七烯大环内酯聚酮抗生素FR-008复合物 【技术领域】
本发明涉及的是一种聚酮抗生素，特别是一种七烯大环内酯聚酮抗生素FR-008复合物，属于生物医药技术领域。
技术背景
链霉菌属原核生物界放线菌目链霉菌科，是土壤中主要的微生物类群之一。聚酮是一类自然产物，很多聚酮类抗生素已应用于医用，兽用及农用，包括红霉素(抗菌)，制霉菌素(抗真菌)，阿维菌素(抗寄生的)，纳巴霉素(免疫抑制剂)和道诺红菌素(抗肿瘤)。例如免疫抑制剂FK506通过抑制T细胞激活与生长所需的信号传导途径来阻碍免疫应答。FK506被用来防止移植排拒反应。并被用于某些自动免疫疾病的治疗。在结构上，FK506也是一个大环内酯，可由一些链霉菌产生。
经文献检索发现，1986年作者：Bolard，J.，在Biochim.Biophys.Acta(生物化学.生物物理学报)第864期257-304页报道：多烯抗生素是通过与真核细胞膜的固醇相互作用形成通道而引起小分子的丢失而导致细胞死亡。七烯大环内酯类抗生素两性霉素B是结核链霉菌产生的一种在医药上具有重要用途的抗真菌抗生素。两性霉素B对真菌细胞膜中数量最大的固醇麦角固醇具有很大的亲和性，从而对真菌细胞具有选择性的毒性。两性霉素B是人类严重系统性真菌感染最重要的抗生素。七烯大环内酯类抗生素制霉菌素也是人类真菌感染重要的医用抗生素。杀念菌素是由灰色链霉菌IMRU3570产生的一种芳香七烯大环内酯抗生素。它对念珠菌有很强的抑制活性。然而，多烯大环内酯的应用至今仍然主要局限在对真菌病的治疗上。
【发明内容】
本发明针对背景技术中存在的不足和需要解决的技术问题，提供了一种七烯大环内酯聚酮抗生素FR-008复合物，即一簇结构相关的多烯大环内酯聚酮抗生素FR-008，它们由FR-008生物合成基因簇所合成的，更具体的说是通过FR-008聚酮合酶中21个特异的聚酮合酶模块介导的21个缩合步骤，以及其后的糖基化，羧基化，羟基化等修饰步骤合成地。
本发明是根据如下技术方案实现的，本发明具有多烯大环内酯聚酮抗生素FR-008化学结构式式I和式II。该化学结构式与其它现有的七烯大环内酯化学结构式均有不同。七烯大环内酯两性霉素B和制霉菌素均不具有对氨基苯甲酸基团。芳香七烯大环内酯杀念菌素已报道的化学结构式不包含有两个顺式的双键。芳香七烯大环内酯Vacidin A虽然也有两个顺式双键，但位于不同的位置，而且在多羟基部分(C3-C13)有很大区别。式I和式II所示的化学结构式是至今未发现或报道的化学结构。
结构相关的多烯大环内酯聚酮抗生素FR-008各组分，即式I和式II所示的化学结构式，R1为羟基，R2为羟基时为组分FR-008-I；R1为酮基，R2为羟基时为组分FR-008-II；R1为酮基，R2为H原子时为组分FR-008-IV。结构相关的多烯大环内酯聚酮抗生素FR-008各组分，包括C-15位与C-19位不形成六元缩醛环即式I与形成六元缩醛环即式II两种动态平衡结构。包含七个共扼双键，其中在C-26-C-27和C-28-C-29位为两个顺式双键，其余为反式双键。携带有一个对氨基苯甲酸基团，在C-21位附着的是氨基海藻糖糖基。
本发明所提供的七烯大环内酯聚酮抗生素FR-008复合物通过与真核细胞膜的固醇相互作用形成通道而引起小分子的丢失而导致真菌细胞死亡从而具有强的抗真菌活性。由于聚酮抗生素FR-008复合物还可以与细胞膜中的胆固醇发生作用，从而对蚊子幼虫有高毒性，浓度为1ppm时，分别在24小时，48小时和72小时内使孑孓的致死率达100％。这未在其它多烯抗生素中发现。
产生抗生素FR-008的菌株可以在20-40℃生长，更适宜在24-37℃生长。
FR-008聚酮抗生素可以不经过改造直接用于抗生素用途，应用于人类，动物，植物等合适的对象。聚酮抗生素FR-008一般被认为是指发酵过程终止时回收的抗生素FR-008复合物，也可以指抗生素FR-008复合物中的任一单一组分。聚酮抗生素FR-008产生于产生菌的菌丝体中，也可以分泌到发酵液中。聚酮抗生素FR-008可用紫外光380nm检测，通过HPLC纯化或通过其它标准的程序分离并纯化。
从这些FR-008聚酮抗生素能衍生各种不同的化学结构分子。通过化学修饰得到包括从这些FR-008聚酮抗生素所能衍生的各种不同的化学结构分子。通过对这些FR-008聚酮抗生素的一系列化学反应，可得到一系列新的，迄今未公开的具有很强活性的衍生物，提供了制备经过修饰的大环内酯的可能性。
FR-008聚酮抗生素可以以被分离开的或经纯化的，或者存在于宿主细胞的培养液中的形式存在或提供。FR-008聚酮抗生素也可以作为药物组分形式的来提供。在产生这些FR-008聚酮抗生素的宿主细胞中也可以产生其它相关联的聚酮抗生素或经过修饰的聚酮抗生素。在这些FR-008聚酮抗生素的基础上可以产生被进一步改造的聚酮抗生素或经过修饰的聚酮抗生素。
FR-008聚酮抗生素可以通过与特定的抗生素产生菌共培养而产生被进一步改造的聚酮抗生素。FR-008聚酮抗生素亦可以经过化学或生物的修饰或改造而得到具有潜在抗生素活性的化合物，以应用于人类，动物，植物等合适的对象。
FR-008聚酮抗生素可以在一定的条件下或与其它聚酮类似的条件通过宿主细胞的生长或发酵得到。产生FR-008聚酮抗生素的宿主细胞可以通过紫外诱变，化学诱变或进一步的基因工程改造而得到提高FR-008聚酮抗生素产量的宿主细胞，这种宿主细胞可以用于工业化生产。
FR-008聚酮抗生素的药用制剂也是本发明的一部分。本发明包括FR-008聚酮抗生素用于治疗易感细菌感染的组合物，包括FR-008聚酮抗生素和可接受的药用载体。用FR-008聚酮抗生素的组合物治疗易感菌感染的方法也是本发明的一部分。
FR-008聚酮抗生素可以作为药物组分来应用。本发明所提供的药物组分可以以药物制备形式来使用，例如以固体，半固体或液体形式。这种制备可以包含本发明一种或多种化合物作为适于外用，内服或注射用的含有有机的或无机的载体或介质的混合物中的有效成分。这种有效成分可以与通常的无毒副作用的，医药用的载体复合成药片，药球，胶囊，栓剂，溶液，乳剂，悬液以及其它适合的形式。
FR-008聚酮抗生素可以以脂质体的形式来应用以减少可能的毒副作用。脂质体包括脂质体剂型，是用脂质体将FR-008聚酮抗生素包裹而成；脂质体复合物，是脂质体与FR-008聚酮抗生素交织；胶样分散，用硫酸胆固醇与FR-008聚酮抗生素混合包裹。这些可用来与FR-008聚酮抗生素制备复合药物的载体包括水，葡萄糖，乳糖，柠檬酸钠，磷酸盐，树胶明胶，甘露醇，淀粉糊，硅酸镁，硬脂酸镁，滑石粉，玉米粉，角蛋白，硅胶，云母，土豆粉，尿素和其它适用于工业制备的载体，而且制作胶囊时可药用的载体包括乳糖和高分子量的聚乙烯乙二醇。这种复合药物可以为固体，半固体或液体的形式。复合药物中可添加辅助的稳定剂，加厚剂，着色剂或香料。
FR-008聚酮抗生素可以与无机或有机酸形成药用加成盐。用于形成酸加成盐的包括硫酸，盐酸，磷酸，氢溴酸，氢碘酸等无机酸，以及乙酸，碳酸，柠檬酸，苯甲酸，草酸，甲磺酸，甲苯磺酸，琥珀酸，对溴苯磺酸等有机酸。这样的药学上可接受的盐包括硫酸盐，焦硫酸盐，硫酸氢盐，亚硫酸盐，亚硫酸氢盐，氯化物，盐酸盐，氢溴酸盐，溴化物，碘化物，甲酸盐，异丁酸盐，己酸盐，庚酸盐，富马酸盐，马来酸盐，柠檬酸盐，乳酸盐，羟基丁酸盐，乙醇酸盐，酒石酸盐，磷酸盐，磷酸一氢盐，磷酸二氢盐，偏磷酸盐，焦磷酸盐，乙酸盐，丙酸盐，癸酸盐，辛酸盐，苯甲酸盐，氯苯甲酸盐，甲基苯甲酸盐，二硝基苯甲酸盐，羟基苯甲酸盐，甲氧基苯甲酸盐，邻苯二甲酸盐，磺酸盐，二甲苯磺酸盐，苯基乙酸盐，苯基丙酸盐，苯基丁酸盐，丙烯酸盐，丙炔酸盐，草酸盐，丙二酸盐，琥珀酸盐，辛二酸盐，癸二酸盐，丁炔-1，4-二酸盐，己炔-1，6-二酸盐，甲磺酸盐，丙磺酸盐，萘-1-磺酸盐，萘-2-磺酸盐，扁桃酸盐等。用于形成碱加成盐的包括氨或碱金属或碱土金属氢氧化物，碳酸盐，碳酸氢盐等衍生自无机碱的盐，可用于制备本发明的盐的碱包括氢氧化钠，氢氧化钾，氢氧化钙，氢氧化铵，碳酸钾，碳酸钠，碳酸钙，碳酸氢钠，碳酸氢钾等。FR-008聚酮抗生素可以与可药用的离子结合形成盐。这些盐包括碱性金属盐或碱性矿物金属盐，特别是钙离子，镁离子，钠离子，钾离子与FR-008聚酮抗生素形成盐。
溶液或悬浮液可用于注射，药用载体可以为水相，如水，等压的盐，等渗的葡萄糖，或非水相的，如植物油(包括棉籽油，花生油)，多羟基化合物(包括甘油和丙烯乙二醇)。
在感染的情况和疾病中，FR-008聚酮抗生素可以包含无毒副作用的药用载体，辅剂或介质的形式被用于口服，外用，注射，气溶吸入(雾化吸入)或塞入直肠或阴道。这里所指的注射包括皮下注射，静脉注射，肌肉注射和鞘内给药或灌输技术。FR-008聚酮抗生素的用药剂量为每人每天每千克体重0.01毫克到100毫克，更好的是约每人每天每千克体重0.1毫克到10毫克。而且，FR-008聚酮抗生素亦可以间歇给药，例如间隔半周，一周，半月，一月等。和药用载体材料混合的而配成的单剂药方中FR-008聚酮抗生素有效成分的用量可依病体治疗效果或特殊的方式。而且，对于任何特殊病体的使用FR-008聚酮抗生素的特定用量依赖于各种因素，包括所提供特定抗生素的的药效，病体的年龄，重量，健康状态，性状态和饮食，还包括服药时间和途径以及排泄比率，亦包括治疗中所用的复合药物，还包括疾病或状态的严重性。
FR-008聚酮抗生素可以单独用于治疗药方，也可以与其它药用成分组合用于治疗药方。本发明所提供的七烯大环内酯聚酮抗生素FR-008复合物除具有强的抗真菌活性。而且对蚊子幼虫有高毒性，这未在其它多烯抗生素中发现。FR-008聚酮抗生素还以用来防止前列腺肿大和念珠菌阴道炎(又称霉菌性阴道炎)。这些聚酮抗生素亦可能具有抗肿瘤，抗艾滋病毒，抗细菌等功能，以及其它潜在的抗生素活性。FR-008聚酮抗生素可用于敏感真菌所致的深部真菌感染且病情呈进行性发展者，如败血症、心内膜炎、脑膜炎(隐球菌及其它真菌)、腹腔感染(包括与透析相关者)、肺部感染、尿路感染和眼内炎等。聚酮抗生素可用于深部真菌感染和敏感菌所致的内脏或全身感染，包括念菌病，珠孢子菌病，球孢子菌病，隐球菌病，曲菌病、毛霉菌病，粗球孢子菌病，皮炎芽生菌病和组织胞浆菌病等。
FR-008聚酮抗生素可以在工业用高产菌株中得到，也可以在经过基因改造的突变株中得到。改造特定的FR-008生物合成基因或中断特定的FR-008生物合成基因或增加特定的结构基因可以产生新型聚酮抗生素和被进一步改造的聚酮抗生素。FR-008聚酮抗生素可以通过外来的特定基因或酶作用而产生相应的结构进一步改变的新型聚酮抗生素。
FR-008聚酮抗生素可以通过特定生物体中存在的糖苷转移酶或氧化酶或羟基化酶或其它合适的修饰酶而产生新的有用化合物，这些特定的生物体包括灰色链霉菌，天蓝色链霉菌，或其它合适的链霉菌，或其它细菌，真菌，植物或动物。FR-008聚酮抗生素亦可以通过特定生物体中存在的糖苷转移酶使之携带上新的糖基，这些特定的生物体包括灰色链霉菌，天蓝色链霉菌，或其它合适的链霉菌，或其它细菌，真菌，植物或动物。
本发明具有实质性特点和显著的进步，FR-008聚酮抗生素可应用于抗真菌感染的用途。尤其可用于治疗念珠菌所引起的霉菌性阴道炎。聚酮抗生素FR-008活性的一个重要方面是其对蚊子幼虫的毒性，这在其它多烯大环内酯抗生素中未有报道。聚酮抗生素FR-008还可用于治疗前列腺肿大。这些聚酮抗生素还可能具有其它潜在的抗生素活性。FR-008聚酮抗生素可用于产生被进一步改造的聚酮抗生素或杂合抗生素或用于得到理化性质提高的化学修饰抗生素或基因工程抗生素。本发明所提供的FR-008聚酮抗生素可以应用并查找和发展可用于医药，工业，农业的化合物。
【附图说明】
以下通过附图对本发明进一步描述：
图1为FR-008化学结构示意图。编号为C1’-C6’的为氨基海藻糖基团。R1为羟基，R2为羟基时为组分FR-008-I；R1为酮基，R2为羟基时为组分FR-008-II；R1为酮基，R2为H原子时为组分FR-008-IV。C-26-C-27与C-28-C-29为两个顺式双键。C-1”-C-6”为对氨基苯甲酸基团。C-15位与C-19位有形成六元缩醛环与不形成六元缩醛环两种动态平衡结构。
图2为负责FR-008生物合成的整个FR-008基因簇的结构。包括结构基因，修饰基因，糖苷转移酶基因及糖基合成酶基因等，负责FR-008的每一步生物合成及调节和外运。
图3为通过FR-008聚酮合酶中21个特异的聚酮合酶模块介导的21个缩合步骤，以及其后的糖基化，羧基化，羟基化修饰而合成FR-008的过程。
【具体实施方式】
本发明中FR-008聚酮抗生素描述：
本发明所提供的FR-008的聚酮抗生素如图1所示。
R1为羟基，R2为羟基时为组分FR-008-I；R1为酮基，R2为羟基时为组分FR-008-II；R1为酮基，R2为H原子时为组分FR-008-IV。C-26-C-27与C-28-C-29为两个顺式双键。C-1”-C-6”为对氨基苯甲酸基团。它们都存在C-15位与C-19位形成六元缩醛环与不形成六元缩醛环两种动态平衡结构。
以下进一步对本发明详细描述：
由于FR-008有抗真菌活性，对蚊子幼虫有高毒性和可以用来防止前列腺肿大以及念珠菌阴道炎以及在其它工业，农业，医药上所具有的应用潜能，本发明提供了FR-008聚酮抗生素复合物。
以下的实施例阐明了得到和应用本发明所提供FR-008聚酮抗生素的途径。这些实例只是用做说明而并不限制本发明的应用范围。
实施例1：链霉菌FR-008的发酵培养基
黄豆饼粉培养基：
淀粉 4％，
黄豆饼粉 5％，
NaCl 0.3％
PH值：7.2
实施例2：链霉菌FR-008的发酵培养
用接种环从长有链霉菌FR-008的斜面上挑取少量孢子，接种于10个装有30ml黄豆饼粉培养基的250ml三角瓶中，28℃培养48小时。约300ml培养液作为种子接种到装有10L培养基的发酵罐中。在培养温度为28℃，转速为500rpm。通气量为10L/min的条件下，培养72小时。
实施例3：FR-008提取分离
用高速离心机在4℃，以6000rpm的速度将10升FR-008发酵液进行离心，沉淀物用5倍的正丁醇萃取3次；上清液用旋转蒸发仪在40℃左右减压浓缩到1/10体积，再用正丁醇萃取三次。合并萃取液，在低于55℃的条件下用旋转蒸发仪浓缩至稠状物。用乙醚洗涤稠状物，离心，弃去上清夜，再用乙醚洗涤2次，得黄色粉末约20克。
实施例4：大孔树脂吸附
用80％的甲醇分3次每次500ml，从中提取FR-008抗生素，不溶物离心除去。加水稀释甲醇溶液至甲醇浓度为60％，获得总体积约为2升纯黄色的FR-008甲醇溶液。将装有300ml大孔树脂的层析柱，用两倍于树脂体积的60％甲醇溶液洗涤，用两倍于树脂体积的甲醇溶液洗涤，用大孔树脂Amberlite XAD-16(Sigma)进行吸附。用两倍于树脂体积的60％甲醇溶液洗涤，再用80％甲醇溶液进行梯度洗脱，用部分收集器收集，并用紫外分光光度计进行监测，直到有明显的七烯大环内酯的特征峰出现，再改换80％的丙酮进行解吸附。所有的溶液在进入大孔树脂以前均需减压脱气处理。合并黄色较深的试管中的溶液，减压蒸去溶剂，得淡黄色固体2克。
实施例5：分配层析
层析载体使用薄层硅胶G，干法进行装柱，80％的丙酮作洗脱剂。系统连接一个蠕动泵进行快速循环，以平衡系统，并可达到消除柱内气泡的目的。然后再用经减脱气的80％丙酮洗涤层析柱。将1.5g淡黄色固体溶于80％的150ml的THF，硅胶G作固定相，80％的丙酮作洗脱剂，进行分配层析，层析速度为5ml/min。收集紫外特征峰，蒸去溶剂，得FR-008样品400mg。
实施例6：HPLC分析
样品制备
待分析样品：5mg的FR-008样品溶于5ml 80％的THF中，充分溶解后，用0.4um过滤膜过滤。
待制备样品：50mg FR-008样品溶于5ml 80％THF，0.4um过滤膜过滤。储存于-20℃冰箱待用。
分析条件
柱压：1200-1400psi；柱温：30℃；速度：1.2ml/min；检测波长：380nm。
流动相：由磷酸缓冲液和有机溶剂组成，比例通过仪器调整。使用前脱气处理；
色谱柱：4.6×250mm Nucleosil RP-18(sigma，分析柱)；球形PR-18(中科院大连化物所，制备柱)；
抗生素FR-008各组分的分离制备：条件同上，进样量为10mg/ml，采用重叠进样的方法进行制备，每10分钟进一次样。对FR-008各组分分别进行分离制备。后处理用Sephadex LH-20(Sigma)进行脱盐。
HPLC色谱仪：四通道Perkin Elmer色谱仪；Perkin Elmer终端；Perkin ElmerLCI-100数据站；HP8451A二极管紫外分光光度计。
实施例7：FR-008-II的二维NMR氢谱
将上述制备的FR-008-II约8mg溶于1ml氘代DMSO中进行2D 1H-1H NMR分析。
FR-008-II的二维NMR氢谱结果列出如下：
芳香残基
2”，6”-H 6.56
3”，5”-H 7.67抗生素母体结构中的三个甲基H的化学位移分别为：36-CH3，0.97(3H，d)；38-CH3，0.83(3H，d)和40-CH3，0.78(3H，d)；根据它们与所在C上的H的相关性，可以确定36-H，38-H，40-H分别为：2.45(1H，m)，1.55(1H，m)，1.83(1H，m)。
对于氨基海藻糖(3，6-二脱氧-3-氨基-D-甘露己糖)的6种氢分别为1.15(3H，d，6′-H)；3.22(1H，m，5′-H)；3.12(1H，m，4′-H)；2.78(1H，d，3′-H)；4.50(1H，2′-H)和5.32(1H，1′-H)。三个6′-H属于5′-C上的CH3，很容易从图谱上找到，然后根据相关接力确定5′-H，4′-H和3′-H。
利用相关接力的方法确定七个共轭双键两端的氢：21-H(非双键上的氢)：4.39；22-H：5.88；23-H：6.18；24-H：6.37和31-H：6.28；32-H：6.36；33-H：34-H：6.12；35-H：5.50。其它双键上的氢(25-30)在6.1-6.4之间。
实施例8：核磁共振
将上述制备的FR-008-II约8mg溶于1ml氘代DMSO中进行13C NMR分析。C谱的累加时间大约为8小时。FR-008-II主要C原子的化学位移如下表。
核磁共振仪：Bruker AM 500 NMR
C原子 数目 化学位移 C原子 数目 化学位移
酯键 2 氨基海藻糖 6
C-1 166.6 C-1’ 96.9
C-37 80.3 C-2’ 70.6
RCOR 4 C-3’ 56.0
C-3 202.2 C-4’ 71.3
C-7 208.7 C-5’ 72.8
C-15 213.0 C-6’ 17.9
C-43 196.7 RCH＝CHR 14
芳环C原子 6 C-22-C-35 124-137
C-1” 130.5 RCOOH 1 176.2
C-2”，C-6” 125.2 RCH3 3 15.5 16.7 16.8
C-3”，C-5” 112.4 R2CHOH 6 65-81
C-4” 153.5 RCH2R 12 29-50
R3CH 4 36-39 C-21 1 57.5
C-18 1 75.2
化学位移(δ)单位为ppm
实施例9：FR-008各组分多级质谱断裂碎片
LC/MS是在安捷伦公司的Agilent 1100 series LC/MSD Trap system上进行。 高压液相色谱的条件同上。质谱是在离子井的负离子条件下进行。干燥气流为10 l/min，喷雾器压力为50psi。干燥气温为325℃。轰击电压在1.0-1.8之间。
FR-008各组分的质谱碎裂片段比较分析：FR-008-I，FR-008-II和FR-008-IV在质谱负离子模式下(比质量数少1)的分子离子峰分别为1110，1108和1092。FR-008各组分均可被脱羧基和脱水，进一步的质谱多级碎裂片段亦显示它们的结构相关性。
实施例10：FR-008的溶解度
FR-008在不同溶剂中的溶解度如下表所示
溶剂 溶解度(mg/ml)
水 0.05
甲醇 0.28
80％甲醇 0.42
丙酮 0.04
80％丙酮 0.40
四氢呋喃 0.04
80％四氢呋喃 3.8
正丁醇 0.04
80％正丁醇 0.45
DMSO 1.8
DMF 0.50
应用实例11：FR-008分子中两个顺式双键的存在
聚酮合酶与动物脂肪酸合成酶中的酮基还原酶结构域组成了SDR还原酶总科中的一个亚科。聚酮合酶中酮基还原酶结构域(KR)负责所合成碳链的立体构型，而这种立体构型的控制是通过酮基还原酶结构域中一个特定位点的天冬氨酸来完成。这个天冬氨酸被认为与酮基还原酶结构域中112位的组氨酸和100位的酪氨酸共同控制所合成碳链的立体构型。当这个特定氨基酸是天冬氨酸(D)时，将酮基还原成D构型的羟基；当这个特定氨基酸是天冬氨酸以外的氨基酸时，将酮基还原成L构型的羟基。在所有的酮基还原，脱水而形成反式双键的反应中，催化酮基还原的酮基还原酶结构域都有这个特定的天冬氨酸。相反，在所有的酮基还原，脱水而形成顺式双键的反应中，催化酮基还原的酮基还原酶结构域都缺少这个特定的天冬氨酸或者这个特定的天冬氨酸发生改变。而且酮基还原酶结构域这种对所合成碳链的立体构型的控制不依赖于其它的酶或底物或酶促环境。FR-008聚酮合酶负责共扼双键合成的聚酮合酶模块8和模块9中的酮基还原酶结构域KR8和KR9的这个特定氨基酸分别是甘氨酸(G)和天冬酰氨(N)而不是天冬氨酸(D)，所以它们所负责合成的双键均为顺式双键。即FR-008分子中C-26-C-27与C-28-C-29之间的双键是顺式双键。
实施例12：
FR-008各组分紫外特征吸收
FR-008各组分在HPLC中分离后，分别检测各组分的紫外特征吸收，紫外特征吸收列出如下：
FR-008-I： 360.6(肩峰)，381.6(主峰)
FR-008-II： 361.6(肩峰)，382.8(主峰)
FR-008-IV： 362.6(肩峰)，384.0(主峰)
实施例13：聚酮抗生素FR-008的抗真菌活性(真菌指示菌：啤酒酵母)
将指示菌啤酒酵母Y029接种到10.3％YEME液体培养基中，28℃摇床(200rpm)培养约24小时，离心收集菌体，分散在20％甘油中，按30μl分装成小份，-20℃贮存备用。融化PDA培养基并冷却至50℃左右，每100ml培养基中加入30μl-20℃贮存的上述小份指示菌，立即混匀后倒入培养皿或方盘，待其凝固后，在合适的位置上摆好圆形滤纸片，将适量待测的FR-008聚酮抗生素滴于圆形滤纸片，30℃培养1-2天后观察结果。生物活性测定呈现明显的抑菌圈，显示聚酮抗生素FR-008具有抗真菌的活性。
实施例14：聚酮抗生素FR-008的杀虫活性(蚊子幼虫)
聚酮抗生素FR-008用吡啶溶解，再用水系列稀释成不同浓度的稀释液，并以等浓度的溶剂(吡啶)和水做对照，用孑孓为试虫。当抗生素的浓度为100ppm，10ppm和1ppm时，分别在24小时，48小时和72小时内使孑孓的致死率达100％；而在此浓度范围内的溶剂和水作为对照的处理不能使孑孓致死。显示聚酮抗生素FR-008具有很强的杀虫活性。