一种动物乳腺局部生物反应器建立的方法.pdf

一种动物乳腺局部生物反应器建立的方法
    本发明涉及一种建立乳腺局部生物反应器，以在乳汁中获得活性蛋白物质的方法。

    以往用生物工程技术获得活性蛋白物质一般均是将所需的目的基因克隆入适合的载体内，然后将此重组载体导入细菌、霉菌或细胞内让其表达，以此获得表达产物。但这类方法有其局限性，或者是技术难度大，或者是成本高，或者是产品中夹带有有害的原核生物的物质，或者是产量低，或者是有些活性蛋白物质无法用这类方法获得。新近发展起来的动物生物反应器技术，是将外源基因注入动物受精卵内，将此受精卵植入雌性动物的生殖系统，发育成个体，然后从此个体的乳汁或血液中提取外源目基因的表达产物，这一技术虽然可从动物个体中上获得活性蛋白物质，但建立一个生物反应器的技术难度极大，周期长，成本极高。虽然理论上说一个生物反应器就可相当于一个生物工厂，但目前国际上尚无几家这样的“工厂”。

    本方法的目的在于克服上述现有技术之不足，提供一种能够快速、简单、有效地从动物乳汁中获得活性蛋白物质前方法。

    为了实现本发明之目的，本发明所述的建立乳腺局部生物反应器以在乳汁中获得其表达产物的方法，是将通过各种不同方法处理的具用表达活性蛋白功能的外源基因置入动物的乳腺内，被乳腺分泌细胞吸收后，在分泌细胞分泌乳汁的同时，也分泌外源基因的表达产物，因此可在动物的乳汁中获得此产物。

    具体点说是先将具用表达活性蛋白功能的外源基因通过适当处理后，使其在动物体内将具用缓释的性质，然后将此处理后的基因置入动物的乳房内，此外源基因将被乳腺分泌细胞所吸收，当动物泌乳时用常规方法挤出乳汁，在乳汁中即可获得此基因的表达产物。本方法不但方法简单，而且是在动物的整体水平上获得外源基因的表达产物，整个生物合成过程更接近自然生理过程，因此表达产物的活性高，另外外源基因在整个泌乳期均可表达，因此表达的时间长，产量高。

    实施例：将外源超氧化物歧化酶(SOD)基因与乳腺定位表达启动子WAP连接，装载入pUC18载体建成重组载体，导入细菌内，大量扩增后提取重组载体，将此重组载体用脂质体包裹后，用生理盐水配制成浓度为0.1mg/ml的液体，取其100ml，置入奶山羊乳腺内，液体将被乳腺分泌细胞吸收，当奶山羊产后泌乳，SOD基因即可表达SOD，用常规方法挤得乳汁，即可在乳汁中获得SOD。

    本方法所述的建立乳腺局部生物反应器，以在乳汁中获得活性蛋白物质地方法，不但克服了在细菌、霉菌或细胞水平上获得活性蛋白物质之技术中的不足之处，又具有了动物生物反应器的优点，而且技术简单，技术没备要求低，极具实用价值。