异系数等都优于进口、国产的半自动生化分析仪。
5．样品超微量。采用现有的一整套适应生化超微量检测的生化酶标多功能分析仪和检测技术的方法，仅用半自动生化分析仪的1／5～1／20样本量，指血一滴即可做肝功、血脂检验，而全自动、半自动生化分析仪则不能。
6．试剂用量成本低。如做同样项目检测，所需试剂的成本仅为常量和半自动生化分析仪的5～30分之一。
7．各种耗材少。从取血液到发出报告，无需注射器、试管、吸管、比色杯。减少了清洗工作，节省人力，提高了工作效率。
实施例1
葡萄糖氧化酶法测定(终点法)
1．末梢血采集：
(1)采血部位成人以左手无名指为宜，半岁以下婴幼儿通常以拇指或足跟采血。
(2)轻轻按摩采血部位，使其自然充血，用75％乙醇棉球消毒局部皮肤、待干。
(3)紧捏刺血部位，用无菌采血针穿刺取血。动作应迅速，深度约2-3mm，以稍加挤压血液能流出为宜。
(4)取内径2-3mm长5-7cm规格的聚乙烯塑料管(微量采血塑料管)上端口接触血滴，下端放低，边轻挤边进血，约采1滴血后烧熔下端，用镊子捏紧封固或不封口，将微量采血塑料管折成“V”型插入一次性注射器的针头塑料套内，在针头塑料套管或采血塑料管上贴上不干胶序号，离心分离血清备用。
2．原理：
葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生一分子过氧化氢。
葡萄糖+O2葡萄糖酸+H2O2
在过氧化物酶和色原性氧受体的存在下，过氧化氢分解，释放出初生太氧，氧化色素原，生成有色化合物。
3．试剂：
葡萄糖氧化酶 ≥10500U／L 过氧化物酶 ≥11000U／L
4-氨基安替吡啉 50mg／L 苯酚 0．5g／L
葡萄糖标准液 5．6mmol／L
4．加样：
取洁净8×12标准96微孔板一块按下表加样：
混匀，置37℃保温15分钟。
5．测试：
将试验微孔板置生化酶标多功能快速分析仪测量室内，用505nm双波长、设空白孔和标准孔位，确认Au／As*C公式，设置标准品单位含量，例如：标准品为5．6mmol／L即设置C=OO5．6，启动测量打印各孔葡萄糖含量的结果报告。
6．结果：
血液葡萄糖测定： 葡萄糖氧化酶法
试剂： 上海科欣生物技术研究所生产
批号： 991101
标准液(品)： 5．6mmol／L(100mg／dl)
波长方式： 双波长
测量波长： 505nm
报告方式： 1、生化测定结果2、吸光度测试结果
使用公式： Au／As*C
标准品单位含量设置：C=OO56(5．6mmol／L)
1、生化测试结果： A行01孔为空白调“O”孔，02、03、
04、05孔为标准品测定结果，其余为标
本测定结果。
2、吸光度测试结果： 与生化测定结果相对应的各孔吸光度值
实施例2
血清胆固醇测定-酶比色法
1．末梢血采集同实施例1。
2．原理：胆固醇酯酶水解胆固醇酯之后，以胆固醇氧化酶氧化胆固醇，产生H2O2，然后以Trinder反应测定，从而求其含量。
3．试剂：北京北化精细化学品有限责任公司生产
试剂盒组成：
胆固醇脂酶 400U／L 胆固醇氧化酶 500U／L
过氧化物酶 200U／L 4-氨基安替吡啉 1mmol／L
苯酚 10mmol／L 磷酸盐缓冲液 (PH7．0±0．1)
胆固醇标准液 5．17mmol／L(200mg／dl)
应用前根据包装规格溶解，配成酶应用液。
4．加样：取洁净8×12标准96微孔板一块按下表加样：
混匀，在37℃中保温15分钟。
5．测试：将试验微孔板置生化酶标多功能分析仪测量室内，用505nm双波长、设空白孔和标准孔位，确认Au／As*C公式，设置标准品单位含量，例如：标准品为5．17mmol／L即设置C=OO5．2)，启动测量打印各孔胆固醇含量的结果报告。
6．结果：血清胆固醇测定： 酶比色法试剂： 北京北化精细化学品有限责任公司生产批号： 000601波长方式： 双波长测量波长： 505nm标准液(品)： 5．17mmol／L(200mg／dl)报告方式： 1、生化测定结果2、吸光度测试结果使用公式： Au／As*C标准品单位含量设置： C=0052(5．17mmol／L)两种报告方式如下：1、生化测定结果： A行01、02孔为空白调“0”孔，03、
04、孔为标准品测定结果，其余为标本
测定孔结果2、吸光度测试结果： 与生化测定结果相对应的各孔吸光度值